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Enriquecimento de 10B por cromatografia de troca aniônica / Enrichment of 10B by anion exchange chromatograph

Carneiro Júnior, Francisco 05 May 1989 (has links)
A separação dos isótopos do boro foi efetuada através da reação de troca isotópica entre o ácido bórico em solução aquosa e os ânions boratos e poliboratos adsorvidos em resinas de troca aniônica do tipo amônio (Dowex 1 e 2), em colunas de vidro de 100 cm de comprimento por 1,4 cm de diâmetro. Foram feitos estudos da variação do fator de fracionamento, medido por análise frontal, em função da concentração do ácido bórico em solução. Foram também conduzidos sobre o fracionamento de 10B e 11 B utilizando-se da técnica cromatográfica de deslocamento por desenvolvimento. As determinações da composição isotópica do boro se realizaram com um espectrômetro de massas"Atlas Varian"modelo CH-4, utilizando-se do gás borato de metila, obtido por reação direta do ácido bórico da amostra correspondente com metanol, em linha de vácuo / The separation of boron isotopes was carried out through isotopic exchange reaction between boric acid in solution and borate and poliborate anions adsorved on an ammonium quaternary (Dowex 1 and 2) anion exchange resin packed in a glass column, 100 cm lenght and 1.4 cm in diameter. Isotope fractionation factors were calculated through the analysis of break through curves as a function of boric acid concentration in solution 10B and 11B fractionation factors for the column were also studied using chromatographic displacement techniques. Boron isotopic concentration analysis were performed in an"Atlas Varian"CH-4 model mass-spectrometer. Methyl borate gas, obtained through direct reaction between boric acid and methanol in a vacuum line, was used for the analysis
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Enriquecimento de 10B por cromatografia de troca aniônica / Enrichment of 10B by anion exchange chromatograph

Francisco Carneiro Júnior 05 May 1989 (has links)
A separação dos isótopos do boro foi efetuada através da reação de troca isotópica entre o ácido bórico em solução aquosa e os ânions boratos e poliboratos adsorvidos em resinas de troca aniônica do tipo amônio (Dowex 1 e 2), em colunas de vidro de 100 cm de comprimento por 1,4 cm de diâmetro. Foram feitos estudos da variação do fator de fracionamento, medido por análise frontal, em função da concentração do ácido bórico em solução. Foram também conduzidos sobre o fracionamento de 10B e 11 B utilizando-se da técnica cromatográfica de deslocamento por desenvolvimento. As determinações da composição isotópica do boro se realizaram com um espectrômetro de massas"Atlas Varian"modelo CH-4, utilizando-se do gás borato de metila, obtido por reação direta do ácido bórico da amostra correspondente com metanol, em linha de vácuo / The separation of boron isotopes was carried out through isotopic exchange reaction between boric acid in solution and borate and poliborate anions adsorved on an ammonium quaternary (Dowex 1 and 2) anion exchange resin packed in a glass column, 100 cm lenght and 1.4 cm in diameter. Isotope fractionation factors were calculated through the analysis of break through curves as a function of boric acid concentration in solution 10B and 11B fractionation factors for the column were also studied using chromatographic displacement techniques. Boron isotopic concentration analysis were performed in an"Atlas Varian"CH-4 model mass-spectrometer. Methyl borate gas, obtained through direct reaction between boric acid and methanol in a vacuum line, was used for the analysis
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Purificação de albumina humana por cromatografia de troca ionica para estudos imunoquimicos

Pinho, Rosa Teixeira de 15 July 2018 (has links)
Orientador : H. A. Rangel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T14:22:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinho_RosaTeixeirade_M.pdf: 2090363 bytes, checksum: dc057b20380a3ed70891833bf10cf606 (MD5) Previous issue date: 1977 / Resumo: Experiências foram realizadas com o sentido de verificar a possibilidade de obtenção de albumina humana imunoquimicamente pura, utilizando-se uma metodologia disponível em laboratório medianamente equipados. Foram utilizados soros humanos obtidos a partir de sangue rejeitado para serviços de transfusão por ser impróprio para uso humano por apresentar reações sorológicas positivas para sífilis ou Doença de Chagas. Estes soros foram fracionados por ¿salting-out¿ e por cromatografia e a pureza das frações foi testada por eletroforese em acetato de celulose, imunoeletroforese e imunoeletroforese cruzada. Os resultados obtidos mostraram que: 1. O fracionamento com sulfato de amoneo permitiu a obtenção de uma fração enriquecida em albumina (80%) com um rendimento médio de 70%. 2. Por cromatografia em CM-celulose em condições controladas pode-se obter uma fração que de acordo com os resultados dos testes de pureza utilizados, contem apenas albumina com um rendimento global da ordem de aproximadamente 30%. 3. Experimentos de digestão da albumina obtida com a catepsina D de coelho, mostraram resultados similares aos obtidos com albuminas humanas purificadas, obtidas comercialmente / Abstract: Not informed. / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas
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Mecanização de cromatografia de troca ionica e sua aplicação a um estudo de estabilidade de Cr(VI)

Melo, Giovani Salviano 16 July 2018 (has links)
Orietnadora : Carol H. Collins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-16T15:18:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melo_GiovaniSalviano_M.pdf: 4679504 bytes, checksum: 05fe625334a40e75197e24a6854bee28 (MD5) Previous issue date: 1985 / Mestrado
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Análise de associações de major royal jelly protein 1 por cromatografia de exclusão molecular

Jorge, Humberto Gonczarowska 31 August 2012 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-01-17T14:01:33Z No. of bitstreams: 1 2012_HumbertoGonczarowskaJorge.pdf: 4182565 bytes, checksum: 32af60ccdfdd2ecfee93fbb6d0737438 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-01-24T13:04:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_HumbertoGonczarowskaJorge.pdf: 4182565 bytes, checksum: 32af60ccdfdd2ecfee93fbb6d0737438 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-24T13:04:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_HumbertoGonczarowskaJorge.pdf: 4182565 bytes, checksum: 32af60ccdfdd2ecfee93fbb6d0737438 (MD5) / Polifenismo é a habilidade de um genoma expressar múltiplos fenótipos morfológica e comportamentalmente distintos. Em abelhas Apis mellifera¸ o polifenismo é essencial, uma vez que gera divisão de tarefas na colméia, vital para sua viabilidade. A plasticidade fenotípica das abelhas é mediada nutricionalmente pela geleia real (GR). A major royal jelly protein 1 (MRJP1) é a mais abundante proteína da GR, e é descrita como o principal fator ativo na diferenciação de castas de Apis mellifera. A MRJP1 é uma glicoproteína que se liga fortemente a um peptídeo chamado apisimina (5,5 kDa) e se auto-associa, formando complexos de diferentes tamanhos, podendo se apresentar em diversas formas moleculares numa única solução. O objetivo deste trabalho foi caracterizar associações de MRPJ1 sob diversas condições. MRJP1 foi purificada em um único passo de cromatografia de troca iônica. Por cromatografia de exclusão molecular foi possível observar que a MRJP1 tende a se oligomerizar ou até mesmo a se agregar em tampões ácidos, em amostras aquecidas a 60ºC ou em tampões com alta molaridade de sal (2 M de NaCl) ou de glicina (2 M),. Em tampão PBS pH neutro e tampão carbonato/bicarbonato pH 10,0, a MRJP1 está presente em três formas -pentâmero (290 kDa), dímero (120 kDa) e monômero (55 kDa). Ao se adicionar 0,5 M de glicina em tampão carbonato/bicarbonato pH 10,0, a MRJP1 se dissocia, apresentando-se mais abundante nas formas dimérica e monomérica. A presença dos surfactantes dodecil sulfato de sódio, Tween® 20 e Brij 35 induz um aumento na massa dos complexos de MRJP1, causado provavelmente pela ligação de moléculas do detergente com a proteína, podendo também induzir oligomerização ou agregação. Logo, conclui-se que a liofilização e aquecimento das amostras de MRJP1 induzem oligomerização e agregação da amostra. Não liofilizar o monômero e mantê-lo em baixas temperaturas mantém a amostra nesta forma molcular. O tampão carbonato/bicarbonato, pH 10,0, contendo glicina 0,5 M foi o melhor para se obter menor quantidade de formas de MRJP1 em solução com grande quantidade de monômero. O processo de ultrafiltração impede a purificação de MRJP1 em cromatografia de troca-iônica. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Polyphenism is the hability of a genome to express multiple phenotypes with different morphologies and behaviors. In Apis mellifera bees, the polyphenism is essential, once it generates labor division in the hive, vital to its viability. The bee s phenotypic plasticity is nutritionally mediated by royal jelly (GR). The major royal jelly protein 1 (MRJP1) is the most abundant protein in GR, and it is described as the main active factor in differentiating Apis mellifera castes. The MRJP1 is a glycoprotein that binds strongly to a peptide named apsimin (5,5 kDa) and self-associates, forming complexes of various sizes, and may present itself in different molecular forms in one solution. The purpose of this study was to characterize MRJP1 associations under different conditions. MRJP1 was purified in a single step of ionic exchange chromatography. By size exclusion chromatography, it was possible to observe the MRJP1 oligomerization or even aggregation in acid buffers, in samples heated to 60ºC or in buffers with high salt molarity (2 M of NaCl) or glycine (2 M). In PBS buffer at neutral pH and carbonate/bicarbonate pH 10,0 buffer, MRJP1 was present in three forms - pentamer (290 kDa), dimer (120 kDa) or monomer (55 kDa). By adding 0.5 M of glycine in carbonate/bicarbonate pH 10,0 buffer, MRJP1 dissociates, leading to monomer and dimmer as the most abundant forms. The presence of the surfactants sodium dodecyl sulfate, Tween® 20 and Brij 35 induces a mass increase in the MRJP1 complex, probably caused by the binding of detergent molecules to the protein. Detergents may also induce oligomerization or aggregation. Therefore, it is concluded that lyophilization and heating the MRJP1 samples induce oligomerization and aggregation of the sample. To not lyophilize the monomer and keep it at low temperatures maintains the sample in this molecular form. The carbonate/bicarbonate buffer, pH 10.0, containing 0.5 M of glycine was the best for obtaining fewer MRJP1 forms in solution with high amounts of monomer. The ultrafiltration process prevents MRJP1 purification by ion exchange chromatography.
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Estudo de sistema bifasico duplo estagio para produção de dextrana

Curralero, Isabel Cristina Baddini 12 July 2000 (has links)
Orientador: Maria Isabel Rodrigues / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-26T23:51:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Curralero_IsabelCristinaBaddini_D.pdf: 25557083 bytes, checksum: ac27bcbea75954a1c01bb2c7e80e54f9 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A dextrana, um homopolissacarídeo de origem bacteriana, possui grande número de aplicações na indústria química, alimentícia e farmacêutica. Neste trabalho foi estudado um processo contínuo, de produção de dextrana, que permite o reciclo da enzima dextranasacarase. Neste sistema a enzima é adsorvida em resina de troca iônica (DEAE CELULOSE) e mantida em recirculação entre dois estágios. No primeiro, se dá a dessorção da dextranasacarase, pela alimentação de solução de NaCl, e a reação enzimática de formação de dextrana, a partir da sacarose alimentada. No segundo estágio a enzima é adsorvida para mantê-Ia no sistema, sendo assim retida pelo filtro colocado na saída desse estágio. o estudo deste sistema se iniciou com a obtenção experimental das isotermas de adsorção e constantes cinéticas dos processos de adsorção e dessorção, assim como a influência da concentração de eletrólito (NaCl) nesses parâmetros. A partir das equações cinéticas de adsorção e dessorção da dextrana-sacarase a 25°C, foi desenvolvido um modelo determinístico do processo e através de simulações foram obtidos perfis de concentrações de enzima livre e adsorvida, sacarose e NaCl...Observação: O resumo, na integra, podera ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Dextran, a bacterial homopolysaccharide, has many applications in chemical, food and pharmaceutical industries. In this work it was studied a continuous process, with dextrasucrase recycle, for dextran production. The enzyme is adsorbed in an ion exchange resin (DEAE CELLULOSE) and recirculated from one stage to other. In the first one, the dextransucrase dessorption takes place by the feeding of NaCl solution feeding, as well as the enzimatic reaction of dextran formation.In the 2ndstage the enzyme is adsorbed and matained in the system. In the exit stream it was located a tangencial filter to retain the resin. The experimental determination of adsorption isotherms, kinetic constants and the influence of eletrolitic strength in these parameters was the first step in this study. A deterministic model with the kinetic equations and mass balances was developed. Concentration profiles of free and adsorbed enzyme, sucrose and NaCl were obtained by simulation...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Engenharia de Alimentos
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Produção de inulinase por Kluyveromyces marxianus e purificação da enzima por cromatografia de troca ionica em coluna de leito expandido

Kalil, Susana Juliano 08 March 2000 (has links)
Orientador: Maria Isabel Rodrigues / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T22:56:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kalil_SusanaJuliano_D.pdf: 27960580 bytes, checksum: f8052c2378f9cdb4809a1a569343f121 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Frutose é o açúcar natural mais doce, sendo uma alternativa segura para substituir a sacarose. A lnulinase tem um importante papel na produção de uutose através da hidrólise enzimática da inulina, que pode ser realizada em uma única etapa e render até 95% de conversão. Este trabalho teve por objetivos otimizar as condições de produção da enzima inulinase produzida por Kluyveromyces marxianus ATCC 16045, otimizar as condições de reação sobre a sacarose e a inulina e recuperar a enzima em coluna de leito expandido utilizando a resina de troca iônica Strearnline SP. Técnicas de planejamento experimental e análise de superficie de resposta foram utilizadas para otimizar o meio de cultura para produção da enzima e as condições de determinação da atividade enzimática. Na produção da enzima foram estudadas as variáveis concentração de sacarose, extrato de levedura, peptona, K2HP04 e pH. Para tanto utilizou-se um planejamento fatorial uacionário (25-1)para determinar as variáveis mais importantes, sendo selecionadas três para serem utilizadas em um planejamento fatorial completo. A enzima obtida foi utilizada nos ensaios de determinação enzimática para verificar os efeitos da concentração de substrato (sacarose ou inulina), pH e temperatura na atividade de inulinase. Usando-se sacarose como substrato, verificou-se que a temperatura e o pH são as variáveis mais importantes e no caso da inulina somente a temperatura, dentro das faixas estudadas. A atividade enzimática passou de 9 para Ii OU/rnL após o estudo de otimização da produção da enzima. O caldo bruto clarificado foi utilizado para determinar a isoterma e cinética de adsorção da inulinase extracelular em resina de troca iônica Strearnline SP. Através dos dados experimentais de adsorção e mediante modelagem matemática, obteve-se os parâmetros cinéticos intrínsecos e os de transporte de massa. Os valores encontrados foram: kl=6,25.1O-3rnLlU.mÍn. e k2=2,09.1O-3mÍn.-1 independentemente da concentração de meio na solução. Os parâmetros coeficiente de transferência de massa (Ks) e difusividade efetiva (Def) foram 5,03.10-2, 5,03.10-4, 5,03.10-4cm/s e 1,105.10-6, 6,58.10-7 , 3,25.10-7 cm2/s para 45%, 60% e 100% de caldo bruto na solução estudada respectivamente. Os ensaios no leito expandido com o meio não clarificado permitiram determinar o expoente de Richardson -Zaki (5,3) e a velocidade terminal (17,6 cm/min.). Através dos ensaios de adsorção obteve-se as curvas de ruptura e determinou-se o grau de expansão mais adequado para a purificação da enzima (expansão de 2 vezes). Através dos testes de purificação da inulinase diretamente do caldo bruto, obteve-se uma recuperação de 74% e um fator de purificação de 10,4 vezes para a eluição do tipo degrau. / Abstract: Fructose is the sweetest sugar, being a safe alternative for sucrose. Inulinase may play an important role in fiuctose production, by enzymatic hydrolysis of inulin. The reaction occurs in a single step and it is possible to obtain up to 95% of conversion. In this work the optimization of the conditions for both inulinase production by Kluyveromyces marxianus ATCC 16045 and inulinase reaction on sucrose and inulin are proposed, as well as, the enzyme purification using an expanded bed with the ion exchanger Strearnline SP is studied. Factorial design and surface response analysis were used to optimize the culture conditions for inulinase production and the enzymatic reaction parameters. In the enzyme production the following variables were studied: sucrose, yeast extract, peptone and K2HPO4concentration and pH. The technique of factorial fiactional design (25-1)was used, resulting in the selection of three variables utilization in a complete factorial designo The inulinase produced in fermentation for Kluyveromyces marxianus was used to verify the effects of substrate concentration, pH and temperature on enzymatic reaction. Using sucrose as substrate it was verified that temperature and pH were the most important variables. However, when inulin was used as substrate only the temperature was selected. The enzymatic activity increased fiom 9 U/rnL to 110 U/rnL after production optimizationby Surface Response Analysis. In terms of enzyme purification, the filtrate of crude broth was used for the determination of the adsorption isotherm and the adsorption kinects of inulinase on the ion exchanger Strearnline SP. The kinetics parameters were: kl=6.25.1O-3rnL/U.min. and k2=2.09.1O-3min.-1. For 45%,60% and 100% of crude broth of the solution, the film coefficient (Ks) of 5.03.10-2, 5.03.10-4, 5.03.10-4 cm/s and the effective diffusion coefficient (Def) of 1.105.10-6,6.58.10-7 , 3.25.10-7 cm% were determined using the experimental results and mathematical modeling. The trials on expanded bed with crude broth were carried out to determine the Richarson - Zaki exponent (5.3) and terminal settling velocity (17.6 cm/min.). The studies of inulinase adsorption performance were used to obtain the breakthrough curves and established the best degree of bed expansion for enzyme recuperation. The inulinase was purified directly fiom an unclarified broth in 74% with a purification factor of 10.4 for elution step. / Doutorado / Doutor em Engenharia de Alimentos
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Recuperação e reciclagem dos ácidos nítrico e sulfúrico e do Molibdênio dos resíduos líquidos das indústrias de lâmpadas / Recovery and recycling of sulfuric and nitric acids and molybdenum from liquid waste of lamp industries

Oliveira, Thais de 26 November 2009 (has links)
O tratamento de rejeitos de determinados processos industriais vem ganhando importância, seja pelo impacto negativo do simples descarte no meio ambiente, seja pelo valor econômico de materiais e substâncias que podem ser eventualmente recuperados e reciclados. O rápido empobrecimento de reservas minerais primárias e o aumento de demanda de energia são problemas que merecem atenção especial. Neste contexto, a recuperação de metais existentes nos rejeitos de alguns processos de fabricação assume papel de maior importância. A recuperação do molibdênio presente em soluções nitro-sulfúricas, na forma de rejeitos líquidos do processo de fabricação de lâmpadas incandescentes e fluorescentes, não constitui exceção no que diz respeito à importância da reciclagem. Este rejeito, proveniente da dissolução dos mandris de conformação dos filamentos de tungstênio das lâmpadas, apresenta valores que podem ser recuperados e até reciclados no próprio processo. É o caso dos ácidos nítrico e sulfúrico. Já o molibdênio, presente em concentrações em torno de 40 a 90 g.L-1, pode ser recuperado e utilizado na fabricação de aços especiais, pigmentos, lubrificantes, adubo, etc. Neste trabalho foram desenvolvidos dois processos de recuperação deste rejeito. No primeiro, o rejeito é diluído e por cromatografia de troca iônica o molibdênio é recuperado. Os ácidos efluentes são destilados para a retirada da água. No segundo processo, o rejeito passa por uma destilação e ao mesmo tempo o molibdênio é precipitado. Em ambos os processos, os ácidos recuperados podem voltar à fábrica de lâmpadas para a dissolução dos mandris do filamento de tungstênio e o molibdênio encontra outras diferentes aplicações, além de possuir um valor significativo no mercado. / The waste treatment of certain industrial processes is becoming more important, either by the economic impact of simple disposal in the environment, or by the economic value of materials and substances that can eventually be recovered and recycled. The rapid depletion of mineral reserves and increasing primary energy demand are problems that deserve special attention. In this context, the recovery of metals present in waste of some manufacturing processes assumes a great importance. The recovery of molybdenum present in nitro-sulfur solutions in the form of liquid waste in the manufacturing process of incandescent and fluorescent lamps, is no exception with regard to the importance of recycling. The tailing from the dissolution of the molybdenum mandrel wires used in the conformation of the tungsten filament of electric lamps, has values that can be recovered and recycled to the process itself. Is the case of sulfuric and nitric acids. Molybdenum, present in concentrations around 40 to 90 g.L-1, can be recovered and used in the manufacture of special stainless steel, pigments, lubricants, fertilizer, etc.. In this work two processes for the recovery of this waste were proposed. At the first one, the waste is diluted and molybdenum is recovered by ion-exchange chromatography. The effluent acid from this process was distilled to extract water used in the dilution step. In the second case, the waste goes through a distillation while the molybdenum is precipitated. In both cases, the acids are recovered back to the lamp factory for the dissolution of the molybdenum mandrel wires and molybdenum finds other different applications, as well as having significant value in the market.
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Desenvolvimento de uma nova metodologia para produção de solução de imunoglobulina polivalente para uso endovenoso com dupla etapa de inativação viral

Edson de Souza Lucena, Antonio 31 January 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2014-06-12T16:24:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1081_1.pdf: 3167695 bytes, checksum: 84ef89e27190ff69ca4e0c0743e5e14b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Obteve-se concentrado de imunoglobulina G intravenosa IgGIV, altamente purificado, utilizando-se polietilenoglicol associado a uma única etapa de precipitação por etanol, em substituição ao tradicional método descrito por Cohn-Oncley, que emprega, em três etapas, o mesmo álcool resfriado, como agente precipitante. A purificação da fração bruta contendo mais de 95% de imunoglobulina G foi realizada utilizando-se cromatografia líquida com um trocador de cátion, a CMSepharose, como fase estacionária. Durante o processamento o produto foi submetido a dupla inativação viral sendo a primeira pela ação do caprilato de sódio, 30 mM a pH 5,1+/- 0,1 e a segunda por ação de mistura de solvente/detergente. O produto acabado foi formulado a 5% utilizando-se sucralose 10% como estabilizante. O rendimento da metodologia foi de 3,3g de IgG/L de plasma. A análise do produto acabado demonstrou atividade anti-complementar inferior a 1CH50. O valor percentual de polímeros e agregados em cinco lotes realizados foi inferior a 3%. O estudo da capacidade de neutralização demonstrou a presença de anticorpos anti-bacterianos e anti-virais em concentração pelo menos três vezes maior que o plasma de origem. O produto acabado apresentou conformidade com todos os requisitos de pureza dispostos na farmacopéia européia IV edição
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Utilização de diferentes tipos de imobilização da enzima oxalato oxidase na construção de biossensores

Okamoto, Sayuri 21 July 2018 (has links)
Orientador: Graciliano de Oliveira Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-21T14:56:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Okamoto_Sayuri_M.pdf: 3523584 bytes, checksum: 596d8bebadb1a1b4f3414b56c472f3f0 (MD5) Previous issue date: 1996 / Mestrado

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