The lymphatic filariasis, a disease known as elephantiasis in one of its chronic manifestations, is caused by a helminth nematodes species of Wuchereria bancrofti (Cobbold, 1877) that just parasite to human. It is transmitted by mosquitoes of the Culex quinquefasciatus (Say, 1823), with haematophagic nocturnal habit, which coincides with the peak of microfilariae in peripheral blood of the host. It is considered the second leading cause of the disability worldwide to work, to cause physical weakness, social stigma and economic loss. Is distributed in tropical and subtropical regions, present in 83 countries in Asia, Africa, Americas and Oceania, where an estimated 120 million in those infected. In Brazil, the areas considered at risk are the state of Pernambuco (Recife, Olinda, Jaboatão and Paulista), state of Alagoas (Maceió) and state of Pará (Belém), while the latter two cities with the foci of transmission interrupted. Salvador, capital of Bahia state, is considered the oldest focus of Bancroftian filariasis in Brazil. The first epidemiological survey conducted in the city to study the distribution of Wuchereria bancrofti was made in 1878, when 309 individuals were examined in 26 (8.4%) were found microfilariae in the blood. The last survey conducted in 1966 documented the prevalence found in the neighborhood Uruguay of 6.24%. Since then no study was conducted to evaluate the transmission of lymphatic filariasis in Salvador, the focus being considered extinct without any confirmation of the disposal of its transmission. The World Health Organization (WHO) established in 1997, the elimination of lymphatic filariasis in the world by the year 2020. In Brazil, in order to achieve this goal was established in 1997 in conjunction with the National Health Foundation, Research Institutes, Federal University of Alagoas and Health Departments of endemic areas, the National Plan to Eliminate Lymphatic Filariasis. Among the activities planned include the reassessment of epidemiological outbreaks considered extinct. This study aimed to evaluate the distribution of lymphatic filariasis endemic area in the old city of Salvador, Bahia (district and adjacent Uruguay). For this, we carried out the investigation in haemoscopic 11.324 students in the night time, finding no microfilaraemic; 663 employees and their families also underwent the examination of haemoscopia, not being found any microfilaraemic; researched is circulating antigens of W. bancrofti in 510 children aged 6 to 10 years of age through the immunochromatography test - ICT card, where no antigenemia was not identified; and determined the vector infection xenomonitoramento by using the technique of polymerase chain reaction, with the collection of 23.580 female mosquitoes of Culex quinquefasciatus that were engorged and resting inside houses. This analysis was not detected the presence of the DNA from W. bancrofti in these mosquitoes. These findings support that the elimination of the lymphatic filariasis transmission in the former endemic area of Salvador, Bahia and no expansion of lymphatic filariasis in areas adjacent to the old focus of Salvador. / A Filariose linfática (FL), doença conhecida como elefantíase em uma de suas manifestações crônicas, é provocada por um helminto Nematoda da espécie Wuchereria bancrofti (Cobbold, 1877) que parasita exclusivamente o ser humano. Sua transmissão ocorre através de mosquitos da espécie Culex quinquefasciatus (Say, 1823), com hábito hematofágico noturno que coincide com o pico das microfilárias no sangue periférico do hospedeiro. Considerada a segunda causa mundial de incapacidade para o trabalho, provoca debilidade física, estigma social e perdas econômicas. Encontra-se distribuída em regiões tropicais e subtropicais, estando presente em 83 países da Ásia, África, Américas e Oceania, onde são estimados em 120 milhões os infectados. No Brasil as áreas consideradas de risco localizam-se no Estado de Pernambuco (Recife, Olinda, Jaboatão e Paulista), no Estado de Alagoas (Maceió) e no Estado do Pará (Belém), estando as duas últimas cidades com os focos de transmissão interrompidos. Salvador, capital do Estado da Bahia, é considerado o mais antigo foco de bancroftose no Brasil. O primeiro inquérito epidemiológico realizado na cidade, para estudar a distribuição da Wuchereria bancrofti foi feito em 1878, quando foram examinados 309 indivíduos e em 26 (8,4%) foram encontrados microfilárias no sangue. No último inquérito documentado realizado nessa cidade, em 1966, a prevalência encontrada no bairro Uruguai foi de 6,24%. Desde então nenhum estudo foi realizado para avaliar a transmissão da FL em Salvador, sendo o foco considerado extinto sem que houvesse confirmação da eliminação de sua transmissão. A Organização Mundial de Saúde (OMS) estabeleceu em 1997, a eliminação da Filariose linfática no mundo até o ano de 2020. No Brasil, a fim de atingir essa meta foi elaborado, em 1997, em conjunto com a Fundação Nacional de Saúde, Instituições de Pesquisa, Universidade Federal de Alagoas e Secretarias de Saúde de áreas endêmicas, o Plano Nacional para Eliminação da Filariose Linfática. Entre as atividades previstas inclui-se a reavaliação epidemiológica dos focos considerados extintos. Baseando-se nesse princípio, este trabalho tem como objetivo apresentar a distribuição da FL na antiga área endêmica da cidade de Salvador/Estado da Bahia (bairro Uruguai e adjacências). Para isto, realizou-se o inquérito hemoscópico em 11.324 escolares do período noturno, não encontrando nenhum microfilarêmico; 663 funcionários e seus familiares também realizaram o exame da hemoscopia, não sendo encontrado nenhum microfilarêmico; pesquisaram-se antígenos circulantes de W. bancrofti em 510 crianças de 6 a 10 anos de idade através do teste da imunocromatografia ICT card, não sendo identificado nenhuma antigenemia; e avaliou-se a infecção vetorial por xenomonitoramento, através da técnica da Reação em Cadeia da Polimerase, com a coleta de 23.580 mosquitos fêmeas da espécie Culex quinquefasciatus que se encontravam ingurgitados e pousados dentro das residências. Nessa análise não foi detectado a presença de DNA de W. bancrofti nesses mosquitos. Esses resultados comprovam a eliminação da transmissão da FL na antiga área endêmica de Salvador e a não expansão da FL para áreas contíguas ao antigo foco de Salvador.

Apesar de Culex quinquefasciatus ser um eficiente vetor de doenças tais como a filariose linfática, febre do Nilo Ocidental e outras várias neuroviroses, poucas pesquisas sobre sua fisiologia têm sido conduzidas. Como em todos os animais ovíparos, o desenvolvimento embrionário dos mosquitos depende da degradação dos nutrientes armazenados no ovo, sendo a catepsina B uma protease que tem sido identificada e caracterizada em vários insetos como envolvida nesta função. Neste trabalho identificamos, por espectrometria de massas, duas catepsinas B de Culex quinquefasciatus, parcialmente purificadas por autoproteólise de extrato total de ovos. Segundo a anotação de suas sequências no banco de dados específico para vetores, o VectorBase, elas são enzimas parálogas e suas sequências apresentam 77% de homologia. Denominadas neste trabalho como CatB1 e CatB2, ambas são expressas simultaneamente no corpo gorduroso de todas as fêmeas vitelogênicas de nossa colônia e sua atividade pode ser detectada nos ovários vitelogênicos, sugerindo sua origem materna. A transcrição de ambas as enzimas se inicia após o repasto sanguíneo (ARS), alcançando o pico de expressão às 36 h ARS, de forma bastante semelhante à da vitelogenina. / Despite Culex quinquefasciatus be an efficient vector of diseases such as lymphatic filariasis, West Nile fever and other various neurotrophic viruses, little research on its physiology have been conducted. As in all oviparous animals, embryonic development of mosquitoes depends on the degradation of the nutrients stored in the egg. Cathepsin B is a protease that has been identified and characterized in a number of insects as involved in this function. In this work we have identified, by mass spectrometry, two cathepsins B of Culex quinquefasciatus, partially purified by self-proteolysis of total egg extract. According to the annotation of their sequences in the specific vector database, the VectorBase, they are paralogue enzymes and their sequences have 77% homology. Named in this work as CatB1 and CatB2, both are expressed simultaneously in the fat body of all vitellogenic females of our colony and its activity can be detected in vitellogenic ovaries, suggesting a maternal origin. The transcription of both enzymes starts post blood meal (PBM), reaching their peak of expression at 36 h PBM, quite similar to vitellogenin.

Les Wolbachia sont des α-Protéobactéries endocellulaires transmises maternellement et qui manipulent la reproduction des Arthropodes pour augmenter leur transmission. Chez le moustique Culex pipiens, Wolbachia induit l'incompatibilité cytoplasmique (IC) qui se traduit par une forte mortalité embryonnaire lors de croisements entre individus infectés par des souches incompatibles de Wolbachia. Ce moustique se caractérise par une forte diversité génétique de ses Wolbachia (nommées wPip) et par des patrons d'IC complexes. Nous avons examiné les mécanismes qui façonnent la dynamique de cette association symbiotique aux niveaux génomique, phénotypique et populationnel. Nous avons montré que les souches wPip ont une origine génétique commune récente et qu'elles s'organisent en groupes génétiques présentant une structuration géographique. Nous avons mis en évidence des évènements de recombinaison entre souches wPip qui pourraient jouer un rôle majeur dans la diversité génétique des Wolbachia et dans l'évolution rapide des patrons d'IC. En croisant des lignées de moustiques d'origines géographiques diverses et infectées par des souches de différents groupes génétiques, nous avons montré que les IC (i) évoluent très rapidement chez Cx. pipiens; (ii) sont contrôlées par plusieurs déterminants génétiques, et (iii) qu'il y a une relation entre les patrons d'IC et les groupes génétiques des Wolbachia. Dans les populations naturelles, il apparaît que les IC sont contre sélectionnées au sein d'une population mais qu'une zone de contact entre populations infectées par des souches incompatibles peut se maintenir de façon stable. / Wolbachia are maternally inherited endocellular α-Proteobacteria that manipulate the reproduction of Arthropods to promote their own transmission. In the mosquito Culex pipiens, Wolbachia induce cytoplasmic incompatibility (CI) which results in high embryonic mortality in crosses between mosquitoes infected with incompatible Wolbachia strains. This mosquito is characterized by high genetic diversity of its Wolbachia (referred as wPip strains) and by complex CI patterns. We examined mechanisms that shape the dynamics of this symbiotic association at genomic, phenotypic and field population levels to understand how it evolves. We showed that wPip strains have a unique and recent evolutionary origin and that their diversity clusters into distinct genetic groups with a geographic structure. We revealed the existence of extensive recombinations among wPip strains, which could influence their adaptive dynamics by creating new wPip strains and thus allow the rapid emergence of new CI patterns. The analysis of crossing relationships between mosquito lines from different geographic origins and infected with wPip strains belonging to different genetic groups showed that CIs (i) evolve rapidly in Cx. pipiens; (ii) are controlled by several genetic factors, and (iii) there is a significant relationship between CI patterns and genetic divergence of wPip strains. In field populations, it appears that CIs are selected against within a population but a contact zone between populations infected by incompatible Wolbachia strains can be stably maintained.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-10-09T18:04:23Z No. of bitstreams: 1 andre_b_veloso_ioc_bp_0047_2011.pdf: 4592043 bytes, checksum: a2b54a8751c7c9a32fe93ed74e1392a6 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-09T18:04:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 andre_b_veloso_ioc_bp_0047_2011.pdf: 4592043 bytes, checksum: a2b54a8751c7c9a32fe93ed74e1392a6 (MD5) Previous issue date: 2011 / FAPERJ / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / No presente trabalho, as atividades proteolíticas de extratos totais das fases pré-imaginais (ovos, larvas e pupa) e de imagos (machos e fêmeas), de Cx. quinquefasciatus foram caracterizadas por enzimografia em uma dimensão. Adicionalmente, o perfil proteolítico dos órgãos internos dos adultos (intestino e gônadas) foi analisado. Ao se comparar o perfil proteolítico das distintas fases evolutivas, observou-se que esses perfis apresentam diferenças qualitativas e quantitativas na expressão de peptidases. As atividades proteolíticas de todos os estágios do inseto são devidas, principalmente, a serinopeptidases do tipo tripsina, com atividades ótimas na faixa de pH alcalino. As tripsinas ativas dos quatro estádios larvais apresentam ampla estabilidade térmica, sendo ativas entre 25 °C – 65 °C, com atividade ótima entre 37 °C – 50 °C.. O perfil proteolítico dos imagos revelou que a expressão de algumas peptidases do tipo tripsina é sexo-específica e órgão-específica, sendo o perfil proteolítico das fêmeas mais complexo em número e intensidade quando ao perfil dos machos. Finalmente, o primeiro mapa proteômico parcial do intestino de fêmeas de Cx. quinquefasciatus foi obtido por eletroforese bidimensional e as proteínas foram identificadas por espectrometria de massas. / In this work, the proteolytic activities from total extracts of pre-imaginal stages (eggs, larvae and pupa) and adults (male and female) of peptidases of Cx. quinquefasciatus were characterized by one-dimensional zymography. In addition, the proteolytic profile from specific tissues such as gut and gonads was analyzed. Comparison of the proteolytic profiles from all life cycle stages revealed several quali- and quantitative differences in the peptidase expression. The proteolytic activities from both pre-imaginal and imaginal stages are mostly due to trypsin-like serine peptidases which display optimal activities at alkaline pH. The proteolytic enzymes of the four larval stages exhibited a broad thermal stability, showing activities in a range of 25 °C – 65 °C, with optimal activity between 37 °C – 50 °C. The proteolytic profile from imaginal stages revealed that the expression of some peptidase isoforms is sex-specific and tissue-specific. In addition, it was observed that the proteolytic profile from females is more complex, both in number of activities and in intensity levels, than that observed in males. Finally, it is reported here the first proteomic map of Cx. quinquefasciatus female gut obtained by two-dimensional electrophoresis and mass spectrometry analysis.

O mosquito Culex quinquefasciatus tem grande importância médica no mundo devido à sua habilidade como vetor de arboviroses e filarioses. O principal fator limitante dos métodos de controle populacional para Cx. quinquefasciatus é a microevolução dessa espécie, fenômeno que freqüentemente resulta em aumento da sua resistência a inseticidas e da sua tolerância à poluição. No Estado de São Paulo existem duas populações vivendo sob diferentes condições ambientais. Uma delas, próxima ao Rio Pinheiros (PIN), está sujeita à alta poluição e aplicações de piretróides e outra, em Pariquera-Açu (PAR), vive em local semi-rural na ausência de inseticidas. O objetivo deste trabalho foi investigar se essas populações provenientes de ambientes distintos possuem polimorfismos genéticomorfológicos e se a população PIN apresenta variações morfológicas ao longo do tempo. Os parâmetros utilizados nas comparações foram morfometria geométrica alar, análises do DNA ribossômico (DNAr) e de cromossomos politênicos. Não obtivemos sucesso na caracterização cariotípica devido a pouca nitidez das bandas e interbandas. A morfometria geométrica de 286 asas de PIN, amostras coletadas em 2004 (PIN04) e 2007 (PIN07), e 150 asas de PARI, amostras coletadas em 2008 demonstrou variações morfológicas. As duas populações PIN04 e PIN07 revelaram alto dimorfismo sexual de forma e tamanho, sendo asas de fêmeas maiores que asas de machos em ambas as populações. A assimetria bilateral não é significante para tamanho e é tênue para forma, sendo ligeiramente mais pronunciada em machos e em PIN07. Os espécimes de PIN07 são maiores e mais assimétricos que PARI, fenômenos possivelmente relacionados à maior disponibilidade de alimento e à contínua exposição a altos níveis de inseticida, respectivamente. Análises de DNAr revelaram padrões equivalentes para PIN07 e PARI. Em suma, supomos que o fluxo gênico entre as populações geográficas pode ter ocorrido até recentemente. Este estudo mostrou que é possível ocorrer variação de tamanho e forma de asas em Culicidae em um intervalo de tempo de três anos. O próximo passo poderia ser uma investigação aprofundada a respeito da relação entre variação geográfica-temporal e algumas de suas possíveis causas tais como poluição e inseticida. / The mosquito Culex quinquefasciatus has medical importance due to its ability of vectoring arboviruses and filariases. Microevolution resulting in insecticide resistance is a remarkable limiting factor for populational control of this species. In the State of São Paulo there are two populations under different environmental conditions. One, near Rio Pinheiros (PIN), is subjected to pollution and pyrethroids applications and another, in Pariquera-Açu (PAR), lives in a semi-rural place in the absence of insecticides. The objective of this work was to investigate if these populations from different environments have geneticmorphological polymorphisms and if PIN population exhibits morphological variations during the time. Parameters used in the comparisons were wing geometric morphometrics, ribosomal DNA (rDNA), and polytene chromosomes. Karyotypic characterization was unsuccessful due to the poor definition of bands and interbands. Morphometrical analyses of 286 wings of PIN, collected in 2004 (PIN04) and 2007 (PIN07), and 150 wings of PARI, collected in 2008, demonstrate morphological variations. The two populations PIN04 and PIN07 revealed strong intrapopulational sexual dimorphism concerning shape and size, being the wings of females larger than those of males in both populations. The wing asymmetry is non-significant for size and tenuous for shape, being slightly more conspicuous in males and in PIN07. The specimens of PIN07 are larger and more bilaterally asymmetric than PARI, possibly due to higher food availability and to continuous exposition to high level of insecticide, respectively. Analysis of rDNA revealed restriction patterns equivalent for PIN07 and PARI populations. Thus, one may suppose that gene flow may have occurred until recently. This study showed that it is possible to occur size and shape variation of wings in Culicidae in time intervals as short as three years. The next step would be to evaluate in depth the relationship between geographical-temporal variation and some of possible causes like pollution and insecticides.

Introdução - Culex quinquefasciatus é um mosquito sinantrópico que causa incômodo à população humana e é relacionado com a transmissão de nematóides ou arbovírus em áreas endêmicas, respectivamente, do litoral brasileiro e da América Central ou do Norte. Culex nigripalpus é um mosquito hemi-sinantrópico que possui a capacidade de se dispersar para as áreas antrópicas e transmitir Saint Louis Virus e Equine Encephalitis Virus, respectivamente, na América do Norte e Venezuela. Objetivo - Caracterizar o hábito alimentar de Culex nigripalpus e a densidade, a sobrevivência e o hábito alimentar de Culex quinquefasciatus no Parque Ecológico do Tietê (PET), São Paulo. Métodos - O PET é uma Área de Preservação Ambiental com animais residentes ou migratórios. As amostras de mosquitos adultos foram coletadas, mensalmente, em quatro áreas no PET, durante um ano e por meio de aspirador à bateria. O método de ELISA indireto foi empregado para a identificação do hospedeiro que é fonte alimentar ao mosquito. A densidade da população de Cx. quinquefasciatus foi estimada pelo método de marcação, soltura e recaptura na vegetação da margem de um canal no PET. Amostras de fêmeas de Cx. quinquefasciatus desse local foram dissecadas ou acompanhadas em laboratório para estimativa da taxa de sobrevivência. Resultados – A proporção de repastos sangüíneos de Cx. quinquefasciatus e de Cx. nigripalpus foi, respectivamente, 6,5 e 8,3% em humanos, 18,8 e 27,7% em cães, 7,4 e 2,3% em galinhas, 2,8 e 9,0% em ratos, 3,2 e 8,3% em múltiplos hospedeiros e 67,7 e 60,9% em hospedeiros não identificados. Human Blood Index para Cx. quinquefasciatus e Cx. nigripalpus foi, respectivamente, 0,20 e 0,17. Feeding Index entre os hospedeiros homem/cão, homem/galinha e homem/rato foi, respectivamente, 0,35, 0,63 e 2,65 para Cx. quinquefasciatus e 0,30, 2,56 e 1,05 para Cx. nigripalpus. A distribuição de repastos sangüíneos teve associação significante estatisticamente com as fêmeas de Cx. nigripalpus em estádio de Sella 2 coletadas em todas as áreas do PET. A densidade de Cx. quinquefasciatus para uma área de 2.520 m2 foi 7.262±1.537. A proporção de paridas, a duração do ciclo gonotrófico e a taxa de sobrevivência foram, respectivamente, igual a 0,48, 4,75 (CL 95% = 4,3-5,2) e 0,86, estimados para a população de Cx. quinquefasciatus. Conclusões – Cães e galinhas foram hospedeiros importantes para Cx. quinquefasciatus, enquanto que cães foram hospedeiros importantes para Cx. nigripalpus. O repasto sangüíneo é mais bem detectado pelo ELISA indireto em fêmeas no estádio de Sella 2. A sobrevivência e a densidade de Cx. quinquefasciatus indicam que essa espécie é epidemiologicamente relevante na área do PET como espécies vetora ou peste urbana. Essa espécie deve ser objetivo do programa de controle de vetores no município de São Paulo. / Introduction - Culex quinquefasciatus has high synanthropy, infest human dwellings and is vector of nematoids and arbovirus from endemic areas, respectively, in Brazilian coast and in Central or North America. Culex nigripalpus has average synanthropy and can disperse through the anthropic environment carrying Saint Louis Virus and Equine Encephalitis Virus, respectively, in North America and Venezuela. Objective - To characterize host-feeding habit of Culex nigripalpus and density, survival and host-feeding habit of Culex quinquefasciatus in the Parque Ecológico do Tietê (PET), São Paulo. Methods - The PET is an Area of Environmental Protection with resident or migratory animals. The samples of adult mosquitoes were collected, monthly, in four areas in the PET, during one year and by means of a backpack battery aspirator. An indirect ELISA technique was used for the identification of the host that is an alimentary source for the mosquito species. The density of Cx. quinquefasciatus population was estimated using the Mark, Release and Recapture method on the vegetation of the edge of a canal in the PET. Samples of females of Cx. quinquefasciatus from this place were dissected or followed in laboratory for estimating the survival rate. Results – Cx. quinquefasciatus and Cx. nigripalpus fed on human 6.5 and 8.3%, dog 18.8 and 27.7%, chicken 7.4 and 2.3%, rat 2.8 and 9.0%, multiple hosts 3.2 and 8.2% and unidentified hosts 67.9 and 60.9%, respectively. The unweighted human blood index (HBI) values were 0.20 for Cx. quinquefasciatus and 0.17 for Cx. nigripalpus populations. The feeding index values between the hosts human/dog, human/chicken and human/rat were, respectively, 0.35, 0.63 and 2.65 for Cx. quinquefasciatus and 0.30, 2.56 and 1.05 for Cx. nigripalpus. The distributions of blood-meals had statistically significant association on Sella 2 stage of the Cx. nigripalpus collected in all areas at the PET. The density of Cx. quinquefasciatus for an area of 2,520 m2 was 7,262±1,537. The proportion of parous, gonotrophic cycle length and survival rate were, respectively, equal to 0.48, 4.75 (CL 95% = 4.3-5.2) and 0.86, for Cx. quinquefasciatus population. Conclusions – Dogs and chickens are important hosts for Cx. quinquefasciatus, whereas dog is an important host for Cx. nigripalpus. The host-blood of females in Sella 2 stage increases sensibility of the indirect ELISA assay. The survivorship and the density of Cx. quinquefasciatus indicate that these species are epidemiologically relevant in the PET area as either a pest or vector species. Those species should be a goal of the vector control program of Sao Paulo municipality.

Le Virus du Nil Occidental (VNO) et le Virus de la Fièvre de la Vallée du Rift (VFVR) sont deux arbovirus transmis par le moustique Culex pipiens comprenant deux biotypes: pipiens et molestus. Au cours de ce projet, nous avons évalué la circulation du VNO au Liban dans des populations de moustiques, des humains, des chevaux et des poulets. Nous avons aussi évalué la compétence vectorielle des populations locales de Cx. pipiens à transmettre le VNO et le VFVR.Des moustiques ont été récoltés et testés pour la présence d’un gène spécifique du VNO. En plus, des sérums humains, de chevaux et de poulets ont été analysés pour rechercher des anticorps spécifiques par ELISA puis confirmés par neutralisation. En outre, des spécimens de Cx. pipiens ont été infectés avec la lignée 1 du VNO ou la souche de VFVR Clone 13. Ensuite, les taux d’infection, de dissémination et de transmission ont été déterminés à différents jours après infection des moustiques. La compétence vectorielle a été comparée entre les différents biotypes.Les résultats entomologiques ont révélé que Cx. pipiens est dominant (87.2%). Tous les moustiques analysés étaient négatifs pour le VNO. Les taux de séroprévalence étaient de 1.01% et 1.98% parmi les humains et les chevaux respectivement. De plus, Cx. pipiens s’est révélé bien plus compétent pour transmettre le VNO que le VFVR. Le biotype molestus est capable de transmettre le VNO plus tôt que celui de pipiens. Cette étude présente des preuves sur une faible circulation du VNO au Liban. Cx. pipiens s’est révélé compétent pour assurer cette transmission. Ainsi, il est essentiel d'établir des programmes de surveillance pour prévenir les éventuelles épidémies. / West Nile virus (WNV) and Rift Valley Fever virus (RVFV) are two emerging arboviruses that have never been reported in Lebanon. They can be transmitted by Culex pipiens mosquito species including two biotypes: pipiens and molestus. During this project, we assessed the circulation of WNV among mosquitoes, human, horse and chicken populations in Lebanon. Moreover, we evaluated, under experimental conditions, the capacity of local Cx. pipiens biotypes to transmit both viruses.Adult mosquitoes were collected, identified and tested to detect WNV RNA. Besides, human, horse and chicken blood samples were collected and screened for WNV antibodies using an in-house ELISA and then confirmed by neutralization assay. Moreover, local Cx. pipiens specimens were experimentally infected with WNV lineage 1 or RVFV Clone 13 strain. The viral infection, dissemination and transmission were then estimated at different days post infection.The vector competence was compared between Cx. pipiens biotypes.Entomological results revealed that 87.2% of collected adult mosquitoes were Cx. pipiens. Screened mosquitoes were negative for WNV. Seroprevalence rates were 1.01% and 1.98% among humans and horses respectively. Besides, local Cx. pipiens were highly competent for WNV transmission and to a lesser extent to RVFV. The molestus biotype was able to transmit WNV earlier than pipiens biotype.The present study provides new evidence of a low circulation of WNV among human and horses in Lebanon. Cx. pipiens is the suspected vector and is experimentally competent to ensure transmission. Therefore, there is a need to establish surveillance program to predict and prevent potential outbreaks.

Made available in DSpace on 2016-06-23T12:13:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 811.pdf: 3335097 bytes, checksum: 1e0ff860185019e7337aefd1db19cb05 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Made available in DSpace on 2016-07-05T22:00:08Z (GMT). No. of bitstreams: 3 811.pdf.txt: 201518 bytes, checksum: 5c6a06ebfc70a1c9165e7d65ca4a2ac9 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 811.pdf: 3335097 bytes, checksum: 1e0ff860185019e7337aefd1db19cb05 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / Devido a suas características epidemiológicas a filariose linfática é uma das doenças potencialmente erradicáveis. Por esse aspecto, a Organização Mundial de Saúde propôs em 1997 sua eliminação mundial prevista para 2020. O principal objetivo do Programa de eliminação da Filariose Linfática é reduzir o reservatório humano com microfilárias circulantes, para menos de 1 por cento, somado a redução para o índice 0.1 por cento nas crianças nascidas após o início do tratamento em massa, ambos diagnosticados pelas técnicas de gota espessa e pesquisa de antígeno circulante filarial (cartão ICT e Og4C3) resultando na interrupção da transmissão. Entre os objetivos do Plano de Controle e Eliminação da filariose linfática está à utilização da pesquisa de antígeno circulante como indicador da monitorização da eficácia do tratamento específico realizado nas comunidades endêmicas. Pesquisas demonstram resultados inconsistente nos padrões de clareamento da circulação sangüínea do antígeno da W.bancrofti após o tratamento, pois ainda não se pode assegurar a cura parasitológica e correlacionar esse fato concreto com a cronologia do desaparecimento do antígeno circulante filarial. O presente estudo comparou o efeito do tratamento seletivo com dietilcarbamazina (dose única e tradicional) e a intervenção cirúrgica sobre a microfilaremia e o marcador sorológico de infecção ativa (antigenemia), diagnosticados pelas técnicas parasitológicas da filtração (microfilaremia), utrason (vermes adultos filarias) e a pesquisa de antígeno circulante filarial (cartão ICT e Og4C3) frente aos 31 indivíduos de ambos os sexos, micro e amicrofilarêmicos, no período pré, 1, 6, 12, 96 e 120 meses. Observou-se uma correlação positiva (r=0,3118, P0,0001) crescente da densidade de MF/mL com o antígeno circulante filarial diagnosticado de forma quantitativa pela ferramenta diagnostica do Og4C3. O tratamento que observamos um menor número de indivíduos positivos foi através da medicação dietilcarbamazinna dose tradicional seguido de cirurgia e dose única. No presente estudo observamos que o tempo eleito pela OMS de 48 a 82 meses é insuficiente para assegurar a cura da infecção, visto quem em 96 meses ainda encontra-se vestígios de antígeno circulante. Sugere-se que exames paralelos sejam realizados para confirmar e assegurar a cura do indivíduo

Introdução - Culex quinquefasciatus é um mosquito sinantrópico que causa incômodo à população humana e é relacionado com a transmissão de nematóides ou arbovírus em áreas endêmicas, respectivamente, do litoral brasileiro e da América Central ou do Norte. Culex nigripalpus é um mosquito hemi-sinantrópico que possui a capacidade de se dispersar para as áreas antrópicas e transmitir Saint Louis Virus e Equine Encephalitis Virus, respectivamente, na América do Norte e Venezuela. Objetivo - Caracterizar o hábito alimentar de Culex nigripalpus e a densidade, a sobrevivência e o hábito alimentar de Culex quinquefasciatus no Parque Ecológico do Tietê (PET), São Paulo. Métodos - O PET é uma Área de Preservação Ambiental com animais residentes ou migratórios. As amostras de mosquitos adultos foram coletadas, mensalmente, em quatro áreas no PET, durante um ano e por meio de aspirador à bateria. O método de ELISA indireto foi empregado para a identificação do hospedeiro que é fonte alimentar ao mosquito. A densidade da população de Cx. quinquefasciatus foi estimada pelo método de marcação, soltura e recaptura na vegetação da margem de um canal no PET. Amostras de fêmeas de Cx. quinquefasciatus desse local foram dissecadas ou acompanhadas em laboratório para estimativa da taxa de sobrevivência. Resultados – A proporção de repastos sangüíneos de Cx. quinquefasciatus e de Cx. nigripalpus foi, respectivamente, 6,5 e 8,3% em humanos, 18,8 e 27,7% em cães, 7,4 e 2,3% em galinhas, 2,8 e 9,0% em ratos, 3,2 e 8,3% em múltiplos hospedeiros e 67,7 e 60,9% em hospedeiros não identificados. Human Blood Index para Cx. quinquefasciatus e Cx. nigripalpus foi, respectivamente, 0,20 e 0,17. Feeding Index entre os hospedeiros homem/cão, homem/galinha e homem/rato foi, respectivamente, 0,35, 0,63 e 2,65 para Cx. quinquefasciatus e 0,30, 2,56 e 1,05 para Cx. nigripalpus. A distribuição de repastos sangüíneos teve associação significante estatisticamente com as fêmeas de Cx. nigripalpus em estádio de Sella 2 coletadas em todas as áreas do PET. A densidade de Cx. quinquefasciatus para uma área de 2.520 m2 foi 7.262±1.537. A proporção de paridas, a duração do ciclo gonotrófico e a taxa de sobrevivência foram, respectivamente, igual a 0,48, 4,75 (CL 95% = 4,3-5,2) e 0,86, estimados para a população de Cx. quinquefasciatus. Conclusões – Cães e galinhas foram hospedeiros importantes para Cx. quinquefasciatus, enquanto que cães foram hospedeiros importantes para Cx. nigripalpus. O repasto sangüíneo é mais bem detectado pelo ELISA indireto em fêmeas no estádio de Sella 2. A sobrevivência e a densidade de Cx. quinquefasciatus indicam que essa espécie é epidemiologicamente relevante na área do PET como espécies vetora ou peste urbana. Essa espécie deve ser objetivo do programa de controle de vetores no município de São Paulo. / Introduction - Culex quinquefasciatus has high synanthropy, infest human dwellings and is vector of nematoids and arbovirus from endemic areas, respectively, in Brazilian coast and in Central or North America. Culex nigripalpus has average synanthropy and can disperse through the anthropic environment carrying Saint Louis Virus and Equine Encephalitis Virus, respectively, in North America and Venezuela. Objective - To characterize host-feeding habit of Culex nigripalpus and density, survival and host-feeding habit of Culex quinquefasciatus in the Parque Ecológico do Tietê (PET), São Paulo. Methods - The PET is an Area of Environmental Protection with resident or migratory animals. The samples of adult mosquitoes were collected, monthly, in four areas in the PET, during one year and by means of a backpack battery aspirator. An indirect ELISA technique was used for the identification of the host that is an alimentary source for the mosquito species. The density of Cx. quinquefasciatus population was estimated using the Mark, Release and Recapture method on the vegetation of the edge of a canal in the PET. Samples of females of Cx. quinquefasciatus from this place were dissected or followed in laboratory for estimating the survival rate. Results – Cx. quinquefasciatus and Cx. nigripalpus fed on human 6.5 and 8.3%, dog 18.8 and 27.7%, chicken 7.4 and 2.3%, rat 2.8 and 9.0%, multiple hosts 3.2 and 8.2% and unidentified hosts 67.9 and 60.9%, respectively. The unweighted human blood index (HBI) values were 0.20 for Cx. quinquefasciatus and 0.17 for Cx. nigripalpus populations. The feeding index values between the hosts human/dog, human/chicken and human/rat were, respectively, 0.35, 0.63 and 2.65 for Cx. quinquefasciatus and 0.30, 2.56 and 1.05 for Cx. nigripalpus. The distributions of blood-meals had statistically significant association on Sella 2 stage of the Cx. nigripalpus collected in all areas at the PET. The density of Cx. quinquefasciatus for an area of 2,520 m2 was 7,262±1,537. The proportion of parous, gonotrophic cycle length and survival rate were, respectively, equal to 0.48, 4.75 (CL 95% = 4.3-5.2) and 0.86, for Cx. quinquefasciatus population. Conclusions – Dogs and chickens are important hosts for Cx. quinquefasciatus, whereas dog is an important host for Cx. nigripalpus. The host-blood of females in Sella 2 stage increases sensibility of the indirect ELISA assay. The survivorship and the density of Cx. quinquefasciatus indicate that these species are epidemiologically relevant in the PET area as either a pest or vector species. Those species should be a goal of the vector control program of Sao Paulo municipality.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_ana_paula_de_lara.pdf: 4627911 bytes, checksum: 887ee69dd56b73509c1a603e3b25aebd (MD5) Previous issue date: 2013-03-08 / Bacillus thuringiensis (Bt) is a Gram-positive bacteria, ubiquitous, facultative anaerobic, and form spores. During sporulation produce a parasporal crystals inclusion. Within these inclusions there are δ-endotoxin proteins well known for its insecticides proprieties. Among them, the Cry (crystal) is wide employed for biological control of plagues. The δ-endotoxin has an advantage of been more specific than chemical insecticides, thus been consider more favorable for the environment. The aim of this study was to obtain the Cry 11Aa recombinant protein of Bacillus thuringiensis var. israelensis in Escherichia coli, active for use in biocontrol. Two expression E. coli strains were tested: BL 21 (DE3) C41 and BL 21 (DE3) Ril. The protein Cry 11Aa was expressed and secreted in a soluble form by the two strains. The expression was demonstrated by Western Blot using anti-histidin monoclonal antibody. The strain BL 21 (DE3) C41 express the protein Cry 11Aa ~3.6 times more than the strain Rill, and showed a biologic efficiency of 95% of mortality for Culex quinquefaciatus larvae. The data obtained in this study suggest that the protein recombinant Cry 11Aa expressed in E. coli has a potential to be used in biological control. / Bacillus thuringiensis (Bt) é uma bactéria Gram-positiva, de ocorrência ubíqua, anaeróbica facultativa, formadora de esporos. Produz cristais, como inclusões parasporal durante a esporulação. Estas inclusões contêm proteínas chamadas de δ-endotoxinas, que são bem conhecidas pelas suas propriedades inseticidas. Dentre elas as toxinas Cry (crystal) são largamente empregadas no controle biológico de pragas. As δ-endotoxinas têm a vantagem de serem mais específicos do que os inseticidas químicos sintéticos, portanto, são considerados como agentes de controles favoráveis ao meio ambiente. O objetivo deste estudo foi a obtenção da proteína Cry 11Aa recombinante de Bacillus thuringiensis var. israelensis em Escherichia coli, ativa, para utilização no controle biológico.Duas cepas de E. coli de expressão foram testadas: BL 21 (DE3) C41 e BL 21 (DE3) Ril. A proteína Cry 11Aa foi expressa e secretada na forma solúvel pelas duas cepas. A expressão foi demonstrada por Western blot utilizando-se anticorpo monoclonal anti-histidina. A cepa BL 21 (DE3) C41 expressou a proteína Cry 11Aa ~3.6 vezes mais que a cepa BL 21 (DE3) Ril, e apresentou, em teste biológico, uma eficácia de 95% de mortalidade sobre larvas de Culex quinquefaciatus. Com os dados obtidos neste trabalho podemos sugerir que a proteína recombinante Cry 11Aa expressa em E. coli é um potencial candidato para ser utilizado no controle biológico.