Thesis (PhD)--University of South Australia, 2002.

Thesis (M.Sc. (Tropical Medicine))--Mahidol University, 1979.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-08T11:46:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 811660 bytes, checksum: 22a429ae96272122735337467c7e7599 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-08T11:46:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 811660 bytes, checksum: 22a429ae96272122735337467c7e7599 (MD5) Previous issue date: 2000-09-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente trabalho tem por objetivo verificar, nos parâmetros morfológicos e biológicos, após a exposição das larvas de Culex. quinquefasciatus à concentração de 1,5 ppb de ivermectina, o comportamento e a sobrevivência de C. quinquefasciatus, as possíveis alterações morfológicas no corpo gorduroso das larvas, as possíveis alterações no número de ínstares, número médio de ovos por postura da fêmea, duração do período larval e a assimetria flutuante nos adultos. Na sua execução foram utilizadas 601 larvas de 3o e 4o ínstar do mosquito como material biológico, que foram obtidas de criação semi natural. As larvas foram colocadas em recipientes plásticos num período de 30 minutos de exposição à droga. Após a exposição à solução do fármaco, foram lavadas em água desclorada e colocadas em gaiolas teladas para acompanhamento do desenvolvimento. Após a postura, os ovos foram separados e as larvas eclodidas, contadas. Algumas larvas submetidas a 1,5 ppb de ivermectina, foram utilizadas para o preparo de amostras para estudos em histologia. Para a análise de assimetria flutuante, 40 machos e 43 fêmeas adultas do grupo controle e 39 machos e 40 fêmeas adultas, sobreviventes das larvas expostas à concentração de 1,5 ppb de ivermectina, foram selecionados e destes, retiradas suas asas para posterior observação através do microscópio estereoscópico com câmera de vídeo acoplada. Foram realizadas medidas de comprimento das nervuras R3, R4+5, M1, M2, M3+4 e do perímetro das nervuras M1 e M2. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que a ivermectina na concentração de 1,5 ppb causou paralisia nas larvas com 73,38% de mortalidade, aumento das gotículas de lipídios no corpo gorduroso larval e uma diminuição do número de posturas. Foi verificado também, alteração na assimetria flutuante (AF), sendo maior no grupo controle e nas fêmeas. / The present work aims to investigate the behavior and the survival rate of Culex. quinquefasciatus, and to determine the lethal effect of ivermectin based on morphologic and biologic parameters of a 1.5 ppb concentration of C. quinquefasciatus larvae, and possible alterations of their fat body. Larvae of mosquito were obtained from semi-natural breeding as biologic material. Changes in the number of instars, average number of eggs per laying, length of the larval stage and fluctuating asymmetry (FA) were studied in adults. For this experiment, 601 larvae of 3rd and 4th instars of the mosquito were obtained and placed in plastic containers and exposed for 30 minutes. The laid eggs were separated and the hatched larvae were counted. Some larvae submitted to 1.5 ppb of ivermectin were used to prepare samples for histologic study. For asymmetry analyses, 40 floating males and 43 adult females of the control group which survived exposure to 1.5 ppb of ivermectin were selected and from them, the posterior observation through stereoscopic microscope with video camera mounting. R3, R4+5, M1, M2, M3+4 nervures and the perimeter of M1 and M2 nervures were measured. The results obtained show that ivermectin in a concentration of 1.5 ppb caused paralysis to the larvae with a mortality rate of 73.38%, an increase in the number of lipid droplets in the fat body and an reduction of the number of egg layings in the adult. It was also observed that the FA is larger in females than in males and also larger in the treated group than in the control one.

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:40:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000019.pdf: 4535638 bytes, checksum: ba6d1594b7c195d05d2f9188b230d1a7 (MD5) Previous issue date: 2007 / A armadilha de oviposição BR-OVT foi desenvolvida com base na soma de estímulos físicos e químicos para atração de fêmeas grávidas de Culex quinquefasciatus Say, 1823 (Diptera: Culicidae), uma espécie de grande importância epidemiológica, envolvida na transmissão da Wuchereria bancrofti e de vários arbovirus. O presente estudo teve como objetivo avaliar atraentes e larvicidas para melhorar o desempenho da armadilha, bem como testar a eficiência da armadilha para uso na coleta de dados entomológicos de Cx. quinquefasciatus. Para otimizar o uso da BR-OVT e avaliar a sua competitividade frente aos principais tipos de criadouros no Recife, foram realizados testes em laboratório e a campo. Em laboratório, foram realizados bioensaios em câmara de escolha, com Bacillus sphaericus (Bs), B. thuringiensis israelensis (Bti) e atraente de oviposição (J1), para verificar se a presença destes produtos interfere na escolha de sítios de oviposição. Estes materiais foram comparados à infusão de gramínea, um atraente comumente utilizado em armadilhas para atrair fêmeas grávidas de mosquitos. Os bioensaios foram conduzidos em gaiola de 100 x 80 x 70 cm, utilizando 50 a 100 fêmeas grávidas por ensaio, com pelo menos 6 repetições. Em campo, armadilhas com diferentes tratamentos foram instaladas no interior ou na área externa de residências localizadas em bairros do Recife, por períodos de 20, 30, 80 ou 348 dias. O número de armadilhas por experimento variou de 11 a 180. Os resultados dos experimentos em laboratório e a campo mostraram que as bactérias entomopatógenas Bs e Bti são atraentes de oviposição para fêmeas de Cx. quinquefasciatus; e quando adicionados à infusão de gramínea não alteram a atratividade da armadilha; que o J1, associado ao Bti, é um bom atraente de oviposição para Culex, com potencial para substituir a infusão de gramínea em armadilhas; a avaliação a campo demonstrou que a BR-OVT é um instrumento eficiente para coleta de amostras populacionais de Cx. quinquefasciatus, com sensibilidade para indicar variações na densidade, além de ser um instrumento de fácil construção e manejo, que dispensa o uso de energia elétrica e tem boa aceitação pelo público

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:44:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000037.pdf: 3432272 bytes, checksum: 6fd23c7e5c7e46be4206f493ddaa6998 (MD5) Previous issue date: 2008 / A eficácia e seletividade do Bacillus sphaericus (Bsp) para larvas do vetor Culex quinquefasciatus é devida à ligação específica da toxina binária (Bin), principal proteína inseticida do Bsp, a um receptor presente no epitélio intestinal das larvas, a glicosidase Cqm1. Um mecanismo de resistência descrito para este culicídeo é devido a uma deleção de 19 nucleotídeos (d19) no gene cqm1 (cqm1-d19) que, em homozigose, impede a expressão do receptor no epitélio. O objetivo deste trabalho foi determinar a freqüência do alelo cqm1-d19 em populações naturais de Cx. quinquefasciatus, não tratadas e tratadas com o Bsp, além de avaliar polimorfismos no gene cqm1. Uma análise in vivo da susceptibilidade ao Bsp em larvas de Cx. quinquefasciatus mostrou que as populações não tratadas de Varadouro, Peixinhos e Fazenda Nova apresentaram valores de razão de resistência (RR) de 1,3 a 4,0 vezes, enquanto que para a população tratada de Água Fria a RR variou de 2,7 a 8,6 vezes, em relação à população susceptível usada como controle. Os valores de RR inferiores a 10 indicaram que não houve alteração significativa na susceptibilidade. Os alelos cqm1 e cqm1- d19 foram identificados através de método diagnóstico de PCR utilizando primers que flanqueiam a d19 e as amostras das populações analisadas variaram entre 162 e 353 larvas. O alelo cqm1-d19 foi detectado pela primeira vez em populações naturais e sua freqüência em áreas não tratadas da Região Metropolitana do Recife (RMR) foi de 1,16 x 10-2 em Varadouro e de 7,8 x 10-3 em Peixinhos. Na população de Fazenda Nova, isolada geograficamente da RMR, o alelo não foi detectado. Em Água Fria, tratada com o Bsp desde 2003, as freqüências foram bem mais elevadas em relação às populações não tratadas: 6,94 e 5,55 x 10-2 após 13 e 24 tratamentos, respectivamente. Em paralelo à detecção do alelo foi feita a avaliação da freqüência de expressão da -glicosidase Cqm1, através de ensaios enzimáticos in gel, e os resultados corroboraram aqueles de freqüência alélica em todas as populações. A partir da análise de polimorfismos no gene cqm1 em 15 indivíduos de Água Fria, foram identificados 13 alelos, baseados em 13 alterações na seqüência de aminoácidos, a maioria na região C terminal. Dentre os alelos identificados, dois ocorreram em maior freqüência e os demais foram variações destes principais. Os resultados deste estudo mostraram que a freqüência do alelo cqm1-d19 é alta em populações naturais, e mais elevada naquelas que estão sob pressão de seleção, além de demonstrarem que o gene cqm1 é altamente polimórfico. As abordagens moleculares utilizadas neste estudo são mais sensíveis que os bioensaios, visto que foi possível detectar indivíduos heterozigotos e homozigotos resistentes, e são adequadas para avaliar a susceptibilidade de populações de Cx. quinquefasciatus ao Bsp. Estes dados reforçam a adoção de medidas visando o uso sustentável do biolarvicida Bsp em programas de controle de vetores

Culex coronator Dyar & Knab e Culex usquatus Dyar são duas espécies irmãs, que fazem parte do Complexo Coronator, composto por mais quatro espécies (Culex usquatissimos Dyar, Culex ousqua Dyar, Culex camposi Dyar, Culex covagarciai Forattini). As fêmeas deste grupo são indistinguíveis por caracteres morfológicos, sendo a identificação possível somente através da distribuição e tamanho das cerdas apicais que ornamentam o gonocoxito da genitália masculina. Cx. coronator, é a espécie com maior distribuição geográfica, ocupando as Américas do Norte, Central e Sul. Já Cx. usquatus só foi registrado nas Américas Central e do Sul, ocorrendo em simpatria no Brasil com Cx. coronator. Apesar da semelhança morfológica das fêmeas das duas espécies, até o momento, somente Cx. coronator foi encontrado naturalmente infectado por diversas arboviroses. Considerando que estudos populacionais são importantes para compreender a evolução e a dinâmica de populações de pontencias vetores, e que a correta identificação de fêmeas é fundamental para estudos de competência vetorial, os objetivos deste trabalho foram: (1) distinguir fêmeas adultas de Cx. coronator de Cx. usquatus (2) obter conhecimento da estrutura populacional de Culex coronator nas regiões Sul e Sudeste (3) examinar a possível existência de outras espécies não descritas e/ou incorretamente identificadas sob o epíteto de Cx. coronator. Para tanto foram utilizadas duas ferramentas: uma morfológica (morfometria de asa), e outra genética (4 loci de microssatélites e sequenciamento do fragmento barcode do gene COI). As análises dos três marcadores mostraram que as populações do Sudeste são geneticamente e morfologicamente diversas, mas não apresentam estrutura populacional, enquanto as populações do Sul são mais homogêneas, e diferentes das do Sudeste. Assim, tanto os microssatélites como a morfometria geométrica, mostraram alguma estruturação populacional em relação às macrorregiões Sul e Sudeste. A análise da morfometria da asa distinguiu as espécies de Cx. coronator e Cx. usquatus, enquanto a análise do COI barcode apresentou uma politomia das duas espécies. Nenhum marcador indicou a existência de um complexo de espécies sob o espíteto Culex coronator. / Culex coronator and Culex usquatus are sibling species belonging to Coronator Group, which comprises five other species (Culex usquatissimos Dyar, Culex ousqua Dyar, Culex camposi Dyar, Culex covagarciai Forattini). Except by Cx. yojae, the females of this group are indistinguishable, being the identification only possible by the analysis of the arrangement and number of appendicles on the apical lobe of the gonocoxite of the male genitalia. Cx. coronator is the most widely distributed species in the complex, occupying North, Central and South America, while Cx. usquatus was recorded only in Central and South America. Therefore, these species are sympatric in Brazil. Despite the morphological similarity of the females of both species, only Cx. coronator has epidemiological importance, being found infected with many arboviruses. Since studies focusing in population structure are important to understand the evolution and dynamics of potencial vectors and that the correct female identification is critical for development of vectorial competence studies, the aims of this study were to: (1) distinguish adult females of Cx. coronator from Cx. usquatus (2) obtain knowledge of the population structure of Culex coronator in Southern and Southeastern areas (3) examine the presence of undescribed and/or incorrectly identified species under Cx. coronator. Thereby, a survey was carried out using morphological (wing geometry) and genetic (4 microsatellite loci and barcode region of the Cytochrome c oxidase subunit I gene) markers. Results showed genetic and morphological diversity of southeastern populations, with low population structure, while southern populations were more homogenous but different from those of Southeast Brazil. Thus, analysis of microsatellite and wing morphometry showed some populational structure according to South and Southeast macro-regions. Only wing morphometric analysis distinguished Cx. coronator from Cx. usquatus, while the COI barcode analysis showed a polytomy of the two species. No marker indicated Cx. coronator s.s as a group of cryptic species.

O propósito deste trabalho foi o de elaborar uma revisão com o objetivo de avaliar a importância epidemiológica de Culex subgen. Melanoconion (Diptera, Culicidae). A análise de informações sobre sistemática e distribuição geográfica, mostrou tratar-se de um taxon composto de uma grande diversidade de espécies e amplamente distribuído através do continente americano. Ao se levantar aspectos relativos às propriedades bioecológicas desses mosquitos, ficou evidente que algumas espécies são dotadas de características favoráveis ao desempenho da função vetora. Dados sobre isolamentos de uma ampla variedade de vírus desses culicídeos, indicaram tratar-se de um grupo potencialmente importante em saúde pública. No Estado de São Paulo, sua importância se evidencia por serem freqüentes no Vale do Ribeira, região que parece comportar muitos vírus. Assim sendo, é possível que algumas espécies possam atuar na manutenção de focos naturais de infecção nessa área. / The aim of this study is to evaluate the epidemiological importance of the Culex subgen. Melanoconion (Diptera, Culicidae), through a review of literature. Informations on systematic and geographic distribution show that the taxon in comprised of several species and it is widely distributed on the American Continent. In the analysis of the bioecological aspects of these mosquitos it is evident that some of the species have the appropriate characteristics to develope the functions of a vector. Several species of virus have been isolated from these culicids and that indicate their potential importance in Public Health. In Vale do Ribeira, State of São Paulo this importance is evident because a large number of virus has been isolatedin this area, and it is possible that species of culicids have a role in the maintenance of natural focuses of infection there.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:06:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6316_1.pdf: 1519850 bytes, checksum: e4bd8e3bdb516150584f89ad5cae15a2 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / A atividade larvicida do Bacillus sphaericus depende da ligação da toxina binária (Bin) com um receptor específico presente no epitélio intestinal de larvas de culicídeos. Este trabalho descreve a clonagem e sequenciamento do gene deste receptor em larvas de Culex quinquefasciatus de uma colônia susceptível (CqSF) e de uma resistente (CqRL1/2362) ao Bs, para elucidar o mecanismo molecular da resistência. Ensaios de afinidade in vitro mostraram que uma proteína de 60 kDa é o receptor da toxina na colônia CqSF e nenhuma molécula funcional foi observada em preparações da colônia CqRL1/2362. O sequenciamento do gene obtido da colônia CqSF mostrou uma seqüência de 1925 pb composta por regiões 5 e 3´não traduzidas, sequência codificadora e íntron. A respectiva sequência do gene para a colônia CqRL1/2362 mostrou uma deleção de 19 nucleotídeos, geradora de uma mudança na fase de leitura de 28 aminoácidos e de um códon de terminação da tradução prematuro. A presença deste códon prematuro pode desestabilizar o respectivo mRNA, e impedir sua tradução, bem como leva a síntese de uma proteína truncada sem a âncora GPI necessária a sua localização na membrana epitelial. Em ambos os casos a ausência do receptor no epitélio intestinal seria a causa da resistência. Neste trabalho foi produzida ainda uma proteína recombinante do receptor de 45 kDa que mostrou funcionalidade, demonstrando que o sítio de ligação está localizado na porção N-terminal da molécula. Anticorpos obtidos contra esta proteína recombinante demonstraram ser uma ótima ferramenta de detecção do receptor nativo

Culex tarsalis is a major vector of West Nile Virus (WNV) in North America. Although the genome for this species was recently sequenced, the physical genome map has not developed. Unlike other Culex species, that have sex-determination locus on chromosome 1, the sex locus in Cx. tarsalis is located on chromosome 3, the longest chromosome. It is currently unknown if this difference is associated with chromosomal rearrangements. The objectives of this study were to develop a high-resolution map for the precise physical genome mapping in Cx. tarsalis and to compare mitotic chromosomes between three species of Culicinae mosquitoes. Using mitotic chromosomes from imaginal discs of 4th instar larvae of Cx. tarsalis, we developed idiograms based on morphology and proportions of the mitotic chromosomes. In addition, the physical mapping of ribosomal genes using fluorescence in situ hybridization was performed. The comparative analysis of Cx. tarsalis to Cx. pipiens and Cx. quinquefasciatus chromosomes showed that the total chromosome length in Cx. tarsalis is longer than the other two species suggesting the bigger genome size in this mosquito. A comparison of the relative chromosome length between the species indicated no significant differences suggesting that no large chromosomal translocation occurred between the species. Comparisons of the centromeric indexes demonstrated a significant difference in chromosome 1 between Cx. pipiens and Cx. quinquefasciatus. This difference suggests the presence of pericentric inversion between the species or amplification of ribosomal genes in Cx. pipiens. Studying mosquito chromosomes advances our understanding of Culex cytogenetics. Further comparative physical mapping of the three major mosquito genera will help us to understand the evolution of genus Culex better and to develop genome-based strategies for the vector control. / Master of Science in Life Sciences / West Nile Virus (WNV) is the most common virus transmitted to humans by mosquitoes in the United States. While many species of mosquitoes are known to carry WNV, Culex tarsalis is a major vector on the west coast of North America. However, previous research on Cx. tarsalis lack chromosome studies on this mosquito. Our study aims to develop a high-quality chromosome map for Cx. tarsalis and to compare the mitotic chromosomes of Cx. tarsalis and Cx. quinquefasciatus and Cx. pipiens in respect of chromosomal rearrangements. We used a fluorescent DNA probe to find the location of the ribosomal locus in the chromosomes of Cx. tarsalis. This study developed a cytogenetic tool for further genomic studies of Cx. tarsalis that will help to develop genome-based strategies for vector control. Comparing the physical mapping of the three major mosquito genera will help to understand the genome evolution in Culicinae mosquitoes better.

Objetivo - Estabelecer um método para produção em massa do mosquito Culex (Culex) quinquefasciatus em laboratório, com o intuito de fornecer subsídio ao controle populacional desta espécie por meio da liberação de machos estéreis. Métodos Foi fundada uma colônia de Cx. quinquefasciatus a partir de imaturos coletados em janeiro de 2013 no rio Pinheiros, São Paulo/SP, Brasil. Os mosquitos adultos tiveram seus pesos secos mensurados e o desenvolvimento avaliado como o tempo para atingirem o estágio de pupa e a fase adulta. No primeiro experimento foram testadas quatro dietas diferentes (ração de peixe, ração canina, mistura de 50 por cento de ração de peixe e 50 por cento de ração canina ou uma mistura de 33,33 por cento de ração de peixe, 33,33 por cento de ração canina e 33,33 por cento de leite em pó) e três temperaturas (27 ± 2°C, 23 ± 2°C e 20 ± 2°C). No segundo experimento testaram-se diferentes quantidades de ração de peixe, densidades larvárias, volume e altura da coluna dágua Resultados - No primeiro experimento não houve diferença estatística significante entre as quatro dietas testadas e o tempo de formação até a fase de pupas e para o peso seco dos adultos. No entanto a ração de peixe proporcionou a menor mortalidade. A maior temperatura (27 ± 2°C) diminuiu o tempo do ciclo de vida dos imaturos, porém gerou adultos com pesos secos menores. No segundo experimento, a condição 0,5 mg/larva, 5 ml/larva em 2,1 cm de coluna dágua e a 27 ± 2°C ofereceu boa produção em massa e gerou maiores taxas de desenvolvimento, menor mortalidade de imaturos e maior peso seco em adultos. Conclusão - Não foi definida uma dieta ideal para uso na produção em massa, considerando os parâmetros analisados. A dieta menos custosa é a ração canina, porém deve ser moída manualmente ou em máquina, tornando a ração de peixe mais eficiente para ser diretamente aplicada nas bandejas de produção. O estudo sugere que a melhor condição para a produção massa do Cx. quinquefasciatus foi 0,5 mg de ração de peixe/dia por larva num volume de 5 ml/larva em 2,1 cm de coluna dágua e a 27 ± 2°C. O estudo sugere que esta técnica pode auxiliar no controle populacional dessa espécie / Objective To establish a method for mass rearing of Culex (Culex) quinquefasciatus mosquitoes in laboratory, in order to provide subsidy to the population control of this species through the release of sterile males. Methods - A colony of Cx. quinquefasciatus was founded from immature collected in January 2013 in the Pinheiros River, São Paulo/SP, Brazil. Adult mosquitoes had their dry weights measured and the development was evaluated as the time to reach pupae and adult phase. In the first experiment it was tested four different diets (fish food, dog food, a mix of 50 percent fish and 50 percent dog food or a mix of 33.33 percent fish 33.33 percent dog food and 33.33 percent milk powder) and three temperatures (27 ± 2°C, 23 ± 2°C and 20 ± 2°C). In the second experiment it was tested several conditions of food amounts (mg/day), larvae densities (ml of water/larva) and water column height that would generate high development rate, low immature mortality and high adult dry weight. Results - In the first experiment there was no statistically significant difference in the time for the development to pupae stage or in the total dry weight of adults among the four experimental diets. However, fish food provided less immature mortality. The highest temperature (27 ± 2°C) decreased the time of the immature life cycle, but generated adults with lower dry weights. In the second experiment, the condition 0.5 mg/larva, 5 ml/larva in 2.1 cm of water column and 27 ± 2°C offered good mass rearing and generated higher development rate, lower immature mortality and higher adult dry weights. Conclusion No ideal diet was defined for mass rearing in the parameters analyzed. The less expensive diet was the dog food, but this should be milled by hand or machine, which makes the fish food more practical in the production trays. This study suggested that the best condition for mass rearing of Cx. quinquefasciatus mosquitoes was 0.5 mg of daily fish food/larva, 5 ml/larva in 2.1 cm of water column and 27 ± 2°C. The study suggests that this technique can assist in population control of this species