Introdução: Um dos primeiros sistemas de defesa contra os microrganismos é a via dos receptores Toll-like (TLRs). A ativação destes receptores leva à síntese de citocinas, dando início à resposta imune inata. Em modelos animais, o TLR2, TLR4 e TLR9 parecem estar relacionados com o reconhecimento de antígenos de Leishmania. A relação entre TLRs e leishmânia pode ser um mecanismo chave no desenvolvimento da doença ou no controle da mesma. Até o momento não existem estudos de TLRs na leishmaniose cutânea humana. Objetivo: Determinar o padrão de expressão e as células associadas com o TLR2, TLR4 e TLR9 na leishmaniose cutânea. O objetivo secundário é correlacionar a quantidade de TLRs com a quantidade de citocinas e células inflamatórias na pele. Métodos: Cem biópsias de pacientes com leishmaniose cutânea causadas por Leishmania (V.) braziliensis foram selecionadas inicialmente. Apenas os casos confirmados (presença de amastigotas no raspado, teste de Montenegro positivo, imunoistoquímica com presença de antígenos de Leishmania e reação em cadeia da polimerase com DNA de Leishmania (V.) braziliensis foram incluídos. Um grupo controle de pele normal foi incluído para comparação (quatro casos). A expressão de TLR2, TLR4 e TLR9 foi determinada por técnica imunoistoquímica, da mesma forma que os fenótipos celulares (células NK, macrófagos, células dendríticas, células CD4 e CD8) e citocinas (IL-1, IL-6, IL-12, TNF-alfa, IFN-gama). Dupla-marcação foi realizada para identificar as células que expressaram os TLRs analisados. Análise semi-quantitativa foi utilizada para avaliação da expressão de TLRs na epiderme, enquanto na derme foi realizada análise quantitativa. O nível de significância foi estabelecido com p<0,05. Resultados: Doze casos preencheram os critérios de inclusão. Os pacientes eram todos masculinos, com lesões apenas em membros inferiores e mediana de idade de 23 anos [16-47]. A expressão de TLR2, TLR4 e TLR9 na epiderme da pele normal foi alta. Quando comparados com pele normal, tanto TLR4 quanto TLR2 mostraram menor expressão no epitélio dos pacientes com leishmaniose e não houve expressão de TLR9. A média de células expressando TLR2 na derme foi de 136,36±82,46 células/mm2, ao passo que a média de células expressando TLR4 foi de 3,21±4,11 células/mm2. A contagem de TLR9 foi de 86,15±88,36 células/mm2 predominando em áreas de formação de granulomas. A regressão linear não demonstrou relação entre a contagem de células marcadas ou citocinas com TLR2 ou TLR4. O aumento proporcional da expressão de TLR9 relacionou-se com maior expressão de IL-12 e IL-4 (p < 0,05). A dupla marcação demonstrou que os macrófagos expressaram TLR2. A dupla marcação não mostrou expressão de TLR2 nas células dendríticas e nas células NK. Conclusão: A leishmaniose cutânea localizada associa-se com a presença de TLR2, TLR4 e TLR9. No epitélio a expressão de TLR2 e TLR4 em pacientes com leishmaniose está diminuída em relação aos pacientes controles. A expressão do TLR2 na derme é estatisticamente maior que a de TLR4 e TLR9, a qual é expressa pelos macrófagos. A expressão de TLR9 ocorre principalmente nas áreas de granulomas havendo relação com a expressão de IL-12 e IL-4 / Introduction: One of the first systems of defense against microorganisms is the Toll-like receptors (TLRs) pathway. The activation of these receptors promotes the cytokine synthesis, initiating the innate immune response. In animal models, TLR2, TLR4 and TLR9 appear to be related to the recognition of antigens of Leishmania. The relationship between TLRs and Leishmania can be a key mechanism in the development of the disease or it control. Until now, there are not studies about TLRs in human cutaneous leishmaniasis. Objective: To determine the expression pattern and the cells associated with TLR2, TLR4 and TLR9 in cutaneous leishmaniasis. The secondary objective is to correlate the amount of TLRs with the amount of cytokines and inflammatory cells. Methods: One hundred biopsies from patients with cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania (V.) braziliensis were initially selected. Only confirmed cases of cutaneous leishmaniasis were included in the analysis (presence of amastigotes in the scraping, positive Montenegro test, immunohistochemistry with the presence of Leishmania antigens and polymerase chain reaction with DNA from Leishmania (V.) braziliensis. A control group (4 cases) of normal skin was included for comparison. The expression of TLR2, TLR4 and TLR9 was determined by immunohistochemistry, as well as cell phenotypes (NK cells, macrophages, dendritic cells, CD4 and CD8) and cytokines (IL-1, IL-6, IL-12, TNF-alpha, IFN-gamma). Double-staining was used to determine the cells expressing TLRs. Semi-quantitative analysis was used for evaluation of the expression of TLRs in the epidermis. Quantitative analysis was performed to evaluate the expression in the dermis. The level of significance was defined as p <0.05. Results: 12 cases fulfilled inclusion criteria. The patients were all male, with lesions in lower limbs and median age of 23 years [16-47]. The expression of TLR2 and TLR4 in the epidermis of normal skin was high. When compared with normal skin, TLR2 and TLR4 showed lower expression in the epidermis. There was no expression of TLR9 in the epidermis in cases of cutaneous leishmaniasis and normal skin. The mean number of cells expressing TLR2 in the dermis was 136.36±82.46 cells/mm2, while the average of cells expressing TLR4 was 3.21±4.11 cells/mm2. The count of TLR9 was 86.15±88.36 cells/mm2, and it was found mainly in the areas of granuloma formation. Linear regression showed no relationship between the number of labeled cells or cytokines with TLR2 or TLR4. There was an association between TLR9 and two cytokines (IL-12 and IL-4). This correlation suggested that the proportional increase in the expression of TLR9 was related to greater expression of IL-12 and IL-4 (p<0.05). The double staining showed that macrophages and endothelial cells expressed TLR2. The double staining showed no expression of TLR2 in dendritic cells and NK cells. Conclusion: The localized cutaneous leishmaniasis associated with the presence of TLR2, TLR4 and TLR9. The expression of TLR2 in the dermis was statistically greater than that of TLR4 and TLR9, which is expressed by macrophages. The expression of TLR9 occurs primarily in the areas of granulomas was associated with the expression of IL-12 and IL-4

As doenças tropicais negligenciadas (DTNs) causam um imenso sofrimento para a pessoa acometida e em muitos casos podem levar o indivíduo a morte. Elas representam um obstáculo devastador para a saúde e continuam a ser um sério impedimento para a redução da pobreza e desenvolvimento socioeconômico. Das 17 doenças desse grupo, a leishmaniose, incluindo a leishmaniose cutânea, tem grande destaque devido sua alta incidência, os gastos para o tratamento e as complicações geradas em processos de coinfecção. Ainda mais agravante, os investimentos direcionados ao controle, combate e principalmente a inovação em novos produtos é ainda muito limitado. Atualmente, a academia tem um importante papel na luta contra essas doenças através da busca de novos alvos terapêuticos e também de novas moléculas com potencial terapêutico. É nesse contexto que esse projeto teve como meta a implantação de uma plataforma para a identificação de moléculas com atividade leishmanicida. Como alvo terapêutico, optamos pela utilização da enzima diidroorotato desidrogenase de Leishmania Viannia braziliensis (LbDHODH), enzima de extrema importância na síntese de novo de nucleotídeos de pirimidina, cuja principal função é converter o diidroorotato em orotato. Esta enzima foi clonada, expressa e purificada com sucesso em nosso laboratório. Os estudos permitiram que a enzima fosse caracterizada cineticamente e estruturalmente via cristalografia de raios- X. Os primeiros ensaios inibitórios foram realizados com o orotato, produto da catálise e inibidor natural da enzima. O potencial inibitório do orotato foi mensurado através da estimativa do IC50 e a interação proteína-ligante foi caracterizada através de estudos cristalográficos. Estratégias in silico e in vitro foram utilizadas na busca de ligantes, através das quais foram identificados inibidores para a enzima LbDHODH. Ensaios de validação cruzada, utilizando a enzima homóloga humana, permitiram identificar os ligantes com maior índice de seletividade que tiveram seu potencial leishmanicida avaliado in vitro contra as formas promastigota e amastigota de Leishmania braziliensis. A realização do presente projeto permitiu a identificação de uma classe de ligantes que apresentam atividade seletiva contra LbDHODH e que será utilizada no planejamento de futuras gerações de moléculas com atividade terapêutica para o tratamento da leishmaniose. Além disso, a plataforma de ensaios otimizada permitirá a avaliação de novos grupos de moléculas como uma importante estratégia na busca por novos tratamentos contra a leishmaniose / Neglected tropical diseases (NTDs) pose a devastating obstacle to health and remain a serious impediment to poverty reduction and socioeconomic development. Of 17 diseases listed among NTDs, the leishmaniasis, including cutaneous and mucocutaneous leishmaniasis, are characterized by high number of cases and high costs for the treatment, usually of low efficacy and highly toxic. Even more problematic, the investment devoted to combat to control and to develop new therapies remains limited. Nowadays, the Academy has had an important role in the fight against NTDs, contributing in the search of new therapeutic targets and in the development of lead compounds. Within this context, the present project aimed the development of a pipeline for identification of leishmanicidal compounds based on the selective inhibition of the enzyme dihydroorotate dehydrogenase from Leishmania Viannia braziliensis (LbDHODH). LbDHODH acts in the de novo biosynthetic pathway of pyrimidine nucleotides, by catalysing the conversion of dihydroorotate to orotate and has been considered an important macromolecular target against proliferative and parasitic diseases. LbDHODH was successfully cloned, expressed and purified. The target enzyme was characterized by kinetic studies and its structure was solved by X-ray crystallography techniques. Inhibition assays were performed in presence of orotate, product of catalysis and natural inhibitor of DHODH. Its inhibitory potential was evaluated by the estimative of IC50 and the protein-ligand interaction was characterized by crystallographic studies. In silico and in vitro strategies were used in the search for LbDHODH inhibitors. Cross-validation studies were performed against the human homologue enzyme. Inhibitors displaying higher selectivity index were evaluated against both promastigote and amastigote forms of Leishmania braziliensis. Our work allowed the identification of a new class of compounds that display selective inhibition of LbDHODH and show leishmanicidal activity. They will be used as prototypes for the development of new generations of LbDHODH inhibitors. Moreover, our pipeline can be used to screen large number of chemical libraries as tool for the identification of different chemical entities that can contribute to the development of new therapeutic strategies for the treatment of leishmaniasis.

Doenças negligenciadas acometem milhares de pessoas em todo o mundo, principalmente em países subdesenvolvidos. A exemplo destas encontram-se doenças como a leishmaniose e a doença de Chagas que representam relevantes problemas de saúde pública. As terapias disponíveis para estas doenças tropicais, contudo, estão longe de serem satisfatórias e eficazes, considerando-se que os quimioterápicos existentes apresentam reconhecida toxicidade, alto custo e eficácia moderada. Com o propósito de obter alternativas terapêuticas otimizadas, este projeto de pesquisa teve como objetivo a obtenção de pró-fármacos de compostos nitroderivados com comprovada atividade leishmanicida e antichagásica para serem utilizados em sistemas ADEPT visando maior eficácia e menor toxicidade no tratamento destas parasitoses. A princípio, duas frentes de trabalho em paralelo foram adotadas: uma teórica, para determinação do mecanismo catalítico da carboxipeptidase G2 (CPG2) e obtenção de informações relacionadas ao mecanismo de clivagem dos pró-fármacos propostos, e a outra sintética, para obtenção dos compostos propriamente ditos. Estudos teóricos de ancoramento e dinâmica molecular da CPG2 com um de seus reconhecidos substratos, o metotrexato, indicaram que o mecanismo de ação proposto para metaloproteases em geral também pode ser aplicado a esta enzima. Informações relacionadas ao mecanismo de clivagem dos pró-fármacos propostos também foram obtidas. A rota sintética inicialmente proposta para a obtenção dos pró-fármacos partia da ligação dos nitroderivados ao ácido glutâmico por intermédio de um agente espaçante, o ácido succínico. Com base nas informações obtidas nos estudos teóricos, entretanto, o projeto foi reformulado focando-se na síntese dos pró-fármacos sem agente espaçante, pois estes se mostraram mais favoráveis ao reconhecimento pela enzima. Com relação à síntese, a obtenção dos compostos planejados não foi alcançada a despeito dos esforços empreendidos. Estudos teóricos e experimentais de reatividade parecem comprovar a tese de que o grupo nitro desativa as funções nucleofílicas das estruturas dos nitrocompostos que seriam fundamentais para as reações de acoplamento ao transportador ácido glutâmico. Este achado, contudo, constitui um importante problema a ser solucionado, visto que nitroderivados parecem exercer suas atividades principalmente mediante redução do grupo nitro e produção de espécies reativas de oxigênio nas redondezas dos parasitas. / Neglected diseases affect millions of people around the world for the most part in underdeveloped countries. Leishmaniasis and Chagas disease are example of important public health problems spread through Africa, Asia and Latin America. Unfortunately, currently available chemotherapy to treat these diseases remains ineffective, being the most frequently applied drugs toxic, expensive and of moderate potency. By considering this actual picture and envisioning new therapeutic alternatives, the aim of this work was to design and synthesize potential antichagasic and antileishmanial prodrugs of nitroderivatives to be used in Antybody-Directed Enzyme Prodrug Therapy (ADEPT), a drug design approach which results in targeted delivery of the active compounds, increasing their potencies in addition to lowering their toxicity. Theoretical studies to determine the catalytic mechanism of the carboxypeptidase G2 (CPG2) and to obtain information about the cleavage mechanism of proposed prodrugs were performed whereas different synthetic approaches were made to obtain the compounds. Docking and molecular studies of the CPG2 considering theoretical interactions with its known substrate, methotrexate, indicated that the proposed general mechanism for metalloproteases could be indeed applied to this enzyme. Information about the cleavage mechanism of prodrugs was also obtained. Initially prodrugs proposed were composed by nitroderivatives structures attached to glutamic acid, the chosen transporter agent, by a spacer group, the succinic acid. Theoretical studies, however, had showed that prodrugs constructed without a spacer agent could be better recognized by the enzyme. These results re-directed the synthetic approach to new prodrug structure without spacer. Despite all efforts spent, it was impossible to obtain the proposed prodrug structures. Experimental reactivity studies were then accomplished, since it was possible that the nitro group, from nitroderivatives structure, was able to reduce the nucleophilic power of particular functional groups chosen to accomplish the coupling between the active compound and the transporter. The results corroborate this hypothesis and the absence of nitro group facilitates the prodrug synthesis. This, however, constitute an important problem to be solved since the nitroderivative seams to exert their function mainly by nitro group reduction and production of free radical species in the surrounding of the parasites.

Mammalian ABC (ATP-binding cassette) transporters are integral membrane proteins that translocate allocrites across biological membranes using ATP as a substrate. ABCB1 is a polyspecific efflux pump which can confer multidrug resistance in cancer. ABCB1 is also expressed in a variety of normal tissues where it functions to prevent the accumulation of toxic allocrites. Direct inhibition of ABCB1 can therefore have detrimental effects on patients. Identification of ABCB1-interacting partners that influence trafficking or function would therefore provide alternative targets for therapy which may be cell- or tissue-type specific. The “split-ubiquitin” yeast two-hybrid system, that can detect protein:protein interactions at the plasma membrane, was used to screen for ABCB1-interactors in a human liver library. All candidates isolated from the screen interacted with ABCB1 in a non-specific manner when subjected to strict testing. ABCB4, a close relative of ABCB1, is expressed primarily at the hepatocyte canalicular membrane where it flops phosphatidylcholine (PC) into the outer leaflet for extraction by bile salts. Many ABCB4 non-synonymous mutations have been linked to cholestatic liver diseases in humans, but data confirming an impact on ABCB4 function is lacking. Transient expression of wild-type (WT) ABCB4 in tissue culture has proved difficult because the protein is toxic to HEK293T cells. However, co-expression of the phosphatidylserine flippase ATP8B1 (FIC1) and its accessory protein CDC50A allowed the cells to tolerate ABCB4. To investigate the impact of SNPs on ABCB4 function, equivalent changes were introduced into the ABCB4 cDNA for transient expression in the presence or absence of ATP8B1/CDC50A. ABCB4 expression and targeting to the plasma membrane were monitored by western analysis and confocal microscopy, respectively, and, by “feeding” the transfected cells [methyl-3H]choline, PC efflux to added bile salt acceptor was measured. By thus mimicking the situation at the canalicular membrane I report the preliminary characterisation of nine variants of ABCB4 that have been linked to cholestatic liver disease.

Úlceras cutâneas constituem um problema de saúde pública no mundo atual. A eficiência do seu tratamento é observada pela redução das áreas total, de fibrina (amarelo) e de granulação (vermelho) da úlcera, calculados manualmente e/ou por imagens, processos demorados e posteriores à consulta médica. O trabalho propõe uma nova técnica não-invasiva e automatizada de acompanhamento das úlceras por redes neurais artificiais (RNAs). Foram utilizadas imagens digitais do banco de imagens do ADUN (Ambulatório da Dermatologia de Úlceras Neurovasculares) do Hospital das Clínicas da FMRP-USP (Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo), escolhidas aleatoriamente, sendo 50 imagens para treinamento da RNA e 250 para o teste da RNA. Para validação da RNA foram criados os grupos: 1 (n=15 imagens poligonais com áreas e cores definidas previamente); 2 (n=15 imagens poligonais com áreas e cores definidas previamente, submetidas a variações de iluminação, brilho, contraste, saturação); 3 (n=15 imagens poligonais constituídas de texturas de fibrina e de granulação); 4 (n=15 imagens de úlceras cutâneas reais preenchidas totalmente em cor preta sua superfície). Para avaliar a sua aplicação clínica foram utilizadas 50 imagens padronizadas submetidas aos cálculos das áreas pela RNA. Os resultados da RNA foram comparados aos do programa Image J (segmentação manual) e/ou às medidas-padrão. Estatisticamente os programas foram considerados similares quando p > 0,05 pelo Teste t Student. Quando p < 0,05 e r positivo, considerou-se o coeficiente de correlação de Pearson. A base de imagens de úlceras cutâneas foi eficiente para a aquisição das imagens, para a criação e execução dos algoritmos de extração de cores, de treinamento e de teste da RNA. A rede neural artificial desenvolvida apresentou desempenho similar ao Image J e às medidas-padrão adotadas para a segmentação das figuras do grupo 1, sendo p > 0,05 para as áreas total, de fibrina e de granulação. Na avaliação de interferência de ruídos (grupo 2), foi verificado que tais fatores não interferiram na segmentação da área dos polígonos (p > 0,05), pela RNA e pelo Image J. Entretanto, apesar de interferirem na segmentação de cores de granulação, sendo p < 0,05, o coeficiente de correlação RNA/Image J foi de 0,90 com p < 0,0001. No grupo 3, os cálculos das áreas foram semelhantes pela RNA e pelo Image J (p > 0,05). Quando comparadas às áreas calculadas pelos programas às medidas-padrão, o coeficiente de correlação foi significante (p < 0,0001) para todas as áreas. A segmentação das áreas das úlceras do grupo 4 pela RNA foi validada quando comparada à segmentação manual pelo Image J (p> 0,05). A aplicação clínica da RNA sobre o banco de imagens foi semelhante ao Image J para a segmentação das áreas (p > 0,05). Enfim, a rede neural artificial desenvolvida no Matlab 7.0 mostrou desempenho eficaz e validado na segmentação das úlceras de perna quanto à automatização do cálculo das áreas total, de fibrina e de granulação, semelhante à oferecida manualmente pelo programa Image J. Além disso, mostrou-se de grande aplicação clínica devido a facilidade de sua utilização através da interface web criada, sua praticidade, não interferência do usuário (automatização), propriedades essas que a consolida como uma metodologia adequada para o acompanhamento dinâmico-terapêutico da evolução das úlceras cutâneas. / Cutaneous ulcers are a public health problem worldwide. The efficiency of their treatment is observed through the reduction on the total affected areas, slough (yellow) and granulation (red) of the ulcer, manually calculated and/or through images, which are delayed processes usually performed after medical consultation. This work proposes a new non-invasive and automated technique to follow-up ulcers through artificial neural networks (ANN). Digital images from the ADUN (Neurovascular Ulcers Dermatology Ambulatory) image bank - FMRP General Hospital (Ribeirão Preto Medical School - University of São Paulo) were used and randomly selected as follows: 50 images for ANN training and 250 for the ANN test. For the ANN validation, the following groups were created: 1 (n=15 polygonal images with areas and colors previously defined); 2 (n=15 polygonal images with areas and colors previously defined submitted to illumination, brightness, contrast and saturation variation); 3 (n=15 polygonal images composed of slough and granulation textures); 4 (n=15 images of actual cutaneous ulcers with their surface fully filled in black). To evaluate its clinical application, 50 standard images were used and submitted to calculation of areas using ANN. The ANN results were compared to those obtained with the Image J software (manual segmentation) and/or to standard measures. The programs were statistically considered similar when p > 0.05 through the t Student test. When p < 0.05 and r is positive, the Pearson correlation coefficient was considered. The cutaneous ulcer image bank was efficient for the acquisition of images, for the creation and execution of color extraction algorithms, ANN training and tests. The artificial neural network developed presented performance similar to that obtained with the Image J software and to standard measures adopted for the segmentation of figures from group 1, with p > 0.05 for total areas, slough and granulation. In the noise interference assessment (group 2), it was verified that such factors did not interfere in the polygons area segmentation (p > 0.05) through both ANN and Image J. However, although interfering in the color and granulation segmentation, with p < 0.05, the ANN/Image J correlation coefficient was of 0.90, with p < 0.0001. In group 3, the calculations of areas were similar through both ANN and Image J (p > 0.05). When compared to standard measures, the correlation coefficient was significant (p < 0.0001) for all areas. The segmentation of ulcer areas of group 4 through ANN was validated when compared to manual segmentation through Image J (p> 0.05). The clinical application of ANN on the image bank was similar to Image J for the segmentation of areas (p > 0.05). Finally, the Artificial Neural Network developed in Matlab 7.0 environment showed good performance and was validated in the segmentation of leg ulcers in relation to the automation of the calculation of total areas, slough and granulation, which was similar to that obtained with the Image J software. Moreover, it presented a large clinical application due to the easiness of its application through the web interface created and the non interference of the user (automation), properties that consolidate this technique as a suitable methodology for the dynamic-therapeutic follow-up of the evolution of cutaneous ulcers.

A formononetina e a biochanina A são as isoflavonas majoritárias nas partes aéreas de Trifolium pratense L. (trevo-vermelho) relacionadas com as principais atividades farmacológicas da planta. São chamadas de fitoestrógenos, pois possuem estrutura similar ao do 17-β-estradiol, e são capazes de se ligar aos receptores estrogênicos (ERβ e ERα). As isoflavonas agliconas são moléculas de baixa hidrossolubilidade, o que pode limitar sua aplicação em produtos para pele e a expressão de sua atividade biológica. O presente trabalho tem como objetivo obter uma fração enriquecida em isoflavonas de T. pratense e avaliar a permeação cutânea das agliconas formononetina e biochanina A individualmente e associadas. Adicionalmente, o efeito de promoção da permeação cutânea em pele de orelha suina também foi objeto do estudo. A fração foi preparada por maceração e após precipitação das isoflavonas agliconas por evaporação do etanol, o precipitado foi separado por filtração e purificado por cromatografia em coluna de poliamida. O produto foi seco e apresentou concentração de isoflavonas de 2,8 mg/g de formononetina e 2,7 mg/g de biochanina A. No entanto, essa concentração ainda não foi suficiente para posterior incorporação em uma formulação visando testes de permeação cutanea. Neste contexto, os estudos de permeação em pele de orelha de suíno (Franz cells) foram realizados com as isoflavonas majoritárias de referência incorporadas à hidrogéis de hidroxipropilmetilcellulose (HPMC). Para avaliar o teor de isoflavonas nas formulações e nas diferentes camadas da pele foi desenvolvido método bioanalítico utilizando cromatografia líquida de alta eficiência, o qual mostrou-se linear, específico, exato, preciso e robusto. Os hidrogéis foram desenvolvidos utilizando como polímero HPMC (3,5%, m/v) e as isoflavonas (0,1%) foram incorporadas à essa base, individualmente ou associadas, em presença ou ausência de hidroxipropil-β-ciclodextrina (HPβCD) ou metil-β-ciclodextrina (MβCD). Os resultados obtidos na avaliação da permeação cutânea revelaram que as isoflavonas permearam mais quando incorporadas individualmente na base especialmente a formononetina. A biochanina A apresentou maior capacidade de permeação do que a formononetina, alcançando concentrações na epiderme de 0,5 ug/cm2 e na derme de 1,5 μg/cm2, representando cerca de 2,7 vezes mais comparando com a concentração de formononetina (respectivamente, 0,2 μg/cm2 e 0,4 μg/cm2). uso de ciclodextrinas aumentou significativamente a permeação da formononetina, tanto na epiderme quanto na derme. Para a biochanina A, apenas a retenção na epiderme foi aumentada com a presença de ciclodextrinas. A HPβCD foi a ciclodextrina que apresentou os melhores resultados de promoção da permeação da formononetina na derme e epiderme, proporcionando um aumento de 113%. Para a biochanina A, as duas ciclodextrinas aumentaram a sua concentração na epiderme na mesma proporção (37%). Quando as duas isoflavonas foram incorporadas em misturas 1:1 no hidrogel, a formononetina apresentou menor retenção, tanto na epiderme (0,1 μg/cm2) quanto na derme (0,4 μg/cm2). Contrariamente, a biochanina A apresentou retenção semelhante àquela apresentada quando foi incorporada isoladamente no hidrogel, caracterizando-se como uma molécula mais permeável e não sofrendo interferência da formononetina na sua permeação e retenção. Não foi observado efeito significativo da presença das ciclodextrinas na promoção da permeação cutânea das isoflavonas nas misturas, exceto para a formononetina, na epiderme. O conjunto dos resultados demonstrou que a formononetina e biochanina A são capazes de permear a pele sendo majoritariamente retidas na epiderme e na derme, revelando o seu potencial uso em preparações cosméticas destinadas à prevenção do envelhecimento cutâneo. As ciclodextrinas apresentaram acentuado efeito promotor da permeação cutânea apenas para a formononetina, que apresenta menor permeabilidade. / The main isoflavones present Trifolium pratense L. (red clover) aereal parts are the isoflavones formononetin and biochanin A, related to its pharmacological activities. These compounds are known as phytoestrogens due to its similarity to the structure of 17-β-estradiol, being able to bind to the estrogen receptor (ERβ and ERα). Aglicones of isoflavones display low water solubility limiting its incorporation in products for the skin and expression of its biological activity. The present work aims to develop a isoflavones-enriched fraction of T. pratense and to evaluate the skin permeation of the aglicones formononetin and biochanin A individually, and in association. Moreover the promoter effect of cyclodextrins on their skin permeation will also be evaluated. The enriched-fraction was prepared by maceration in ethanol 40% (v/v). The ethanol was evaporated and the dispersion was filtered. The supernatant was purified using a column chromatography packet with polyamide. The final product was dried and presented a concentration of 2.8 mg/g of formononetin and 2.7 mg/g of biochanin A. However, these amounts of isoflavones were not enough for subsequent incorporation into a formulation to proceed the cutaneous permeation tests. In this context, the permeation studies were performed using the chemical reference formononetin and biochanin A, incorporated into the hydroxypropyl methylcellulose (HPMC) hydrogels for the permeation studies on porcine ear skin (Franz cells). To evaluate the isoflavone concentration in the formulations and in the different skin layers, a bioanalytical method was validated using high performance liquid chromatography (HPLC), which showed linearity, specificity, accuracy, precision and robusteness. Hydrogels were developed using HPMC (Methocel® K4M) polymer (3.5%, m/v) and the isoflavones were incorporated into this base individually or in combination, in the presence or absence of hydroxypropyl-β-cyclodextrin (HPβCD) or methyl-β-cyclodextrin (MβCD). The results obtained in the cutaneous permeation tests showed higher permeation values when the isoflavones were individually incorporated into the formulations especially for formononetin. Biochanin A showed higher permeation capacity when compared to formononetin, reaching 0.5 μg/cm2 in the epidermis and 1.5 μg/cm2 in the dermis, representing about 2.7 times the concentration of formononetin (0.2 μg/cm2 and 0.4 μg/cm2). The use of cyclodextrins increased significantly the permeation values of formononetin, both in the epidermis and in the dermis. For biochanin A only the retention in the epidermis was increased. HPβCD was the cyclodextrin that showed the best results for formononetin as permeation promoter, providing an increasing in the epidermis and dermis of 113%. Both cyclodextrins improved the biochanin A permeation in the same proportion in the epidermis (37%). When the isoflavones were incorporated into hydrogels together (1:1 ratio), formononetin showed less retention in both skin layers (0.1 μg/cm2 in the epidermis and 0.4 μg/cm2 in the dermis) and biochanin A remained with similar performance when added alone. In the presence of cyclodextrins, no significant effect was observed in the promotion of skin permeation of isoflavones in mixtures, except for formononetin, in the epidermis. Taken together, the results indicated that formononetin and biochanin A present skin permeation being mostly retained in the epidermis and dermis, revealing its potential use in cosmetic products preparations for preventing skin aging. Cyclodextrins presented a marked skin permeation promoting effect only on formononetin, which molecule presents lower permeability.

A Síndrome de Sézary (SS) é um dos tipos mais comuns de linfoma cutâneo de células T (CTCL). Esta síndrome é caracterizada por eritrodermia, linfadenopatia generalizada e presença de células tumorais na pele, linfonodos e sangue periférico. A imunidade do hospedeiro está comprometida nesta síndrome, contudo, estudos relacionados à imunidade inata, particularmente sobre as células Natural Killer (NK) são mais escassos. As células NK exercem um papel essencial na resposta imune antitumoral. A proposta deste estudo é caracterizar o perfil fenotípico associado à ativação e inibição das células NK e a capacidade de secreção de citocinas em resposta aos agonistas de receptores Toll-like (TLR), TLR4, TLR7/TLR8 e TLR9 em pacientes com SS. Foram selecionados 14 pacientes com SS (7 homens, 7 mulheres), com 48-85 anos de idade provenientes do Ambulatório de Linfomas Cutâneos do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP, e um grupo controle com 22 indivíduos sadios (11 homens, 11 mulheres, idade de 48-75). Os resultados evidenciaram diminuição percentual de células NK CD56dim do sangue periférico dos pacientes SS, bem como baixa expressão de marcadores de ativação, NKG2D e NKG2C. A forma solúvel dos ligantes de NKG2D, MICB e MICA solúvel (sMICA/MICB), foi detectada em níveis séricos elevados para sMICB, e sMICA foi detectado em apenas 2 pacientes. Houve uma correlação negativa entre os níveis de sMICB e o percentual de células NK CD56brightCD16 NKG2D+. O perfil de secreção de citocinas das células NK, mostra, já na condição sem estímulo, um aumento percentual de TNF e CD107a em células NKCD56dim de pacientes com SS. Após o estímulo com os agonistas de TLR7/TLR8 houve um aumento na produção de CD107a e TNF nas células NKCD56bright e de TNF para as células NKCD56dim. Na produção de citocinas induzidas por agonistas de TLRs nos sobrenadantes de células mononucleares, foi observado que os agonistas TLR2 e TLR4 foram capazes de estimular a produção de IL-6, TNF e IL-10 enquanto o agonista de TLR7/8 mostrou um efeito adjuvante para a secreção de IFN-alfa, IFN-y e IL-10. Além disso, foi observado aumento de expressão de RNAm para TLR2 em células mononucleares avaliada por PCR em tempo real, como também para os fatores relacionados à resposta antiviral, como interferon tipo I (IFN- alfa), receptor de IFN-beta e interferon tipo III (IFN- ) em pacientes com SS. Quanto aos níveis séricos de citocinas, foi detectado aumento de IL-5 (citocina Th2), IL-6 (pró-inflamatória) e IL-10 (reguladora) nos SS, não diferindo quanto aos níveis de IL-1beta, IL-2, IL-17a, TNF e TGF-beta em relação ao grupo controle. Os resultados mostram que há uma diminuição percentual de células NK CD56dim, alteração da expressão dos receptores de ativação e elevação de ligantes solúveis que podem bloquear a ativação das células NK nos pacientes com SS. Além disto, as células NK exibem diminuição da produção de IFN-alfa, que contribuem na diminuição da resposta Th1. Há uma baixa responsividade das células NK aos ligantes de TLRs. Contudo, há um efeito adjuvante dos ligantes de TLRs em células mononucleares dos pacientes com SS, sendo que os agonistas de TLR2/4 e TLR7/8 foram capazes de restaurar parcialmente a produção de citocinas. Os resultados evidenciam que nos pacientes com SS, apesar da redução percentual das células NK, essas células são funcionais, mas que podem ser bloqueadas pelos ligantes solúveis de receptores de ativação. O uso de ligantes de TLRs pode ser uma estratégia para potencializar a produção de citocinas na Síndrome de Sézary / Sézary syndrome (SS) is one of the most common types of cutaneous T-cell lymphoma (CTCL). This syndrome is characterized by erythroderma, generalized lymphadenopathy and presence of tumor cells in the skin, lymph nodes and peripheral blood. Immunity of the host is compromised in syndrome, a study has related an innate immunity, particularly in Natural Killer (NK) cells are more scarce. NK cells play an essential role in the antitumor immune response. The aim of this study is to characterize the phenotypic profile associated with the activation and inhibition of NK cells and cytokine secretion capacity in response to the TLR4, TLR7 / TLR8 and TLR9 receptor agonists in SS patients. METHODS: We selected 14 patients with SS (7 men, 7 women, 48-85 years old) from the Cutaneous Lymphoma Outpatient Clinic of the Medical School of USP, and a control group with 22healthy individuals (11 men , 11 women, 48-75 years old). The results showed a decrease in CD56dim NK cells in the peripheral blood of SS patients, as well as low expression of activation markers, NKG2D and NKG2C. The soluble form of NKG2D, MICB and soluble MICA (sMICA/MICB) ligands was detected at high levels in serum for sMICB, and sMICA was detected in only 2 patients. There was a negative correlation between sMICB levels and the percentage of NK cells CD56brightCD16 NKG2D+. The cytokine secretion profile of NK cells, in the unstimulated condition, showed an increase of TNF and CD107a in NKCD56dim cells of SS patients. Upon stimulation of TLR7 / TLR8 agonists, CD107a and TNF production was higher in NKCD56bright cellsandforTNF in CD56dim cells.The agonists TLR2 and TLR4 in NK cells were able to stimulate the production of IL-6, TNF and IL-10,, while TLR7/8 agonist showed an adjuvant effect for secretion of IFN-alfa, IFN-y e IL-10. In addition, increased expression of TLR2 mRNA was observed in mononuclear cells evaluated by real-time PCR, simirlaly for factors related to antiviral response, such as interferon type I (IFN-alfa), IFN-Type III receptor (IFN - ) in patients with SS. Forserum levels of cytokines, IL- 5 (cytokine Th2), IL-6 (proinflammatory) and IL-10 (regulatory) were detectedhigher in SS, not differing in levels of IL-1beta, IL-2 , IL-17a, TNF and TGF-beta in relation to the control group. The results show that, there is a percentage decreased of CD56dim NK cells, alteration in activation receptor expression and elevation of soluble ligands that block theactivation of NK cells in SS patients. In addition, NK cells exhibit decreased IFN-? production, thatcontribute to the decrease in Th1 response. There is low responsiveness of NK cells to TLR ligands. However, there is an adjuvant effect of TLR ligands on mononuclear cells of SS patients, with TLR2/4 and TLR7 / 8 agonists is able to partially restore cytokine production. The results show that patients with SS, despite the percentage reduction of NK cells, these cells are functional, but can be blocked by soluble ligands of activation receptors. The use of TLR ligands may be a strategy to potentiate a production of cytokines in Sézary Syndrome

A leishmaniose é uma doença negligenciada causada por protozoários do gênero Leishmania. Esta doença é endêmica em regiões tropicais, áridas e Mediterrâneas afetando mais de 350 milhões de pessoas no mundo. A leishmaniose tem duas formas clínicas principais: visceral (LV) e tegumentar (LT). Sem tratamento médico LV é letal e a LT pode produzir deficiências graves devido à destruição do tecido mucoso nasal-oral. O ciclo de transmissão da Leishmania depende do vetor flebotomíneo (Diptera: Psychodidae); do hospedeiro, que pode ser qualquer mamífero infectado com o parasita; e do reservatório, que pode transmitir o parasita ao vetor, os três devem interagir num meio ambiente permissivo para que aconteça a transmissão da doença. A leishmaniose é uma antiga zoonose cujo ciclo de transmissão restringia-se em paisagens não modificadas, no entanto o desenvolvimento de assentamentos humanos aumentou o contato entre humanos e o ciclo de transmissão. Atualmente, a incidência da doença não só depende das condições ambientais que afetam ao vetor e o reservatório, mas também dependem das condições socioeconômicas das populações humanas. Para entender melhor como estes fatores afetam a transmissão da leishmaniose, este estudo objetiva: 1) Identificar as condições ambientais e fatores socioeconômicos que influenciam a transmissão da LV e a LT, considerando todas as regiões endêmicas tropicais, áridas e Mediterrâneas. 2) Entender como estes fatores influenciam a incidência da leishmaniose e como esta antiga zoonose tem se adaptado a novas condições de ambientes modificados pelo homem. No primeiro capítulo, realizamos uma revisão de literatura e foi proposto um modelo conceitual para LV e LT destacando as diferenças entre os fatores ambientais e socioeconômicos que influenciam o ciclo de transmissão em regiões tropicais, áridas e Mediterrâneas. A principal diferença está associada ao comportamento dos vetores de Leishmania e reservatórios da LV e LT e suas preferências por condições ambientais específicas de cada região; e também na possibilidade de adaptação a ambientes urbanos em países em desenvolvimento onde o baixo nível socioeconômico aumenta a vulnerabilidade ante a leishmaniose. No segundo capítulo, analisamos como os fatores ambientais afetam a transmissão da leishmaniose no estado mais rico de um país tropical, o Estado de São Paulo, no Brasil. Usamos modelos mistos generalizados para analisar as condições ambientais e socioeconômicas que influenciam a ocorrência e o número de casos de LV e LT no estado de São Paulo desde 1998 até 2015. Para LT, a ocorrência aumentou com áreas maiores de vegetação nativa, maior desigualdade econômica (Índice de Gini) e maiores precipitações média do inverno. Para LV, a ocorrência aumentou com um alto índice de desenvolvimento humano (IDH), grande numero de cabeças de gado, maiores temperaturas máximas anuais e maiores precipitações mínimas da primavera. O numero de casos tanto de LV quanto de LT aumentou com maiores temperaturas médias anuais e somente os casos de LV aumentaram com as altas precipitações médias do outono. Estes resultados podem contribuir para predizer futuros picos da doença e desenvolver politicas publicas não só no Estado de São Paulo e também em outras regiões com características similares / Leishmaniasis is a neglected tropical disease caused by a protozoan of Leishmania genus. This disease is present in tropical, arid and Mediterranean regions and affects more than 350 million people around the world. Leishmaniasis has two main clinical forms visceral (VL) and cutaneous (CL).VL is lethal without adequate treatment and CL can produce serious disability due to the destruction of naso-buccal mucosal tissue. The transmission cycle of Leishmania depend on the sand fly vector (Diptera: Psychodidae), the host which are any mammal infected by the parasite and the reservoir which can transmit the parasite to the vector, all three must interact in a permissive environment to occur the transmission of disease. Leishmaniasis is an ancient zoonosis which transmission cycle was present in undisturbed landscapes, but the development of human settlements increased the contact between the humans and the transmission cycle. Nowadays, the incidence of disease does not only depend on environmental conditions which affect the vector and reservoir; but also depends on socioeconomic conditions of the human population. To better understand how these factors affect the transmission of leishmaniasis this study aim: 1) Identify the environmental conditions and socioeconomic factors which influence the transmission of VL and CL, considering all the endemic regions: tropical, arid and Mediterranean regions. 2) Understanding how these factors influence the incidence of leishmaniasis and analyze how this ancient zoonosis has adapted to novel human-modified environmental conditions. In the first chapter, we conducted a literature review and propose a conceptual model for VL and CL highlighting the differences between environmental and socioeconomic factors which influence the transmission cycle in tropical, arid and Mediterranean regions. The main difference was associated with the behavior of Leishmania vector and reservoirs of VL and CL and their preferences in environmental conditions in each region; and also the possible adaptation to urban environments in developing countries where low socioeconomic status increases the vulnerability to leishmaniasis. In the second chapter, we analyze how environmental and socioeconomic factors influence the transmission of leishmaniasis in the wealthiest state of a tropical country, São Paulo state, Brazil. We used generalized mixed models to analyze the environmental and socioeconomic factors which affect the occurrence and the number of cases of VL and CL in the state of São Paulo from 1998 to 2015. For CL, the occurrence increased with larger vegetation cover, high economic inequality (Gini), and high mean winter precipitation For VL, the occurrence increased with high human development index (HDI), a larger number of cattle heads, high maximum annual temperatures and high minimum spring precipitation. The number of cases of both VL and CL increased with high annual mean temperature, and only VL cases increased with high mean fall precipitation. These results can inform predictions of future outbreaks and contribute to the development of public health policies not only in São Paulo state, but in other regions with similar characteristics

A Síndrome de Sézary (SS) é um dos tipos mais comuns de linfoma cutâneo de células T (CTCL). Esta síndrome é caracterizada por eritrodermia, linfadenopatia generalizada e presença de células tumorais na pele, linfonodos e sangue periférico. A imunidade do hospedeiro está comprometida nesta síndrome, contudo, estudos relacionados à imunidade inata, particularmente sobre as células Natural Killer (NK) são mais escassos. As células NK exercem um papel essencial na resposta imune antitumoral. A proposta deste estudo é caracterizar o perfil fenotípico associado à ativação e inibição das células NK e a capacidade de secreção de citocinas em resposta aos agonistas de receptores Toll-like (TLR), TLR4, TLR7/TLR8 e TLR9 em pacientes com SS. Foram selecionados 14 pacientes com SS (7 homens, 7 mulheres), com 48-85 anos de idade provenientes do Ambulatório de Linfomas Cutâneos do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP, e um grupo controle com 22 indivíduos sadios (11 homens, 11 mulheres, idade de 48-75). Os resultados evidenciaram diminuição percentual de células NK CD56dim do sangue periférico dos pacientes SS, bem como baixa expressão de marcadores de ativação, NKG2D e NKG2C. A forma solúvel dos ligantes de NKG2D, MICB e MICA solúvel (sMICA/MICB), foi detectada em níveis séricos elevados para sMICB, e sMICA foi detectado em apenas 2 pacientes. Houve uma correlação negativa entre os níveis de sMICB e o percentual de células NK CD56brightCD16 NKG2D+. O perfil de secreção de citocinas das células NK, mostra, já na condição sem estímulo, um aumento percentual de TNF e CD107a em células NKCD56dim de pacientes com SS. Após o estímulo com os agonistas de TLR7/TLR8 houve um aumento na produção de CD107a e TNF nas células NKCD56bright e de TNF para as células NKCD56dim. Na produção de citocinas induzidas por agonistas de TLRs nos sobrenadantes de células mononucleares, foi observado que os agonistas TLR2 e TLR4 foram capazes de estimular a produção de IL-6, TNF e IL-10 enquanto o agonista de TLR7/8 mostrou um efeito adjuvante para a secreção de IFN-alfa, IFN-y e IL-10. Além disso, foi observado aumento de expressão de RNAm para TLR2 em células mononucleares avaliada por PCR em tempo real, como também para os fatores relacionados à resposta antiviral, como interferon tipo I (IFN- alfa), receptor de IFN-beta e interferon tipo III (IFN- ) em pacientes com SS. Quanto aos níveis séricos de citocinas, foi detectado aumento de IL-5 (citocina Th2), IL-6 (pró-inflamatória) e IL-10 (reguladora) nos SS, não diferindo quanto aos níveis de IL-1beta, IL-2, IL-17a, TNF e TGF-beta em relação ao grupo controle. Os resultados mostram que há uma diminuição percentual de células NK CD56dim, alteração da expressão dos receptores de ativação e elevação de ligantes solúveis que podem bloquear a ativação das células NK nos pacientes com SS. Além disto, as células NK exibem diminuição da produção de IFN-alfa, que contribuem na diminuição da resposta Th1. Há uma baixa responsividade das células NK aos ligantes de TLRs. Contudo, há um efeito adjuvante dos ligantes de TLRs em células mononucleares dos pacientes com SS, sendo que os agonistas de TLR2/4 e TLR7/8 foram capazes de restaurar parcialmente a produção de citocinas. Os resultados evidenciam que nos pacientes com SS, apesar da redução percentual das células NK, essas células são funcionais, mas que podem ser bloqueadas pelos ligantes solúveis de receptores de ativação. O uso de ligantes de TLRs pode ser uma estratégia para potencializar a produção de citocinas na Síndrome de Sézary / Sézary syndrome (SS) is one of the most common types of cutaneous T-cell lymphoma (CTCL). This syndrome is characterized by erythroderma, generalized lymphadenopathy and presence of tumor cells in the skin, lymph nodes and peripheral blood. Immunity of the host is compromised in syndrome, a study has related an innate immunity, particularly in Natural Killer (NK) cells are more scarce. NK cells play an essential role in the antitumor immune response. The aim of this study is to characterize the phenotypic profile associated with the activation and inhibition of NK cells and cytokine secretion capacity in response to the TLR4, TLR7 / TLR8 and TLR9 receptor agonists in SS patients. METHODS: We selected 14 patients with SS (7 men, 7 women, 48-85 years old) from the Cutaneous Lymphoma Outpatient Clinic of the Medical School of USP, and a control group with 22healthy individuals (11 men , 11 women, 48-75 years old). The results showed a decrease in CD56dim NK cells in the peripheral blood of SS patients, as well as low expression of activation markers, NKG2D and NKG2C. The soluble form of NKG2D, MICB and soluble MICA (sMICA/MICB) ligands was detected at high levels in serum for sMICB, and sMICA was detected in only 2 patients. There was a negative correlation between sMICB levels and the percentage of NK cells CD56brightCD16 NKG2D+. The cytokine secretion profile of NK cells, in the unstimulated condition, showed an increase of TNF and CD107a in NKCD56dim cells of SS patients. Upon stimulation of TLR7 / TLR8 agonists, CD107a and TNF production was higher in NKCD56bright cellsandforTNF in CD56dim cells.The agonists TLR2 and TLR4 in NK cells were able to stimulate the production of IL-6, TNF and IL-10,, while TLR7/8 agonist showed an adjuvant effect for secretion of IFN-alfa, IFN-y e IL-10. In addition, increased expression of TLR2 mRNA was observed in mononuclear cells evaluated by real-time PCR, simirlaly for factors related to antiviral response, such as interferon type I (IFN-alfa), IFN-Type III receptor (IFN - ) in patients with SS. Forserum levels of cytokines, IL- 5 (cytokine Th2), IL-6 (proinflammatory) and IL-10 (regulatory) were detectedhigher in SS, not differing in levels of IL-1beta, IL-2 , IL-17a, TNF and TGF-beta in relation to the control group. The results show that, there is a percentage decreased of CD56dim NK cells, alteration in activation receptor expression and elevation of soluble ligands that block theactivation of NK cells in SS patients. In addition, NK cells exhibit decreased IFN-? production, thatcontribute to the decrease in Th1 response. There is low responsiveness of NK cells to TLR ligands. However, there is an adjuvant effect of TLR ligands on mononuclear cells of SS patients, with TLR2/4 and TLR7 / 8 agonists is able to partially restore cytokine production. The results show that patients with SS, despite the percentage reduction of NK cells, these cells are functional, but can be blocked by soluble ligands of activation receptors. The use of TLR ligands may be a strategy to potentiate a production of cytokines in Sézary Syndrome

Introdução: a vasculopatia livedoide é uma doença cutânea rara que acomete principalmente mulheres adultas, cursando inicialmente com lesões purpúricas e necróticas intensamente dolorosas, acometendo extremidades inferiores, que podem evoluir com úlceras de tamanhos variados. Estas lesões costumam evoluir com cicatrizes atróficas, estreladas e com telangiectasias, denominadas cicatrizes de atrofia branca. Apesar da etiologia não estar totalmente esclarecida, os distúrbios da coagulação parecem ser o mecanismo fisiopatológico primário da vasculopatia livedoide. Inúmeras trombofilias já foram associadas à vasculopatia livedoide, porém cerca de metade dos casos permanece sem etiologia definida. Recentemente foi documentado aumento de lipoproteína(a) na vasculopatia livedoide. Níveis plasmáticos elevados de lipoproteína(a) são considerados um fator de risco causal independente para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares e trombóticas, devido à sua similaridade estrutural com o plasminogênio. A deposição tecidual da lipoproteína(a) em vasos ateroscleróticos é bem descrita, porém na vasculopatia livedoide a participação da lipoproteína(a) não é conhecida. Objetivos: analisar os níveis séricos da lipoproteína(a) e a sua expressão tecidual na pele dos pacientes com vasculopatia livedoide e comparar os resultados com um grupo controle. Métodos: amostras de pele obtidas através de biópsia de pele de 38 pacientes com vasculopatia livedoide (27 do sexo feminino e 11 do sexo masculino) e 9 indivíduos do grupo controle (5 do sexo feminino e 4 do sexo masculino) foram avaliados para a presença de lipoproteína(a) através de imuno-histoquímica utilizando anticorpo policlonal anti- lipoprotéina(a). Os níveis plasmáticos da lipoprotéeíina(a) foram analisados por imunoturbidimetria e comparados com setenta pacientes portadores de outras doenças dermatológicas. Resultados: utilizando anticorpo policlonal contra lipoproteína(a), observou-se que a pele perilesional em pacientes com vasculopatia livedoide apresentava dez vezes mais lipoprotéina (a) do que a pele controle. O coeficiente de correlação de Pearson (r = 0,02) mostrou que os níveis teciduais de lipoproteína(a) não se correlacionaram com os níveis plasmáticos nos pacientes com vasculopatia livedoide. Níveis plasmáticos elevados de lipoproteína(a) foram observados nos portadores de vasculopatia livedoide, no entanto não pode ser demonstrada diferença estatística em relação ao grupo controle. Conclusões: achados de aumento da expressão tecidual de lipoproteína(a) na pele lesionada e níveis plasmáticos elevados desta proteína em pacientes com vasculopatia livedoide podem corroborar com a hipótese de que a lipoproteína(a) possa contribuir para a patogênese da vasculopatia livedoide através dos seus efeitos antifibrinolíticos, pró- trombóticos e ação direta no endotélio vascular, induzindo a formação do trombo / Background: livedoid vasculopathy is a chronic disorder that usually presents as recurrent reticulated purpura on the lower limbs, with recurrent painful, purpuric and/or necrotic macules that may lead to ulcerative lesions. These lesions usually heal into atrophic white scars, with depigmentation and telangiectasias, known as \"atrophie blanche\". Although the etiology of the livedoid vasculopathy is not fully understood, coagulation disorders appear to be the primary pathophysiological mechanism. Hereditary thrombophilia has been associated with livedoid vasculopathy, but about half of the cases remain without defined etiology. Recently, high serum levels of lipoprotein(a) in livedoid vasculopathy patients have been documented. Elevated plasma levels of lipoprotein(a) are an independent risk factor for the development of cardiovascular and thrombotic diseases due to their structural similarity with plasminogen. Lipoprotein(a) deposition in atherosclerotic vessels is well described, but its role in livedoid vasculopathy is unknown. Objectives: To analyze the serum levels of lipoprotein(a) and tissue expression in the skin of patients with livedoid vasculopathy and to compare the results with a control group. Methods: Skin biopsy samples from 38 patients (27 women-11 men) with active lesions diagnosed with livedoid vasculopathy and 9 samples of normal skin (5 women-4 men) from control individuals without livedoid vasculopathy were evaluated for skin expression of lipoprotein(a) by immunohistochemistry using polyclonal anti-lipoprotein(a) antibody. Plasma levels of lipoprotein(a) were analyzed by immunoturbidimetry and compared with seventy patients with other dermatological diseases. Results: We found lesional skin in patients with livedoid vasculopathy expressed tenfold higher lipoprotein(a) immunostaining than controls. High plasma levels of lipoprotein(a) were observed in livedoid vasculopathy patients, but we cannot observed a positive correlation (p = 0.02) between skin expression of Lipoprotein(a) and plasma levels of Lipoprotein(a) in patients with livedoid vasculopathy. Conclusions: Increased of lipoprotein(a) tissue expression on lesioned skin and elevated plasma levels of this protein in patients with livedoid vasculopathy may corroborate the hypothesis that lipoprotein(a) may contribute to the pathogenesis of livedoid vasculopathy through its antifibrinolytic effects, prothrombotic and direct action on the vascular endothelium, inducing thrombosis