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Estudo da depuração pulmonar pulmonar do radioaerossol de Dietilenotriaminopentacético (DTPA) em indivíduos saudáveis submetidos à pressão positiva contínua nas vias aéreas

Paiva, Dulciane Nunes January 2005 (has links)
Resumo não disponível
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Análise de vacinas contra o sorotipo 3 do vírus da doença de marek por PCR em tempo real e cultivo celular.

Rodenbusch, Carla Rosane January 2006 (has links)
A doença de Marek (MD), causada por um alfaherpesvírus, é uma enfermidade linfoproliferativa que acomete principalmente galinhas. Como não existe tratamento, a melhor forma de prevenção e controle da MD é através do uso de vacinas atenuadas, que vêm sendo usadas desde 1970. Este trabalho descreve a análise de vacinas vivas congeladas contra o sorotipo 3 do vírus da doença de Marek (herpesvírus de peru – HVT) por PCR em tempo real (qPCR) e por cultivo em células de embrião de galinha. Foram avaliadas três vacinas (cepa FC126) provenientes de distintos fabricantes. As análises da homogeneidade inter e intra-lote apresentaram, respectivamente, média ± desvio padrão de 2,6 ± 1,7%, 2,1 ± 1,1% e 1,2 ± 0,1% e média ± desvio padrão de 1,5 ± 0,1%, 1,2 ± 0,8% e 1,0 ± 0,3% para A, B e C, respectivamente. A qPCR subestimou os títulos das vacinas concentradas 4x e superestimou os títulos das vacinas diluídas 8x, enquanto o cultivo celular superestimou os títulos das vacinas concentradas. As vacinas apresentaram quantidades diferentes de células/dose e unidade formadoras de placa/dose. Conseqüentemente, a relação PFU/célula também foi diferente, o que demonstra a necessidade de construção de curvas diferentes, para cada fabricante, para a titulação por qPCR.
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Caracterização fenotípica e genotípica de isolados de Ornithobacterium rhinotracheale do Brasil.

Macagnan, Marisa January 2006 (has links)
Ornithobacterium rhinotracheale é uma bactéria associada com doença respiratória, decréscimo no crescimento, condenação de carcaças e mortalidade em galinhas e perus. Esta bactéria tem sido isolada em vários países e, recentemente, foi isolada no Brasil pelo nosso grupo que também estabeleceu um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para a sua detecção e identificação e determinou a prevalência de anticorpos contra esta bactéria em plantéis comerciais de frangos e de matrizes da Região Sul do Brasil. O presente trabalho teve o objetivo de caracterizar isolados de O. rhinotracheale através de sorotipificação, resistência a antimicrobianos e single-enzyme amplified fragment length polymorphism (SAFLP). Vinte e sete isolados foram compatíveis com esta espécie através de isolamento em ágar sangue com gentamicina, coloração de Gram, teste de aglutinação em lâmina e reação em cadeia da polimerase. Dezenove isolados foram classificados como sorotipo A, seis não puderam ser sorotipificados com o painel de soros existentes e dois pertenceram ao sorotipo C. Vinte e cinco isolados foram sensíveis à norfloxacina, amoxicilina, doxiciclina, lincomicina e cefalotina, dois isolados foram resistentes à neomicina e 18 foram resistentes à sulfametoxazol/trimetoprima. Na análise de SAFLP, 22 isolados apresentaram padrão idêntico e os cinco isolados restantes foram classificados em cinco padrões distintos. Os resultados da sorotipificação indicaram que o sorotipo A de O. rhinotracheale é predominante em criações comerciais no Brasil. Os isolados brasileiros foram sensíveis à maioria dos antimicrobianos testados. O poder discriminatório do teste de suscetibilidade a antimicrobianos foi maior do que a sorotipificação e SAFLP, porém o método de SAFLP gerou um maior número de padrões, sugerindo que possa ser utilizado como ferramenta em estudos epidemiológicos.
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Seleção artificial para resistência à murcha bacteriana

Medeiros, Cláudio Vidal de January 2005 (has links)
O desenvolvimento de materiais tipo Burley resistente a Murcha Bacteriana é de suma importância para a fumicultura brasileira. Em fumo tipo Burley não existem variedades comerciais com boa adaptação resistentes à R. solanacearum. O objetivo desse trabalho foi determinar o efeito da seleção artificial para resistência à murcha bacteriana na população Burley x Virgínia em diferentes gerações segregantes. Este estudo foi realizado em um infectário de R. solanacearum, localizado em Santa Cruz do Sul, RS. Foi realizado cruzamento entre um cultivar tipo Burley moderadamente resistente (BY 26) e um material tipo Virgínia resistente à murcha (Oxford 207). Foram comparados quatro gerações F1, F3, F5, F7, pai moderadamente resistente (BY 26), pai resistente (OX 207) e uma testemunha suscetível (01528). O delineamento experimental utilizado foi de blocos ao acaso, com quatro repetições e 10 plantas em cada parcela, para uniformizar e aumentar o nível de severidade da moléstia, as plantas foram inoculadas através da deposição de 20 mL de uma suspensão (108 UFC/mL) de R. solanacearum. Para a murcha bacteriana não houve diferença significativa entre as médias das quatro gerações e nem destas com o genitor resistente, já que provavelmente a seleção efetuada em todas as gerações foi suficiente para manter os níveis de resistência observados na geração F1. Observou-se em F7 que várias linhas já estavam fixas com níveis de resistência à murcha semelhante ao genitor resistente. Portanto, os resultados finais mostraram que a seleção artificial foi eficiente para selecionar a resistência à murcha bacteriana, e que é possível transferir resistência a R. solanacearum de fumo Virgínia para fumo tipo Burley – mantendo as características desejadas de cor e tipo do fumo Burley com a resistência similar a do pai resistente.
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Doença infecciosa bursal: estudo sobre amostras vacinais e de campo, imunidade materna e desafio com amostra muito virulenta do vírus.

Moraes, Hamilton Luiz de Souza January 2004 (has links)
As aves foram separadas em quatro grupos, dois vacinados e dois não vacinados no 1º dia de vida. As aves foram desafiadas no 1º,4º,7º,10º,13º,16º,19º e 22º dias de vida. A cada dia de desafio eram coletados e medidos, antes e depois, os seguintes itens do grupo: peso relativo da bolsa de Fabrício, diâmetro da bolsa, bolsa de Fabrício para exame histológico e soro para medir os anticorpos contra a DIB, através de Elisa e avaliação clínica da DIB. Os resultados mostraram uma queda de anticorpos sem diferença significativa entre aves vacinadas e não vacinadas. Analisando os diferentes resultados, foi estabelecido que um título de Elisa (log10) de 3,4, foi o ponto de corte entre aves saudáveis e aves doentes. Foram construídas equações de regressão, para o estabelecimento do melhor dia para a vacinação ou do título de Elisa (log10), que as aves podem ter numa determinada idade. Assim sendo, os pintos da Empresa A deveriam receber vacina contra a DIB a partir do 6º - 7º dia, e os da Empresa B deveriam receber a vacina entre o 11º-12º dia de idade. Com os resultados obtidos neste experimento fica claro que as aves não devem ser vacinadas no 1º dia de vida, que o esquema de vacinação das reprodutoras ocasiona diferenças na proteção da progênie e que não se deve aplicar o mesmo esquema de vacinação indiscriminadamente para todos os lotes de frangos.
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Controle biológico do mofo cinzento (Botrytis cinerea) com Clonostachys rosea em cultivos experimental e comercial de Fúcsia / Biological control of gray mold (Botrytis cinerea) with Clonostachys rosea in experimental and commercial growth of fuchsia

Silvera-Pérez, Ana Elisa January 2006 (has links)
O cultivo de mudas de fúcsia (Fuchsia speciosa) pode sofrer perdas por Mofo Cinzento (MC), causado por Botrytis cinerea. Relatos indicam que Clonostachys rosea é um fungo eficaz no controle do MC em diferentes hospedeiros. Esta pesquisa objetivou definir a eficácia do congelamento como método alternativo ao meio de cultivo com paraquat para a detecção de infecções latentes de B. cinerea em tecidos de fúcsia; comparar a eficacia de três estirpes de C. rosea no controle do MC em cultivo experimental de fúcsia; comparar o desempenho de C. rosea aos fungicidas na incidência/severidade do MC, na fotossíntese e na produção de mudas no cultivo comercial. Nos resultados verificou-se que o tratamento de folhas destacadas com temperatura -20 °C por 15 e 20 min mostrou efeito semelhante à incubação em meio ágarparaquat na detecção de B. cinerea. No experimento conduzido em 2004 e 2005 em estufa em Porto Alegre, RS, a eficiência das estirpes GFO4, G8 e GSAL de C. rosea no controle do MC foi comparada avaliando-se folhas de fúcsia destacadas. As três estirpes do antagonista não diferiram na redução da incidência do MC. No experimento conduzido nestes dois anos, em estufa com cultivo comercial de mudas em Vacaria, RS, as plantas foram aspergidas: (1) semanalmente com água + espalhante adesivo (0,01%); (2) aplicação seqüencial de fungicidas (clorotalonil, folpet, oxicloreto de cobre, mancozeb, iprodione e thiram); (3) suspensão de conídios da estirpe GFO4, 39 vezes a partir dos 26 dias do transplantio; e (4) suspensão de GFO4, 29 vezes a partir dos 61 dias do transplantio. C. rosea reduziu a incidência/severidade do MC a níveis similares das plantas tratadas com fungicida nos dois anos, sem afetar a fotossíntese ou o número de mudas. As aplicações com C. rosea podem ser iniciadas no segundo mês pós o transplantio. / Gray Mold (GM), caused by Botrytis cinerea, may induce heavy losses to the production of fuchsia cuttings. The effectiveness of Clonostachys rosea in the control of GM on several plants is well-known. This research aimed to define the efficiency of leaf freezing for the detection of latent infections of B. cinerea; to compare three strains of C. rosea in the control of GM on fuchsia experimental growth; to compare C. rosea to usually applied fungicides on a commercial growth on the incidence and severity of GM, the photosynthesis and the production of cuttings. In a preliminary study, the method of detecting B. cinerea by submitting detached leaves to -20 °C for 15 and 20 min showed similar results to the incubation on agar-paraquat medium, and was adopted to evaluate the amount of GM. In a greenhouse experiment in 2004 and 2005, Porto Alegre, RS, the efficiency of three strains of C. rosea was compared using detached leaves of fuchsia. The GFO4, G8 and GSAL strains showed the same performance in preventing and reducing the incidence of GM. In another experiment conducted in these two years in a commercial greenhouse, Vacaria, RS, plants of fuchsia var. 022, from cuttings, were sprayed with: (1) water + wetting agent, 0.01% (control); (2) fungicides (chlorotalonil, folpet, copper, mancozeb, iprodione or thiram), applied weekly, alternating the active ingredients; (3) 39 applications 26 days after transplanting, conidial suspension of strain GFO4 of C. rosea, and (4) 29 application after 61 days of the transplanting. Conidial suspension of GFO4 of C. rosea reduced the incidence and severity of GM to similar levels of the fungicide-treated plants in both years, without diference in the photosynthesis and numbers of cuttings. The disease amount did not change when the treatment with C. rosea started two months after transplanting.
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Associação de Trichoderma sp. e fungicidas no controle de Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli / Association of Trichoderma sp. and fungicides in the control of Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli

Pandolfo, Juliana Dalmagro January 2007 (has links)
Avaliou-se, por testes in vitro, a fungitoxicidade dos produtos Cabrio Top, Captan SC, Comet, Derosal 500, Derosal Plus, Frowncide 200 SC, Nativo, Opera, Stratego e Vitavax-Thiram 200 SC em isolados de Trichoderma sp. (T1R, T2R, T4R, T6R, T7R, TSV e PCT). Os fungicidas foram adicionados em meio de cultura BDA e em discos de papel filtro na dosagem recomendada pelo fabricante, metade e dobro desta dose. Os tratamentos foram mantidos a 23 ± 1ºC e fotoperíodo de 14 horas. Após sete dias de incubação foi medido o diâmetro da colônia dos fungos na presença dos fungicidas e o halo de inibição formado em torno do disco de papel filtro. Os fungicidas Cabrio Top, Captan SC, Comet, Stratego e Vitavax-Thiram 200 SC não se mostraram tóxicos aos isolados. O isolado T4R foi o menos sensível aos fungicidas e os isolado T6R e PCT foram os mais sensíveis. Avaliou-se também, a fungitoxicidade in vitro destes mesmos defensivos agrícolas a Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli, agente causal da murcha do feijoeiro e o potencial antagônico dos isolados de Trichoderma sp. ao fitopatógeno. Os fungicidas, Derosal 500, Derosal Plus, Nativo, Opera e Vitavax-Thiram 200 SC foram efetivos no controle de F. oxysporum f.sp. phaseoli in vitro. Experimentos in vitro, testando o potencial antagônico dos isolados T4R, TSV e PCT de Trichoderma sp. ao fitopatógeno mostraram que os isolados são efetivos no controle de F. oxysporum f.sp. phaseoli quando inoculados 48 horas antes e simultaneamente com o fitopatógeno. Em experimento de casa de vegetação, sementes de feijão foram tratadas com os fungicidas Vitavax-Thiram 200 SC e Derosal Plus, com os isolados T4R, TSV e PCT e com o fitopatógeno F. oxysporum f. sp. phaseoli. Somente o isolado TSV foi efetivo no controle do fitopatógeno. Todos os isolados de Trichoderma sp. foram recuperados de raízes de plantas cujas sementes foram tratadas com fungicidas. / The fungitoxicity of the products Cabrio Top, Captan SC, Comet, Derosal 500, Derosal Plus, Frowncide 200 SC, Nativo, Opera, Stratego and Vitavax-Thiram200 SC was evaluated through in vitro tests in strains of Trichoderma sp. (T1R, T2R, T4R, T6R, T7R, TSV and PCT). The fungicides were added in a PDA culture medium and on discs of filter paper following manufactures recommended dosages, half and the double of this dose. The treatments were maintained at 23±1ºC and at a photophase of 14 hours. After 7 days of incubation the diameter of the fungus colony in the presence of fungicides and the halo of inhibition formed around the disc of paper filter were measured. The fungicides Cabrio Top, Captan SC, Comet, Stratego and Vitavax-Thiram 200 SC were not toxic towards the isolates. The isolate T4R was less sensitive towards the fungicide while the isolates T6R and PCT were the most sensitive ones. The fungitoxicity in vitro of these same agricultural defensives towards Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli (the casual agent of Fusarium Wilt and the antagonistic potential of the isolates of Trichoderma sp. towards the pathogen) was evaluated. The fungicides Derosal 500, Derosal Plus, Nativo, Opera and Vitavax-Thiram 200 SC were effective in the control of F. oxysporum f.sp. phaseoli in vitro. Experiments in vitro, testing the antagonistic potential of the isolates T4R, TSV and PCT of Trichoderma sp. towards the pathogen have shown that the isolates are effective in the control of F. oxysporum f.sp. phaseoli when inoculated before 48 hour period and simultaneanously with the pathogen. In experiment in greenhouse bean seeds were treated with the fungicides Derosal Plus and Vitavax-Thiram200 SC with the isolates T4R, TSV and PCT and with the pathogen Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli. Only the isolated TSV was effective in the control of the pathogen. All isolated of Trichoderma sp. Tested they had been recouped of roots of plants whose seeds had been with fungicides.
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Incidência de cancro cítrico (Xanthomonas axonopodis pv. citri) em pomares de laranjeiras 'Valencia' com poda sanitária e pulverizações com produtos cúpricos, abamectin e calda sulfocálcica / Incidence of citrus canker (Xanthomonas axonopodis pv. Citri) in 'Valencia' groves after sanitary prunings, copper, abamectin and lime sulfur sprays

Theisen, Sergiomar January 2007 (has links)
O cancro cítrico (Xanthomonas axonopodis pv. citri Vauterin et al.) está presente em praticamente todos os continentes, causando prejuízos, por vezes expressivos à produção de citros. O estudo de medidas de controle assume grande importância, principalmente em áreas onde a doença atingiu o nível endêmico. O objetivo deste trabalho foi estudar formas alternativas de controle do cancro cítrico em pomar comercial de laranjeiras ‘Valência’ (Citrus sinensis L. Osbeck) enxertadas sobre Poncirus trifoliata Raf., situado no município de Butiá, RS, onde a doença é endêmica. Foram instalados dois experimentos, no primeiro, foi testada a utilização de poda sanitária, de tecidos infectados, em combinação com pulverizações com três produtos cúpricos, cada qual em concentrações de 0,1 e 0,2% de cobre metálico, realizadas duas semanas após o início de um forte fluxo de brotação. No segundo experimento, foram testadas pulverizações com inseticida abamectin para controle do minador-doscitros (Phyllocnistis citrella Stainton) e pulverizações com calda sulfocálcica a 5 e/ou 12%, no outono (maio) e no início do segundo forte fluxo de brotação (dezembro, início do verão), respectivamente. Os resultados do primeiro experimento indicam que: a poda sanitária exerce maior controle do cancro cítrico em anos de poucas chuvas no período de crescimento das plantas; os produtos cúpricos, nas concentrações de 0,1 e 0,2% de cobre metálico nas formulações calda bordalesa, oxicloreto e hidróxido de cobre, pulverizados duas semanas após o início de um forte fluxo de brotação, reduzem a incidência de cancro cítrico; as pulverizações cúpricas aumentam a produção de frutos sadios, sendo economicamente vantajosas. No segundo experimento, verificou-se que as pulverizações com 5 e/ou 12% de calda sulfocálcica, não diminuem a incidência de cancro cítrico e que a aplicação de abamectin para controle do minador-dos-citros e do cancro cítrico, em pomares, é desnecessária. / Citrus canker (Xanthomonas axonopodis pv. citri Vauterin et al.) is a world wide spread disease causing significant losses to growers. Control measures are very important where the disease has become endemic. In the present work alternative control treatments were evaluated in a ‘Valencia’ (Citrus sinensis Osbeck) grafted onto Poncirus trifoliata Raf. grove located in Butia, RS, Brazil, where the disease is already established. Two experiments were conducted. In the first one, sanitary pruning was tested in combination with copper sprays. Three sources of copper at concentrations of 0,1% or 0,2% of Cu+2 were applied two weeks after growth flushes. In the second experiment sprays with the insecticide abamectin to control citrus leaf miner (Phyllocnistis citrella Stainton) were tested in combination with lime sulfur sprays at 5% in May (autumn) or 12% at the beginning of the second growth flush (December, early summer). The results of the first experiment indicate that sanitary pruning exerts a good citrus canker control in years of less rain during the growing seasons; copper sprays at 0,1% or 0,2% of Cu+2 in formulations of bordeaux mixture, copper oxichloride and hydroxide applied two weeks after the first growth flush reduce citrus canker incidence; copper sprays increase the number of healthy fruit. From the data of the second experiment it is possible to conclude that lime sulfur sprays of 5% and/or 12% do not reduce citrus canker incidence and that abamectin sprays to control citrus leaf miner and citrus canker are not necessary.
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Vivências, percepções, sentimentos e experiências de aprendizagem de mães de crianças portadoras de doença crônica com prognóstico reservado : implicações para o ensino de enfermagem

Issi, Helena Becker January 1989 (has links)
A necessidade de compreender, de modo profundo e abrangente, a experiencia existencial de ser mãe de criança portadora de doença crônica de prognóstico reservado, advinda de reflexões inspiradas pela prática profissional, conduziu à realização deste estudo. Para tanto, foi definido o seguinte problema de pesquisa: ''Como as mães de crianças com doença crônica de prognóstico reservado que estão recebendo assistência hospitalar vivenciam a doença do(a) filho(a)?" Utilizou-se a metodologia do estudo de caso com materiais qualitativos que consistiram nos depoimentos de seis mães acornpanhantes e participantes da assistência a filhos(as) hospitalizados(as) portadores9as)de patologias crônicas de prognóstico reservado, colhidos por meio de entrevista. 0s depoimentos, submetidos à análise de conteúdo com base no método de BARDIN (1977), permitiram compreender a experiência vivenciada pelas mães. A experiência das mães revelou que elas vivem uma crise e que há momentos no desenrolar de sua trajetória nos quais o sofrimento mostra-se com todo vigor. Acompanhando e participando da situação de doença, as mães vão gradativamente alcançando compreensões mais profundas, pois aprendem formas de enfrentar esta crise de vida que resulta do defrontar-se com a doença e com a possibilidade de morte de um filho ou de uma filha. Este processo pode ser facilitado pela ação de elementos que se encontram presentes no contexto hospitalar. O conhecimento produzido pela compreensão da experiência destas mães possibilitou a discuçsão das implicações do presente estudo para o serviço e o ensino de enfermagem, especialmente na área da assistência à criança. / A professional experience has inspired this study. It was noticed the necessity to understand deeply and thoroughly the existencial experience of the mother of unfavorable prognoses chronically ill children. Therefore, it was stated the following research problern: How do the mothers of unfavorable prognoses, who children's illness? It was employed the case study methodology. Qualitative data were collected. Six mothers of such children, who accornpanied them at the hospital and assisted in their care, were interviewed. The mother's testimony was submitted to content analysis. That has made it possible to understand their life experience. The data analysis indicate that the mothers undergo a severe crisis and that there are times during the course o f their experience when their distress is overwhelming. Following and sharing their childrenqs illness, the mothers gradually reach a deep understanding of the situation. They learn how to face this life crisis, how to face the illness, and how to face the possibility of their children's death. This process might be facilitated by other elements within the hospital context. The knowledge brought about by the understanding of these motherqs experiente made it possible to discuss the implications of the present study for nursing practice and for nursing teaching, specially in the area of children's assistance.
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Clonagem e caracterização de análogos de genes de resistência e desenvolvimento de um marcador SCAR Iigado ao gene Ppr1 em Eucalyptus grandis / Cloning and characterization of Eucalyptus resistance gene analogs and development of a SCAR marker linked to Ppr1 gene in Eucalyptus grandis

Laia, Marcelo Luiz de 18 October 2001 (has links)
Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-19T17:18:55Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6847894 bytes, checksum: fd13826f239b9a952bf3541d2710297c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-19T17:18:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6847894 bytes, checksum: fd13826f239b9a952bf3541d2710297c (MD5) Previous issue date: 2001-10-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A maioria dos genes de resistência (genes R) cIonados codifica proteínas que tém dominios conservados. Estas proteinas sao classificadas em classes ou subclasses de acordo com a presenca ou ausência desses domínios. Domínios do tipo LRR (Leucine rich repeat) e NBS (Nucleotide binding site) são os mais freqüentes em produtos dos genes R de mono e dicotiledôneas. A presença desses domínios conservados permite o uso da técnica de PCR com vistas ao isolamento e a clonagem de sequências análogas a genes de resistência (RGA - ReS/Stance Gene Ana/og), mediante o uso de oligonucleotídeos degenerados específicos para regiões conservadas. Associado a mapeamento genético, essa abordagem pode facilitar a clonagem e caracterização de novos genes R. Visando a clonagem e caracterização do gene Ppr1, que confere resistência a ferrugem em E. grandis, procurou-se neste trabalho identificar RGA’s que cossegregassem com este gene. Seqüências análogas a genes R foram amplificadas a partir do DNA isolado de uma matriz de E. grandis resistente a ferrugem, com o uso de oligonucleotídeos degenerados que aneIam a seqüências que codificam domínios conservados de proteínas de resistência. Os fragmentos amplificados (~6OO pb) foram clonados no vetor pGEMT-Easy, transformados em E. coli e seqüênciados. Utilizando-se como critérios o tamanho, o rendimento e a qualidade do DNA, 13 clones, dentre noventa obtidos, foram selecionados (ML 5, ML 21, ML 23, ML 25, ML 27, ML 28, ML 29, ML 31, ML 32, ML 33, ML 34, ML 35 e ML 38) para seqüenciamento. Os clones foram comparados entre si e com outros genes de resistência já caracterizados, com base nas suas seqüências de aminoácidos deduzidas. A análise com o algoritmo Blastx revelou que os clones ML27 e ML34 são similares ao gene N de Nicotiana glutinose e RPSS de Arabidopis thaliana, respectivamente. Além disso, o clone ML27 também foi similar a um homólogo do gene N presente em Pinus radiata. Os clones ML28, ML21, ML23, ML29 e ML38 não mostraram similaridade significativa com seqüências depositadas em bancos de dados e o clone ML05 possui NBS similar a de um provável transportador ABC de arabidopsis. Embora estes clones tenham revelado vários locos RFLP polimórficos entre progenitores da população estudada, nenhum desses polimorfismos cossegregou com o gene Ppr1. Uma segunda fase do trabalho consistiu no desenvolvimento de marcadores SCAR (Sequence Characterized Amplified Region) a partir do marcador RAPD AT9917. Para tal, o DNA da matriz G21 (E. grandis) foi amplificado com o oIigonucIeotídeo AT9 e o fragmento de 917pb foi purificado do gel, cIonado em vetor apropriado e multiplicado em E. coli DH5α. A partir da seqüência de nucleotídeos deste fragmento, desenharam-se quatro oligonucIeotídeos no sentido direto e três no sentido reverso. Os oligonucleotídeos foram combinados entre si a fim de identificar um par que gerasse polimorfismo entre o genótipo resistente (G21) e o genótipo suscetível (G38). Não foi possível obter polimorfismo a partir da amplificação, mas após clivagem do produto da PCR com a enzima de restrição Cfo I, obteve-se uma banda de aproximadamente 800 pb que cossegregou com o fenótipo de resistência. Todavia, esta banda não cossegregou com o fenótipo de resistência em outras famílias oriundas do mesmo genitor G21. / The majority of cloned resistance genes (R) codes for proteins which have conserved LRR (Leucine Rich Repeat) and NBS (Nucleotide Binding Site) domains. The presence of these conserved domains allows the use of the specific degenerated primers for these conserved regions and PCR technique to amplify resistance gene analogue sequences (RGAs). Associated to genetic mapping, this approach may facilitate the cloning and characterization of new R genes. Aiming to clone and characterize the Ppr1 gene, which confers resistance to rust in Eucalyptus grandis, this work sought to identify RGAs that would cosegregate with this gene. Degenerated oligonucleotides were used to amplify RGAs from a rust -resistant E. grandis clone G21. The amplified fragments (~6OO bp) were cloned into the vector pGEMT-EASY, transformed into E. coli Using DNA size, yield and quality criteria, 13 clones, among the 90 obtained, were selected (ML 5, ML 21, ML 23, ML 25, ML 27, ML 28, ML 29, ML 31, ML 32, ML 33, ML 34, ML 35 and ML 38) for sequencing. The clones were compared to each other and to other resistance genes already characterized, based on their deduced amino acid sequences. The Blastx searches revelead that clones ML27 and ML34 are similar to the N (Nicotiana glutinosa) and RPS5 (Arabidopsis thaliana) genes, respectively. Besides, clone ML27 was also similar to a homologue of the N gene present in P/nus racfiata. Clones ML28, ML21, ML23, ML29 and ML38 did not show significant similarity with sequences in the Genebank and clone MLo5 has a NBS similar to a putative Arabidopsis ABC transporter. Southern analyses using these clones revealed several polymorphic RFLP loci in the progenitors of the Ppr1 mapping population. However, none of them co-segregated with the Ppr1 gene. The other objective of this work was to develop SCARs (Sequence Characterized Amplified Region) markers from the RAPD AT9 marker. G21 DNA was amplified with the primer AT9 and the 917pb band obtained was gel-purified and cloned into pGEMT-EASY vector. Based on the nucleotide sequence of this fragment were designed four primers that align in the forward and three in the reverse orientation. Several combinations of forward and reverse primers were tested in order to obtain a pair that could amplify the expected fragment of 917 bp and generate polymorphism between the resistant (G21) and susceptible (G38) genotypes, respectively. It was not possible to obtain polymorphism directly from the amplification; however, after cleavage of the PCR product with the restriction enzyme CfoI, a band of approximately 800 bp was obtained, which co-segregated with the resistance phenotype in the mapping population. However, this band did not co-segregate with the resistance phenotype in other families originated from the same G21 progenitor. / Dissertação importada do Alexandria.

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