Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-04-23Bitstream added on 2014-12-02T11:21:03Z : No. of bitstreams: 1 000773891.pdf: 2310007 bytes, checksum: 25083cc7ba35dc563a6fd32da4ab8cc5 (MD5) / Estrógenos naturais e sintéticos são microcontaminantes emergentes continuamente lançados no ambiente, incluídos na classe de substâncias capazes de afetar a saúde, crescimento e reprodução de organismos aquáticos e humanos, os alteradores endócrinos. A ocorrência de estrógenos foi investigada em água e material particulado em suspensão (SPM) de dois importantes mananciais inseridos na Unidade de Gerenciamento de Recursos Hídricos do Estado de São Paulo (UGRHI 13 – Tietê/Jacaré), receptores de efluente in natura (Rio Bauru) ou tratado (Ribeirão das Cruzes), utilizando métodos de extração em fase sólida (SPE) para água, extração sólido-líquido para SPM e QuEChERS para sedimentos, desenvolvidos com critérios de confiabilidade analítica (exatidão, precisão, seletividade, robustez e avaliação de efeito matriz) seguido de análise simultânea por HPLC-FLD-UV em modo de eluição isocrático (60:40, MeCN:H2O ambos à 0,1% H3CCOOH) e coluna C18. Os limites de detecção e quantificação dos métodos foram determinados para ambos os detectores e variaram, respectivamente, de 0,009- 1200 ng mL-1 e 0,03-1700 ng mL-1 (FLD) e 0,4-1,8 μg mL-1 e 0,6-2,6 μg mL-1 (UV) para as amostras de água, de 1,0-28,5 ng g-1 e 1,6-42,7 ng g-1 (FLD) para as amostras de sedimento e, de 290-430 ng g-1 e 450-630 ng g-1 (FLD) e 90-160 ng g-1 e 130-230 ng g-1 (UV) para as amostras de MPS. Os métodos apresentaram valores de recuperação média e coeficiente de variação entre 60 – 139% e 0,5 – 20%, nesta ordem. A distribuição dos estrógenos nos compartimentos aquáticos foi distinta para os mananciais e as maiores concentrações desses compostos foram encontradas na fase aquosa (0,02-17 ng mL-1) e material em suspensão (791,8-14403,8 ng g-1) do Rio Bauru. As amostras foram submetidas a ensaios in vivo (enzimas de biotransformação e defesa antioxidantes) e in vitro (RYA) para avaliar a toxicidade e possível impacto ambiental... / Natural and synthetic estrogens are emerging microcontaminants daily released to the environment, included in class of substances that may affect health, growth and reproduction of aquatic organisms and humans, the endocrine disrupters. Occurrence of estrogens has been researched in surface water and suspended particulate matter (SPM) in two important aquifers inserted into the Comitê da Bacia Hidrográfica Tietê-Jacaré (UGRHI 13 - Tietê/Jacaré) , effluent untrated (Bauru River) or treated (Ribeirão das Cruzes) receivers, employing solid phase extraction (SPE) for water , solid-liquid extraction for MPS and QuEChERS for sediments developed reliable analytical criteria (accuracy, precision, selectivity, robustness and evaluation of matrix effect) followed by simultaneous analysis HPLC-FLD-UV in isocratic elution (60:40 MeCN:H2O both 0.1% H3CCOOH) and C18 analytical column. Methods detection and quantification limits were established for FLD and UV detectors. It ranged from 0.009 - 1200 ng mL-1 and 0.03 - 1700 ng mL-1 (FLD) and 0.4 - 1.8 mg mL-1 and 0.6 - 2.6 mg mL-1 (UV) to surface waters; from 1.0 - 28.5 ng g-1 and 1.6 - 42.7 ng g-1 (FLD) for sediment and 290 - 430 ng g-1 and 450 - 630 ng g-1 (FLD) and 90 - 160 ng g-1 and 130 - 230 ng g-1 (UV) for MPS. Recoveries of every method ranged from 60 - 139 % with relative standard deviations 0.5 - 20%. The estrogens partition in aquatic compartments was otherwise for rivers and highest compounds concentrations were found in Bauru River aqueous phase (0.02 - 17 ng mL-1) and suspended solids (791.8 - 14403.8 ng g-1). The samples were submitted to in vivo (biotransformation enzymes and antioxidants defenses) and in vitro (RYA) assays in order evaluate toxicity and environmental impact. All samples showed estrogenic activity with EEQ ranged from 1.0 - 880.0 nM in the RYA for surface water and 0.4 - 56.7 nM for MPS. Additionally, changes has been observed in phase Ι and ΙΙ besides...

Orientador: Ian Castro-Gamboa / Banca: Luiz Alberto Colnago / Banca: Rodrigo Ramos Catharino / Banca: Patrícia Verardi Abdelnur / Banca: Denise Brentan da Silva / Resumo: O uso de extratos e tinturas de partir de fontes naturais para fins terapêuticos remonta o aparecimento da humanidade. A ação biológica proveniente destas misturas é justificado pela diversidade estrutural e química de seus compostos na qual, interagem concomitante a diferentes alvos proteicos. No entanto, os últimos anos foram marcados pela substituição das metodologias clássicas de isolamento e teste biológicos por ferramentas de automação como High Throughput Screening (HTS) e o uso da química combinatória para a geração de substâncias. No entanto, os resultados até o momento foram insatisfatórios e a indústria tem retomado o uso dos produtos naturais. Para tanto, ela tem buscado por abordagens mais racionais de detecção e identificação estrutural de biomarcadores. Dentro dessa óptica, a inserção e o desenvolvimento de metodologias de desreplicação associadas a estudos metabolômicos sob a visão da biologia sistêmica torna-se crítica na busca por micromoléculas ativas. Recentemente, o uso de técnicas hifenadas como a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), associadas a métodos espectroscópicos de RMN e a espectrometria de massas de alta resolução (EMAR), tem sido fundamentais na geração de métodos analíticos em estudos metabolômicos e de biologia sistêmica em plantas, fungos endofíticos, e outras organismo, acelerando a escolha de matrizes bioativas promissoras. Este projeto visa ao entendimento das relações moleculares presentes em matrizes dinâmicas gerando ferramentas analíticas para uma abordagem racional no estudo de produtos naturais bioativos. Para tanto, espécimes depositadas na nossa extratoteca, da família Solanaceae, pouco estudadas no que diz respeito a sua composição química serão o objeto de estudo deste projeto. / Abstract: The use of drugs from natural sources is as old as humanity itself. However, due to the economic impact caused by globalization, many pharmaceutic industries searched for alternatives to speed-up assays aiming for simpler structural molecules and low-costs budgets. Therefore, the insertion and development of methods of dereplication associated to metabolomics studies through an approach in system biology is a key issue when searching for bioactive molecules. Recently, due to the advancement of technology, the use of hyphenated techniques such as high performance liquid chromatography (HPLC) coupled to spectroscopic methods like nuclear magnetic resonance (NMR) and high resolution mass spectrometry (HRMS) intensified the metabolomic and system biology research in plants and fungi thus, accelerating the selection of bioactive substances. This project aims to study the molecular dynamics in complex matrixes using multivariate analysis and in doing so generating analytical tools to apply as a rational approach towards the study of bioactive natural products and the understanding of their complexity. To accomplish this task, specimens deposited in our bank of extracts, from the Solanaceae family, little studied on their chemical composition but that showed interesting bioactivities form initial biological screenings, will be the object of study on this project. / Doutor

Orientador: Carlos Ferreira Damião Filho / Banca: Fabiola Vitti Moro / Banca: Hosana Maria Debonsi Navickiene / Resumo: A preocupação com o ambiente, bem como a busca por um produto natural de amplo uso na agricultura, encontramos a azadiractina, uma substância encontrada em extratos de nim (Azadirachta indica), planta indiana que demonstra ser uma alternativa para o controle de insetos praga. Característica que motivaram o presente trabalho, objetivando a obtenção e detecção desta substância em calos de nim (Azadirachta indica). Os calos foram obtidos a partir de explantes de peciólulos desta espécie, os quais foram cultivados in vitro em meio de Murashige & Skoog, suplementado com diferentes quantidades e tipos de reguladores de crescimento. Os calos foram triturados e submetidos a extrações com solventes orgânicos, concentrados e analisados via CLAE (Cromatografia Líquida de Alta Eficiência). Dos experimentos realizados, melhores resultados quanto a produção e acúmulo de azadiractina, foram obtidos em extratos de calos cultivados em meio básico contendo 2,0 mg.L -1 de AIA em associação com 1,0 mg.L-1 de BAP, após 12 meses de cultivo in vitro. / Abstract: The concern with the environment, as well as the search of a natural product, the azadirachtin (AZA), widely used in agriculture, motivated the present work aiming this substance detection in neem (Azadirachta indica) calli. The calli, obtained by means of leaflets peciolules, was cultivated on Murashige & Skoog (1962) media, supplemented with different amounts and kind of growth regulators. The obtained powdered calli was submitted to organic extraction, and after thod was analyzed through High Performance Liquid Chromatography (HPLC). From the experimental treatments, the better results, as the AZA production and accumulation, were obtained in calli extracts cultivated in basic Murashige & Skoog (1962) media containing 2,0 mg.L -1 of AIA in association with 1,0 mg.L-1 of BAP, after 12 months of in vitro cultivation. / Mestre

Orientador: Marlus Chorilli / Coorientador: Maria Palmira Daflon Gremião / Banca: Leila Aparecida Chiavacci / Banca: Maria José Vieira Fonseca / Banca: Flávia Chiva Carvalho / Banca: Eneida de Paula / Resumo: A administração de compostos na pele é dificultada principalmente pelo estrato córneo; dessa forma diversas técnicas químicas e físicas podem ser exploradas e combinadas de modo a vencer esta barreira. O acetato de dexametasona (DXM) é um potente antiinflamatório utilizado principalmente no tratamento de doenças inflamatórias e autoimunes que, embora muito utilizado, pode promover uma serie de efeitos colaterais sistêmicos. Dessa forma, sua aplicação tópica pode ser conveniente, de forma a localizá-lo no seu sítio de ação. O objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de sistemas líquido-cristalinos (SLC) estabilizados com polioxietileno 20 cetil éter como tensoativo utilizando diferentes fases oleosas: ácido oleico (AO), miristato de isoproprila (MI) e N metil pirrolidona (NMP), e posterior realização de ensaios de permeação cutânea in vitro e atividade anti-noceptiva in vivo. As amostras foram caracterizadas por microscopia de luz polarizada e espalhamento de raios-X a baixo ângulo, as quais resultaram em sistemas líquido-cristalinos de mesofases lamelares e hexagonais; estes sistemas apresentaram (G)'>(G") nos estudos reológicos, indicando um comportamento predominantemente elástico. O ensaio de perfil de textura revelou que as amostras hexagonais constituídas por NMP e MI foram as que apresentaram maior adesividade e que as amostras lamelares foram mais bioadesivas. Os ensaios de liberação demonstraram que os sistemas lamelares liberaram maior porcentage... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Administration of compounds in the skin is mainly hindered by stratum corneum. Thus, various chemical and physical techniques may be exploited and combined in order to overcome this barrier. Acetate dexamethasone (DXM) is a potent a nti-inflamatory and immunosuppressive primarily used in the treatment of inflammatory, autoimmune and allergic that although widely used, can promote a series of systemic side effects. Thus, topical application may be appropriate in order to find it on their site of action. The objective of this work was to develop liquid crystal systems (LCS) stabilized with polyoxyethylene 20 cetyl ether as surfactant using different oil phases: oleic acid (OA), isopropyl myristate (IM), N methyl pyrrolidone (NMP), and subsequent testing of skin permeation in vitro and in vivo anti-noceptiva activity.The samples were characterized by polarized light microscopy and SAXS, which showed the presence of liquid crystal systems of lamellar mesophases and hexagonal. These systems showed (G)' > (G") in rheology studies, indicating a predominantly elastic behavior. The texture profile test revealed that the hexagonal samples containing in its composition NMP and IM showed the highest adhesiveness and that the lamellar samples were more bioadhesive. Release tests showed that the lamellar systems release a higher percentage of drug when compared to the hexagonal systems.In cutaneous permeation tests, the results showed that the drug does not permeate, but rea... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-26Bitstream added on 2014-06-13T19:57:21Z : No. of bitstreams: 1 chierentin_l_me_arafcf_parcial_prot.pdf: 94153 bytes, checksum: b25ed8bc84653284002d5291e354c06e (MD5) Bitstreams deleted on 2015-06-03T11:42:27Z: chierentin_l_me_arafcf_parcial_prot.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-03T11:44:00Z : No. of bitstreams: 1 000712988_20150826.pdf: 94153 bytes, checksum: b25ed8bc84653284002d5291e354c06e (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-28T16:08:59Z: 000712988_20150826.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-28T16:10:01Z : No. of bitstreams: 1 000712988.pdf: 2194395 bytes, checksum: 9cd76df3505cbddc42ddb33fc0e7079a (MD5) / O norfloxacino é uma fluoroquinolona de segunda geração derivada do ácido nalidíxico. Como as demais fluoroquinolonas, o norfloxacino atua por inibição da DNA-girase bacteriana, complexo enzimático que participa do processo de replicação do DNA bacteriano e também inibe a topoisomerase tipo IV do DNA bacteriano. Esta fluoroquinolona é utilizada para o tratamento de infecções do trato urinário causadas por bactérias Gram-negativas, incluindo Enterobacteriaceae e espécies Pseudomonas-resistentes e também alguns micro-organismos Gram-positivos. A literatura apresenta alguns métodos de análise para norfloxacino em fluidos biológicos, águas subterrâneas, alimentos e formas farmacêuticas. Com base nestas considerações, este trabalho objetiva desenvolver ensaios para análise qualitativa de norfloxacino utilizando espectrofotometria na região do visível, análise térmica, cromatografia em camada delgada, cromatografia líquida de alta eficiência, eletroforese capilar e outros métodos gerais para caracterização da SQR e comprimidos de norfloxacino. Métodos analíticos foram desenvolvidos e validados para a quantificação deste fármaco como: (1) espectrofotometria na região do visível, comprimento de onda de detecção 520 nm, com faixa linear de 95,0 a 120,0 μg/mL utilizando ácido cloranílico 0,1% como reagente, com exatidão de 102,48%; (2) cromatografia líquida de alta eficiência, com comprimento de onda de detecção de 277 nm, fase móvel composta por solução aquosa de ácido acético 5% e metanol (80:20 v/v), obtendo-se tempo de retenção médio de 5,7 minutos e capacidade de separação de produtos de degradação. A faixa linear avaliada foi de 10,0 a 30,0 μg/mL, com exatidão de 103,96%; (3) Eletroforese Capilar, validado utilizando-se como eletrólito, tampão de tetraborato de sódio 30 mM a pH 9,0 e capilar... / Norfloxacin is a second-generation fluoroquinolone derivate of nalidixic acid. Like other fluoroquinolones, norfloxacin acts by inhibiting DNA gyrase, the enzyme complex that participates in the process of bacterial DNA replication and also inhibit topoisomerase IV type of bacterial DNA. This fluoroquinolone is used in treatment of urinary tract infections caused by Gram-negative bacteria, including Enterobacteriaceae, and Pseudomonas-resistant species and also by Gram-negative microorganisms. The literature describes some methods to analyses norfloxacin in biologic fluids, groundwater, foods and pharmaceutical forms. Based on these considerations, this work aims to develop assays for qualitative analysis of norfloxacin using visible spectrophotometry, thermal analysis, thin-layer chromatography, high performance liquid chromatography, capillary electrophoresis and other general methods for the characterization of API and tablets of norfloxacin. Analytical methods were developed and validated for the quantification of this drug as: (1) visible spectrophotometry, detection wavelength 520 nm with a linear range from 95.0 to 120.0 μg/mL using chloranilic acid 0.1% as a reagent, with an accuracy of 102.48%; (2) high performance liquid chromatography with detection wavelength of 277 nm, mobile phase composed of aqueous 5% acetic acid and methanol (80:20 v/v) obtaining an average retention time of 5.7 minutes and separation capability degradation products. The linear range was measured from 10.0 to 30.0 μg/mL, with accuracy (103.96%); (3) Capillary electrophoresis was validated using a solution of 30 mM sodium tetraborate buffer pH 9.0 as the electrolyte and a fused silica capillary of 48.5 cm, with 40.0 cm effective, and 75 μm of diameter. The linear range was evaluated from... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-05Bitstream added on 2014-06-13T19:58:04Z : No. of bitstreams: 1 motta_rr_me_jabo.pdf: 906417 bytes, checksum: 313df4fc7f074ff43b3f9ee2d69280ca (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este trabalho teve como objetivos monitorar a quantidade de resíduo existente em frutos de laranjeira ‘Valência’ dos fungicidas oxicloreto de cobre, tiofanato metílico e pyraclostrobin, como também determinar a capacidade protetora e fungistática (oxicloreto de cobre) e a capacidade preventiva e curativa (tiofanato metílico e pyraclostrobin) no controle da mancha preta dos frutos cítricos (MPC). No primeiro experimento, aproximadamente 1000 frutos, previamente ensacados, foram primeiramente imersos nas caldas fungicidas e posteriormente inoculados com conídios de Guignardia citricarpa em intervalos regulares de 1, 7, 14, 21, 28 e 35 dias após a aplicação do fungicida, para o oxicloreto de cobre e de 1, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 e 56 dias após a aplicação do fungicida, para o tiofanato metílico e pyraclostrobin. No segundo experimento, aproximadamente 1000 frutos, previamente ensacados, foram primeiramente inoculados e posteriormente tratados por imersão com os respectivos fungicidas nos mesmos intervalos regulares. Foram utilizados 16 frutos por período de inoculações e oito frutos por período de aplicação do fungicida. Para o primeiro experimento, oito frutos foram utilizados para a realização das análises de resíduo e outros oito frutos deixados na planta até a época da colheita. Para o segundo experimento, somente avaliou-se a incidência da doença e severidade na colheita. As análises de resíduos foram realizadas por técnicas de Espectrofotometria de Absorção Atômica na superfície dos frutos, para o oxicloreto de cobre e de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada ao detector de massas/massas (CLAE - EM/EM) na superfície e casca dos frutos, para o tiofanato metílico e na superfície, casca e polpa dos frutos para o pyraclostrobin. Na época da colheita, os frutos foram avaliados quanto à incidência, severidade... / The objectives of this study were: (i) measure the amount of residues of copper oxychloride, methyl thiophanate and pyraclostrobin in 'Valencia’ sweet orange fruits after their application; (ii) to evaluate the protective and fungistatic capacity of copper oxychloride and (iii) to evaluate the preventive and curative capacity of systemic fungicides methyl thiophanate and pyraclostrobin for the control of citrus black spot (CBS). Two experiments were carried out, in the first on 1.000 fruits were first immersed in the fungicides and then inoculated with conidia of Guignardia citricarpa at regular intervals of 1, 7, 14, 21, 28 and 35 days, for the copper oxychloride and 1, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 and 56 days for methyl thiophanate and pyraclostrobin. In the second experiment, on 1.000 fruits were first inoculated with conidia of G. citricarpa and then treated by immersion with the fungicides in the same regular intervals as described. Sixteen fruits were used for each period of inoculations and eight fruits per application. For the first experiment, eight fruits were used for analysis of residues and eight fruits were left in the plant until harvesting to evaluate disease incidence and severity. For the second experiment it was evaluate only disease incidence and severity in the harvest. Analysis of residues were performed by Atomic Absorption Spectrometry on the fruits surface, for copper oxychloride and High Performance Liquid Chromatography coupled to the detector mass/mass (HPLC - MS / MS) on the fruits surface and peel for the methyl thiophanate, and on the fruits surface, peel and pulp for the fungicide pyraclostrobin. Under conditions of high inoculum pressure, copper oxychloride showed limited protective capacity and no fungistatic capacity. Residues found on the fruits surface were directly related to the fruits growth. Methyl thiophanate was converted on its metabolite... (Complete abstract click electronic access below)

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The application of good livestock practices in the sheep industry is a growing concern on food security due to the increase of financial transactions in this sector in Brazil, mainly due to imports. To perform the monitoring Maximum Residue Limits (MRLs) are adopted such as suitable matrices for monitoring. The deposition of residues of veterinary drugs in sheep muscle is verified by appropriate analytical methods. In this work it were developed two methods aiming to determine avermectins residues in ovine muscle by HPLC-FD using QuEChERS method and also a method for the determination of different classes of veterinary drugs using UHPLC-MS / MS. The extraction was optimized by comparing the three most common variants of QuEChERS method and also the application of experimental design to select the best composition of the clean-up stage, varying amounts of PSA and C18. Some parameters such as derivatization step, the mobile phase composition, mobile phase flow, and the conditions of ionization source and ions entrance of the system were also optimized. The developed methods were validated by reference to Decision 657 of 2002 published by the European Community. The following parameters were evaluated: selectivity; linearity and working range; matrix effect; limits of detection and quantification; decision limit and detection capability; accuracy; and precision. The results were satisfactory, with the values of recovery in the concentration ranges required for each rated level, determination coefficients for curves prepared in solvent blank extract and white matrix were above 0.99 (except for ciprofloxacin) and linear working range was from 5 to 200 μg kg-1 for UHPLC-MS / MS and 2.5 to 112.5 μg kg-1 for HPLC-FD. There were no significant matrix effects only sulfamethoxazole, trichlorfon and albendazole by determining UHPLC-MS / MS. The limits of detection for HPLC-FD ranged from 4 to 18.4 μg kg-1 and decision limits from 10.7 to 59.4 μg kg-1 for UHPLC-MS / MS detection limits ranged from 1.7 to 33.3 μg kg-1 and for decision threshold from 5 to 100 μg kg-1. The method was considered suitable for routine analysis, and the confirmation was only possible using UHPLC-MS / MS, and the method was applied for determination of veterinary drug residues in sheep muscle in 11 samples by HPLC-FD and 36 UHPLC MS / MS / A aplicação das boas práticas agropecuárias na ovinocultura é uma preocupação crescente na segurança alimentar em virtude do aumento das movimentações financeiras neste setor no Brasil, principalmente em função das importações. Para realização do monitoramento são adotados Limites Máximos de Resíduo (LMR) e matrizes adequadas para monitoramento. A deposição de resíduos de medicamentos veterinários em músculo ovino é verificada através de métodos analíticos adequados. Neste trabalho desenvolveram-se dois métodos um buscando a determinação de resíduos de avermectinas em músculo ovino por HPLC-FD, utilizando o método QuEChERS e, também, um método para determinação de diferentes classes de medicamentos veterinários utilizando UHPLC-MS/MS. A extração foi otimizada pela comparação das 3 variações mais usuais do método QuEChERS e, também, aplicação de planejamento experimental para escolha da melhor composição da etapa de clean-up, variando as quantidades de PSA e C18 aplicadas. Alguns parâmetros como etapa de derivatização, composição da fase móvel, vazão da fase móvel e condições da fonte de ionização e entrada de íons no sistema também foram otimizadas. Os métodos desenvolvidos foram validados tomando como referência a Decisão 657 de 2002 publicada pela Comunidade Europeia. Foram avaliados os seguintes parâmetros: seletividade; linearidade e faixa de trabalho; efeito matriz; limites de detecção e quantificação; limite de decisão e capacidade de detecção; exatidão; e precisão. Os resultados obtidos foram satisfatórios, tendo como valores de recuperação nas faixas de concentração exigidas para cada nível avaliado, os coeficientes de determinação para curvas preparadas em solvente, em extrato branco e matriz branco ficaram acima de 0,99 (com exceção de ciprofloxacin) e a faixa linear de trabalho foi de 5 a 200 μg kg-1 para UHPLC-MS/MS e de 2,5 a 112,5 μg kg-1 para HPLC-FD. Não foram observados efeitos de matriz significativos apenas para sulfametoxazol, triclorfon e albendazol na determinação por UHPLC-MS/MS. Os limites de detecção para HPLC-FD variaram de 4 a 18,4 μg kg-1 e os limites de decisão de 10,7 a 59,4 μg kg-1, para UHPLC-MS/MS os limites de detecção variaram de 1,7 a 33,3 μg kg-1 e para limite de decisão de 5 a 100 μg kg-1. O método foi considerado adequado para análises de rotina, sendo que a confirmação só foi possível utilizando UHPLC-MS/MS, e o método foi aplicado para determinação de resíduos de medicamentos veterinários em músculo ovino em 11 amostras por HPLC-FD e 36 por UHPLC-MS/MS.

Submitted by Alison Vanceto (alison-vanceto@hotmail.com) on 2016-09-19T12:26:32Z No. of bitstreams: 1 TeseFGA.pdf: 2851839 bytes, checksum: e4c958d9e4050def8714e03f741d0fff (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T18:18:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseFGA.pdf: 2851839 bytes, checksum: e4c958d9e4050def8714e03f741d0fff (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T18:18:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseFGA.pdf: 2851839 bytes, checksum: e4c958d9e4050def8714e03f741d0fff (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-21T18:18:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseFGA.pdf: 2851839 bytes, checksum: e4c958d9e4050def8714e03f741d0fff (MD5) Previous issue date: 2015-05-22 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Angiotensin converting enzyme 1 (ACE1) is a dipeptidyl carboxypeptidase that converts angiotensin I (decapeptide) to a vasoconstrictor octapeptide angiotensin II. Thus, ACE presents an important role in blood pressure regulation. There are many synthetic commercially available ACE inhibitors such as captopril, lisinopril and enalapril. Due to their side effects, naturally occurring inhibitors have been prospected. In order to endorse this research field we have developed a new tool for ACE ligand screening. To this end, ACE was extracted from bovine lung, purified and chemically immobilized in modified ferrite magnetic beads (ACEMBs). The ACE-MBs have shown a Michaelian kinetic behavior towards hippurylhistidyl- leucine (HHL) and was also able to catalyze the conversion of angiotensin I to angiotensin II. Moreover, as proof of concept, the ACE-MBs was inhibited by lisinopril with an IC50 of 10 nM. At the fishing assay, ACE-MBs were able not only to fish out the reference inhibitor, but also three peptides from a pool of tryptic digested BSA. ACE-MBs emerge as new straightforward tool for ACE kinetics determination, inhibition and binder screening. / Enzima conversora de angiotensina 1 (angiotensin converting enzyme 1, ACE1) é uma dipeptidil carboxipeptidase que catalisa a reação para conversão da angiotensina I, um decapeptídeo inativo, para angiotensina II, um octapeptídeo vasoconstritor. Assim, a ACE1 exerce um papel essencial na regulação da pressão arterial e tratamento de hipertensão. Existem diversos inibidores de ACE1 sintéticos disponíveis comercialmente, como captopril, lisinopril e enalapril. No entanto, o uso contínuo desses fármacos pode causar diversos efeitos adversos como falência renal, hipotensão e hipercalemia. Devido a isso, inibidores de ACE1 de origem natural tem sido prospectados. Com o objetivo de contribuir para esse campo de pesquisa, neste trabalho foi desenvolvido uma ferramenta para a busca de ligantes de ACE1. Para isso, a ACE1 foi extraída de pulmão bovino e subsequentemente purificada com o auxílio de filtros de exclusão por tamanho e mais duas etapas de cromatografia de afinidade. Para acompanhar o processo de purificação, ensaios de atividade utilizando o substrato sintético hipuril-histidil-leucina (HHL) foram estabelecidos, e foi desenvolvido um método cromatográfico para suas análises, através do monitoramento do ácido hipúrico (HA), produto da reação catalisada. Após a sua purificação, a ACE foi quimicamente imobilizada em partículas nanomagnéticas (NMB-ACE), que permitiu a realização de ensaios enzimáticos para a sua caracterização, obtendose um comportamento michaeliano para o substrato HHL. Além disso, a especificidade do reator enzimático foi testado frente a seu substrato natural e testes de inibição com o lisinopril foram realizados, obtendo um valor de IC50 próximo ao encontrado para a enzima livre. Por fim, a seletividade do reator enzimático foi avaliada pelo ensaio de bioconjugação, resultando na pesca de 3 peptídeos presente em uma mistura de mais de 100 peptídeos. Sendo assim, os estudos apresentados nesse trabalho confirmam o estabelecimento do NMB-ACE como uma ferramenta para a busca de ligantes de ACE em misturas complexas.

Submitted by Livia Mello (liviacmello@yahoo.com.br) on 2016-09-28T13:36:10Z No. of bitstreams: 1 TeseMD.pdf: 2629186 bytes, checksum: a65ef77c5020a35a967c33f34da819c0 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-04T19:04:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseMD.pdf: 2629186 bytes, checksum: a65ef77c5020a35a967c33f34da819c0 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-04T19:04:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseMD.pdf: 2629186 bytes, checksum: a65ef77c5020a35a967c33f34da819c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-04T19:04:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseMD.pdf: 2629186 bytes, checksum: a65ef77c5020a35a967c33f34da819c0 (MD5) Previous issue date: 2015-11-27 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / The presence of drugs in the environment is an important issue in environmental risk assessment. The fluoroquinolones represent a class of compounds widely used in human and veterinary medicine, and its apport in the environment is continuous and lacking of monitoring. In this scope, it is important to evaluate the levels of these compounds in the environment and their toxicological impact on aquatic organisms. The present study discuss the development and validation of analytical methods for direct injection of samples using liquid chromatography coupled to mass spectrometry for multiresidual determination of fluoroquinolones in effluents of São Carlos – SP, and toxicity tests of ciprofloxacin (CIP) on fish. For monitoring of effluent samples, six fluoroquinolones were evaluated: CIP, gemifloxacin, moxifloxacin, ofloxacin, enrofloxacin, and norfloxacin (NOR). In effluent samples from wastewater treatment plant, CIP and NOR were quantified at concentrations of 195 ng L-1 and 270 ng L-1, respectively. Toxicity studies of CIP in species of O. niloticus exposed to different concentrations (0.5, 1.0 and 5.0 μg L-1) for periods of 7 and 14 days were evaluated by enzymatic and non-enzymatic systems. The biochemical assays demonstrated that fishes were not able to perform the detoxification, which was evidenced by the severe damage in their cells, especially on the gills and liver of the fishes. In vitro studies were carried out in species of O. mykiss, evaluating the biotransformation and bioaccumulative potential of some drugs commonly used in fish farms, including fluoroquinolones. The results using this in vitro model corroborate to the understanding of similarities and differences among different species of fish, as well as the assessment of environmental impact due to these compounds present in the environment. / A presença de fármacos no meio ambiente é uma importante questão na avaliação de impactos ambientais. As fluoroquinolonas (FQs) representam uma classe de compostos amplamente utilizada na medicina humana e veterinária, e seu aporte no ambiente é contínuo e ausente de monitoramento. Diante deste panorama, é importante a avaliação dos níveis destes compostos, bem como o impacto toxicológico em organismos aquáticos. O presente trabalho discute o desenvolvimento e validação de métodos analíticos, por injeção direta de amostras usando a cromatografia líquida hifenada ao espectrômetro de massas, para a determinação multiresidual de FQs, em efluentes do município de São Carlos – SP, a para ensaios de toxicidade do ciprofloxacino (CIP) em peixes. Para o monitoramento em efluentes, seis FQs foram avaliadas: CIP, gemifloxacino, moxifloxacino, ofloxacino, enrofloxacino, e norfloxacino (NOR). As FQs não foram encontradas nos 4 pontos de coleta ao longo do Monjolinho, mas em amostras de influente da estação de tratamento de esgoto de São Carlos foram quantificadas a CIP (195 ng L-1) e a NOR (270 ng L-1). Foram feitos ensaios de estresse oxidativo, por avaliação de sistemas enzimáticos e não enzimáticos em espécie O. niloticus, expostos ao CIP em diferentes concentrações (0,5, 1,0 e 5,0 μg L-1) em períodos de 7 e 14 dias. Estes ensaios bioquímicos demonstraram que o organismo do peixe não foi capaz de realizar a detoxificação, evidenciado pelos danos severos ocorridos à níveis celulares, principalmente nas brânquias e fígado. Frações S9 de fígado de trutas (O. mykiss) foram utilizadas a fim de avaliar a biotransformação e o potencial bioacumulativo de alguns fármacos comumente utilizados em pisciculturas. Os resultados obtidos com o modelo in vitro corroboram para o entendimento das similaridades e diferenças entre as espécies de peixes, e também para a avaliação do impacto ambiental causado por estes compostos presentes no meio ambiente. / FAPESP: 2010/19000-2

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-26. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:50:55Z : No. of bitstreams: 1 000865246.pdf: 1418887 bytes, checksum: e6ebb1960afe82f4c1dcbbf2458c4f2b (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Os compostos bioativos do arroz variam de acordo com a variedade e condições de cultivo. Componentes lipossolúvies como γ-orizanol, tocoferóis, tocotrienóis, carotenóides e ácidos graxos foram analisados em variedades de arroz integral, integral açucarado, vermelho e negro, utilizando métodos estabelecidos de cromatografia líquida de alta pressão e cromatografia gasosa. Todas as amostras também foram submetidas a análise por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa (LTQ-Orbitrap XL), para identificar a abundância iônica [M-H]- de γ-orizanol, variando de m/z 573.3949 a 617.4211. O maior conteúdo de tocoferóis (α-, 1.5; γ-, 0.5 mg/100 g) e carotenóides (luteína 244; trans-β caroteno 25 μg/100 g) foram observados no arroz negro; tocotrienóis (α-, 0.07; γ-, 0.14 mg/100 g) em arroz vermelho e γ-orizanol (115 mg/100 g) no arroz integral açucarado. Em todas as amostras de arroz integral coloridas, os principais ácidos graxos encontrados foram palmítico (16:0), oleico (18:1n-9) e linoleico (18:2n-6). A análise dos componentes de γ-orizanol por espectrometria de massa permitiu identificar 3, 10, 8, e 8 álcoois triterpenóides ou esteril ferulatos nas amostras integral, integral açucarado, vermelho e negro, respectivamente. Estas identificações dos componentes de γ-orizanol, assim como, a concentração dos compostos bioativos, pode levar a elucidação das funções biológicas de cada componente à nível molecular. O consumo de amostras de arroz integral colorido, ricas em compostos bioativos benéficos, pode representar uma interessante estratégia dietética para melhoria da saúde / Bioactive components in rice vary depending on the variety and growing condition. Fat-soluble components such as γ-oryzanol, tocopherols, tocotrienols, carotenoids and fatty acids were analyzed in brown, sugary brown, red and black rice varieties using established high-performance liquid chromatography (HPLC) and GC methodologies. In addition, these colored rice varieties were further analyzed using a high-resolution liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry (LC-MS/MS) (LTQ-Orbitrap XL) to identify the [M-H]- ions of γ-oryzanol, ranging from m/z 573.3949 to 617.4211. The highest content of tocopherols (α-, 1.5; γ-, 0.5 mg/100 g) and carotenoids (lutein 244; trans-β carotene 25 μg/100 g) were observed in black rice; tocotrienols (α-, 0.07; γ-, 0.14 mg/100 g) in red rice, and γ-oryzanol (115 mg/100 g) in sugary brown rice. In all colored rice varieties, the major fatty acids were palmitic (16:0), oleic (18:1n-9), and linoleic (18:2n-6) acids. When the γ-oryzanol components were further analyzed by LC-MS/MS, 3, 10, 8, and 8 triterpene alcohols or sterol ferulates were identified in brown, sugary brown, red, and black rice varieties, respectively. Such structural identification can lead to the elucidation of biological function of each component at the molecular level. Consumption of colored rice rich in beneficial bioactive compounds may be a useful dietary strategy for achieving optimal health / CNPq: 20013-8/140083-GM/GD