Wolbachia é uma bactéria endossimbionte que interfere na reprodução de seus hospedeiros. Dentre os efeitos estão: partenogênese, morte dos machos, feminização, alterações na aptidão reprodutiva e incompatibilidade citoplasmática. Este trabalho avalia e compara as diferenças fisiológicas e reprodutivas entre Culex quinquefasciatus infectados e não-infectados por Wolbachia. As larvas de mosquitos não-infectadas atingem o estágio adulto anteriormente. As fêmeas adultas não- infectadas têm maior capacidade de depositar ovos, depositam uma maior quantidade de ovos e estes são também mais viáveis. Em contrapartida as fêmeas infectadas vivem mais tempo quando alimentadas com sangue, e necessitam de menos tempo, após a alimentação sanguínea, para depositar ovos. O fato de os mosquitos não-infectados terem uma melhor aptidão reprodutiva pode estar relacionado a diferenças na quantidade de vitelogenina. Constatamos que o tamanho alar não é significativamente alterado com a desinfecção, porém a assimetria bilateral alar dos mosquitos infectados é mais acentuada. / Wolbachia is an endosymbiont bacterium that interferes on reproduction of their hosts. It can cause: parthenogenesis, male-killing, feminilization, alterations in reproductive fitness and cytoplasmic incompatibility. This study evaluated and compared physiological and reproductive differences between Culex quinquefasciatus infected and non-infected with Wolbachia. We noted that the mosquito larvae of non-infected mosquitoes reach the adult stage earlier. Uninfected adult females have higher ability to lay eggs, lay more eggs and those eggs have higher viability. In contrast, infected females live longer when fed with blood, and require less time after blood feeding to lay eggs. The fact that non-infected mosquitoes have better reproductive fitness may be related to differences in the amount of vitellogenin. We noted that wing size is not significantly altered by the infection, and that the infected mosquitoes showed higher bilateral wing asymmetry.

O diptero Culex quinquefasciatus, devido ao seu interesse médico, tem sido alvo de diversas tentativas de controle populacional que acabam enfrentando como fator limitante a microevolução. Para verificar a presença de variação populacional indicativa de microevolução, foram coletadas e comparadas amostras de dois locais dentro do Estado de São Paulo: O Parque Ecológico do Tietê, no município de São Paulo e em Pariquera-Açú, no Vale do Ribeira. A análise morfométrica das asas revelou que há diferença de forma e tamanho entre as populações e que o dimorfismo sexual é evidente e a assimetria bilateral alar é pouco pronunciada nas duas populações. A micrografia de ovos mostrou diferenças interpopulacionais quanto à altura dos tubérculos do exocórion. O padrão de bandas observado na análise do DNA ribossômico foi homogêneo. O fluxo gênico entre essas populações parece reduzido, fato que reflete diretamente a dinâmica dispersional desses mosquitos, fenômeno que pode ter implicações diretas na transmissão de eventuais doenças veiculadas por esses insetos. / Culex quinquefasciatus is a pantropical synanthropic species of great medical interest. Several attempts to control this species have fail due to its microvelution of resistance to insecticides. In order to detect populational variation indicative of microevolution, two populational samples from State of São Paulo were compared: São Paulo municipality (Park Ecológico do Tietê) and Pariquera-Açú municipality. Biological parameters were wing morphometrics, exochorion micrography and ribosomal DNA. Wings characters revealed shape and size divergencies between populations. Exochorion were also interpopulationally different. Polymorphisms observed may be a result of genetic differentiation. rDNA was homogeneous intra and interpopulationally. Gene flow between populations appears to be reduced, which may be closely related to the dispersional dynamics of these mosquitoes. Such interpretation is relevant to a better understanding of transmission of diseases by these insects.

Objetivo. Culex (Culex) quinquefasciatus Say 1823 tem distribuição expansiva em aglomerados humanos e é vetor em ciclos de transmissão de agentes patogênicos, como filarídeos e arbovírus. Taxonomicamente, essa espécie está dentro do subgrupo pipiens, cuja principal característica é a similaridade morfológica dos seus integrantes. Este estudo objetivou caracterizar genética e morfologicamente espécies Cx. quinquefasciatus de dez localidades brasileiras e da região da bacia do Prata, na Argentina. Métodos. Para análises morfológicas foram utilizados valores morfométricos das veias alares de fêmeas e a razão DV/D do edeago, na genitália de machos adultos. Para testes genéticos foram sequenciados os genes mitocondriais cox1 e nd4, clonados fragmentos do segundo espaçador ribossomal ITS2 e analisado o padrão de bandas eletroforéticas do segundo intron do lócus da Acetilcolinesterase (ace2). Resultados. A forma das veias alares de fêmeas agrega dois principais grupos, um com mosquitos do Brasil e outro de La Plata, tendo este último maior variança interna. Esses dados estão relacionados à distribuição encontrada no fragmento ace2, que indica La Plata como área de hibridação entre Cx. quinquefasciatus e Cx. pipiens. Os valores de tamanho da asa apresentam três principais agrupamentos. Um deles em áreas ao norte do Brasil, outro no sudeste e sul, e outro na Argentina. O mesmo ocorre com a razão DV/D da genitália masculina. Os dados de sequências de bases do gene cox1 apresentam polimorfismos, com baixa diversidade e agrupamento populacional na região Sul do Brasil. Os SNPs encontrados são silenciosos, pois não apresentam modificação na estrutura da proteína produzida. O gene nd4 é idêntico em todas as amostras. Esses fragmentos sugerem características de homoplasmia em Cx. quinquefasciatus. O espaçador ITS2 mostrou variedade de polimorfismos, por eventos intra-genômicos de inserção, deleção, translocação e transição de bases. Porém, esses eventos são sincrônicos em populações de diferentes áreas geográficas; assim como, mostra pouca variação nas estruturas dos transcritos RNAr. Por outro lado, os dados ITS2 apontam a segregação de um trinucleotídeo GTC, em mosquitos de La Plata, caracterizando essa área como de isolamento geográfico de mosquitos do complexo pipiens. Conclusão. A espécie Cx. quinquefasciatus possui baixa diversidade genética e morfológica, duas linhagens mitocondriais no Brasil e mosquitos de origem híbrida com Cx. pipiens na Bacia do Prata, na Argentina / Objective. The Culex (Culex) quinquefasciatus Say 1823 is widely distributed in human settlements, and is a vector in the transmission cycles of pathogens such as arboviruses and filarids. This species belongs to Cx pipiens complex, whose main characteristic is the morphologic similarity of their species. This study aimed to characterize genetic and morphological Cx quinquefasciatus species from different regions of Brazil and La Plata, Argentina. Methods. Were used morphometric values of wing veins of females and the DV/D ratio of aedeagus in adult male genitalia. For genetic testing were sequenced mitochondrial cox1 and nd4 genes, cloned fragments of ribosomal ITS2 spacer and examined the pattern of electrophoretic bands of the second intron of Acetylcholinesterase (ace2) locus. Results. The shape of the wing veins of female aggregates two main groups, one with mosquitoes of the Brazil and one from La Plata, the latter having greater internal variance. These data are related to the distribution found in ace2 fragment, which indicates La Plata as hybridization area between Cx. pipiens and Cx. quinquefasciatus. The values of wing size form a geographical cline, with three main groupings. One of these areas in the north of Brazil other in the southeast and south, and another in Argentina. The same happens with reason DV/D of the male genitalia. Sequence data bases have cox1 gene polymorphisms with low diversity and clustering of population in southern Brazil. The cox1 SNPs found are trace, because it does not show modification in the structure of the protein produced. The nd4 gene is identical in all samples. These fragments suggest homoplasmic features in Cx. quinquefasciatus. ITS2 showed polymorphisms and intragenomic events by insertion, deletion, translocation and transition bases. However, these events are synchronous in populations from different geographic areas and shows little variation in the structures of rRNA transcripts. Moreover, the data indicate ITS2 segregation of a trinucleotide GTC in mosquitoes from La Plata, featuring this area as the geographic isolation of the subgroup pipiens mosquitoes. Conclusion. Cx quinquefasciatus species has low genetic and morphological diversity, two mitochondrial lineages in Brazil and mosquitoes of hybrid origin with Cx pipiens in La Plata, Argentina

Les Wolbachia sont des alpha-protéobactéries intracellulaires transmises verticalement de la mère aux descendants via les ovocytes. Du fait de ce mode de transmission, des stratégies de manipulation de la reproduction favorisant leur propagation ont été sélectionnées chez ces bactéries. La plus communément utilisée par Wolbachia s’appelle l’incompatibilité cytoplasmique (IC). L’IC a lieu lorsque des mâles infectés copulent avec des femelles non infectées ou infectées par des Wolbachia incompatibles et se traduit par la mort des descendants avant l’éclosion. L’IC est généralement conceptualisée comme un modèle mod/resc ou toxine/antidote dans lequel les Wolbachia présentes chez les mâles introduiraient dans les spermatozoïdes une toxine (fonction mod) qui, après la fécondation, entrainerait la mort des embryons, sauf si les Wolbachia présentes dans l’œuf produisent un antidote (fonction resc). C’est chez l’espèce de moustique Culex pipiens que la plus grande diversité de phénotypes d’IC a été décrite. Cette diversité repose uniquement sur la diversité des souches de Wolbachia hébergées par C. pipiens. Dans cette thèse, nous avons mené la première étude des mécanismes cytologiques responsables de la mort des embryons dans les croisements incompatibles chez C. pipiens. Nous avons montré que des défauts de condensation et de ségrégation de la chromatine paternelle lors de la première division embryonnaire entraînent la mort des embryons dans tous les croisements incompatibles étudiés. Ces défauts cellulaires sont les seuls observés, ce qui indique que la diversité de relations d’IC décrite chez C. pipiens ne repose pas sur une diversité de défauts cellulaires. L’étude, chez plusieurs souches de wPips, de l’opéron cidA/cidB dont l’implication fonctionnelle dans l’IC a récemment été mise en évidence chez la drosophile, nous a permis de montrer que cet opéron est amplifié et polymorphe dans tous les génomes de wPips séquencés. L’exploration des variants de cet opéron dans les génomes de Wolbachia infectant des populations naturelles de C. pipiens, à l’aide de plus de 250 lignées isofemelles, a permis d’associer de manière robuste une variation de cidB avec un changement dans le phénotype mod de certains mâles. En outre, la présence d’un variant ubiquitaire de cidA, supporte le rôle de ce gène dans la fonction resc. Ainsi, chez C. pipiens, l’opéron cidA/cidB grâce à son amplification et sa diversification est impliqué dans la diversité des phénotypes d’IC et fonctionnerait comme un système toxine-mod /antidote-resc : cidB étant impliqué dans la fonction mod et cidA dans la fonction resc. / Wolbachia are intracellular alpha-proteobacteria vertically transmitted from mothers to their offspring through oocytes. As a consequence of this transmission mode, reproductive manipulation strategies that promote bacteria spread in host populations have been selected. The most common manipulation used by Wolbachia is called cytoplasmic incompatibility (CI). CI occurs when infected males mate with uninfected or incompatible Wolbachia-infected females and results in the death of offspring before hatching. CI is generally conceptualized as a mod/resc or toxin/antidote model in which paternal Wolbachia would introduce a toxin (mod function) in sperms which would, after fertilization, induce embryonic death unless an antidote produced by maternal Wolbachia in the egg counteracts its effect (resc function). A to date unique diversity of CI phenotypes has been described in the mosquito species Culex pipiens. This diversity is based solely on the diversity of Wolbachia strains hosted by C. pipiens. In this PhD, we conducted, in C. pipiens, the first study of the cytological mechanism behind embryonic mortality in CI crosses. We showed that paternal chromatin condensation and segregation defects during the first embryonic division were responsible for embryonic death in all CI crosses. These CI defects were the only ones observed indicating that the diversity of CI phenotypes in C. pipiens is not based on a diversity of cellular mechanisms. We then studied the cidA/cidB operon in several wPip strains as the functional involvement of this operon in CI was recently demonstrated in Drosophila. We showed that this operon is amplified and polymorphic in all genomes of sequenced wPip. Investigation of cidA/cidB variants in Wolbachia genomes infecting natural populations of C. pipiens, using more than 250 isofemale lines, enabled us to reveal a robust association between cidB variations and change in mod phenotype. In addition, the presence of an ubiquitous cidA variant supports the role of this gene in the resc function. In C. pipiens, the cidA/cidB operon, through its amplification and diversification, is involved in the CI phenotypes diversity and would operate as a toxin-mod / antidote-resc system: cidB being involved in the mod function and cidA in the resc function.

Wolbachia est une bactérie endosymbiotique, intracellulaire et exclusivement transmise maternellement qui infecterait au moins 106 espèces d'insectes. Wolbachia manipule fréquemment la reproduction de ses hôte à son avantage, notamment en induisant une forme de stérilité conditionnelle appelée incompatibilité cytoplasmique (IC). Chez les moustiques du complexe Culex pipiens, une grande diversité de souches de Wolbachia et de types d'IC a été précédemment identifiée, mais plusieurs aspects de la biologie de cette association restaient peu connus. Les travaux présentés dans cette thèse ont notamment permis de caractériser (i) l'impact de Wolbachia sur la structuration génétique des populations hôtes et (ii) la diversité des souches de Wolbachia et, plus précisément d'appréhender le mécanisme de l'IC. Par un suivi de populations naturelles, nous avons mis en évidence que Wolbachia induisait une forte structuration de la diversité mitochondriale, mais aussi qu'elle participait à des événements répétés d'introgression cytoplasmique entre les différents membres du complexe Cx. pipiens. Nous avons également mené une étude de génomique comparative basée sur le séquençage de quatre génomes complets de Wolbachia très proches phylogénétiquement. Pour cela, nous avons mis en place une série d'analyses approfondies utilisant un large panel d'outils bioinformatiques couplés à des vérifications moléculaires. Nous avons montré qu'il existait peu de polymorphisme entre les groupes de Wolbachia infectant Cx. pipiens. De plus, ces études nous ont permis de mettre en évidence des gènes candidats qui pourraient être directement impliqués dans le mécanisme de l'IC. / Wolbachia is an intracellular bacterial symbiont, exclusively maternally inherited, infecting at least 106 species of insects. Wolbachia commonly manipulates insect reproduction to its own advantage, as well illustrated by a phenomenon of conditional sterility called cytoplasmic incompatibility (CI). In mosquitoes of Culex pipiens complex, a great diversity of Wolbachia strains and of CI types was previously identified, but several aspects of the biology of this symbiotic association remained unknown. The aim of the studies presented in this thesis is to characterize (i) the impact of Wolbachia on the host genetic structure and (ii) the Wolbachia strains diversity in order to attempt an identification of CI molecular basis. By a survey of natural populations, we highlighted that Wolbachia deeply impacts the population structure of mitochondrial diversity, but is also associated with repeated events of cytoplasmic introgression between members of complex Cx. pipiens. We also conducted a study of comparative genomics based on the sequencing of four complete genomes of very closely related Wolbachia strains. For that purpose, we performed a series of analyses using a wide panel of bioinformatic tools coupled with molecular validations. We showed a low polymorphism between two groups of Wolbachia infecting Cx. pipiens. These studies also allowed us to highlight promising candidate genes which could be directly involved in the CI mechanism.

Introdução: Parques inseridos na malha urbana de grandes metrópoles possuem potencial para manter o ciclo biológico de diversas espécies vetoras de patógenos, como as espécies Culex quinquefasciatus e Culex nigripalpus. Consideradas antropofílicas, essas espécies têm importância epidemiológica e são abundantemente encontradas na cidade de São Paulo. Porém, pouco se sabe sobre as características genéticas dessas espécies em escala microgeográfica. Visando o melhor entendimento sobre a estrutura populacional dessas espécies, foi analisado os padrões da forma alar e a caracterização genética por marcadores de microssatélites, afim de se obter informações que contribuam para o entendimento da situação populacional desses vetores dentro do município. Objetivos: (1) Analisar a variabilidade da forma alar nas populações de Cx. quinquefasciatus e Cx. nigripalpus; (2) Analisar a variabilidade genética e o fluxo gênico nas mesmas populações; (3) Testar a funcionabilidade de primers desenvolvidos para regiões de microssatélites nas populações de Cx. nigripalpus. Material e Métodos: No total, foram estudadas cinco populações de Cx. quinquefasciatus e sete populações de Cx. nigripalpus, coletados em parques urbanos da cidade de São Paulo. Análises discriminantes, como variável canônica, teste de reclassificação cruzada e dendrograma de Neighbor-joining, utilizando os software Morpho J e Past, foram realizadas para a compreensão do formato e tamanho da asa direita nas populações. Em relação ao estudo da estruturação genética, foram testados 12 pares de primers de microssatélites em mosquitos Cx. quinquefasciatus e 33 pares de primers em mosquitos Cx. nigripalpus. Resultados: Análise da morfometria geométrica alar nas populações de Cx. quinquefasciatus demonstrou homogeneidade nos formatos alares, sendo um caracter preservado nessa espécie pela cidade, contudo, há tênues diferenças na população coletada em ambiente mais silvestre. O mesmo foi observado para as populações de Cx. nigripalpus, onde foi possível visualizar uma subestruturação na forma alar dentro da população Shangrilá. Dos primers testados, 12 amplificaram de forma consistente em todas as populações de Cx. quinquefasciatus e seis primers nas populações de Cx. nigripalpus. Os resultados encontrados sugerem que ambas as espécies possuem baixa estruturação genética, com fluxo gênico moderado entre as populações de Cx. quinquefasciatus e baixo entre as de Cx. nigripalpus, apresentando alto índice de heterozigosidade, onde as únicas populações que estão em expansão são as que foram coletadas em ambientes onde a urbanização está avançando. Discussão: Processos de urbanização, somados às mudanças causadas no ambiente, beneficiam e tendem a elevar a abundância dessas espécies em ambientes antropizados. A baixa estruturação genética e morfométrica das asas dessas espécies indicam a adaptação delas na cidade, havendo segregação devido à heterogeneidade do ambiente em que as populações se encontram. Conclusão: Evidências de baixa estruturação entre as populações e indícios de expansão em populações de ambientes mais silvestres indicam que essas espécies estão atreladas ao processo de urbanização da cidade de São Paulo / Introduction: Urban parks have the potential to harbor and maintain the life cycle of several mosquitoes such as Culex quinquefasciatus and Culex nigripalpus, both are anthropophilic species with epidemiological importance and very abundant in São Paulo city. However, their genetics characteristics are poorly know. Aiming the better understanding of the population structure of these species in microregion, was evaluated the wing shape variation and selected microsatellite loci. In this way, the information obtained can contribute to the understanding of the population situation of these vectors in São Paulo city. Objectives: (1) To evaluate the wing shape variability in populations of Cx. quinquefasciatus and Cx.nigripalpus; (2) To evaluate the genetic variability and gene flow in the Cx. quinquefasciatus and Cx.nigripalpus populations (3) Test microsatellite markers functionality parameters in Cx. nigripalpus, previously used successfully in other Culex species. Material and Methods: Were studied, five populations of Cx. quinquefasciatus and seven population of Cx. nigripalpus collected in urban parks in São Paulo city. Discriminant analysis was made to evaluate the wing shape patterns, such as Canonical variate analysis, cross validated test and Neghbor-joninin dendrogram using Morpho J and Past softwares, were perfomed to understand the size and shape of the right wing in these populations. For the study of genetic structuring, there were tested 12 pairs of microsatellite loci in Cx. quinquefasciatus samples and 33 pairs of microsatellite loci in Cx. nigripalpus samples. Results: The wing shape patterns in Cx. quinquefasciatus population were homogeneous, showing a preserved character in this population, however, has been tenuous differences in the more sylvatic population. The same pattern was observed in Cx. nigripalpus populations and was observed substructuring in the Shangrilá population. From the tested primers, 12 were functional and amplified consistently in the all five Cx. quinquefasciatus population and for Cx. nigripalpus, six primers were amplified. The results suggest both species having low genetic structure, moderate gene flow and the only populations which are expading were collected in areas that the urbanization is increasing. Discussion: Urbanization processes added to the environmental changes benefit and tend to raise the abundance of these species in anthropized locals. The low genetic structure and alar morphometry indicates the adaptation of these species in São Paulo city, there being segregated due to the environment heterogeneity which the population inhabit. Conclusion: Evidence of low structure between populations studied and signs of expansion in populations of more sylvatic environments indicate that these species are linked to urbanization process

Mosquito species of the Culex genus are the enzootic vectors for several bird-associated viruses that cause disease in humans. In Europe, these viruses include Sindbis (SINV), West Nile and Usutu viruses. The morphologically similar females of Cx. torrentium and Cx. pipiens are potential vectors of these viruses, but difficulties in correctly identifying the mosquito species have caused confusion regarding their respective distribution, abundance, ecology, and consequently their importance as vectors. Species-specific knowledge from correctly identified field material is however of crucial importance since previous research shows that the relatively unknown Cx. torrentium is a far more efficient SINV vector than the widely recognized Cx. pipiens. The latter is involved in the transmission of several other viruses, but its potential importance for SINV transmission is debated. In this thesis I describe the development of a molecular method for species identification, based on reliably identified males of Cx. torrentium and Cx. pipiens. This identification method was then used in consecutive studies on the distribution and relative abundance of the two species in Sweden and 12 other European countries, SINV field infection rates in mosquitoes identified to species level, and evaluation of potential trap bias associated with common sampling techniques. The results showed that Cx. torrentium is a far more common species in Europe than previously assumed. In Sweden and Finland, it is the dominant species, accounting for 89% of the sampled Culex population. In central Europe, it is equally common to Cx. pipiens, while Cx. pipiens dominates south of the Alps Mountain range. Larvae of both species are often found together in both artificial containers (e.g. car tires) and natural sites. Also, a trapping bias against Cx. torrentium was revealed for CDC-traps. For the first time, SINV was isolated from species-identified Cx. torrentium and Cx. pipiens mosquitoes caught in the field, with Cx. torrentium being superior in infection rates (36/1,000 vs. 8.2/1,000). Future studies on SINV, as well as other mosquito-borne bird viruses in Europe, can hopefully gain from the baseline information provided here, and from principles of vector discrimination discussed in the thesis.

Made available in DSpace on 2016-05-19T13:08:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 174.pdf: 454680 bytes, checksum: 9c562dcb6ffa461994ffc34ce6b10bbd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação OSwaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / Os insetos podem atuar como pragas agrícolas e vetores de patógenos causadores de doenças ao homem e outros animais. Investigações a respeito do sistema imunológico de Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus poderão contribuir para o desenvolvimento de métodos de controle das doenças veiculadas por estes insetos, principalmente a dengue, enfermidade causadora de sério problema de saúde pública no mundo. Apesar de Ae. aegypti ser a única espécie vetora confirmada na transmissão do vírus Dengue no Brasil, considera-se também importante um melhor entendimento dos mecanismos imunológicos de Cx. quinquefasciatus tido como refratário ao vírus. Neste estudo foram utilizadas linhagens de Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus mantidas no Insetário do Departamento de Entomologia do CPqAM/FIOCRUZ. Três grupos experimentais de fêmeas com 10 dias de idade foram formados para cada espécie. Grupo I, composto por fêmeas alimentadas com solução sacarose (10 por cento); grupo II, fêmeas alimentadas com sangue limpo e grupo III, fêmeas alimentadas com sangue infectado com o sorotipo DENV-1. De cada grupo foram obtidos hemolinfa, glândula salivar, intestino médio e corpo gorduroso para avaliação da expressão dos antimicrobianos defensina e transferrina. Essa avaliação foi realizada através de PCR em Tempo Real utilizando o kit QuantiFast SYBR Green - One-Step qRT-PCR. A avaliação da hemodinâmica foi realizada utilizando 10 microlitros de hemolinfa de cada grupo, através da contagem das células em câmara de Neubauer. Nossos resultados demonstraram que o Cx. quinquefasciatus tem um maior aumento da expressão de defensina e um maior número total de hemócitos quando infectados com DENV-1 em relação ao Ae. aegypti e a transferrina teve sua expressão alterada somente no Ae. aegypti. Em ambas as espécies estudadas, apenas a alimentação sanguínea não interfere na produção de hemócitos ou quanto na indução de defensina e transferrina. Esses dados sugerem que fêmeas de Cx. quinquefasciatus parecem apresentar uma resposta imune celular e humoral mais intensa do que Ae. aegypti quando infectados com DENV-1

Objetivo. Culex (Culex) quinquefasciatus Say 1823 tem distribuição expansiva em aglomerados humanos e é vetor em ciclos de transmissão de agentes patogênicos, como filarídeos e arbovírus. Taxonomicamente, essa espécie está dentro do subgrupo pipiens, cuja principal característica é a similaridade morfológica dos seus integrantes. Este estudo objetivou caracterizar genética e morfologicamente espécies Cx. quinquefasciatus de dez localidades brasileiras e da região da bacia do Prata, na Argentina. Métodos. Para análises morfológicas foram utilizados valores morfométricos das veias alares de fêmeas e a razão DV/D do edeago, na genitália de machos adultos. Para testes genéticos foram sequenciados os genes mitocondriais cox1 e nd4, clonados fragmentos do segundo espaçador ribossomal ITS2 e analisado o padrão de bandas eletroforéticas do segundo intron do lócus da Acetilcolinesterase (ace2). Resultados. A forma das veias alares de fêmeas agrega dois principais grupos, um com mosquitos do Brasil e outro de La Plata, tendo este último maior variança interna. Esses dados estão relacionados à distribuição encontrada no fragmento ace2, que indica La Plata como área de hibridação entre Cx. quinquefasciatus e Cx. pipiens. Os valores de tamanho da asa apresentam três principais agrupamentos. Um deles em áreas ao norte do Brasil, outro no sudeste e sul, e outro na Argentina. O mesmo ocorre com a razão DV/D da genitália masculina. Os dados de sequências de bases do gene cox1 apresentam polimorfismos, com baixa diversidade e agrupamento populacional na região Sul do Brasil. Os SNPs encontrados são silenciosos, pois não apresentam modificação na estrutura da proteína produzida. O gene nd4 é idêntico em todas as amostras. Esses fragmentos sugerem características de homoplasmia em Cx. quinquefasciatus. O espaçador ITS2 mostrou variedade de polimorfismos, por eventos intra-genômicos de inserção, deleção, translocação e transição de bases. Porém, esses eventos são sincrônicos em populações de diferentes áreas geográficas; assim como, mostra pouca variação nas estruturas dos transcritos RNAr. Por outro lado, os dados ITS2 apontam a segregação de um trinucleotídeo GTC, em mosquitos de La Plata, caracterizando essa área como de isolamento geográfico de mosquitos do complexo pipiens. Conclusão. A espécie Cx. quinquefasciatus possui baixa diversidade genética e morfológica, duas linhagens mitocondriais no Brasil e mosquitos de origem híbrida com Cx. pipiens na Bacia do Prata, na Argentina / Objective. The Culex (Culex) quinquefasciatus Say 1823 is widely distributed in human settlements, and is a vector in the transmission cycles of pathogens such as arboviruses and filarids. This species belongs to Cx pipiens complex, whose main characteristic is the morphologic similarity of their species. This study aimed to characterize genetic and morphological Cx quinquefasciatus species from different regions of Brazil and La Plata, Argentina. Methods. Were used morphometric values of wing veins of females and the DV/D ratio of aedeagus in adult male genitalia. For genetic testing were sequenced mitochondrial cox1 and nd4 genes, cloned fragments of ribosomal ITS2 spacer and examined the pattern of electrophoretic bands of the second intron of Acetylcholinesterase (ace2) locus. Results. The shape of the wing veins of female aggregates two main groups, one with mosquitoes of the Brazil and one from La Plata, the latter having greater internal variance. These data are related to the distribution found in ace2 fragment, which indicates La Plata as hybridization area between Cx. pipiens and Cx. quinquefasciatus. The values of wing size form a geographical cline, with three main groupings. One of these areas in the north of Brazil other in the southeast and south, and another in Argentina. The same happens with reason DV/D of the male genitalia. Sequence data bases have cox1 gene polymorphisms with low diversity and clustering of population in southern Brazil. The cox1 SNPs found are trace, because it does not show modification in the structure of the protein produced. The nd4 gene is identical in all samples. These fragments suggest homoplasmic features in Cx. quinquefasciatus. ITS2 showed polymorphisms and intragenomic events by insertion, deletion, translocation and transition bases. However, these events are synchronous in populations from different geographic areas and shows little variation in the structures of rRNA transcripts. Moreover, the data indicate ITS2 segregation of a trinucleotide GTC in mosquitoes from La Plata, featuring this area as the geographic isolation of the subgroup pipiens mosquitoes. Conclusion. Cx quinquefasciatus species has low genetic and morphological diversity, two mitochondrial lineages in Brazil and mosquitoes of hybrid origin with Cx pipiens in La Plata, Argentina

Objetivo - Estabelecer um método para produção em massa do mosquito Culex (Culex) quinquefasciatus em laboratório, com o intuito de fornecer subsídio ao controle populacional desta espécie por meio da liberação de machos estéreis. Métodos Foi fundada uma colônia de Cx. quinquefasciatus a partir de imaturos coletados em janeiro de 2013 no rio Pinheiros, São Paulo/SP, Brasil. Os mosquitos adultos tiveram seus pesos secos mensurados e o desenvolvimento avaliado como o tempo para atingirem o estágio de pupa e a fase adulta. No primeiro experimento foram testadas quatro dietas diferentes (ração de peixe, ração canina, mistura de 50 por cento de ração de peixe e 50 por cento de ração canina ou uma mistura de 33,33 por cento de ração de peixe, 33,33 por cento de ração canina e 33,33 por cento de leite em pó) e três temperaturas (27 ± 2°C, 23 ± 2°C e 20 ± 2°C). No segundo experimento testaram-se diferentes quantidades de ração de peixe, densidades larvárias, volume e altura da coluna dágua Resultados - No primeiro experimento não houve diferença estatística significante entre as quatro dietas testadas e o tempo de formação até a fase de pupas e para o peso seco dos adultos. No entanto a ração de peixe proporcionou a menor mortalidade. A maior temperatura (27 ± 2°C) diminuiu o tempo do ciclo de vida dos imaturos, porém gerou adultos com pesos secos menores. No segundo experimento, a condição 0,5 mg/larva, 5 ml/larva em 2,1 cm de coluna dágua e a 27 ± 2°C ofereceu boa produção em massa e gerou maiores taxas de desenvolvimento, menor mortalidade de imaturos e maior peso seco em adultos. Conclusão - Não foi definida uma dieta ideal para uso na produção em massa, considerando os parâmetros analisados. A dieta menos custosa é a ração canina, porém deve ser moída manualmente ou em máquina, tornando a ração de peixe mais eficiente para ser diretamente aplicada nas bandejas de produção. O estudo sugere que a melhor condição para a produção massa do Cx. quinquefasciatus foi 0,5 mg de ração de peixe/dia por larva num volume de 5 ml/larva em 2,1 cm de coluna dágua e a 27 ± 2°C. O estudo sugere que esta técnica pode auxiliar no controle populacional dessa espécie / Objective To establish a method for mass rearing of Culex (Culex) quinquefasciatus mosquitoes in laboratory, in order to provide subsidy to the population control of this species through the release of sterile males. Methods - A colony of Cx. quinquefasciatus was founded from immature collected in January 2013 in the Pinheiros River, São Paulo/SP, Brazil. Adult mosquitoes had their dry weights measured and the development was evaluated as the time to reach pupae and adult phase. In the first experiment it was tested four different diets (fish food, dog food, a mix of 50 percent fish and 50 percent dog food or a mix of 33.33 percent fish 33.33 percent dog food and 33.33 percent milk powder) and three temperatures (27 ± 2°C, 23 ± 2°C and 20 ± 2°C). In the second experiment it was tested several conditions of food amounts (mg/day), larvae densities (ml of water/larva) and water column height that would generate high development rate, low immature mortality and high adult dry weight. Results - In the first experiment there was no statistically significant difference in the time for the development to pupae stage or in the total dry weight of adults among the four experimental diets. However, fish food provided less immature mortality. The highest temperature (27 ± 2°C) decreased the time of the immature life cycle, but generated adults with lower dry weights. In the second experiment, the condition 0.5 mg/larva, 5 ml/larva in 2.1 cm of water column and 27 ± 2°C offered good mass rearing and generated higher development rate, lower immature mortality and higher adult dry weights. Conclusion No ideal diet was defined for mass rearing in the parameters analyzed. The less expensive diet was the dog food, but this should be milled by hand or machine, which makes the fish food more practical in the production trays. This study suggested that the best condition for mass rearing of Cx. quinquefasciatus mosquitoes was 0.5 mg of daily fish food/larva, 5 ml/larva in 2.1 cm of water column and 27 ± 2°C. The study suggests that this technique can assist in population control of this species