Submitted by Beatrice Ingrid Macente null (beatrice.vetuel@yahoo.com.br) on 2017-12-13T17:24:54Z No. of bitstreams: 1 Tese de doutorado - FINAL.pdf: 1497835 bytes, checksum: ec09acb806dd08292a1d4ec818d596e7 (MD5) / Approved for entry into archive by Karina Gimenes Fernandes null (karinagi@fcav.unesp.br) on 2017-12-13T18:29:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 macente_bi_dr_jabo.pdf: 1454157 bytes, checksum: 970c2725b03ed803688cfef9261d801c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-13T18:29:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 macente_bi_dr_jabo.pdf: 1454157 bytes, checksum: 970c2725b03ed803688cfef9261d801c (MD5) Previous issue date: 2017-11-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Esta pesquisa teve por justificativa ampliar os estudos acerca da criopreservação de tecido gonadal e células espermáticas de gatos domésticos, podendo servir de modelo experimental para felinos selvagens. Objetivou-se comparar os efeitos da criopreservação sobre diferentes tamanhos de fragmentos testiculares, empregando dois crioprotetores. Utilizaram-se os testículos de 31 gatos domésticos, submetidos à orquiectomia eletiva. Os testículos foram pesados e apenas os que apresentarem pesos entre 1 e 2 g foram empregados. O tecido testicular foi dissecado e cortado em fragmentos de tamanhos pré-determinados (0,3cm3 e 0,5cm3). Uma amostra foi direcionada para as avaliações a fresco: integridade de membrana e do DNA; histopatologia; incidência de apoptoses por imuno-histoquímica; e índice de peroxidação lipídica - TBARS. A criopreservação foi feita em meio Tris-gema Equex STM suplementado com 3% de crioprotetores (glicerol e propanediol) através da técnica congelação rápida. Após a descongelação, foram realizados os mesmos testes iniciais. Os primeiros resultados obtidos com os 12 gatos iniciais apontaram na avaliação histomorfológica e pelo teste de lipoperoxidação lipídica que o glicerol foi mais eficiente que o propanediol na criopreservação de fragmentos testiculares de gatos domésticos de 0,5cm3 (Capítulo 2). No experimento seguinte, avaliaram-se os fragmentos testiculares de outros 31 gatos domésticos, seccionados nos mesmos tamanhos e criopreservados nas mesmas condições do experimento anterior, empregando-se 3% glicerol ou 3% propanediol no meio diluente Tris-gema Equex STM, utilizando a técnica de congelamento rápido, seguindo das avaliações pelos testes para dano ao DNA dos espermatozoides por meio da acridina laranja; e análise dos fragmentos teciduais semi-quantitativamente por histomorfologia e imuno-histoquímica. A avaliação imuno-histoquímica foi mais eficiente em verificar os danos às células tubulares seminíferas, sendo possível observar a marcação diferenciada da caspase presente no citoplasma e núcleo das células espermáticas, bem como na cabeça dos espermatozoides. Por meio da caspase foram verificado que os fragmentos frescos já apresentavam danos consideráveis as células teciduais e que não diferiram dos achados para os fragmentos criopreservados, demonstrando a eficiência do protocolo de congelação adotado, sem a observação de superioridade entre os dois tamanhos de fragmentos ou entre os crioprotetores. Contudo, a avaliação apenas do espermatozoides tanto pela técnica de acridina laranja, como pela imuno-histoquímica, pode-se verificar a inferioridade do propanediol em relação ao glicerol para fragmentos de 0,5 cm³ (Capítulo 3). Novas pesquisas que possam complementar os testes realizados neste estudo, como o cultivo dos fragmentos, a fertilização in vitro por meio de ICSI, ou ainda, o uso dos fragmentos para xenotrasnplantes poderiam avaliar com maior acurácia os achados das pesquisas reportadas nesta tese. / This research had the justification to broaden the studies about the cryopreservation of gonadal tissue and sperm cells of domestic cats, and could serve as an experimental model for wild cats. The objective of this study was to compare the effects of cryopreservation on different sizes of testicular fragments using two cryoprotectants. The testicles of 31 domestic cats submitted to elective orchiectomy were used. The testes were weighed and only those weighing between 1 and 2 g were used. The testicular tissue was dissected and cut into fragments of predetermined sizes (0.3cm3 and 0.5cm3). A sample was directed to fresh evaluations: membrane integrity and DNA; histopathology; incidence of apoptosis by immunohistochemistry; and lipid peroxidation index - TBARS. Cryopreservation was done on Tris-egg yolk Equex STM medium supplemented with 3% cryoprotectants (glycerol and propanediol) by the rapid freezing technique. After thawing, the same initial tests were performed. The first results obtained with the 12 initial cats showed that glycerol was more efficient than propanediol in the cryopreservation of testicular fragments of domestic cats of 0.5 cm3 (Chapter 2). In the following experiment, the testicular fragments from 31 other domestic cats, sectioned in the same sizes and cryopreserved under the same conditions as in the previous experiment, were evaluated using 3% glycerol or 3% propanediol in the Tris- egg yolk Equex STM medium, using rapid freezing technique, followed by evaluations for DNA damage of the spermatozoa by acridine orange; and analysis of the tissue fragments semi-quantitatively by histomorphology and immunohistochemistry. The immunohistochemical evaluation was more efficient in verifying the damage to the seminiferous tubular cells, being possible to observe the differentiated marking of the caspase present in the cytoplasm and nucleus of the sperm cells, as well as in the spermatozoa head. By caspase, it was verified that the fresh fragments already presented considerable damage to the tissue cells and did not differ from the findings for the cryopreserved fragments, demonstrating the efficiency of the adopted freezing protocol, without the observation of superiority between the two sizes of fragments or between the cryoprotectants. However, the evaluation of spermatozoa by both acridine orange and immunohistochemistry, the inferiority of propanediol to glycerol can be verified for fragments of 0.5 cm³ (Chapter 3). New research that could complement the tests performed in this study, such as the culture of fragments, in vitro fertilization using ICSI, or the use of fragments for xenotransplantation could more accurately assess the findings of the research reported in this thesis.

Embora o congelamento apresente vantagens em relação a outros métodos de conservação de alimentos, o mesmo causa alterações sensoriais, principalmente em produtos de origem vegetal. O morango, uma fruta muito apreciada e com formas variadas de consumo, tem comportamento sazonal e apresenta como fator limitante para o congelamento sua estrutura frágil e sensível ao processo, o que causa alterações sensoriais. Tais alterações podem ser minimizadas com a incorporação de crioprotetores, como a trealose, um dissacarídeo que vem se destacando pelo seu efeito crioprotetor em produtos congelados e desidratados. O principal objetivo deste trabalho foi verificar o efeito crioprotetor da trealose incorporada através da impregnação a vácuo em soluções de diferentes concentrações (100, 300 e 500 g/L) em morangos submetidos ao congelamento e descongelamento. As condições de impregnação foram de 5 min, aplicando pressão de -650 mmHg e 10 min de tempo de relaxamento. As alterações provocadas pelo processo de impregnação bem como a verificação do efeito crioprotetor da trealose foram identificadas através de análise de cromatografia líquida de alta eficiência (High Performance Liquid Chromatography- HPLC), análise colorimétrica, análise de textura, determinação do teor de sólidos solúveis, determinação do teor de umidade e perda de massa (perda por gotejamento). Os resultados mostraram que a concentração da solução de trealose exerce influência significativa no teor de umidade, teor de sólidos solúveis e teor de trealose. As amostras tratadas com soluções mais concentradas não sofreram desidratação após descongelamento. O teor de trealose, após descongelamento, permaneceu constante em todas as amostras tratadas. Todas as amostras tiveram a mesma perda de massa após descongelamento (perda por gotejamento), porém a composição da massa diferiu entre elas. Amostras tratadas com a solução mais concentrada perderam sólidos enquanto que as amostras tratadas com a menos concentrada, perderam água. Na análise de textura, a introdução da trealose não influenciou a força máxima de pico nas amostras impregnadas. Após descongelamento, todas as amostras, exceto a tradada com solução de 500 g/L, sofreram amolecimento. A parte externa dos morangos não sofreu alterações de cor devido à introdução da trealose nem devido ao congelamento e descongelamento. Na parte interna dos frutos, ocorreram variações no parâmetro L* devido à impregnação e no parâmetro b*, devido ao congelamento e descongelamento. / Although freezing offers advantages to others food conservations process, it causes sensorial changes, mostly in vegetables products. The strawberry, a quite appreciated fruit, shows different ways of use, has seasonal behavior and is limited to freezing due the sensorial changes caused by its fragile structure to freezing process. These sensorial changes can be minimized by the incorporation of cryoprotectors, as trehalose, that is known by its cryoprotector effect during freezing and dehydration. The aim of this work was to verify the trehalose cryoprotector effect in frozen and thawed strawberries introduced by vacuum impregnation with different solutions (100, 300 and 500 g/L). The impregnation conditions were 5 min of applying pressure of -650 mmHg and after atmospheric pressure was restored, the sample was maintained within the solution for 10 min (these conditions were obtained from previous experiments). The alterations caused by the vacuum impregnation and the verification of the cryoprotector effect of trehalose were identified by High Performance Liquid Chromatography (HPLC), color analysis, texture analysis, soluble solids content, moisture content and drip loss. The results have shown that concentration of the trehalose solution had a significant influence on the moisture content, soluble solids and trehalose content of impregnated strawberries. The samples treated with more concentration solutions did not dehydrated after thawing. The trehalose content was the same in all treated samples after thawing. All the samples showed the same drip loss due to thawing although the composition of the mass was different among the samples. Samples treated with the most concentration solution lost trehalose while the sample treated with the least concentration solutions lost water. The introduction of trehalose did not affect the maximum peak force of the impregnated samples. The freezing and the thawing process caused the softening of the samples. This effect was not observed on the sample treated with solution of 500 g/L. The introduction of trehalose did not cause significant differences in all color parameters measured on the outside of the strawberries after impregnation and thawing. In the inside of the samples, there were variation in the L* parameter caused by the vacuum impregnations and in the b* parameter caused by the freezing and thawing process.

Embora o congelamento apresente vantagens em relação a outros métodos de conservação de alimentos, o mesmo causa alterações sensoriais, principalmente em produtos de origem vegetal. O morango, uma fruta muito apreciada e com formas variadas de consumo, tem comportamento sazonal e apresenta como fator limitante para o congelamento sua estrutura frágil e sensível ao processo, o que causa alterações sensoriais. Tais alterações podem ser minimizadas com a incorporação de crioprotetores, como a trealose, um dissacarídeo que vem se destacando pelo seu efeito crioprotetor em produtos congelados e desidratados. O principal objetivo deste trabalho foi verificar o efeito crioprotetor da trealose incorporada através da impregnação a vácuo em soluções de diferentes concentrações (100, 300 e 500 g/L) em morangos submetidos ao congelamento e descongelamento. As condições de impregnação foram de 5 min, aplicando pressão de -650 mmHg e 10 min de tempo de relaxamento. As alterações provocadas pelo processo de impregnação bem como a verificação do efeito crioprotetor da trealose foram identificadas através de análise de cromatografia líquida de alta eficiência (High Performance Liquid Chromatography- HPLC), análise colorimétrica, análise de textura, determinação do teor de sólidos solúveis, determinação do teor de umidade e perda de massa (perda por gotejamento). Os resultados mostraram que a concentração da solução de trealose exerce influência significativa no teor de umidade, teor de sólidos solúveis e teor de trealose. As amostras tratadas com soluções mais concentradas não sofreram desidratação após descongelamento. O teor de trealose, após descongelamento, permaneceu constante em todas as amostras tratadas. Todas as amostras tiveram a mesma perda de massa após descongelamento (perda por gotejamento), porém a composição da massa diferiu entre elas. Amostras tratadas com a solução mais concentrada perderam sólidos enquanto que as amostras tratadas com a menos concentrada, perderam água. Na análise de textura, a introdução da trealose não influenciou a força máxima de pico nas amostras impregnadas. Após descongelamento, todas as amostras, exceto a tradada com solução de 500 g/L, sofreram amolecimento. A parte externa dos morangos não sofreu alterações de cor devido à introdução da trealose nem devido ao congelamento e descongelamento. Na parte interna dos frutos, ocorreram variações no parâmetro L* devido à impregnação e no parâmetro b*, devido ao congelamento e descongelamento. / Although freezing offers advantages to others food conservations process, it causes sensorial changes, mostly in vegetables products. The strawberry, a quite appreciated fruit, shows different ways of use, has seasonal behavior and is limited to freezing due the sensorial changes caused by its fragile structure to freezing process. These sensorial changes can be minimized by the incorporation of cryoprotectors, as trehalose, that is known by its cryoprotector effect during freezing and dehydration. The aim of this work was to verify the trehalose cryoprotector effect in frozen and thawed strawberries introduced by vacuum impregnation with different solutions (100, 300 and 500 g/L). The impregnation conditions were 5 min of applying pressure of -650 mmHg and after atmospheric pressure was restored, the sample was maintained within the solution for 10 min (these conditions were obtained from previous experiments). The alterations caused by the vacuum impregnation and the verification of the cryoprotector effect of trehalose were identified by High Performance Liquid Chromatography (HPLC), color analysis, texture analysis, soluble solids content, moisture content and drip loss. The results have shown that concentration of the trehalose solution had a significant influence on the moisture content, soluble solids and trehalose content of impregnated strawberries. The samples treated with more concentration solutions did not dehydrated after thawing. The trehalose content was the same in all treated samples after thawing. All the samples showed the same drip loss due to thawing although the composition of the mass was different among the samples. Samples treated with the most concentration solution lost trehalose while the sample treated with the least concentration solutions lost water. The introduction of trehalose did not affect the maximum peak force of the impregnated samples. The freezing and the thawing process caused the softening of the samples. This effect was not observed on the sample treated with solution of 500 g/L. The introduction of trehalose did not cause significant differences in all color parameters measured on the outside of the strawberries after impregnation and thawing. In the inside of the samples, there were variation in the L* parameter caused by the vacuum impregnations and in the b* parameter caused by the freezing and thawing process.

Embora o congelamento apresente vantagens em relação a outros métodos de conservação de alimentos, o mesmo causa alterações sensoriais, principalmente em produtos de origem vegetal. O morango, uma fruta muito apreciada e com formas variadas de consumo, tem comportamento sazonal e apresenta como fator limitante para o congelamento sua estrutura frágil e sensível ao processo, o que causa alterações sensoriais. Tais alterações podem ser minimizadas com a incorporação de crioprotetores, como a trealose, um dissacarídeo que vem se destacando pelo seu efeito crioprotetor em produtos congelados e desidratados. O principal objetivo deste trabalho foi verificar o efeito crioprotetor da trealose incorporada através da impregnação a vácuo em soluções de diferentes concentrações (100, 300 e 500 g/L) em morangos submetidos ao congelamento e descongelamento. As condições de impregnação foram de 5 min, aplicando pressão de -650 mmHg e 10 min de tempo de relaxamento. As alterações provocadas pelo processo de impregnação bem como a verificação do efeito crioprotetor da trealose foram identificadas através de análise de cromatografia líquida de alta eficiência (High Performance Liquid Chromatography- HPLC), análise colorimétrica, análise de textura, determinação do teor de sólidos solúveis, determinação do teor de umidade e perda de massa (perda por gotejamento). Os resultados mostraram que a concentração da solução de trealose exerce influência significativa no teor de umidade, teor de sólidos solúveis e teor de trealose. As amostras tratadas com soluções mais concentradas não sofreram desidratação após descongelamento. O teor de trealose, após descongelamento, permaneceu constante em todas as amostras tratadas. Todas as amostras tiveram a mesma perda de massa após descongelamento (perda por gotejamento), porém a composição da massa diferiu entre elas. Amostras tratadas com a solução mais concentrada perderam sólidos enquanto que as amostras tratadas com a menos concentrada, perderam água. Na análise de textura, a introdução da trealose não influenciou a força máxima de pico nas amostras impregnadas. Após descongelamento, todas as amostras, exceto a tradada com solução de 500 g/L, sofreram amolecimento. A parte externa dos morangos não sofreu alterações de cor devido à introdução da trealose nem devido ao congelamento e descongelamento. Na parte interna dos frutos, ocorreram variações no parâmetro L* devido à impregnação e no parâmetro b*, devido ao congelamento e descongelamento. / Although freezing offers advantages to others food conservations process, it causes sensorial changes, mostly in vegetables products. The strawberry, a quite appreciated fruit, shows different ways of use, has seasonal behavior and is limited to freezing due the sensorial changes caused by its fragile structure to freezing process. These sensorial changes can be minimized by the incorporation of cryoprotectors, as trehalose, that is known by its cryoprotector effect during freezing and dehydration. The aim of this work was to verify the trehalose cryoprotector effect in frozen and thawed strawberries introduced by vacuum impregnation with different solutions (100, 300 and 500 g/L). The impregnation conditions were 5 min of applying pressure of -650 mmHg and after atmospheric pressure was restored, the sample was maintained within the solution for 10 min (these conditions were obtained from previous experiments). The alterations caused by the vacuum impregnation and the verification of the cryoprotector effect of trehalose were identified by High Performance Liquid Chromatography (HPLC), color analysis, texture analysis, soluble solids content, moisture content and drip loss. The results have shown that concentration of the trehalose solution had a significant influence on the moisture content, soluble solids and trehalose content of impregnated strawberries. The samples treated with more concentration solutions did not dehydrated after thawing. The trehalose content was the same in all treated samples after thawing. All the samples showed the same drip loss due to thawing although the composition of the mass was different among the samples. Samples treated with the most concentration solution lost trehalose while the sample treated with the least concentration solutions lost water. The introduction of trehalose did not affect the maximum peak force of the impregnated samples. The freezing and the thawing process caused the softening of the samples. This effect was not observed on the sample treated with solution of 500 g/L. The introduction of trehalose did not cause significant differences in all color parameters measured on the outside of the strawberries after impregnation and thawing. In the inside of the samples, there were variation in the L* parameter caused by the vacuum impregnations and in the b* parameter caused by the freezing and thawing process.

Submitted by Anaclaudia Mattos Villalba (anaclaudiamattosvillalba@gmail.com) on 2016-04-09T23:49:33Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao-Josie-Schwartz-Caldas.pdf: 794588 bytes, checksum: edeac2ef5d199f65023941d4036fc463 (MD5) / Approved for entry into archive by cleuza maria medina dos santos (cleuzamai@yahoo.com.br) on 2016-05-09T14:06:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao-Josie-Schwartz-Caldas.pdf: 794588 bytes, checksum: edeac2ef5d199f65023941d4036fc463 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-09T14:06:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao-Josie-Schwartz-Caldas.pdf: 794588 bytes, checksum: edeac2ef5d199f65023941d4036fc463 (MD5) Previous issue date: 2014 / O peixe Geophagus brasiliensis, nativo brasileiro é explorado comercialmente como peixe ornamental, podendo, no futuro, ter reduzidos os estoques naturais. Com isso, a criopreservação pode garantir a sobrevivência e diversidade genética dessa espécie nativa. O objetivo deste estudo foi testar a eficiência crioprotetora e do Dimetil sulfóxido, Etileno glicol e Glicerol em sêmen de G. brasiliensis, utilizando os parâmetros espermáticos motilidade (taxa e tempo de motilidade), integridade de membrana e DNA, funcionalidade mitocondrial e espécies reativas de oxigênio (ERO). Os machos (n=12) foram obtidos de pescadores profissionais da Laguna dos Patos, tiveram seu sêmen coletado por massagem abdominal e diluído (1:9 v/v) em Betsville Thawing Solution para avaliação dos parâmetros espermáticos. As amostras seminais foram diluídas nos difentes tratamentos com crioprotetores DMSO, EG e GLI nas concentrações (5, 10, 15 e 20%). Sendo então, congeladas em Dryshipper e posteriormente armazenadas em botijão de Nitrogênio líquido à -196ºC, por no mínimo 15 dias. Posteriormente, descongeladas em banho-maria a 37º C por 8 segundos e as análises espermáticas refeitas. Todas as análises espermáticas foram realizadas por citometria de fluxo, exceto a motilidade (taxa e tempo) analisada ao microscópio de contraste de fases. Os resultados foram avaliados estatísticamente no programa Statistix 9.0 (2008). Os tratamentos com BTS, DMSO e EG, nas concentrações de 5%, não diferiram na quantidade de ERO (P>0.05). Os tratamentos com DMSO 10, 15 e 20% obtiveram os melhores resultados de integridade de membrana (P<0.05). A Funcionalidade mitocondrial foi semelhante nos grupos com DMSO 10 e 15% e EG 5% (P>0,05). Todos os tratamentos mantiveram a integridade do DNA (P>0,05). O DMSO 10% apresentou melhores médias de motilidade (taxa e tempo), sendo essas de 24% e de 160 segundos. O DMSO 10% foi o tratamento mais eficiente na criopreservação seminal de G. brasiliensis. / The Geophagus brasiliensis fish, Brazilian native is commercially exploited as ornamental fish, and may in the future have reduced the natural stocks. Thus, cryopreservation can ensure the survival and genetic diversity of this and other native species. The aim of this study was to test the efficiency of the cryoprotectant dimethyl sulfoxide, ethylene glycol and glycerol in semen G. brasiliensis, using the sperm motility parameters (rate and time), membrane and DNA integrity, mitochondrial function and reactive oxygen species (ROS). The fishes (n = 12) were obtained from fishermen of the Patos Lagoon, The semen was collected by abdominal massage and diluted (1:9 v / v) in Betsville Thawing Solution (BTS) for evaluation of sperm parameters. The samples were diluted in cryoprotectant treatments, DMSO, EG and GLI at different concentrations (5, 10, 15 and 20%) and frozen in Dryshipper and subsequently stored in liquid nitrogen (-196 ° C) for at least 15 days. Subsequently thawed in a water bath at 37 ° C for 8 seconds and remade sperm analysis. All analyzes were performed by flow cytometry, except motility (rate and time) analyzed by phase contrast microscopy. The results were evaluated statistically in Statistix 9.0 (2008) program. Treatments with BTS, EG and DMSO, at concentrations of 5%, did not differ in the amount of ROS (p> 0.05). Treatment with DMSO 10, 15 and 20% achieved the best results of membrane integrity (P <0.05). Mitochondrial functionality was similar in the groups with 10 and 15% DMSO and 5% EG (P> 0.05). All treatments were maintained the integrity of DNA (P> 0.05). The 10% DMSO showed better average motility (rate and time) which are 24% and 160 seconds. DMSO 10% was the most effective treatment cryopreservation of semen in G. brasiliensis.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_alexander_de_oliveira_goncalves.pdf: 291520 bytes, checksum: b6ebcc42cb32615e466fb7da14f76006 (MD5) Previous issue date: 2013-02-22 / The bovine in vitro embryo production (IVEP) showed a great expansion in last decades, but, various factors concours to low embryo production rates. This paper aimed to determine the influence of cryoprotector and sperm selection gradient on super recuperation rate and sperm integrity, including the rate of IVEP. The ejaculate of a bull with high FIV rates was divided; one part was frozen with 5% glycerol (GLY) and the other with 3% of ethylene glycol (EG). At sperm selection each group was centrifuged at 5000 x g/5min in discontinuous Percoll® (MP; 90 e 45%) and OptiPrep® (MO; 30 e 26%) mini gradients (600μl), forming four experimental groups: GLI/MP; EG/MP; GLI/OP e EG/OP. Motility, agglutination, recuperation rate, membrane integrity (MI), acrosome integrity (AI) and mitochondrial activity (MA) were evaluated pre- and post-sperm selection. Embryo production rates were accessed at cleavage, D7 and D8. At thawing there was no difference (P>0,05) on sperm motility (GLY - 78.6% ± 6,9 and EG - 75.7%± 5,3) and no sperm agglutination was detected. After sperm selection motility and sperm recuperation were different (P<0,05) between the groups GLY/MP; EG/MP e GLY/OP; EG/OP (82.9 ± 7.6 e 46.5 ± 13.8; 81.4 ± 9,0 and 44.3 ± 16.3 vs. 27.1 ± 4.9 e 23.1 ± 7.4; 31,4 ± 6.9 e 29.8 ± 12.4, respectively). On the other hand, there were no difference (P>0,05) between groups in sperm structural integrity after thawing and after sperm selection. The cleavage rate of GLY/MP and EG/MP groups were higher (P<0,05) than GLY/OP and EG/OP (66.1 ± 8.1 e 60.6 ± 14.2 vs. 41.6 ± 7.9 e 48.5 ± 7.5, respectively). At D7 blastocyst rates of GLY/MP group was superior (P<0,05) than GLY/MO, but similar (P>0,05) to EG/MP group, which do not differ (P>0,05) from EG/MO. At this moment only EG/MO do not differ (P>0,05) from GLY/MO. EG/MP, EG/MO and GLY/MO groups presented similar (P>0,05) embryo production rates at D8. In conclusion, the cryoprotectant do not interfere in the evaluated sperm and embryo parameters, and Percoll® mini - gradient provided better embryo production rates than OptiPrep® mini-gradient. / A PIV de embriões bovinos é a biotécnica de reprodução assistida que apresentou o maior crescimento nas últimas décadas, entretanto, vários fatores podem concorrer no comprometimento dos resultados. Este trabalho objetivou determinar a influência do crioprotetor e do gradiente de seleção espermática sobre a recuperação e integridade dos espermatozoides e a taxa de PIV de embriões bovinos. Inicialmente, um ejaculado de um touro reconhecidamente eficiente na FIV foi dividido em duas frações, uma delas congelada com 5% de glicerol (GLI) e a outra com 3% de etilenoglicol (EG). No momento da seleção espermática, cada grupo foi centrifugado a 5000 x g/5min em mini gradientes descontínuos de Percoll® (MP; 90 e 45%) ou OptiPrep® (MO; 30 e 26%) usando o método de volume reduzido (600μl), constituindo quatro grupos experimentais: GLI/MP; EG/MP; GLI/OP e EG/OP. Foram realizadas avaliações espermáticas pré e pós seleção espermática de motilidade, aglutinação, recuperação, integridade de membrana (IM), integridade de acrossoma (IA) e funcionalidade mitocondrial (FM). Com relação à produção embrionária, foram avaliados os parâmetros de clivagem, desenvolvimento embrionário no dia 7 (D7) e no dia 8 (D8). Na avaliação espermática ao descongelamento as taxas de motilidade observadas foram semelhantes (P>0,05) entre os grupos GLI (78,6 ± 6,9) e EG (75,7 ± 5,3). Nesse momento também não foi detectada aglutinação espermática nas amostras dos dois tratamentos. Pós-seleção espermática foi encontrada diferenças para motilidade e recuperação espermática entre os grupos, GLI/MP; EG/MP e GLI/OP; EG/OP (82,9 ± 7,6 e 46,5 ± 13,8; 81,4 ± 9,0 e 44,3 ± 16,3 vs. 27,1 ± 4,9 e 23,1 ± 7,4; 31,4 ± 6,9 e 29,8 ± 12,4, respectivamente). Não foram encontradas diferenças nas avaliações de integridade estrutural dos espermatozoides pósdescongelamento e pós-seleção espermática em nenhum dos grupos testados (P>0,05). Nas avaliações de produção embrionária os grupos GLI/MP e EG/MP foram superiores (P<0,05) para clivagem do que os grupos GLI/OP e EG/OP (66,1 ± 8,1 e 60,6 ± 14,2 vs. 41,6 ± 7,9 e 48,5 ± 7,5, respectivamente). No D7, as taxas de produção de blastocistos obtidas no grupo GLI/MP foram maiores (P<0,05) do que no GLI/MO, mas foram semelhantes (P>0,05) ao EG/MP, que por sua vez, não diferiu (P>0,05) do EG/MO. Neste momento, apenas o EG/MO não diferiu (P>0,05) do GLI/MO. No D8, os grupos EG/MP, EG/MO e GLI/MO foram semelhantes (P>0,05). Conclui-se que o crioprotetor utilizado no congelamento de sêmen não interfere em nenhuma das avaliações espermáticas e de desenvolvimento embrionário e que o método de seleção espermática usando o mini gradiente OptiPrep® afeta a motilidade e recuperação espermática proporcionando menor taxa de produção embrionária do que quando se utiliza o mini gradiente Percoll®.