O presente estudo comparou a PCR com o exame microscópico (EM) na detecção do T. cruzi em amostras do trato digestório do T. infestans, do 1º ao 5º, 10º, 15º, 20º, 25º, 30º e 60º dia, após repasto sanguíneo em camundongos Balb/C infectados pelo T. cruzi, divididos em grupos de alta e baixa parasitemia. Concluiu-se que a PCR apresentou vantagens em termos diagnósticos para a doença de Chagas quando comparada ao EM, em 10 dos 11 tempos estudados no grupo de alta parasitemia, e em todos os tempos na baixa parasitemia. O diagnóstico precoce na baixa parasitemia é de relevância clínica já que poderá influenciar o prognóstico dos pacientes imunossuprimidos com reativação da doença de Chagas / Detection of T. cruzi in T. infestans digestive tract samples was compared by PCR and microscopic examination (ME) on the 1st to 5th, 10th, 15th, 20th, 25th, 30th and 60th day after feeding in Balb/C mice infected by T. cruzi, and divided in two groups: with high parasitemia and with low parasitemia. PCR presented vantages to the Chagas' disease diagnosis when compared with EM in 10 of 11 times in high parasitemia, and in all times in low parasitemia. Earlier diagnosis in low parasitemia model is of clinical relevance since may influence prognosis of immunosupressed patients in reactivation of Chagas' disease

O presente estudo comparou a PCR com o exame microscópico (EM) na detecção do T. cruzi em amostras do trato digestório do T. infestans, do 1º ao 5º, 10º, 15º, 20º, 25º, 30º e 60º dia, após repasto sanguíneo em camundongos Balb/C infectados pelo T. cruzi, divididos em grupos de alta e baixa parasitemia. Concluiu-se que a PCR apresentou vantagens em termos diagnósticos para a doença de Chagas quando comparada ao EM, em 10 dos 11 tempos estudados no grupo de alta parasitemia, e em todos os tempos na baixa parasitemia. O diagnóstico precoce na baixa parasitemia é de relevância clínica já que poderá influenciar o prognóstico dos pacientes imunossuprimidos com reativação da doença de Chagas / Detection of T. cruzi in T. infestans digestive tract samples was compared by PCR and microscopic examination (ME) on the 1st to 5th, 10th, 15th, 20th, 25th, 30th and 60th day after feeding in Balb/C mice infected by T. cruzi, and divided in two groups: with high parasitemia and with low parasitemia. PCR presented vantages to the Chagas' disease diagnosis when compared with EM in 10 of 11 times in high parasitemia, and in all times in low parasitemia. Earlier diagnosis in low parasitemia model is of clinical relevance since may influence prognosis of immunosupressed patients in reactivation of Chagas' disease

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-06-04T13:19:24Z No. of bitstreams: 1 luciana_g_portugal_ioc_bp_0019_2009.pdf: 1548127 bytes, checksum: 8942d79125d2358e00f75100870c51fe (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-04T13:19:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 luciana_g_portugal_ioc_bp_0019_2009.pdf: 1548127 bytes, checksum: 8942d79125d2358e00f75100870c51fe (MD5) Previous issue date: 2009 / Instituto Oswaldo Cruz, CNPq, PAPES III / Fundação Oswaldo Cruz. Escola Nacional de Saúde Pública. Rio de janeiro, RJ, Brasil / Este trabalho determinou o perfil de infecção natural, ao longo do tempo, do Trypanosoma cruzi nos marsupiais Didelphis aurita e Philander frenatus e nos roedores Nectomys squamipes, Akodon cursor e Oligoryzomys nigripes no Município de Sumidouro, RJ. O diagnóstico parasitológico, obtido através de hemocultivos, e as prevalências sorológicas, obtidas através de Imunoflorescência Indireta, foram analisadas e correlacionadas com os dados populacionais, biológicos e de habitat dos hospedeiros, e com as variáveis ambientais e de composição de fauna da área. As dinâmicas populacionais dos pequenos mamíferos seguiram os padrões observados para as espécies neotropicais, estando relacionadas às suas estratégias reprodutivas, sendo estacional para os marsupiais e oportunista para os roedores. Apesar da degradação ambiental, os marsupiais e roedores apresentaram preferências por microhabitats específicos dentro da área de captura. Nenhuma amostra proveniente dos roedores foi positiva no hemocultivo, nem na análise sorológica. Na análise parasitológica dos marsupiais, 5% dos hemocultivos foram positivos, enquanto que na sorologia, a prevalência variou de 20% a 60% para D. aurita e 0% e 67,5% para P. frenatus. Através das taxas de infecção, não foram encontradas relações entre o parasitismo e a riqueza ou diversidade de mamíferos da área de estudo. Não houve diferença entre o habitat de animais infectados e não infectados. Não houve diferença entre machos e fêmeas infectados. O parasitismo por T. cruzi não afetou a biologia dos seus hospedeiros nem suas dinâmicas populacionais neste cenário de transmissão do parasito. Assim, foi verificada a existência de um ciclo de transmissão de T. cruzi na área, com ausência de participação dos roedores. Os marsupiais atuaram como hospedeiros mantenedores nas duas áreas de estudo, devido às evidências sorológicas e as baixas parasitemias. É possível que outras espécies de mamíferos estejam atuando na área como hospedeiros mantenedores ou amplificadores da infecção, como o furão Galictis cf. Cuja, que foi a primeira espécies capturada com infecção natural por T. cruzi na área. Concluímos que o ciclo de transmissão do T. cruzi nesta região apresentou um perfil de parasitemia sub-patente nas espécies marsupiais, caracterizada apenas pelo diagnóstico sorológico, e uma continuidade de transmissão ao longo de todo o ano nas duas áreas, observada através das conversões sorológicas. / The aim of this study was to understand the natural infection dynamic by Trypanosoma cruzi in the marsupials Didelphis aurita and Philander frenatus and the rodents Nectomys squamipes, Akodon cursor and Oligorysomys nigripes in order to along time, in Sumidouro Municipality, Rio de Janeiro State. The parasitological diagnose obtained from Haemoculture and the Serological prevalence obtained from Immunofluorescense assay were analyzed and correlated with the population dynamics of the hosts, their habitat and biological factors, and also with environment variables and species composition of the study area. The population dynamics of the small mammals followed the patterns observed for Neotropical species, showing a relation with the reproductive strategies, which was seasonal for the marsupials and opportunist for the rodents. Despite of the environment degradation, the marsupials and rodents presented preference for specifics microhabitats in the study area. No rodent was positive neither in the haemoculture nor in serology for T. cruzi infection. In the parasitological analysis of the marsupials, 5% of the haemocultures were positive while the prevalence using serology ranged from 20% to 60% for D. aurita and from 0% to 67,5% for P. frenatus. No relation was found between parasitism and richness and diversity of mammals’ species. Marsupials’ habitats were more related to triatomines’ habitat than the rodents’ habitat. No difference was observed between males and females infected animals. The parasitism of T. cruzi did not affect the biology of the hosts, neither their population dynamics in this scenario of transmission. Thus, a transmission cycle of T. cruzi was confirmed in the study area, and the rodents’ species were not participating in the transmission. The marsupials D.aurita and P. frenatus acted in this scenario as maintaining hosts in both study areas, due to the serological evidences and low parasitemia. It is possible that other mammal species are participating in this cycle as maintaining or amplifier hosts, for example the ferret Galictis cf. cuja. In conclusion, the profile of the transmission cycle of T. cruzi in this area was a sub-patent parasitemia in the marsupials, evidenced only by serologic results, and there is continuity in the parasite transmission throughout the year in the two study areas, observed in the serologic conversions.

Made available in DSpace on 2016-06-17T14:14:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1914 bytes, checksum: 7d48279ffeed55da8dfe2f8e81f3b81f (MD5) Tese_Fred_Luciano_Neves_Santos.pdf: 7174621 bytes, checksum: af4e9021f0c8974198df6ec268ccfaf9 (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-05T22:07:11Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Tese_Fred_Luciano_Neves_Santos.pdf.txt: 436440 bytes, checksum: 1d22503c32c1f332f780c4197a546123 (MD5) Tese_Fred_Luciano_Neves_Santos.pdf: 7174621 bytes, checksum: af4e9021f0c8974198df6ec268ccfaf9 (MD5) license.txt: 1914 bytes, checksum: 7d48279ffeed55da8dfe2f8e81f3b81f (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / O diagnóstico da doença de Chagas crônica (DCC) baseia-se em metodologias que usam em sua fase sólida antígenos brutos, semipurificados ou recombinantes, podendo resultar em baixa sensibilidade ou reação cruzada. Uma forma para resolver este problema é o uso de quimeras formadas por epítopos conservados e repetitivos de diferentes estruturas parasitárias em uma única molécula. O nosso objetivo foi caracterizar e avaliar o uso de quimeras em imunoensaios para o diagnóstico da DCC. As quimeras, IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4 foram purificadas por meio de cromatografia e sua pureza avaliada por SDSPAGE. Ensaios de dicroísmo circular (DC) e espalhamento dinâmico da luz (EDL) foram usados para avaliação do raio hidrodinâmico das quimeras, avaliação de sua estabilidade e escolha do sistema tampão que oferecesse o menor estado de agregação molecular. Ensaios sorológicos para detecção de anticorpos anti-Trypanosoma cruzi através de ELISA foram realizados utilizando um painel de 857 amostras positivas para a DCC e 689 negativas. Para avaliação de reação cruzada foram usadas 1079 amostras de diversas doenças endêmicas no país. A purificação foi eficiente uma vez que o SDS-PAGE indicou ausência de degradação das quimeras. As análises de DC e EDL mostraram que as quatro quimeras apresentaram menor tendência de agregação em tampão carbonato pH 9,6, sendo, assim, este o sistema para a sensibilização das placas. Os ensaios sorológicos revelaram valores elevados de sensibilidade (Sen) e especificidade (Esp) para a molécula IBMP-8.4 (Sen-99,3%; Esp- 100%). O desempenho para as demais moléculas foi satisfatório, ficando os valores de Sen e Esp acima de 94%. As moléculas IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4 apresentaram respectivamente 0,46%, 0,85%, 0,46% e 0,37% de reação cruzada. Os resultados apontam que as quimeras atingiram os critérios de proficiência do Ministério da Saúde podendo, dessa forma, ser utilizados em ensaios diagnósticos para a DCC. Chronic Chagas disease (CCD) diagnosis is based on serological methods employing crude, semipurified or recombinant antigens, which eventually may result in low sensitivity or crossreactivity. An alternative method for solving this problem is the use of chimeric molecules composed by conserved and repetitive epitopes of distinct parasite structures. Our objective was to evaluate the use of chimeras in immunoassays for the diagnosis of CCD. The chimeras IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 and IBMP-8.4 were purified by chromatography and their purity assessed by SDS-PAGE. Circular dichroism (CD) and dynamic light scattering (DLS) were used to assess the hydrodynamic radius of the chimeras, to evaluate their stability and to select the buffering system that offers the lowest state of molecular aggregation. Serological tests for detection of anti-Trypanosoma cruzi were performed by ELISA using a panel of 857 positive and 689 negative serum samples for CCD. Cross-reactivity was assessed by using 1079 serum samples from patients with unrelated diseases. The purification was efficient since SDS-PAGE indicated the absence of degradation of chimeric proteins. Analyses of CD and DLS showed that the four chimeras had low aggregation tendency in carbonate buffer, pH 9.6. Serological testing showed high values of sensitivity (Sen) and specificity (Spe) for IBMP-8.4 (Sen-99.3%; Spe-100%). The performance of other molecules was satisfactory, being the Sen and Spe values above 94%. Cross-reaction was observed in 0.46%, 0.85%, 0.46% and 0.37% of the samples tested against IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 and IBMP- 8.4, respectively. The results indicate that the chimeras reached the Brazilian Ministry of Health proficiency criteria and may thus be used in diagnostic assays for CCD.

O objetivo deste estudo foi avaliar a contribuição de linfoproliferação (1 parâmetro) em associação a provas sorológicas de alto desempenho (4 parâmetros), estudo epidemiológico (1) e parasitológico (1) em indivíduos com sorologia convencional inconclusiva para a doença de Chagas. Mostramos que o diagnóstico de doença de Chagas é provável quando 3 ou mais desses parâmetros são positivos em 7 (15/73). A combinação: TESA-blot e linfoproliferação positivos revelou-se útil diante de antecedentes epidemiológicos positivos / This study aims to evaluate the contribution of lymphoproliferation (1 parameter) in association with high performance serological tests (4), epidemiological data (1) and parasitological tests (1) for Chagas disease in patients with inconclusive conventional serological tests. We showed that this diagnosis is probable in individuals presenting > three positive of these 7 parameters (15 of 73 individuals). The combination of TESA-blot, lymphoproliferation was useful when epidemiological data were positive

O objetivo deste estudo foi avaliar a contribuição de linfoproliferação (1 parâmetro) em associação a provas sorológicas de alto desempenho (4 parâmetros), estudo epidemiológico (1) e parasitológico (1) em indivíduos com sorologia convencional inconclusiva para a doença de Chagas. Mostramos que o diagnóstico de doença de Chagas é provável quando 3 ou mais desses parâmetros são positivos em 7 (15/73). A combinação: TESA-blot e linfoproliferação positivos revelou-se útil diante de antecedentes epidemiológicos positivos / This study aims to evaluate the contribution of lymphoproliferation (1 parameter) in association with high performance serological tests (4), epidemiological data (1) and parasitological tests (1) for Chagas disease in patients with inconclusive conventional serological tests. We showed that this diagnosis is probable in individuals presenting > three positive of these 7 parameters (15 of 73 individuals). The combination of TESA-blot, lymphoproliferation was useful when epidemiological data were positive