Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4858_1.pdf: 1670085 bytes, checksum: e9633b164026a38f15e739944c5a046d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A definição das espécies dentro dos gêneros pode ser problemática e as espécies de Citrus configuram um exemplo clássico de classificação conflitante. O presente estudo visou auxiliar na compreensão da sistemática deste grupo, ampliando a análise citogenética dos gêneros Citrus e Poncirus. Inicialmente foi analisada a variabilidade cariotípica dos pomelos (toranja × laranjadoce), indicando diferentes cariótipos entre as cultivares. Provavelmente, os diferentes cariótipos são resultantes de eventos de hibridação independentes, envolvendo diversos acessos de toranja. No entanto, as toranjas analisadas mostraram cariótipos idênticos e homozigotos, corroborando sua classificação como espécie pura. O segundo estudo dedicou-se à análise de 13 acessos de tangerinas. Em todos os acessos, o cromossomo D/5S-45S foi observado em homozigose e considerado um bom marcador para este grupo. A tangerina é classificada com uma das espécies puras, porém os dados obtidos sugerem que compreendam três espécies básicas: C. sunki, C. reshni e C. deliciosa, todas com cariótipos homomórficos, sendo que as duas primeiras foram idênticas. O terceiro trabalho visou refinar a análise cromossômica a partir da FISH de seqüências de cópia única. A espécie utilizada foi P. trifoliata, importante fonte de genes de resistência para Citrus. A análise da hibridização foi realizada comparativamente ao padrão de bandeamento CMA/DAPI e localização de sítio de DNAr 45S, permitindo reconhecer os nove pares cromossômicos, além de mapear a região de resistência ao VTC

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:03:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3685_1.pdf: 2865283 bytes, checksum: 115acf8d372a43b33dd516445d8a7865 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Cromossomos mitóticos de Glossophaga soricina (2n=32,XY; NF=60), Platyrrhinus lineatus e Sturnira lilium (2n=30,XY; NF=56) foram analisados através da coloração convencional, bandeamento C, impregnação com nitrato de prata (AgNO3) e fluorocromos base-específicos. Dados da análise convencional obtidos para as três espécies estão de acordo com aqueles descritos na literatura, exceto pela morfologia do cromossomo Y de P. lineatus, indicando variação cromossômica geográfica para a espécie. Os blocos de HC na região distal do braço curto dos pares 5, 6, 7 e cromossomo X, observados pelo bandeamento C, em P. lineatus e S. lilium, além da coloração diferencial do braço longo do cromossomo X de Sturnira lilium correspondem a um padrão compartilhado por alguns representantes de Stenodermatinae. A fraca marcação CMA3+ nas regiões heterocromáticas pericentroméricas e distais de alguns cromossomos indica uma predominante associação de heterocromatina com seqüências ricas em pares de bases GC. Contudo, os padrões diferenciais obtidos com o emprego de fluorocromos base-específicos confirmaram a heterogeneidade da HC quanto à sua composição (rica em AT e/ou GC) e comprovaram características diferenciais das seqüências intergênicas associadas às RONs (CMA3 positiva, negativa ou sem especificidade) em representantes de Phyllostomidae

Using nuclei isolated from less than 0.2 g tissue or 107 cells, a method is presented for the quantitative determination of amounts of DNA per cell at the picogram level. This technique is based on the enhanced fluorescence of 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) when it binds to DNA. A rapid, one-step nuclear isolation and DNA staining procedure is used to prepare tissue samples for flow cytometric analysis. Frozen tissues give results comparable to those for fresh tissue. Both chicken and trout erythrocyte nuclei were used as reference standards in the determination of amounts of DNA per diploid cell for several mammals and Amazon molly fish. The consistent values obtained for different tissues from the same organism show the accuracy of this method for DNA measurement.

Polyphosphat-speichernde Bakterien entfernen das im Abwasser enthaltene Phosphat durch Speicherung in Form von Granula, die dann mit einem Teil des Belebtschlammes aus dem Abwasser entfernt werden können. Dies ist wichtig um negative Einflüsse auf Oberflächengewässer wie Flüsse und Seen so gering wie möglich zu halten. Trotz intensiver Forschung ist der Prozess der sogenannten biologischen Phosphatelimination oft uneffektiv und im Jahresverlauf instabil, da über die im Belebtschlamm aktiven Polyphosphat-speichernden Bakterien nur wenig bekannt ist. Hauptproblem ist hierbei die geringe Kultivierbarkeit der Bakterien unter definierten Bedingungen (nur etwa 10-15 % der Mikroorganismen im Belebtschlamm sind kultivierbar). Aus diesem Grund war das Ziel der Arbeit die aktiven, Polyphosphat-speichernden Bakterien durchflusszytometrisch zu bestimmen und deren Dynamiken im Belebtschlamm kultivierungsunabhängig zu messen. Zunächst wurde ein Fixierungsprotokoll für die durchflusszytometrische Untersuchung der Polyphosphat-speichernden Bakterien erarbeitet, welches die größtmögliche Stabilität der hochdiversen mikrobiellen Gemeinschaft in Belebtschlammproben gewährleistet. Eine Mischung aus den Metallen Barium und Nickel (jeweils 5 mM) in einer 10%igen Natriumazidlösung erwies sich als bestes Fixierungsmittel mit einer Belebtschlamm-Stabilität von mindestens 9 Tagen. Um sowohl den DNA-als auch den Polyphosphat-Gehalt der Zellen messen zu können wurde weiterhin eine neue und sehr spezifische Polyphosphatfärbung auf Basis des fluoreszierenden Antibiotikums Tetrazyklin etabliert. Tetrazyklin bindet divalente Kationen, die auch in großer Menge in Polyphosphatgranula enthalten sind und fluoresziert gelblich grün. Die entwickelten Methoden zur Fixierung und Polyphosphatfärbung wurden an Belebtschlamm einer kommunalen Kläranlage getestet. Neben DNA- und Polyphosphat-Gehalt der Bakterienzellen wurde eine Vielzahl abiotischer Parameter (pH, Temperatur, Leitfähigkeit, …) gemessen. Diese wurden zusammen mit den durchflusszytometrischen Daten mittels Korrelationsanalyse ausgewertet. Hieraus ergaben sich wichtige Hinweise auf die Art der Polyphosphat-speichernden Bakterien, fördernde und störende Einflüsse des in der Kläranalage behandelten Abwassers auf die biologische Phosphatelimination und die Abhängigkeiten der mikrobiellen Gemeinschaft von Faktoren wie Temperatur, pH oder der anfallenden Regenmenge. Diese Erkenntnisse können genutzt werden um die biologische Phosphatelimination aus dem Abwasser zu verbessern und damit den Weg zu einer Ressourcen- und Umweltschonenden Phosphatrückgewinnung zu bereiten. Außerdem ist es, bei Kenntnis des kläranlagenspezifischen Prozesses, möglich anhand der durchflusszytometrischen Daten schnell die aktuelle Situation zu erfassen und gegebenenfalls rechtzeitig auf Änderungen zu reagieren, bevor es zu einer massiven Störung kommt. Eine Kombination von Durchflusszytometrie und der Erfassung abiotischer Daten ist nicht nur auf die biologische Phosphateliminierung anwendbar, sondern auch auf viele andere wissenschaftliche Fragestellungen.

Multiple sclerosis is a complex disease and one for which the aetiology remains largely unanswered. Anti-dsDNA antibodies have been found intrathecally and bordering lesions in multiple sclerosis patients and in view of their known pathogenity in lupus nephritis the aim of this project was to further investigate their role in multiple sclerosis. Using the acute experimental allergic encephalomyelitis (EAE) model in the Lewis rat, the inflammatory phase of disease was profiled using immunohistological and ELISA methods and was related to clinical sign severity. The parameters of interest were central nervous system deposits of IgM, IgG, B cells and C3 and anti-DNA antibodies in sera, cerebrospinal fluid and in situ. In situ evaluation of anti-dsDNA antibodies was also performed in tissue taken from Biozzi (AH) mice (relapsing/remitting EAE model) and from a multiple sclerosis patient. Inflammatory deposits specifically at sites of perivascular cuffing were found to increase with increasing clinical sign severity. At the time clinical signs had plateaued in the Lewis rat, intrathecal anti-dsDNA antibodies were at their highest level and anti-ssDNA antibodies at their lowest. The latter possibly due to their involvement in the 'clearing-up' process following tissue damage. Using novel DNA probes fluorescence suggestive of the presence of anti-dsDNA iii antibodies was seen in both animal and human tissue. Within human tissue the antibodies appeared to accumulate around active lesions and within vessels, raising the question of these antibodies having differing location dependent functions. EAE models have the potential to investigate these findings further and to evaluate new therapies.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:04:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6207_1.pdf: 1261112 bytes, checksum: 722a988b8d4d13813f6d4987851e5b03 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / O gênero Artibeus (Stenodermatinae) está constituído por 18 espécies e possui distribuição restrita à região Neotropical. No Brasil foram formalmente registradas apenas quatro espécies dos grandes Artibeus: A. lituratus, A. jamaicensis, A. obscurus e A. fimbriatus. Neste trabalho foi realizado um estudo citogenético comparativo nos grandes Artibeus através de técnicas diferenciais e moleculares de análise cromossômica. As preparações cromossômicas foram obtidas a partir de medula óssea de A. obscurus (6 machos e 8 fêmeas), A. fimbriatus (2 machos e 4 fêmeas), A. jamaicensis (8 machos e 5 fêmeas) e A. lituratus (10 machos e 10 fêmeas) coletados no Estado de Pernambuco. O cariótipo das espécies analisadas está constituído por 2n=30/31 (XX;XY1Y2) e número fundamental (NF=56), diferindo entre si pelo tamanho de Y1 e Y2. O bandeamento C evidenciou blocos de heterocromatina constitutiva (HC) nas regiões pericentroméricas de todos os cromossomos, além de pequenos blocos de HC na região telomérica dos pares 5, 6, 7 e X em todas as espécies. Além disso, A. obscurus apresentou blocos intersticiais no braço curto e longo do par 1, como também nos braços longos dos pares 2, 5 e 6, e nos telômeros do braço curto do par 9. Por sua vez, em A. jamaicensis observaram-se blocos teloméricos nos braços curtos dos pares 9 e 13, e blocos intersticiais nos braços longos dos cromossomos 1, 2 e 6. A presença de um bloco intersticial também foi verificada no braço longo do par 6 de A. lituratus. Em todos os indivíduos, o braço longo do X mostrou uma coloração diferencial em relação ao complemento cromossômico, e os acrocêntricos Y1 e Y2 mostraram-se heterocromáticos exceto por A. jamaicensis, cujo Y2 exibiu blocos centroméricos e distais. Nas quatro espécies analisadas, as RONs estavam localizadas nas contrições secundárias dos pares 5, 6 e 7, exibindo variação individual de distribuição de atividade das RONs em cerca de três a quatro cromossomos. Através da coloração seqüencial observou-se que os blocos heterocromáticos associados às RONs em A. obscurus e A. fimbriatus apresentaram riqueza em pares de bases GC. O estudo realizado proporcionou a análise comparativa das espécies, permitindo a visualização tanto de estruturas conservadas pelo gênero Artibeus como de divergências características de cada indivíduo, permitindo a correta individualização de espécies que ocorrem em simpatria no Nordeste brasileiro

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:02:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8569_1.pdf: 776272 bytes, checksum: afcf5071cf95d763da3e9f4ccb484cf5 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / A criptosporidiose tem se destacado como um problema de saúde pública e animal. A associação de casos da doença na população humana com a presença de Cryptosporidium spp. spp. em águas de consumo ou de recreação tem motivado a pesquisa do parasito no ambiente aquático. Este estudo objetivou a detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. em águas superficiais na Região Metropolitana de Recife. A técnica de centrífugo- flutuação com solução saturada de cloreto de sódio foi usada para recuperação experimental de oocistos de Cryptosporidium spp.. Oocistos foram pesquisados em mananciais e no sistema de tratamento (água bruta e tratada) através da filtração das amostras em membrana, sendo identificados, sem prévia purificação, pelos métodos de coloração Kinyoun e imunofluorescência direta (IFD) associada ao 4 6 - Diamidino-2-Phenylindole (DAPI), analisando-se amostras durante 12 meses, nos períodos seco (Setembro à Fevereiro) e chuvoso (Março à Agosto). A qualidade da água foi avaliada através dos parâmetros microbiológicos (coliformes totais e fecais) e físicoquímicos (turbidez, pH). A técnica de PCR foi realizada para a pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp. de origem fecal a partir dos iniciadores gênero e espécie específicos, CPB-DIAGF/CPB-DIAGH e HB-1/HB-2, sendo o DNA extraído com proteinase K e solução de lise sob congelamento/descongelamento. Os resultados mostraram que a técnica de purificação garantiu um material mais limpo, porém o percentual de recuperação de oocistos variou de 39,0% a 98,4%. Na água tratada não se verificou a presença de oocistos de Cryptosporidium spp., enquanto nas amostras de água bruta foram encontradas estruturas álcool-ácido resistentes similares aos oocistos de Cryptosporidium spp. em 100% (05/05) dos locais e em 40% (24/60) das amostras analisadas pelo método Kinyoun, sendo a presença do parasito confirmada pela técnica IFD/DAPI em 40% (02/05) dos locais e em 5% (03/60) das amostras, com o número variando de 16 a 40 oocistos/l, e verificando sua ocorrência no período seco e chuvoso. Todas as amostras encontraram-se dentro dos limites microbiológicos e físico-químicos padrões, exceto no parâmetro turbidez. Os produtos de PCR foram obtidos apenas com o uso dos primers CPB-DIAGF/CPB-DIAGR, sendo o melhor perfil de amplificação observado quando 105 oocistos foram usados para a extração do DNA, e após o emprego dos protocolos de extração e de amplificação modificados. Conclui-se que a técnica de purificação de oocistos de Cryptosporidium spp. influencia os percentuais de recuperação. Os oocistos de Cryptosporidium spp. estão presentes em águas de rio na Região Metropolitana de Recife, sendo este o primeiro relato de Cryptosporidium spp. em mananciais de Pernambuco e do Nordeste. A técnica IFD/DAPI permite uma melhor identificação de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras de água, no entanto a coloração histoquímica demonstrou ser útil como uma técnica de triagem. As técnicas de extração e amplificação avaliadas neste estudo podem ser usadas para a pesquisa de Cryptosporidium spp. em amostras com elevado número de oocistos

Multiple sclerosis is a complex disease and one for which the aetiology remains largely unanswered. Anti-dsDNA antibodies have been found intrathecally and bordering lesions in multiple sclerosis patients and in view of their known pathogenity in lupus nephritis the aim of this project was to further investigate their role in multiple sclerosis. Using the acute experimental allergic encephalomyelitis (EAE) model in the Lewis rat, the inflammatory phase of disease was profiled using immunohistological and ELISA methods and was related to clinical sign severity. The parameters of interest were central nervous system deposits of IgM, IgG, B cells and C3 and anti-DNA antibodies in sera, cerebrospinal fluid and in situ. In situ evaluation of anti-dsDNA antibodies was also performed in tissue taken from Biozzi (AH) mice (relapsing/remitting EAE model) and from a multiple sclerosis patient. Inflammatory deposits specifically at sites of perivascular cuffing were found to increase with increasing clinical sign severity. At the time clinical signs had plateaued in the Lewis rat, intrathecal anti-dsDNA antibodies were at their highest level and anti-ssDNA antibodies at their lowest. The latter possibly due to their involvement in the `clearing-up¿ process following tissue damage. Using novel DNA probes fluorescence suggestive of the presence of anti-dsDNA iii antibodies was seen in both animal and human tissue. Within human tissue the antibodies appeared to accumulate around active lesions and within vessels, raising the question of these antibodies having differing location dependent functions. EAE models have the potential to investigate these findings further and to evaluate new therapies. / Covance Laboratories Ltd.

Polyphosphat-speichernde Bakterien entfernen das im Abwasser enthaltene Phosphat durch Speicherung in Form von Granula, die dann mit einem Teil des Belebtschlammes aus dem Abwasser entfernt werden können. Dies ist wichtig um negative Einflüsse auf Oberflächengewässer wie Flüsse und Seen so gering wie möglich zu halten. Trotz intensiver Forschung ist der Prozess der sogenannten biologischen Phosphatelimination oft uneffektiv und im Jahresverlauf instabil, da über die im Belebtschlamm aktiven Polyphosphat-speichernden Bakterien nur wenig bekannt ist. Hauptproblem ist hierbei die geringe Kultivierbarkeit der Bakterien unter definierten Bedingungen (nur etwa 10-15 % der Mikroorganismen im Belebtschlamm sind kultivierbar). Aus diesem Grund war das Ziel der Arbeit die aktiven, Polyphosphat-speichernden Bakterien durchflusszytometrisch zu bestimmen und deren Dynamiken im Belebtschlamm kultivierungsunabhängig zu messen. Zunächst wurde ein Fixierungsprotokoll für die durchflusszytometrische Untersuchung der Polyphosphat-speichernden Bakterien erarbeitet, welches die größtmögliche Stabilität der hochdiversen mikrobiellen Gemeinschaft in Belebtschlammproben gewährleistet. Eine Mischung aus den Metallen Barium und Nickel (jeweils 5 mM) in einer 10%igen Natriumazidlösung erwies sich als bestes Fixierungsmittel mit einer Belebtschlamm-Stabilität von mindestens 9 Tagen. Um sowohl den DNA-als auch den Polyphosphat-Gehalt der Zellen messen zu können wurde weiterhin eine neue und sehr spezifische Polyphosphatfärbung auf Basis des fluoreszierenden Antibiotikums Tetrazyklin etabliert. Tetrazyklin bindet divalente Kationen, die auch in großer Menge in Polyphosphatgranula enthalten sind und fluoresziert gelblich grün. Die entwickelten Methoden zur Fixierung und Polyphosphatfärbung wurden an Belebtschlamm einer kommunalen Kläranlage getestet. Neben DNA- und Polyphosphat-Gehalt der Bakterienzellen wurde eine Vielzahl abiotischer Parameter (pH, Temperatur, Leitfähigkeit, …) gemessen. Diese wurden zusammen mit den durchflusszytometrischen Daten mittels Korrelationsanalyse ausgewertet. Hieraus ergaben sich wichtige Hinweise auf die Art der Polyphosphat-speichernden Bakterien, fördernde und störende Einflüsse des in der Kläranalage behandelten Abwassers auf die biologische Phosphatelimination und die Abhängigkeiten der mikrobiellen Gemeinschaft von Faktoren wie Temperatur, pH oder der anfallenden Regenmenge. Diese Erkenntnisse können genutzt werden um die biologische Phosphatelimination aus dem Abwasser zu verbessern und damit den Weg zu einer Ressourcen- und Umweltschonenden Phosphatrückgewinnung zu bereiten. Außerdem ist es, bei Kenntnis des kläranlagenspezifischen Prozesses, möglich anhand der durchflusszytometrischen Daten schnell die aktuelle Situation zu erfassen und gegebenenfalls rechtzeitig auf Änderungen zu reagieren, bevor es zu einer massiven Störung kommt. Eine Kombination von Durchflusszytometrie und der Erfassung abiotischer Daten ist nicht nur auf die biologische Phosphateliminierung anwendbar, sondern auch auf viele andere wissenschaftliche Fragestellungen.

A formação de biofilmes é um fator preocupante para indústria de alimentos, pois pode comprometer a sanitização de superfícies de contato e aumentar o risco de contaminação por patógeno em alimentos processados. L. monocytogenes é uma bactéria de ampla distribuição no ambiente e com capacidade de formar biofilmes e sobreviver por longos períodos em condições adversas. Esta bactéria pode causar doenças em pessoas imunocomprometidas e mulheres grávidas manifestando-se por infecções do sistema nervoso central, abortos e nascimentos prematuros. Vários estudos têm demonstrado que algumas bactérias podem sofrer transição para o estado viável mas não cultivável em resposta ao estresse. Considerando-se a importância da garantia da segurança e qualidade dos alimentos, há necessidade de desenvolvimento e de padronização de técnicas rápidas para a quantificação de células viáveis de L. monocytogenes em alimentos e biofilmes. Neste estudo foi avaliada a formação de biofilmes e viabilidade celular de Listeria monocytogenes em condições de estresse. Foram utilizadas técnicas de semeadura em placa e quantificação direta por microscopia de fluorescência com os corantes cloreto de 5-ciano-2,3-di-(p-tolil) tetrazólio (CTC) e 4,6-diamino-2- fenilindol (DAPI). Foram também realizados ensaios preliminares para padronização da Reação da Polimerase em Cadeia em tempo real (PCR em tempo real) com amostras previamente tratadas com brometo de etídio monoazídico (EMA). Os resultados obtidos demonstraram que o método de semeadura em placa foi adequado somente para a enumeração de células viáveis de L. monocytogenes em biofilmes enquanto que o método de enumeração por microscopia de fluorescência com CTC-DAPI permitiu quantificar bactérias no estado viável e viável mas não cultivável. Também foi observado que a presença de bacteriocinas de L. sakei 1 e L. mensenteroides 11 causou a diminuição na viabilidade e formação de biofilmes por L. monocytogenes. Os resultados preliminares utilizando culturas puras de L. monocytogenes demonstraram que o tratamento com brometo de etídio monoazídico (EMA) antes da análise por PCR em tempo real reduziu a amplificação do DNA de células mortas em 1 log de UFC por mL. No entanto dependendo da concentração utilizada, pode ocorrer também a inibição da amplificação de células viáveis de L. monocytogenes. Os resultados do presente trabalho indicaram que a microscopia de fluorescência é comparável à placa para análise de células de L. monocytogenes não estressadas. Entretanto, para a quantificação de L. monocytogenes submetida a estresse, é desejável a utilização de corantes de viabilidade celular. O método de PCR em tempo real com pré-tratamento com EMA é promissor mas, ainda necessita de maior padronização para avaliação de sua aplicabilidade na determinação seletiva de células viáveis de L. monocytogenes. / Biofilm formation is of great concern for food industry because it may compromise sanitization of surfaces and increase contamination risk of processed foods by bacterial pathogens. L. monocytogenes is an ubiquitous bacterium which is able to form biofilms and to survive for long periods under adverse conditions. L. monocytogenes may cause disease in immunocomprommised people and pregnant women, manifesting as central nervous system infections, abortion and premature birth. Some bacteria can undergo transition to viable but non-cultivable state in response to stress and it is important to study techniques for rapid quantification of viable cells of L. monocytogenes in foods. In this study biofilm formation and cell viability of Listeria monocytogenes were studied in stress conditions by plate counting, direct quantification by fluorescence microscopy with double staining dyes 5-cyano-2,3-ditolyl tetrazolium chloride (CTC)/4\'-6 diamino-2 phenylindole (DAPI). Preliminary experiments with real time polymerase chain reaction and treatment with ethidium bromide monoazide (EMA) were also performed. The results showed that plate count method was suitable for enumeration only of viable cells of L. monocytogenes in biofilms since, fluorescence microscopy with CTC-DAPI yielded higher counts, probably due to the presence of viable but nonculturable cells. It was also observed that the presence of bacteriocins of L. sakei 1 and L. mensenteroides 11 decreased viability and formation of biofilm by L. monocytogenes. Results obtained with pure cultures of L. monocytogenes showed that the treatment with ethidium bromide monoazide (EMA) before real time PCR detection, reduced DNA amplification of dead cells in 1 log CFU per mL, but depending on the concentration used, EMA also inhibited amplification of viable cells of L. monocytogenes. The results indicated that plate counting and fluorescence microscopy are equivalent for enumeration of non-stressed L. monocytogenes cells. However, the use of double staining with fluorescence microscopy is a more suitable method if stressed cells are present. The EMA-real time PCR is a promissing tool for rapid evaluation of viable L. monocytogenes, but it needs further standartization.