Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Benigno Alberto Moraes Rocha.pdf: 429604 bytes, checksum: e7166c606b960cf25df199a5ddc928fd (MD5) Previous issue date: 2008-02-29 / In Brazil, dengue is present in almost all states and territories, with a circulation of three different serotypes (DEN 1, DEN 2 and DEN 3), resulting in about 500 000 cases reported in 2007 (PAHO 2008; MS / SVS 2008a). This dissertation consists of a literature review, with emphasis on the epidemiology of dengue in Brazil and two articles that are designed to analyze the clinical and epidemiological characteristics of this condition, focusing on children under 15 years old, in Goiânia. The first article provides a profile analysis 59. 157 reported cases of dengue (SINAN), in Goiania, from 2001 to 2006. It also presents a reliability evaluation of the clinical classification of dengue, as recorded in the SINAN, compared with a revised classification proposed by the authors. There was an increase of dengue fever with complications or Dengue hemorrhagic fever in all age groups (p <0.05), children showed more hemorrhagic manifestations, however, no difference in the proportion of severe cases among adults and children. The results showed a low capacity of the surveillance system for classifying cases potentially serious in children under 15 years old (Kappa = 0.22; 95% CI 0.20 to 0.24). The second article examines 162 children under 15 years with acute febrile illness suggestive of dengue fever, attended from 2005 to 2006. We collected blood samples for detection of IgM anti-dengue (MAC-ELISA), molecular biology test (RT-PCR) and virus isolation. Half the cases were laboratory confirmed by serology and 84 and five by RT-PCR and / or virus isolation and identification of DEN 3 in all. Myalgia, arthralgia, rash, thrombocytopenia and leukopenia were more frequent among confirmed cases (p <0.05). PPV and NPV for suspected dengue cases, by clinical criteria, were respectively 54.8% and 40.0%. Recommended clinical criteria for diagnosis of dengue were reluctant for this specific age group, even in a region of high endemicity. / No Brasil, a dengue esta presente em quase todos os estados e territórios, com circulação de três sorotipos diferentes (DEN 1, DEN 2 e DEN 3), resultando em cerca de 500 mil casos notificados, em 2007 (PAHO 2008; MS/SVS 2008a). A presente dissertação de mestrado é composta por uma revisão da literatura, com ênfase na epidemiologia da dengue no Brasil e por dois artigos que se propõem analisar as características clínicas e epidemiológicas desse agravo, com enfoque em menores de 15 anos de idade, em Goiânia. O primeiro artigo traz uma análise do perfil de 59. 157 casos notificados de dengue (SINAN), em Goiânia, de 2001 a 2006. Apresenta, também, uma avaliação da confiabilidade da classificação clínica de dengue, conforme registrada no SINAN, em comparação com uma classificação revisada, propostas pelos autores. Houve aumento de dengue com complicação ou dengue hemorrágica, em todas as faixas etárias (p<0,05), Crianças apresentaram mais manifestações hemorrágicas, entretanto, não houve diferença na proporção de formas graves entre adultos e crianças. Foi evidenciada uma baixa capacidade do sistema de vigilância para classificar casos potencialmente graves, em menores de 15 anos de idade (Kappa = 0,22; IC95% 0,20-0,24). O segundo artigo analisa 162 menores de 15 anos, com quadro febril agudo, sugestivo de dengue, atendidas entre 2005 a 2006. Foram colhidas amostras de sangue para detecção de IgM anti-dengue (MAC-ELISA); teste de biologia molecular (RT-PCR) e isolamento viral. Metade dos casos foram confirmados laboratorialmente, sendo 84 por sorologia e cinco por RT-PCR e/ou isolamento viral, com identificação de DEN 3 em todos eles. Mialgia,artralgia, exantema, plaquetopenia e leucopenia foram mais freqüentes entre os casos confirmados (p< 0,05). VPP e VPN para casos suspeitos de dengue, pelos critérios clínicos, foram, respectivamente, de 54,8% e 40,0%. Critérios clínicos preconizados para o diagnóstico de dengue mostraram-se pouco específicos para esta faixa etária, mesmo em região de alta endemicidade.

A dengue à transmitida por mosquitos hematÃfagos do gÃnero Aedes das espÃcies aegypti e albopictus. O vÃrus dengue (DENV) pertence à famÃlia Flaviviridae do gÃnero FlavivÃrus e possui quatro sorotipos que foram designados como: DENV-1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4. A doenÃa pode manifestar-se como uma enfermidade infecciosa aguda, caracterizada por um amplo espectro clÃnico que varia desde formas de infecÃÃo assintomÃtica ou febre indiferenciada atà as formas graves, com hemorragia e/ou choque. Este estudo apresentou como objetivo descrever os aspectos epidemiolÃgicos, clÃnicos e laboratoriais de pacientes com suspeita de dengue atendidos no Hospital SÃo Josà de DoenÃas Infecciosas (HSJ) e no Hospital Nossa Senhora da ConceiÃÃo (HDNSC) no perÃodo de fevereiro a dezembro de 2010. Dessa forma, foram recrutados 93 pacientes, sendo que, 86 preencheram os critÃrios de inclusÃo. Os pacientes foram recrutados por busca ativa nas emergÃncias e nas enfermarias dos referidos hospitais e submetidos a um protocolo de acompanhamento por meio de uma ficha de avaliaÃÃo clÃnica inicial (1 ao 5Âdia de doenÃa) e de uma ficha de avaliaÃÃo subsequente (6 ao 7 dia de doenÃa). Foram realizadas pelo menos duas mensuraÃÃes de hematÃcrito, plaquetas, alÃm de exames bioquÃmicos e exames especÃficos para dengue. Os sinais e os sintomas mais prevalentes nos pacientes com suspeita de dengue foram: febre, cefaleia e mialgia. Vinte e cinco pacientes (29%) apresentavam manifestaÃÃes hemorrÃgicas espontÃneas, sendo que, as hemorragias cutÃneas (petÃquias e equimoses) foram as mais encontradas (15%). Quando avaliada a populaÃÃo feminina em idade reprodutiva, 6% apresentaram metrorragia. A prova do laÃo foi realizada em 80 pacientes, sendo positiva em 20 pacientes (25%). Dos 86 pacientes, 48 (55,8%) foram positivos para dengue por pelo menos uma das tÃcnicas: imunocromatografia NS1 (16%), RT-PCR (19%), ELISA IgM (44%), imunocromatografia IgM (42%) e ELISA NS1 (27%). O vÃrus dengue foi detectado em 16 pacientes, sendo, DENV-1 em 1 paciente (6,2%), DENV-2 em 14 pacientes (87,5%) e DENV-3 em 1 paciente (6,2%). Vinte e seis pacientes (54,1%) preencheram os critÃrios do MinistÃrio da SaÃde (MS) de Dengue ClÃssica (DC), 10 (20,8%) de Febre HemorrÃgica de Dengue (FHD) e 12 (25%) de Dengue com ComplicaÃÃo (DCC). A relaÃÃo entre sexo feminino e masculino foi de aproximadamente 1,1/1, com predomÃnio maior de adultos jovens. Quanto ao critÃrio de gravidade do MS, 60% dos casos suspeitos de dengue foram classificados como grau II e nenhum caso como grau IV. Dos critÃrios de extravasamento plasmÃtico preconizado pelo MS, a hipoalbuminemia esteve presente em 5 pacientes (10,4%). A queda do hematÃcrito acima de 20% apÃs hidrataÃÃo foi observada em apenas 4 pacientes (8,3%). No perÃodo do estudo, foram diagnosticados dois pacientes com dengue e leptospirose, sendo que um paciente complicou com pÃrpura trombocitopÃnica idiopÃtica, esses pacientes tiveram evoluÃÃo benigna. Portanto salientamos a necessidade de um diagnÃstico precoce, antes do desenvolvimento das manifestaÃÃes graves, de polÃticas de erradicaÃÃo do Aedes e da estruturaÃÃo de um serviÃo de referÃncia. / Dengue is transmitted by blood-sucking mosquitoes of the species of the genus Aedes aegypti and albopictus. Dengue virus (DENV) belongs to the genus Flavivirus of the Flaviviridae family and has four serotypes that were designated as: DENV-1, DENV-2, DENV-3 and DENV-4. The disease can manifest as an acute infectious disease characterized by a wide clinical spectrum ranging from asymptomatic forms of infection or undifferentiated fever to severe forms, with bleeding and / or shock. This study had as objective to describe the epidemiological, clinical and laboratory features of patients with suspected dengue fever treated at the St Joseph Hospital of Infectious Diseases (HSJ) and the Hospital Nossa Senhora da ConceiÃÃo (HDNSC) in the period from February to December 2010. Thus, we recruited 93 patients, 86 met the inclusion criteria. Patients were recruited by an active search in emergencies and in the ward of these hospitals and underwent a follow-up protocol through an initial clinical evaluation form (from day 1 to day 5 of illness) and an evaluation form following (from the 6 to 7 day of illness). Were performed at least two measurements of hematocrit, platelets, and biochemical tests and specific tests for dengue. The signs and symptoms more prevalent in patients with suspected dengue were fever, headache and myalgia. Twenty-five patients (29%) had spontaneous bleeding manifestations and the cutaneous bleeding (petechiae and ecchymosis) were the most frequent (15%). When evaluating the female population of reproductive age, 6% had metrorrhagia. The tourniquet test was performed in 80 patients and was positive in 20 patients. Of 86 patients, 48 (55,8%) were positive for dengue at least one of the techniques: immunochromatography NS1 (16%), RT-PCR (19%), IgM ELISA (44%), IgM immunochromatography (42%) and NS1 ELISA (27%). The dengue virus was detected in 16 patient and, DENV-1 in 1 patient (6.2%), DENV-2 in 14 patients (87.5%) and DENV-3 in 1 patient (6.2%). Twenty- six patients (54,1%) met the criteria of the Ministry of Health (MOH) Classic Dengue (DC), 10 (20,8%) of Dengue Hemorrhagic Fever (DHF) and 12 (25%) of Dengue with complication (DCC). The relationship bet ween females and males were approximately 1.1/1, with higher prevalence in young adults The criterion for severity of MOH, 60% of suspected dengue cases were classified as grade II and none as grade IV. Plasma extravasation of criteria recommended by MOH, hypoalbuminemia was present in 5 patients (10,4%). The drop in hematocrit higher than 20% after hydration was observed in only 4 patients (8,3%). During the study period, two patients were diagnosed with dengue and leptospirosis, and one patient complicated with idiopathic thrombocytopenic purpura, these patients had a benign outcome. Therefore we stress the need for early diagnosis, before the development of severe manifestations, of policies to eradicate Aedes and structure a reference service.

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2013-03-20T19:12:45Z No. of bitstreams: 1 Tiago_Póvoa.pdf: 6904413 bytes, checksum: 89b7d7a97e24eb2dfd28a1d63fbce130 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-20T19:12:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tiago_Póvoa.pdf: 6904413 bytes, checksum: 89b7d7a97e24eb2dfd28a1d63fbce130 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A dengue representa um sério problema de saúde pública mundial entre as doenças causadas por arbovírus. Seu agente etiológico, o vírus da dengue, compreende 4 sorotipos antigenicamente distintos (DENV1-4). Os sintomas da dengue variam desde a febre da dengue (FD) até a febre hemorrágica da dengue (FHD) e a síndrome do choque da dengue (SCD). No presente trabalho, iniciamos um estudo com o material obtido de diferentes órgãos (fígado, baço, pulmão, coração e rim) de quatro casos fatais de dengue. Análises histopatológicas revelaram, em todos os casos, áreas com edema e hemorragia; presença de esteatose (micro e macrovesicular) e necrose no fígado; degeneração de fibras cardíacas; necrose tubular aguda dos túbulos contorcidos proximais renais; destruição dos centros germinativos e atrofia de folículos linfóides do baço; espessamento dos septos alveolares e hipertrofia de macrófagos alveolares nos pulmões dos quatro pacientes e também a formação de membrana hialina nos casos 1 e 2. Detectamos antígenos virais em todos os órgãos e também um aumento de infiltrado inflamatório mononuclear, com aumento da população de macrófagos ativados e linfócitos B no rim; predomínio somente de linfócitos B no coração; aumento do número de macrófagos ativados e linfócitos T CD4+ no fígado e pulmão, e de linfócitos T CD8+ no pulmão. No baço, observamos uma diminuição das populações de linfócitos T CD4+, T CD8+ e B. A quantificação de células expressando citocinas mostrou: aumento da expressão de RANTES em todos os órgãos; um equilíbrio entre a produção das citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IFN-γ) e anti-inflamatórias (IL-10 e TGF-β) no fígado, rim e pulmão; aumento das citocinas pró-inflamatórias e diminuição das anti-inflamatórias no baço e o perfil oposto no tecido cardíaco, com predomínio da detecção de TGF-β. Além disso, avaliamos o efeito da infecção com DENV-2 em camundongos BALB/c inoculados pelas vias intraperitoneal (i.p.) e intravenosa (i.v.). A análise histopatológica do fígado e baço destes animais revelou alterações semelhantes às observadas nos casos de dengue (áreas de edema e hemorragia, esteatose, necrose e tumefação no fígado, e desorganização da arquitetura dos folículos no baço). De um modo geral, a inoculação pela via i.p. induziu danos em áreas focais, enquanto a via i.v. provocou lesões mais difusas em ambos os tecidos. Entretanto, essas diferenças entre as vias de inoculação não se refletiram em diferenças nas subpopulações de linfócitos. Verificamos que, em ambos os casos, as alterações das subpopulações linfocitárias ocorreram já no segundo dia de infecção. A quantificação dessas subpopulações revelou uma diminuição de linfócitos B totais e um aumento de linfócitos T CD4+ totais no fígado dos camundongos infectados, enquanto que no sangue, observamos um comportamento inverso dessas subpopulações. Já no baço, verificamos uma diminuição da subpopulação de linfócitos T CD8+ totais e um aumento de linfócitos T CD8+ ativados nos animais com 2 dias de infecção. De um modo geral, tais resultados poderão contribuir para um melhor entendimento da doença e para a validação do modelo experimental murino em novas abordagens vacinais ou terapêuticas. / Dengue is a serious worldwide public health problem among the diseases caused by arboviruses. Its etiologic agent, the dengue virus, comprises four antigenically distinct serotypes (DENV1-4). Dengue symptoms range from the dengue fever (DF) to the dengue hemorrhagic fever (DHF) and dengue shock syndrome (DSS). In the present work, we initiated a study with materials obtained from different organs (liver, spleen, lung, heart and kidney) of four dengue fatal cases. Histopathological analysis revealed, in all cases, areas with edema and hemorrhage; the presence of steatosis (micro and macrovesicular) and necrosis in the liver; degeneration of cardiac fibers; acute tubular necrosis of renal proximal convoluted tubules; destruction of the germinal centers and atrophy of lymphoid follicles in the spleen; thickened alveolar septa and hypertrophy of alveolar macrophages in the lungs of the four patients and also the presence of hyaline membrane in cases 1 and 2. Virus antigens were detected in all organs as well as an increase of mononuclear cell infiltration, with the increase of activated macrophages population and B lymphocytes in the kidney; predominance of only B lymphocytes in the heart; increased number of activated macrophages and CD4+ T cells in the liver and the lung, and of CD8+ T cells in the lung. In the spleen, we observed a decrease of CD4+ T, CD8+ T and B populations. The quantification of cells expressing cytokines showed: increase of RANTES expression in all organs, a balance between production of proinflammatory (TNF-α e IFN-γ) and anti-inflammatory (IL-10 and TGF-β) cytokines in the liver, kidney and lung; increase of proinflammatory and decrease of anti-inflammatory cytokines in the spleen, while the opposite profile was observed in the cardiac tissue, with the predominance of TGF-β. In addition, we evaluated the effect of DENV-2 infection in BALB/c mice inoculated by the intraperitoneal (i.p.) and intravenous (i.v.) routes. Histopathological analysis in the liver and the spleen of these animals showed alterations similar to those observed in the dengue cases (areas of edema and hemorrhage, steatosis, necrosis and swelling hepatocytes in the liver, as well as disorganization of splenic follicle architectures). In general, results indicated that the i.p. inoculation induced damages in focal areas, whereas the lesions caused by the i.v. route were more diffused in both tissues. However, these differences between the two inoculation routes were not reflected in differences in the lymphocyte subsets. We observed that changes in lymphocyte subpopulations occurred by the second day after infection in both cases. The quantification of these subpopulations revealed a decrease of total B lymphocytes and an increase of total CD4+ T cells in the liver of infected mice, whereas in the blood we were observed an inverse behavior of such subpopulations. In the spleen, we verified a decrease of the total CD8+ T lymphocyte subpopulation and an increased of activated CD8+ T cells, two days after infection. Overall, these results may contribute to a better understanding of the disease and to the validation of this murine experimental model for novel vaccine or therapeutic approaches.

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2016-12-14T17:53:04Z No. of bitstreams: 2 Tese - Benigno Alberto Moraes da Rocha - 2015.pdf: 2182475 bytes, checksum: 33c24230875842c1d6d2b9260ba26f6e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-12-15T17:34:35Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Benigno Alberto Moraes da Rocha - 2015.pdf: 2182475 bytes, checksum: 33c24230875842c1d6d2b9260ba26f6e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-15T17:34:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Benigno Alberto Moraes da Rocha - 2015.pdf: 2182475 bytes, checksum: 33c24230875842c1d6d2b9260ba26f6e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-12-03 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Outro / Background: Dengue is the fastest growing arbovirosis in the world, infecting almost 390 million people. The dengue virus is the etiological agent of the disease, which has four serotypes (DENV1-4). All serotypes can cause dengue, varying from asymptomatic to severe forms and may lead to death. In Brazil, in 2010, there was the re-emergence of serotype DENV-4 after 28 years. In 2013, it was registered the largest epidemic in history with more than 1.4 million cases and circulation of the four serotypes. In the state of Goiás, Central Region of Brazil, after serotype DENV-4 entry in 2011, for the first time in the region, in 2013, there was a major epidemic which registered more than 10% of the cases in Brazil, more often DENV -4 followed by DENV-1. In this scenario, a study was conducted with the objective to characterize the clinical and molecular profile of patients with dengue; establish if there were associations between clinical and laboratory markers of severity with the infectious virus serotypes; and genetic characterization of the more frequent virus serotype during the 2012/2013 dengue epidemic in Goiânia, Goiás. Methods: A prospective clinical study with suspected dengue patients from eight reference health units (five public, two hospitals and three of secondary level; and three private hospitals) from January 2012 to July 2013 was conducted. The patients were evaluated in three different moments by clinicians who collected clinical and sociodemographic information. Blood sampling for laboratory testing (Hg, AST, and ALT) and confirmatory tests for dengue infection (IgM, IgG, NS1, and RT-PCR) were performed. The gene sequencing of dengue virus type 4 envelope was also carried out. Patients with confirmation of dengue infection were classified according to clinical signs according to the World Health Organization. Principal findings: Six hundred and fifty patients were recruited; 18 were excluded, and 632 were followed. Four hundred fifty-two patients (71.5%) had confirmed infection and 112 (24.8%) were hospitalized. More than 90% were over 15 years of age, and 235 were female (52.0%). In 328 patients, it was possible to classify the type of infection, and 248 (75.6%) of these had a secondary infection. 188 (41.6%) were classified as FD, 238 (52.6%) as DwC and 26 (5.8%) with DG. Compared to those aged xvi over 15 years, spontaneous bleeding, severe abdominal pain and plasma extravasation were more frequent in children under 15 years of age (p <0.05). There was one death of a 16-year-old. During two years of follow-up, viral RNA was identified in 243 (40.5%) of 600 patients evaluated in these tests, where the four serotypes were identified: 91 (37.4%) with DENV-1, 4 (1.6%) with DENV-2, 13 (5.3%) with DENV-3 and 135 (55.5%) with DENV-4. A higher frequency of some symptoms of severity was observed (thrombocytopenia, spontaneous bleeding and severe abdominal pain) in DENV-1 serotype compared to DENV-4. Eighty percent of patients with DENV-4 had a secondary infection. In the phylogenetic study of DENV-4 envelope gene, genotype II was identified. Conclusion: The present study described clinically and molecularly a large dengue epidemic that occurred in a state of Brazil's Central Region, which revealed the concurrent circulation of the four serotypes, the frequency of clinical signs of disease severity in children aged under 15 years and in people with DENV-1 infection. It also identified the current genotype of the most common serotype in the epidemic. These findings should serve as a warning sign for the health authorities because we are experiencing a significant dispersion of serotypes situation worldwide. / Contexto: Dengue é a arbovirose que mais cresce no mundo, infectando quase 390 milhões de pessoas. Ela é causada pelos vírus dengue que possui quatro sorotipos (DENV1-4). Todos os sorotipos podem causar a doença, que varia de formas assintomáticas a graves e podem levar a óbito. No Brasil em 2010 houve a reemergência do sorotipo DENV-4 após 28 anos. No ano de 2013, foi registrada a maior epidemia da história com mais de 1,4 milhão de casos e circulação do quatro sorotipos. Na Região Central do Brasil, Estado de Goiás, após a entrada sorotipo DENV-4, em 2011, pela primeira vez na região, em 2013, aconteceu uma grande epidemia onde foi registrado mais de 10% dos casos do Brasil, com maior frequência do DENV-4 seguido pelo DENV-1. Neste cenário foi realizado um estudo com os objetivos de caracterizar o perfil clínico e molecular dos pacientes com dengue, estabelecer se houve associação entre marcadores de gravidade clínica e laboratorial com os sorotipos virais infectantes e caracterizar geneticamente o vírus da dengue mais frequente que circulou na epidemia de 2012/2013 em Goiânia – GO. Metodologia: Foi realizado um estudo clínico prospectivo com pacientes suspeitos de dengue atendidos em oito unidades de saúde (cinco públicas, sendo dois hospitais e três de nível secundário; três hospitais privados) de referência de janeiro de 2012 a julho de 2013. Os pacientes foram abordados em três momentos diferentes e avaliados por clínicos que coletaram informações clínicas e sócio-demográficas. Também houve coleta de sangue para realização de exames complementares (Hg, AST e ALT) e exames confirmatórios da infecção por dengue (IgM, IgG, NS1 e RT-PCR). Foi realizado ainda o sequenciamento do gene do envelope do vírus dengue tipo 4. Os pacientes com confirmação da infecção por dengue foram classificados quanto à forma clínica da doença de acordo com a Organização Mundial de Saúde, Principais achados: Foram recrutados 650 pacientes, dos quais 18 foram excluídos e 632 foram seguidos. Quatrocentos e cinquenta e dois pacientes (71,5%) tiveram a infecção confirmada. Destes, 112 (24,8%) foram hospitalizados. Mais de 90% tinham idade superior a 15 anos e 235 (52,0%) eram do sexo feminino. Para 328 pacientes foi possível classificar o tipo de infecção e destes, 248 (75,6%) tiveram infecção xiv secundária. Classificou-se como FD 188 indivíduos (41,6%), 238 (52,6%) com DwC e 26 (5,8%) com DG. Sangramento espontâneo, dor abdominal intensa e extravasamento de plasma foram mais freqüentes em menores de 15 anos de idade, quando comparado aos maiores de 15 anos (p<0,05). Houve um óbito de um adolescente de 16 anos de idade. O RNA viral foi identificado em 243 (40,5%) de 600 pacientes investigados por estes exames, onde foi identificados os quatros sorotipos DENV-1 em 91 pacientes (37,4%) DENV-2 em 4 (1,6%), DENV-3 em 13 (5,3%) e DENV-4 em 135 (55,5%) nos dois anos de acompanhamento. Foi observada uma frequência maior de alguns sintomas de gravidade (plaquetopenia, sangramentos espontâneos e dor abdominal intensa) no sorotipo DENV-1 comparado ao DENV-4. Oitenta por cento dos pacientes com DENV- 4 tiveram infecção secundária. No estudo de filogenia do gene do envelope do DENV-4 foi identificado o genótipo II. Conclusão: Foi descrito clínica e molecularmente uma grande epidemia que ocorreu em um Estado da Região Central do Brasil que revelou a circulação concomitante dos quatros sorotipos virais, frequência de sinais de gravidade em menores de 15 anos de idade e em pessoas com infecção pelo DENV-1. Identificou-se ainda o genótipo circulante do sorotipo mais freqüente na epidemia. Estas constatações devem servir de sinal de alerta para as autoridades de saúde, pois nos encontramos em situação de grande dispersão dos sorotipos em todo o mundo.

De 50 à 100 millions de cas de maladie de dengue sont recensés chaque année dans le monde. Le virus de la dengue présente aujourd’hui un problème de santé publique avec son émergence en Europe et particulièrement en France. L’infection par le virus peut être asymptomatique ou être responsable de trois pathologies: l’une avec des symptômes grippaux (DF), une autre avec des hémorragies modérées (DHF) et une dernière avec des hémorragies sévères entraînant un syndrome de choc (DSS).Les facteurs de l’hôte jouent un rôle important dans le développement de formes sévères mais les facteurs viraux impliqués restent peu décrits. Le but de ce travail de thèse était de mieux comprendre ces facteurs viraux au travers de l’étude des dynamiques de circulation de souches de dengue 3 génotype III en Afrique et de la caractérisation de trois souches de dengue de sérotype I du Cambodge. Ce travail nous a permis de mettre en évidence la circulation de variants pendant les épidémies, permettant de supposer que la présence de variants permet une meilleure dissémination, ainsi que des caractéristiques génotypiques et phénotypiques particulières in vitro aux souches associées aux formes hémorragiques et aux formes avec syndrome de choc chez l’homme. Ces travaux ont été complétés par le développement d’un système original de détection du virus de la dengue et des autres virus du genre Flavivirus. Ce travail de thèse a permis d’identifier de potentiels facteurs de virulence propres au virus, ouvrant la voie à la recherche sur le rôle de certaines protéines virales dans la pathogénicité. / From 50 to 100 million cases of dengue illness occurred every year in the world. Today, dengue virus is a public health problem with its emergence in Europe, particularly in France. DENV infection can be asymptomatic or be responsible for three distinct pathologies: one with flu-like symptoms (DF), another with moderate hemorrhage (DHF) and the last one with severe bleeding leading to shock syndrome (DSS). Host factors have an important role in the development of severe forms but implicated viral virulence factors stay not well described. The aim of this research work was to better understand these viral factors through study of dengue serotype 3 genotype III dynamics of circulation in Africa and through the characterization of three dengue serotype 1 strains in Cambodia. This work highlighted the circulation of variants during epidemics, allowing us to suppose that the presence of variants permits a better dissemination, as well as specific phenotypic and genotypic characteristics in vitro of strains associated with hemorrhagic forms or forms with shock syndrome in humans. These works were completed by the development of an original system of detection of dengue virus and other viruses of genus Flavivirus. This research work allowed identifying potential virulence factor specific to virus, opening the way for research on the role of certain viral proteins in pathogenicity.

Dengue é uma doença tropical negligenciada que atualmente ameaça mais da metade da população mundial e representa custo anual de bilhões de dólares para as áreas afetadas. Avanços recentes na elucidação estrutural de proteínas humanas e vitais contribuíram para o entendimento do ciclo de replicação vital e das interações vírus-hospedeiro a nível molecular. Em particular, a camada mais externa do vírus é composta por 180 monômeros da glicoproteína do envelope. Cada um desses monômeros apresenta duas glicosilações que são reconhecidas por lectinas cuja atividade depende de Ca2+. A interação entre o vírus e essas lectinas favorece a infecção ou o aparecimento de sintomas mais severos. Neste trabalho aplicamos simulações de dinâmica molecular e métodos de estimativa de afinidade para avançar nosso conhecimento sobre os mecanismos moleculares do reconhecimento de glicosilações high-mannose pelas lectinas DC-SIGN e MR, ambas já experimentalmente validadas como alvos biológicos para desenvolvimento de novos antivirais. Adicionalmente, através de virtual screening usando um conjunto de programas de implementação própria e uma biblioteca de moléculas já aprovadas para uso como fármacos, encontramos uma molécula (lohexol) que apresenta alto potencial de interação com ambos os receptores. Embora testes experimentais ainda sejam necessários para validar esse achado, nossos resultados sugerem que essa molécula, e eventualmente moléculas similares, podem agir como inibidor da infecção do vírus da Dengue por um mecanismo duplo. / Dengue is a tropical neglected disease that currently threatens more than half the world\'s population and represents a yearly cost of billions of dollars to the affected areas. Recent advances in the elucidation of 3D structures of human and viral proteins has contributed to the understanding of the viral replication cycle and virus-host interactions at the molecular level. In particular, the outermost layer of the virus is composed by 180 monomers of the envelope glycoprotein. Each one of these monomers displays two glycosylations that are recognized by lectins which have Ca2+-dependent activity. The interaction between the virus and these lectins favors infection or severe disease onset. In this work we apply molecular dynamics simulations and affinity estimation methods to advance our knowledge about the molecular mechanisms underlying the recognition of the high-mannose glycosylation by the DC-SIGN and MR lectins, both of which are already validated as targets for the development of new antivirals against Dengue. Additionally, by running virtual screening assays using a set of programs implemented by us and a library containing molecules which are already approved to be used as drugs, we found one molecule (lohexol) which presents high potential of interaction with both receptors. Although experimental testing is still necessary to validate this finding, our results suggest that this molecule, and eventually similar ones, can act as an inhibitor of the Dengue virus infection by a dual mechanism.

A análise espaço-temporal da transmissão é um recurso fundamental para abordagem de doenças que acometem a população. Este estudo teve por objetivo descrever e analisar espacialmente e temporalmente a transmissão de dengue no município de São Sebastião - SP, entre os anos de 2001 a 2015, buscando elucidar aspectos da transmissão de dengue no município. Dados de casos de dengue e variáveis de características da população foram obtidos no Centro de Vigilância Epidemiológica \"Prof. Alexandre Vranjac\" e na Secretaria da Saúde de São Sebastião do banco Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN) e dados da infestação do vetor Aedes aegypti, nos arquivos dos sistemas de informação SISAEDES e SISAWEB, bem como de projetos desenvolvidos anteriormente pelo Laboratório de Biologia e Ecologia de Culicídeos da SUCEN. Foi realizada a análise descritiva dos dados de incidência e do índice de infestação predial (IP). Observou-se o registro da positividade do vetor em 1998, na região central, com crescente expansão para os bairros próximos. A ocorrência dos casos de dengue mostrou um possível maior registro no sexo feminino. Anos com baixos índices anuais pluviométricos demonstraram provável aumento no número de casos de dengue e de imóveis positivos para o vetor. Anos com temperaturas médias anuais entre 20 a 31ºC mostraram uma possível elevação no número de casos e de infestação de Aedes aegypti. / The spatial-temporal analysis of transmission is a base resource on approaching of population diseases. The objective of this study is to describe and analyze the spatial-temporal transmission of dengue in the municipality of São Sebastião - SP, between 2001 and 2015 aiming to elucidate aspects of dengue transmission. The data of cases of Dengue and variables characteristic of population were obtained from the center of epidemiological vigilance \"Prof. Alexandre Vranjac\", the notification database (SINAN) of health secretary from São Sebastião, the database of vector Aedes aegypti infestation in information system SISAEDES and SISAWEB and previous projects developed by laboratory of culicid biology and ecology from Superintendência de Controle de Endemias (SUCEN). It was observed the vector positivity in 1998 on central region with a growing expansion to near neighborhoods. The occurrence of dengue cases has shown a possible higher level on female gender. The years with low annual precipitation levels had a possible increasing on number of dengue cases and houses with vector. The years with annual temperature ranging from 20 to 31°C have shown a possible increasing on number of cases and infestation of Aedes aegypti.

Introdução: A dengue é uma doença infecciosa causada por um arbovírus relatada em regiões tropicais e subtropicais. Os maiores números de casos costumam ocorrer nos períodos quentes e chuvosos do ano, que favorecem as condições para o desenvolvimento do vetor da doença, o mosquito Aedes aegypti. Modelos estatísticos podem ser úteis para a compreensão das variações mensais dos números de casos registrados da doença e podem trazer razoáveis predições dos números mensais de casos em um período subsequente a uma série temporal estudada. Métodos: Esta dissertação trata de um estudo ecológico com componente de série temporal. Foram usados registros mensais de casos confirmados de dengue, entre os anos de 1998 a 2008, obtidos do Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN), de dois municípios do interior paulista (Ribeirão Preto e Campinas). Modelos estatísticos de séries temporais foram utilizados para descrever o comportamento das séries de dados e predizer o número esperado de casos da doença em um período subsequente. Utilizou-se modelos de Box & Jenkins, ou seja, o modelo SARIMA (Seasonal Autoregressive Integrated Moving Average) com extensões (modelo SARIMAX) que permitem incorporar covariáveis como as temperaturas máxima, média e mínima e a precipitação média a cada mês. Utilizou-se o critério de Akaike (AIC) para a comparação entre diferentes especificações dos modelos. A partir dos modelos ajustados aos dados, foram obtidas predições mensais para o ano de 2009, sendo estas comparadas com os valores observados. Resultados: Sem considerar a inclusão de covariáveis, o melhor modelo para os dados de Campinas foi o SARIMA(2,1,2)(1,1,1)12 , e para os dados de Ribeirão Preto o melhor foi o SARIMA(2,1,3)(1,1,1)12 (modelos com menores valores de AIC). Ao incorporar nos modelos as variáveis climáticas, observou-se um melhor ajuste para o município de Campinas, o modelo SARIMAX(1,1,1)(1,1,1)12 que inclui a precipitação observada nos 2 meses antecedentes às ocorrências mensais de casos de dengue e a temperatura mínima registrada nos 3 meses antecedentes. No município de Ribeirão Preto, o modelo que mostrou-se mais adequado aos dados foi o SARIMAX(1,1,1)(0,1,1)12 que inclui precipitação observada nos 3 meses antecedentes às ocorrências mensais de casos de dengue e a temperatura mínima registrada em um mês anterior. As predições mensais obtidas para o ano de 2009 mostraram-se razoavelmente próximas àquelas observadas, em ambos municípios. Conclusões: Os resultados do presente estudo, em adição a resultados da literatura, evidenciam que os números de componentes autorregressivos e de média móvel adequados ao ajustes de modelos SARIMA variam de uma população a outra, sugerindo diferentes padrões temporais da doença de acordo com características locais. Comparações entre valores preditos e observados sugerem que os modelos SARIMA são ferramentas úteis para predição do número de casos de dengue. Sugere-se que os modelos utilizados nesta dissertação sejam utilizados por serviços municipais de saúde para a vigilância da doença, o que pode trazer benefícios em programas de prevenção e planejamentos de serviços públicos. / Introduction: Dengue is an infection disease which is caused by an arbovirus related to tropical and subtropical region. Most cases usually occur on warm and rainy weathers of the years that facilitate the conditions of the development vector of the disease, the Aedes Aegypti mosquito. Statistical models can be very useful to comprehend the monthly variations of the number of registered cases of the disease, and they might bring reasonable predictions to the monthly number of cases in a subsequent period to a studied time series. Metodology: This dissertation is about ecologic study with a time series component. It was used monthly registry of confirmed dengue cases, between 1998 and 2008 years, obtained by the Information Center of Notification Diseases (ICND), out of two cities in the state of São Paulo (Campinas and Ribeirão Preto). Statistic time series models were used to describe the data series behavior and to predict the average number of disease cases in the subsequent period. We used the Box & Jenkins model, that in, the SARIMA (Seasonal Autoregressive Integrated Moving Average) model, with extensions (SARIMAX model) that allow to incorporate co-variables to the maximum, mean and minimum temperatures and the average monthly precipitation. We used the Akaike criterio (AIC) for comparison between different model specifications. From the fit data models, we obtained monthly predictions to the 2009 year, being compared to the observed data. Results: Without considerating the inclusion of the covariables, the best model for Campinas data was the SARIMA(2,1,2)(1,1,1)12, and for Ribeirão Preto data the best was SARIMA(2,1,3)(1,1,1)12 (smaller AIC values models). As we incorporate the climate variables in the models, we observe that the best fit for Campinas city was the SARIMAX(1,1,1)1,1,1)12 that includes the observed precipitation in 2 months before the monthly dengue cases and the minimum registered temperature in 3 months before. In Ribeirão Preto city, the most adequate model was the SARIMAX(1,1,1)(0,1,1)12 that includes the observed precipitation in 3 months before the monthly dengue case occurrence and the minimum temperature in one month before. The monthly prediction obtained for 2009 year show reasonably close to the observed, in both cities. Conclusion: The results of this study, in addition to the literature results, show that the adequate number of autoregressive and moving average components fitted in SARIMA models, vary between one population and other, suggesting different disease time patterns according to local characteristics. Comparing predict and observed values suggest that the SARIMA models are useful tools to predict the number of dengue cases. We suggest that the models in this dissertation be used in city health services to surveillance the disease, which may bring benefits for prevention programs and public service planning.

A dengue é uma doença infecciosa transmitida pela picada de mosquitos do gênero Aedes. O vírus da dengue (DENV), pertencente ao gênero Flavivirus, família Flaviviridae, é atualmente um importante problema de saúde pública em todo o mundo. São reconhecidos quatro sorotipos antigenicamente distintos (DENV-1, -2, -3 e -4). A infecção por qualquer um dos sorotipos cursa de forma assintomática ou com quadro clínico que varia desde uma febre indiferenciada e autolimitada, passando pela febre clássica da dengue (FD) até quadros graves de febre hemorrágica da dengue (DHF). O diagnóstico clínico é difícil de ser realizado principalmente na faixa etária pediátrica em que os sintomas são muito similares aos de outras infecções febris agudas, ficando a cargo do laboratório o diagnóstico confirmatório. Este estudo descritivo do tipo série de casos teve como objetivo analisar as características clínicas e laboratoriais da dengue em pacientes pediátricos. A população de estudo foi constituída por 110 crianças com idade média de 9,3 ± 3,7 anos recrutadas em uma unidade de saúde no município de Ribeirão Preto, São Paulo. Amostras de sangue, saliva e urina foram coletadas das crianças 1-14 dias após o início do quadro clínico. Os sinais e sintomas mais frequentes foram a febre (105/110, 95%), seguida de cefaleia (66/110, 60%), mialgia (49/110, 45%), vômitos (27/110, 25%) e exantema (16/110, 15%). A infecção pelo vírus da dengue foi confirmada laboratorialmente em 96 crianças, as quais apresentavam sinais e sintomas compatíveis com a classificação de caso suspeito de dengue de acordo com os critérios da Organização Mundial da Saúde. A análise clínica inicial falhou em classificar como caso suspeito de dengue 46% das crianças. A carga viral foi significativamente maior no soro quando comparado àquela observada em saliva e urina, mas ainda assim estas amostras podem ser utilizadas como alternativa para diagnóstico da doença. O sequenciamento nucleotídico da região codificadora da proteína NS5 mostrou a circulação de DENV-3, principalmente durante o ano de 2010, e de DENV-1 e DENV-2, predominantemente no ano de 2011 na população do estudo. Houve predomínio de infecções primárias com quadro clínico leve sem complicações. / Dengue is an infectious disease transmitted by the biting of mosquitoes of Aedes genus. Dengue virus (DENV), belonging to the Flavivirus genus, Flaviviridae family, is an important public health problem worldwide. Four antigenically distinct viruses are recognized (DENV-1, -2, -3, e -4). Infection with any of the virus serotypes causes a spectrum of clinical manifestations ranging from inapparent or mid viral syndrome to classic dengue fever (DF) and severe hemorrhagic disease (DHF). The clinical diagnosis of dengue is difficult, especially in children because the symptoms are very similar to those observed in other febrile illness; thus, the confirmatory diagnosis is carried out by laboratory tests. This descriptive study aimed to analyze the clinical and laboratory features of dengue in pediatric patients. The study population consisted of 110 children; mean age 9.3 ± 3.7 years enrolled in a health center in Ribeirao Preto, Sao Paulo. Samples of blood, saliva and urine were collected from children 1-14 days after the onset of symptoms. The most common signs and symptoms were fever (105/110, 95%), followed by headache (66/110, 60%), myalgia (49/110, 45%), vomiting (27/110, 25%) and rash (16/110, 15%). Dengue virus infection was confirmed by laboratory tests in 96 children whom presented signs and symptoms compatible with the suspected dengue case classification in accordance with the criteria of the World Health Organization. The initial clinical examination failed to classify as a suspected dengue case 46% of children. The viral load in the serum was significantly higher when compared to saliva and urine. Even though, saliva and urine might be used as alternative samples for the diagnosis of the disease. The nucleotide sequencing of a partial region of NS5 protein gene showed the circulation of DENV-3, especially during the year 2010, and DENV-1 and DENV-2, predominantly in the year 2011 in the study population. There was a predominance of primary instead of secondary infections, all of them with self-limiting dengue fever.

Dengue é uma doença viral que atinge vários países, infectando milhares de pessoas anualmente. Sua transmissão ocorre pelo repasto sanguíneo feito pelas fêmeas dos mosquitos Aedes sp. infectadas e seus sintomas tem um amplo espectro de variação, que vão desde quadros assintomáticos até quadros graves com hipovolemia, podendo levar a óbito. A necessidade de adaptação do vírus a sistemas tão distintos (inseto e mamífero) restringe o espectro de variabilidade que o mesmo pode adquirir, permitindo que o vírus se adapte a ambos os hospedeiros com eficiência replicativa semelhante. Estudos com outros flavivírus já mostraram que a aquisição de variabilidade ocorre de maneiras distintas no hospedeiro mamífero e no inseto vetor, permitindo ao vírus máxima adaptação nas células infectadas. Levando em consideração estes estudos, este trabalho investigou a adaptação de duas cepas do vírus da dengue, a ACS-46, não neurovirulenta para camundongos adultos e a cepa JHA, neurovirulenta para camundongos adultos. O estudo foi feito utilizando cultura de células de mosquito (C6/36), cultura de células de mamífero (HepG2) e infecção em cérebro de camundongos neonatos. Utilizando sequenciamento de nova geração, foi possível verificar as mutações adquiridas ao longo de passagens em cada sistema de cultura. Foram realizadas 20 passagens seriadas em célula C6/36 e seis passagens alternadas entre C6/36 e HepG2. Os vírus obtidos na décima sexta e vigésima passagens do modelo seriado e na quarta e sexta passagens do modelo alternado foram completamente sequenciados utilizando a plataforma de sequenciamento em larga escala Ion Torrent. A análise das sequências revelou duas populações virais claramente distintas, já observadas a partir de décima sexta passagem, identificadas através da deleção de dois códons no sítio de glicosilação do domínio I da proteína de Envelope. Essa deleção induziu aumento na fusão do vírus à célula de mosquito, visto que a partir dessa passagem houve aumento no efeito citopático do vírus e na carga viral produzida durante infecções em células de mosquito. Contudo, essa mutação teve um perfil deletério em células humanas, fato deduzido pelo total desaparecimento da população com a deleção durante as passagens alternadas. Além desta deleção, foram detectadas sete mutações não sinônimas em região de proteínas não estruturais com porcentagens muito próximas, sugerindo que as mesmas fazem parte de uma mesma população. A cepa JHA teve seu caráter neurovirulento perdido após 29 passagens em C6/36, porém rapidamente recuperado após uma única passagem em cérebro de camundongo neonato. O sequenciamento dos vírus dessas passagens mostrou certa variabilidade em sítios distintos entre as variantes do vírus parental, vírus não neurovirulento e vírus neurovirulento passado em camundongo. Esse resultado indicou que aparentemente, não há sítios específicos determinantes de neurovirulência em DENV2, ao menos no nosso modelo, mas sim, um conjunto de mutações podem levar ao fenótipo neurovirulento, a depender das condições as quais o vírus é exposto. / Dengue is a viral disease that affects several countries, infecting thousands of people annually. It is transmitted by blood meal of the female Aedes sp mosquitoes infected. Symptoms have a wide range of variation, ranging from asymptomatic to severe symptoms, including hypovolemia and death. The need for adaptation in such distinct systems (insect and mammalian) restricts the variability that the viruses can acquire, allowing them to adapt to both hosts with similar replicative efficiency. Studies performed with other flaviviruses have shown that acquisition of variability occurs differently between the mammalian host and the insect vector, allowing the virus to adaptat in both systems. Therefore, this study investigated the adaptation of two strains of dengue virus, the ACS-46, not neurovirulent for adult mice and JHA strain, which is neurovirulent for adult mice. The study was done using mosquito cells culture (C6/36), mammalian cells (HepG2) and in vivo infection in newborn mouse brain. Using next-generation sequencing, we analyzed the mutations acquired over passages in each culture system. Twenty serial passages were conducted in C6/36 cells and six alternate passages between C6/36 and HepG2. Viruses obtained in the sixteenth and twenty passages from the serial experiment and the fourth and sixth passages from alternate model were completely sequenced using the next generation sequencing platform Ion Torrent. Sequence analysis revealed two clearly distinct viral populations observed from the sixteenth passage identified by deletion of two codons in the glycosylation site in the envelope protein domain I. This deletion led to increased fusion of the virus to mosquito cell, since the cytopathic effect increased from this passage to next as well as the viral load. However, this mutation had a deleterious profile in human cells since the mutated population was vanished during the alternate passages. It was also identified seven non-synonymous mutations in the region of nonstructural proteins with very similar percentages, suggesting that they belong to the same population. JHA strain lost the neurovirulent characteristic after 29 passages in C6/36, but quickly recovered it after a single passage in newborn mouse brain. The sequencing of the virus of these passages showed some variability in different sites among the parental virus, not neurovirulent viruses and neurovirulent virus after the single passage in mice. These data indicated that apparently there is no specific determinants of neurovirulence in DENV2, at least in our model, but rather a set of mutations can lead to neurovirulent phenotype, depending on the conditions in which the virus is exposed.