Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al grado de Doctor en Bioquímica / Caveolina-1 es una proteína de membrana esencial en la formación de caveolas, participa en el transporte de colesterol, actúa como proteína de andamiaje en señalización y ha sido descrita como un supresor de tumores. Por otro lado, la presencia de Caveolina-1 juega un rol esencial en la polarización celular durante el proceso migratorio, ya que controla la localización de moléculas de señalización y regula la activación de proteínas que participan en migración. Sin embargo, no sólo la presencia de Caveolina-1 es esencial para la migración celular, sino también la fosforilación de Caveolina-1 en Tirosina 14. Considerando que la migración celular es esencial para la metástasis, Caveolina-1 ha sido descrita también como un promotor de metástasis. Este comportamiento dual ha causado controversia y ha dado origen a un gran número de investigaciones en desarrollo actúalmente en la comunidad científica. El principal objetivo de esta tesis fue establecer, en un modelo in vivo inmunocompetente, si Caveolina-1 tiene o no este rol dual en cáncer usando como modelo células de melanoma. Estudiamos en ratones C57-BL/6 el comportamiento de las líneas tumorales B16-F0 y B16-F10, ambas líneas singénicas con la cepa C57-BL/6, y por lo tanto no existe rechazo inmunológico. Estas células al ser subcutáneamente en estos ratones tienen la capacidad de formar tumores sólidos y a la vez, si se inyectan por la vía intravenosa, generan focos de metástasis en el pulmón de los ratones. Por lo tanto, con este sistema estudiamos el rol dual de Caveolina-1 en un mismo modelo in vivo. Una vez inoculados los animales en el lomo (vía subcutánea) o por la vena lateral de la cola (vía intravenosa), con las células seguimos la formación de tumores y cuantificamos la metástasis a nivel pulmonar, respectivamente. Los ensayos realizados in vivo en las células B16-F0 mostraron que Caveolina-1 era capaz de suprimir la formación de tumores, retardando al doble el tiempo de aparición de éstos. Al silenciar los niveles de expresión de Caveolina-1 en las B16-F0 Caveolina-1 mostró promover metástasis no sólo a nivel de pulmón, a la vez mostró nódulos metastasicos en ganglios, riñón, bazo e hígado. Los ensayos en los ratones C57BL/6 con las células B16-F10 con y sin expresión de Caveolina-1 mostraron una reducción del 60 % en el tamaño de los tumores formado por las células que expresaron Caveolina-1 comparado con las que no la expresaron. En los ensayos de metástasis, las células que expresaron Caveolina-1 causaron al menos dos veces más metástasis pulmonar. Estos resultados mostraron por primera vez en un modelo in vivo que Caveolina-1 es capaz de actúar tanto como supresor tumoral y como promotor de metástasis. Usando el mismo modelo de estudio, para analizar el rol dual de Caveolina-1 continuamos con un análisis mutacional, específicamente usando una población celular que expresó Caveolina-1 no fosforilable en la posición de la Tirosina-14 (B16-F10(cav-1/Y14F) y se realizaron los ensayos de supresión de tumor y metástasis. Los resultados revelaron que Tirosina-14 era esencial para otorgarla a Caveolina-1 la capacidad de actúar como una molécula promotora de metástasis, pero al mismo tiempo este residuo no era esencial para el rol supresor de tumores. Por otra parte, evaluamos in vivo la capacidad de E-cadherina de modular los dos roles descritos para Caveolina-1 en las células B16-F10. En estas, la presencia de E-cadherina cumple una función sinérgica sobre Caveolina-1 en su rol supresor de tumores, llegando incluso a inhibir completamente la formación de tumor dependiendo de la expresión de E-cadherina de manera directamente proporcional. Al mismo tiempo E-cadherina mostró frenar el efecto promotor de metástasis dado por Caveolina-1, es decir, ambas proteínas juntas en las células B16-F10 evitan la formación de tumores metastasicos en el pulmón o en cualquier otra parte del cuerpo del animal. / Caveolin-1 is a membrane protein essential for the formation of caveolae, is involved in cholesterol transport, acts as a signaling scaffold protein and has been described as a tumor suppressor. On the other hand, the presence of caveolin-1 plays an essential role in cell polarization during the migration process as it controls the localization of signaling molecules and regulates the activation of proteins involved in migration. However, not only the presence of caveolin-1 is essential for cell migration, but also the phosphorylation of caveolin-1 on Tyrosine 14. Whereas cell migration is essential for metastasis, caveolin-1 has also been described as a promoter of metastasis. This dual behavior has caused controversy and led to a large number of investigations currently under development in the scientific community. The main objective of my research is to establish, in an immunocompetent in vivo model, caveolin-1 whether or not this dual role in cancer melanoma. We study a model where we use mice C57-BL / 6 and tumor lines F0 B16, B16 and F10, both lines syngeneic with the strain C57-BL / 6, ie, no immune rejection. These cells to be inoculated subcutaneously in mice have the ability to form solid tumors and also, if injected intravenously, generate foci of metastases in the lungs of mice. Therefore, with this system we can study the dual role of caveolin 1 in the same model in vivo. Once inoculated animals in a case in the back of the animal (subcutaneously) and the lateral tail vein (intravenously), the cells follow the formation of tumors and quantified the lung metastases, respectively. The tests performed in vivo in B16-F0 cells show that caveolin-1 is able to suppress tumor formation, slowing to twice the time of appearance of these. Metastases in trials of these same cells, caveolin-1 showed promote metastases not only in both lung metastatic lymph nodes showed kidney, spleen and liver. By silencing the expression levels of caveolin-1 in B16-F0 results showed that both roles of caveolin-1 is lost. Trials in C57BL / 6 mice with B16 F10 cells with and without expression of caveolin-1 show that there is a 60% reduction in the size of tumors formed by cells expressing caveolin-1 compared with those without expressed. In trials of metastasis, the cells expressing caveolin-1 cause at least twice as lung metastases. These results show for the first time in an in vivo model that caveolin 1 is able to act as both tumor suppressor and a promoter of metastasis. Using the same model to study, to analyze the dual role of caveolin-1 continue with mutational analysis, specifically using a cell population that expresses caveolin-1 is not phosphorylated at the position of tyrosine-14 (B16 F10 (cav 1/Y14F) tests were performed in tumor suppression and metastasis. The results show that tyrosine-14 is essential for caveolin-1 to grant it the ability to act as a metastasis-promoting molecule, but at the same time, this residue is not essential for the role tumor suppressor. Moreover, we evaluate in vivo the ability of E-cadherin to modulate the two roles described for caveolin-1 in B16-F10 cells. In these, the presence of E-cadherin plays a synergistic role of caveolin-1 in tumor suppressor role, even to completely inhibit tumor formation depending on the expression of E-cadherin in direct proportion. While E-cadherin stops the metastasis-promoting effect given by caveolin-1, ie both proteins together in B16 F10 cells prevent the formation of metastatic tumors in the lung or elsewhere in the body of the animal. / Conicyt; FONDECYT-FONDAP

CAVALCANTE, José Roosivelt. Imunoexpressão da caderina-E nas cervicites, nas lesões intraepiteliais escamosas e no carcinoma invasor do colo uterino. 2013. 77 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-11-13T16:09:56Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_jrcavalcante.pdf: 3451433 bytes, checksum: d441e08824737aebfc4daaae6b202f97 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-11-13T16:11:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_jrcavalcante.pdf: 3451433 bytes, checksum: d441e08824737aebfc4daaae6b202f97 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-13T16:11:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_jrcavalcante.pdf: 3451433 bytes, checksum: d441e08824737aebfc4daaae6b202f97 (MD5) Previous issue date: 2013 / Cervical cancer is one of the most important public health problems around the world. About 17.540 new cases are expected, in Brazil, for 2013. Actually, it’s believed that the majority of cervical cancers begin with non invasive dysplastic lesions, the cervical intraepithelial neoplasias. The acquisition of invasive properties, in epithelial malignancies, is associated to the disruption of intercellular adhesions. The adhesion molecules play a pivotal role in these intercellular bindings and E-cadherin is considered one of the most important among them. In normal epithelial tissues its presence in cell membrane is recognized and it was shown that a down regulation of these proteins in the majority of solid tumors may contribute to facilitate the invasive process. The aim, of this research, was to investigate the E-cadherin immunoexpression in cervicitis, in SILs and in the invasive carcinomas of the uterine cervix. Samples specimens consisted of 83 cases of uterine cervical biopsies and conizations retrieved from the Department of Pathology and Forensic Medicine files of the Federal University of Ceará (Brazil) in 2007 and 2010, distributed, by diagnostic, as follows: Cervicitis = 8 cases; Low Squamous Intraepithelial Lesion (LSIL) = 24 cases; High Squamous Intraepithelial Lesion (HSIL) = 28 cases; and Invasive Carcinoma = 23 cases. Immunohistochemistry (IHC) was performed with the anti-E-cadherin monoclonal antibody and it was considered positive the membranar expression, and, negative, the absence of membranar expression. The Fisher’s exact test was the choice for the contingency tables calculations. The immunostaining results were: Cervicitis = (12%) negative and 7/8 (88%) positive cases to E-cadherin; LSILs = 7/24 (29%) negative cases and 17/24 (71%) positive; HSILs = 7/28 (25%) negative and 21/28 (75%) positive; Invasive Carcinoma = 19/23 (83%) negative and 4/23 (17%) positive. The negative expression was much more frequent in SILs (27%) when compared to cervicitis (12%), although no significant difference (p = 0,6657). In SILs, a bigger E-cadherin loss was noted in undifferentiated cells at the basal third of epithelial thickness. Finally it was shown that the absence of E-cadherin membranar expression was much more frequent in the uterine cervix invasive carcinoma when compared to LSILs and HSILs. These data showed the E-cadherin importance in cervical carcinogenesis, nonetheless, several aspects remain without explication and new researches are to be performed. / O câncer do colo do útero é um dos mais preocupantes problemas de saúde pública do planeta. São esperados para 2013, no Brasil, 17.540 casos novos. Acredita-se atualmente que a maior parte dos cânceres cervicais se desenvolve a partir das neoplasias intraepiteliais cervicais. A aquisição de propriedades invasivas dos tumores malignos está associada ao desequilíbrio nas adesões intercelulares. As moléculas de adesão têm papel fundamental nestas uniões e a caderina-E é uma das mais importantes. Está comprovada a sua presença na membrana celular de tecidos epiteliais normais e foi demonstrado que esta proteína tem sua expressão diminuída na maioria dos tumores sólidos, o que favorece o processo de invasão. O objetivo, neste estudo, foi investigar a imunoexpressão da caderina-E nas Cervicites, nas Lesões Intraepiteliais Escamosas (LIE) e no Carcinoma Invasivo do colo uterino. A amostra consistiu de 83 casos de biópsias e cones de colo do útero obtidos dos arquivos do Departamento de Patologia e Medicina Legal da Universidade Federal do Ceará, em 2007 e 2010, com os seguintes diagnósticos: Cervicite = 8 casos; Lesão Intraepitelial Escamosa de Baixo Grau (LIEBG) = 24 casos; Lesão Intraepitelial Escamosa de Alto Grau (LIEAG) = 28 casos; Carcinoma Invasor = 23 casos. A imunohistoquímica (IHQ) foi efetuada com o anticorpo monoclonal anti-caderina-E, tendo sido considerada positiva a presença de expressão membranar, e negativa, a ausência de expressão. O teste exato de Fisher foi utilizado para os cálculos das tabelas de contingencias. Os resultados da imunomarcação foram: Cervicites = 1/8 (12%) negativos e 7/8 (88%) casos positivos para caderina-E; LIEBG = 7/24 (29%) casos negativos e 17/24 (71%) positivos; LIEAG = 7/28 (25%) negativos e 21/28 (75%) positivos; Carcinoma Invasor = 19/23 (83%) negativos e 4/23 (17%) positivos. A expressão negativa foi muito mais frequente nas LIEs (27%), comparadas com as Cervicites (12%) apesar de diferença não significante (p = 0,6657). Nas LIEs, uma maior perda da caderina-E foi notada nas células menos diferenciadas do 1/3 basal da espessura epitelial. Finalmente, observou-se que a ausência de expressão membranar da caderina-E foi muito mais frequente no carcinoma epidermóide invasor do que nas lesões intraepiteliais escamosas do colo do útero. Estes dados mostraram a importância da caderina-E na carcinogênese do colo uterino, no entanto, muitos aspectos permanecem sem explicação e novos estudos são necessários.

RODRIGUES, Bruno Jucá. Imunoexpressão das caderinas E e N em carcinomas gástricos primários e respectivas metástases linfonoidais. 2014. 72 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-11-19T13:19:47Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_bjrodrigues.pdf: 4825754 bytes, checksum: c97657766a8823acdd9dfa11f1ab9bb7 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-11-19T13:31:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_bjrodrigues.pdf: 4825754 bytes, checksum: c97657766a8823acdd9dfa11f1ab9bb7 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-19T13:31:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_bjrodrigues.pdf: 4825754 bytes, checksum: c97657766a8823acdd9dfa11f1ab9bb7 (MD5) Previous issue date: 2014 / E - Cadherin and N - cadherin are calcium - dependent adhesion molecules with important roles in the shaping and maintenance of normal tissue architecture and are altered in several types of cancer, according to the biomedical literature. The aim of this study is to evaluate the expression of both proteins in gastric carcinoma and their ly mph node metastases as well as their possible participation in tumor progression. Fifty - one (51) cases of gastrectomy for gastric carcinoma were used, 35 of which with available lymph nodes, obtained from the files of the Department of Pathology and Forensic Medicine, Federal University of Ceará (DPML / UFC). The cases were classified into intestinal (26) and diffuse (25) types according to Lauren's classification (1965). Data associated with tissue microarray immunohistochemistry wi th monoclonal antibody anti - E - cadherin and N - cadherin, anti - universal detection and strepta vidin - biotin - peroxidase system were used. The expression of E - cadherin was evaluated according to the following scores (based on previous reports): preserved when pr esence of E - cadherin membrane was found in 50% or more of tumor cells, and decreased when less than 50% of these cells showed immunostaining. Labeling of N - ca dherin was considered positive when 5% or more of tumor cells presented with membrane and / or cyt oplasm stained by this protein, and negative when less than 5% of cells were marked. Expression preserved and reduced to E - cadherin, positive and negative N - cadherin for each histotype carcinoma, primary seat, lymph node, intestinal metaplasia and normal t issue distant from the tumor were compared. It was found that E - cadherin in greater than 5 centimeters tumors showed a significant reduction in the expression ( p = 0.0006). E - cadh erin was significantly reduced ( p = 0.0209) in diffuse carcinomas compared to normal mucosa distant from the tumor . The re were significant differences in the N - cadherin expression between normal and metaplastic epithelial cells in the basal third ( p <0.0001) and intermediate ( p = 0.0026 .In normal tissue, there was an increased neg ativity from basal (less differentiated) to superficial (more differentiated) epithelial levels. It was evident that in the primary tumor (92%), lymph node (100%) and intestinal metaplasia (100%) the negativity is predominant, whereas i n the normal tissue the positivity of N - cadherin occurre d in 74% of cases. The distribution of N - cadherin expression in mononuclear stromal cells had a similar positivity between primary tumor and lymph node metaplasia, while in lymph nodes occurred marked lacking of expression, with 92% of negative expression. / As caderinas E e N, moléculas de adesão celular dependentes de cálcio, com importantes funções na formação e manutenção da arquitetura tecidual normal se encontram alteradas em vários tipos de câncer, de acordo com a literatura biomédica. O objetivo deste trabalho é avaliar a expressão das duas proteínas no carcinoma gástrico e respectivas metástases linfonodais, bem como as possíveis participações na progressão tumoral. Foram utilizados 51 casos de gastrectomia por carcinoma gástrico, 35 dos quais com linfonodos disponíveis, dos Arquivos do Departamento de Patologia e Medicina Legal da Universidade Federal do Ceará (DPML/UFC). Os casos foram classificados nos tipos intestinal (26) e difuso (25) de acordo com a classificação de Lauren (1965). Utilizou-se técnica de tissue microarray associada com imunohistoquímica com anticorpos monoclonais anti-Caderina-E e anti-Caderina-N e sistema de detecção universal estreptavidina-biotina-peroxidade. A expressão de caderina-E foi avaliada de acordo com os seguintes escores: considerada preservada quando da presença da caderina-E membranar em 50% ou mais de células tumorais, e, reduzida, quando menos de 50% destas células apresentavam imunomarcação membranar. A marcação de caderina-N foi considerada positiva pela presença de 5% ou mais de células tumorais com membrana e/ou citoplasmas corados, por esta proteína e, negativa, quando menos de 5% destas células apresentavam marcação. Foram comparadas expressão preservada e reduzida para caderina-E, positiva e negativa para caderina-N em cada histotipo de carcinoma, na sede primária, linfonodo, metaplasia intestinal e tecido normal distante do tumor. Observou-se que a caderina-E em tumores maiores que 5 centímetros apresentaram significativa redução na expressão (p = 0,0006). Na comparação entre carcinomas difusos em relação à mucosa normal distante do tumor a expressão da caderina-E foi significativamente reduzida (p = 0,0209). Foram verificadas diferenças significantes na expressão da caderina-N entre células epiteliais normais e metaplasicas, no terço basal (p < 0,0001) e intermediário (p = 0,0026). No tecido normal, na comparação entre os terços observou-se que: basal vs superficial (p < 0,0001) e intermediário vs superficial (p < 0,0001), apresentaram aumento da negatividade no decorrer da diferenciação dos terços. Na distribuição da expressão da caderina-N em células tumorais e não tumorais, ficou evidente que no tumor primário (92%), linfonodo (100%) e metaplasia intestinal (100%) a negatividade foi predominante, enquanto no tecido normal ocorreu com 74% de expressão positiva para caderina-N. A distribuição da expressão da caderina-N em mononucleares do estroma apresentou uma positividade semelhante entre tumor primário, linfonodo e metaplasia, enquanto nos linfonodos ocorreu acentuada falta de expressão, com 92% da expressão negativa. Os dados aqui observados de caderina-E e caderina-N sugerem um papel controverso destas moléculas de adesão na progressão tumoral-linfonodal no câncer gástrico.

SAMPAIO, João Paulo Aguiar. Imunoexpressão de Caderina-E no câncer colorretal primário e nas metástases linfonodais. 2013. 69 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-21T11:14:49Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_jpasampaio.pdf: 18070044 bytes, checksum: 26426c1707ecbfd7857d05920f0fdc36 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-21T11:18:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_jpasampaio.pdf: 18070044 bytes, checksum: 26426c1707ecbfd7857d05920f0fdc36 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-21T11:18:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_jpasampaio.pdf: 18070044 bytes, checksum: 26426c1707ecbfd7857d05920f0fdc36 (MD5) Previous issue date: 2013 / E-cadherin is closely related to epitelial-mesenchymal transition and tumor progression in many cancers, including colorectal cancer. The aim of this study is to evaluate the expression of E-cadherin in primary colorectal cancer as well as in lymph node metastasis, establishing also a comparison with the expression of E-cadherin in normal colonic mucosa. We utilized 77 cases of colectomies for colorectal carcinoma and 10 cases of metastatic lymph nodes from the files of the Department of Pathology and Forensic Medicine/Federal University of Ceara. Tissue microarray and immunohistochemistry were performed with monoclonal anti-E-cadherin, evaluated using the following scores: 0 = no staining; 1 = cytoplasmic staining; 2 = mixed staining (cytoplasmic and membranous); 3 = membranous staining. It was used the classification proposed by Jawahri et al. which includes cases of abnormal expression (0, 1 and 2 scores) and cases of normal expression (3 score), and was also used the classification proposed by Almeida et al. which includes cases of non-membranous expression (0 and 1 scores) and membranous expression (2 and 3 scores). Primary tumors presented more cases of abnormal E-cadherin expression in comparison to normal colonic mucosa (p < 0.0001). There were no differences between E-cadherin expression in the primary tumor in comparison to lymph node metastasis. The grouped cell tumors showed increased expression of E-cadherin in comparison to isolated cell tumors, either using the classification proposed by Jawhari et al. (p = 0.0230) and the classification proposed by Almeida et al. (p = 0.0043). In conclusion, abnormal expression of E-cadherin in the primary tumor, with frequent membranar immunostaining associated with the cytoplasmic marking (abnormal heterogeneous or mixed staining), reinforces the evidence that E-cadherin expression change in cancer is more qualitative than quantitative. The predominance of membranar expression in primary tumor and lymph node metastasis, with or without associated cytoplasmatic expression, particularly in cell-grouped tumors, suggests that E-cadherin presence is essential for local invasion and tumor progression, as opposed to the classical paradigm that tumor progression is exacerbated by the loss of this adhesion molecule. / A Caderina-E está intimamente relacionada com a transição epitelial-mesenquimal e com a progressão tumoral em muitos tipos de câncer, inclusive no câncer colorretal. O objetivo deste trabalho foi avaliar a imunoexpressão de Caderina-E no câncer colorretal primário e nas respectivas metástases linfonodais, na mucosa colônica normal, e investigar possíveis correlações desta expressão com parâmetros clínicopatológicos. Setenta e sete casos de colectomias por carcinoma colorretal e dez casos de linfonodos metastáticos, dos arquivos do Departamento de Patologia e Medicina Legal/Universidade Federal do Ceará, foram utilizados. Realizou-se o Tissue Microarray e imunohistoquímica, com anticorpo monoclonal anti-Caderina-E. Foram avaliados os seguintes escores: 0 = ausência de expressão; 1 = expressão citoplasmática; 2 = expressão mista (citoplasmática e membranar); 3 = expressão membranar pura. Foi utilizada tanto a classificação proposta por Jawhari et al., agrupando os casos em expressão anormal (escores 0, 1 e 2) e expressão normal (escore 3), como os critérios propostos por Almeida et al., agrupando os casos como expressão não-membranar (escores 0 e 1) e expressão membranar (escores 2 e 3). Os tumores primários tiveram mais casos de expressão de Caderina-E anormal em comparação com a mucosa normal (p < 0.0001). Não houve diferença significante entre expressão de Caderina-E no tumor intestinal e em metástases linfonodais, embora nestas a expressão membranar tenha sido mais freqüente do que no sítio primário. Tumores de células agrupadas apresentaram maior expressão de Caderina-E membranar do que os de células isoladas, tanto utilizando a classificação de Jawhari et al. (p = 0.0230), como os critérios propostos por Almeida et al. (p = 0.0043). Em conclusão, a expressão anormal de Caderina-E no tumor primário, com persistência freqüente da imunomarcação membranar associada à marcação citoplasmática (marcação anormal heterogênea ou mista), reforça as evidências de que esta alteração no câncer é mais qualitativa do que propriamente quantitativa. O predomínio da expressão membranar no sítio primário da neoplasia e na metástase, com ou sem expressão citoplasmática associada, principalmente em tumores de células agrupadas, sugere que a presença da Caderina-E é essencial para a invasão local e progressão tumoral, em oposição ao clássico paradigma de que a progressão tumoral se exacerba com a perda desta molécula de adesão.

Epidermodisplasia verruciforme (EV) é uma genodermatose rara, com susceptibilidade para infecção pelo vírus do papiloma humano, considerada modelo de oncogênese viral. Comparou-se a expressão epidérmica das citoqueratinas (K) 1, 10, 14, 4, 16, involucrina, filagrina e e-caderina, em lesões de verrugas planas e nas verrugas planas da EV através de método imunohistoquímico. Na EV houve ausência ou retardo de expressão (queratinócitos mais superficias) de K1/10, com substituição pela K14. Houve expressão basal e suprabasal de K14 em ambos os grupos, bem como positividade para K4 e 16, e expressão de involucrina nas camadas mais inferiores da epiderme. A expressão de filagrina não foi alterada, e a de e-caderina apresentou-se diminuída nas células coilocitóticas superficiais na EV / Epidermodisplasia verruciforme (EV) is a rare genodermatosis with susceptibility to human papillomavirus infection, considered a model of viral oncogenesis. We compared epidermal expression of cytokeratins (K) 1, 10, 14, 4, 16, involucrin, filaggrin and e-cadherin in plane warts and plane wart-type lesions in EV by immunohistochemical technique. In EV there was absent or retarded expression (more superficial keratinocytes) of K1/10, being substituted by K14. There was basal and suprabasal expression of K14 in both groups, as well as positivity for K4 and K16, and involucrin expression in more inferior layers of epidermis. Filaggrin expression was not altered, and e-cadherin was diminished in superficial koilocytotic cells in EV

Tesis para optar al grado de Doctora en Bioquímica / El cáncer corresponde a la segunda causa de muerte en Chile y el mundo, pero los pacientes con cáncer no mueren debido al crecimiento del tumor primario, sino a la diseminación de las células tumorales y posterior colonización de éstas en nuevos órganos o metástasis. En términos generales, el cáncer es la consecuencia de un proceso multifactorial que lleva a la transformación progresiva de células normales en células altamente malignas. La amplia variedad de fenotipos del cáncer se debe a la manifestación de alteraciones esenciales en la fisiología celular, las que colectivamente dictaminan el crecimiento maligno. Dos de las características adquiridas por las células tumorales en las que se enfocará esta tesis son; la invasión de tejidos y metástasis y la reprogramación del metabolismo energético. Caveolina-1 es una proteína integral de membrana a la que se le ha atribuido un rol dual en la progresión tumoral, actuando como supresor de tumores, ya que la disminución de la expresión de caveolina-1 es suficiente para revertir el fenotipo transformado, o como promotor de metástasis en estadios tardíos del cáncer, donde la expresión de caveolina-1 aumenta sin revertir el fenotipo maligno y se correlaciona con un aumento en la migración celular y metástasis, multiresistencia a drogas y una mala prognosis para el paciente. Ambos roles de caveolina-1 se ven afectados por la presencia de la glicoproteína Ecadherina, la cual potencia su acción supresora de tumores y suprime la habilidad de caveolina-1 para promover metástasis in vivo. Sin embargo, el mecanismo por el cual E-cadherina suprime la habilidad de caveolina-1 para promover la metástasis no ha sido estudiado. La habilidad de caveolina-1 para promover un aumento en la migración en células metastásicas se relaciona con un aumento en la activación de Rab-5 y Rac-1. Ya que la reprogramación del metabolismo energético de las células, suple tanto las necesidades bioenergéticas como biosintéticas de las células cancerígenas para sostener una proliferación aumentada y una rápida migración e invasión celular, en este proyecto se caracterizó el fenotipo metabólico de las células metastásicas que expresan o no, caveolina-1 y estudiamos cómo la expresión de E-cadherina afecta el metabolismo. Caveolina-1 sufre modificaciones post-traduccionales que participan en su función intracelular, como la fosforilación en el residuo de tirosina 14 (Y14), mediada por las proteínas tirosina quinasas no receptoras Src, Fyn y Abl en respuesta a varios estímulos como. En células metastásicas de cáncer de mama, se observan altos niveles de expresión de caveolina-1 y un alto grado de fosforilación de ésta en Y14, lo que promueve un aumento en la migración celular por un aumento en el recambio de la adhesiones focales, polarización, velocidad persistencia y direccionalidad de la migración. Todas estas funciones de caveolina-1 son bloqueadas por la inhibición de la fosforilación de caveolina- 1 en Y14 tanto de manera farmacológica como por la utilización de una caveolina-1 que no es fosforilable (Y14F). Por lo tanto, el rol promotor de metástasis de caveolina-1, dependería de su fosforilación en Y14. La fosfatasa PTPN14 co-inmunoprecipita con caveolina-1 en presencia de E-cadherina y PTPN14 en células de melanoma murino e induce una disminución en la migración, formación de colonias y crecimiento independiente de anclaje de células de cáncer de colon. Estos antecedentes nos llevaron a proponer la siguiente hipótesis: En presencia de E-cadherina se recluta a la fosfatasa PTPN14 al complejo multiproteíco formado con caveolina-1 lo que reduce la habilidad promotora de migración y metástasis de caveolina-1 por la disminución de la fosforilación de ésta en tirosina 14. El objetivo principal de esta tesis es determinar el efecto de la co-expresión de caveolina-1 y E-cadherina sobre la fosforilación en tirosina de caveolina-1 (Y14) y β-catenina (Y654) y la migración e invasión celular en células cancerígenas. Para abordar la hipótesis de trabajo se plantearon los siguientes objetivos específicos: (1) Determinar el efecto de la co-expresión de caveolina-1 y E-cadherina sobre los niveles de fosforilación en tirosina 14 de caveolina-1 y en tirosina 654 de β-catenina y la migración e invasión celular; (2) Estudiar la participación de Src en la fosforilación en tirosina 14 de caveolina-1 y en tirosina 654 de β-catenina en presencia y ausencia de E-cadherina; (3) Determinar si los complejos proteicos formados con caveolina-1 en presencia de E-cadherina contienen PTPN14, la que contribuye a la desfosforilación de caveolina-1 en tirosina 14; (4) Determinar el efecto de la co-expresión de caveolina-1 y E-cadherina sobre la activación de Rab-5 y Rac-1; (5) Caracterización de los cambios metabólicos inducidos por la expresión caveolina-1 y la variación de éstos por la co-expresión con Ecadherina. Para el desarrollo de los objetivos mencionados se utilizaron líneas celulares metastásicas en las que se co-expresan caveolina-1 y E-cadherina. Se realizó ensayos de Western de blot, luego de ensayos de multiherida para determinar los niveles de fosforilación de caveolina-1 en Y14 y β-catenina en Y654, ensayos de migración por transwell, ensayos de invasión, ensayos de precipitación por afinidad para determinar la actividad de Rab-5 y Rac1 en células que expresan caveolina-1 en presencia o en ausencia de E-cadherina. Además, se caracterizaron los complejos multiproteícos formados por caveolina-1, mediante ensayos de inmunoprecipitación y espectrometría de masa en células que expresan o no E-cadherina y se caracterizó el fenotipo metabólico de células que expresan o no caveolina-1, estudiando cómo cambia éste en presencia de E-cadherina. En resumen en esta tesis se buscó dilucidar el mecanismo mediante el cual Ecadherina reduce la habilidad promotora de migración, invasión y metástasis de caveolina-1 en células de cáncer metastásicas. En este trabajo mostramos que la expresión de E-cadherina inhibe el aumento en la migración, invasión y metástasis inducido por caveolina-1 por la disminución de la fosforilación de caveolina-1 en Y14, además, de bloquear la activación del eje Rab-5/Rac1. La fosfatasa PTPN14 co-inmunoprecipitó con caveolina-1 en presencia de E-cadherina y su expresión fue capaz de inhibir el rol promotor de migración, invasión y metástasis de caveolina-1. Finalmente mostramos que la expresión y fosforilación de caveolina-1 induce un switch metabólico a un fenotipo glicolítico aeróbico por el bloqueo del complejo mitocondrial IV, generando cambios en el metaboloma de las células metastásicas congruentes con este switch metabólico. La expresión de Ecadherina bloquea el cambio metabólico inducido por caveolina-1 llevando a las células a un metabolismo quiescente / Cancer is the second leading cause of death in Chile and in the world. Cancer patients do not die due to the primary tumor growth, but rather due to the spread of the cancer cells from the primary tumor and subsequent colonization of new organs, a process known as metastasis. In general terms, cancer is the result of a multifactorial process that leads to the progressive transformation of normal cells into highly malignant cells. The wide variety of cancer phenotypes is due to alterations in cell physiology that collectively lead to the malignant cell behavior. Two of the characteristics acquired by tumor cells, on which this thesis will focus, are tissue invasion, as well as metastasis and reprogramming of energy metabolism. Caveolin-1 is a membrane protein that has been attributed a dual role in cancer progression, acting at early stages as a tumor suppressor given that augmenting the expression of caveolin-1 is sufficient to reverse the transformed phenotype, or as a promoter of metastasis in late stages of cancer, where enhanced expression of caveolin-1 favors the malignant phenotype and correlates with an increase in cell migration and metastasis, multidrug resistance and poor prognosis of the patients. Both roles of caveolin-1 are affected by the presence of the glycoprotein E-cadherin, which enhances caveolin-1 function as a tumor suppressor and suppresses the ability of caveolin-1 to promote metastasis in vivo. However, the precise mechanism by which E-cadherin suppresses the malignant traits of caveolin-1 is unknown. The ability of caveolin-1 to promote migration of metastatic cells is associated with increased activation of Rab-5 and Rac-1. Bearing in mind that the reprogramming of energy metabolism in cancer cells, is required to supplement both the both the bioenergetic and biosynthetic needs of these cells to sustain increased proliferation, rapid migration and cell invasion, this thesis also evaluated the metabolism of metastatic cells expressing or not caveolin-1 and how this was affected by the expression of E-cadherin. Caveolin-1 is subjected to posttranslational modifications relevant to protein function, such as phosphorylation on tyrosine 14 (Y14), by the non-receptors protein tyrosine kinases non-receptor Src, Fyn and Abl. This may occur in response to a large variety of different stimulus. In metastatic breast cancer cells, high levels of caveolin-1 expression and phosphorylation on Y14 are observed and associated with increased cell migration by promoting focal adhesion turnover, polarization, persistence, speed and directionality of migration. All these functions of caveolin-1 are blocked by inhibition of caveolin- 1 phosphorylation on Y14 either pharmacologically or by introducing a nonphosphorylatable caveolin-1 (Y14F) mutation. Therefore, the metastasis promoting role of caveolin-1 depends on Y14 phosphorylation. The PTPN14 phosphatase co-immunoprecipitated with caveolin-1 in the presence of Ecadherin and PTPN14 in murine melanoma cells and decreased migration, colony formation and anchorage-independent growth of colon cancer cells. These results available in the literature led us to propose that in the presence of E-cadherin PTPN14 is recruited to the multiprotein complex including caveolin-1 to reduce Y14 phosphorylation, cell migration and metastasis induced by caveolin-1. The main objective of this thesis was to determine the effect of co-expression of caveolin-1 and E-cadherin on tyrosine phosphorylation of caveolin-1 (Y14) and β-catenin (Y654), as well as migration and invasion in cancer cells. To address the working hypothesis the following specific objectives were evaluated: (1) To determine the effect of the co-expression of caveolin-1 and E-cadherin on the levels of tyrosine phosphorylation 14 of caveolin-1 and on tyrosine 654 of β catenin and migration and cell invasion; (2) To study participation of Src in the phosphorylation of the tyrosine 14 of caveolin-1 and on tyrosine β-catenin 654 in the presence and absence of E-cadherin; (3) To determine whether the protein complexes formed with caveolin-1 in the presence of E-cadherin contain PTPN14, and if this phosphatase contributes to dephosphorylation of tyrosine 14 of caveolin-1; (4) To determine the effect of coexpression of caveolin-1 and E-cadherin on the activation of Rab-5 and Rac-1; (5) To characterization of the metabolic changes induced by caveolin-1 expression and the effect of the co-expression with E-cadherin on cell metabolism. To address these objectives metastatic cell lines that co-expressed caveolin-1 and E-cadherin were used. Multiple wounding assays and Western blot analysis was used to determine the phosphorylation levels of caveolin-1 on Y14 and β-catenin on Y654 moreover migration assays, invasion assays, affinity precipitation assays were employed to determine the activity of Rab-5 and Rac1 in cells expressing caveolin-1 in the presence or absence of E-cadherin. Furthermore, protein composition the analysis of the multiprotein complex formed by caveolin-1 and E-cadherin was evaluated following immunoprecipitation assays by mass spectrometry analysis. The metabolic phenotype of cells expressing or not caveolin-1 was characterized using Seahorse extracellular analyzer and metabolic changes in presence of Ecadherin were determined. In summary, this thesis sought to elucidate the mechanism by which E-cadherin reduces the ability of caveolin-1 to promote migration, invasion and metastasis as well as metabolic reprograming of metastatic cancer cells. In this study, we show that the expression of E-cadherin prevented caveolin-1- enhanced migration, invasion and metastasis by reducing caveolin-1 phosphorylation on Y14 and, as a consequence, blocking of the activation of the Rab-5/Rac-1 signaling axis. The PTPN14 phosphatase co-immunoprecipitated with caveolin-1 in the presence of E-cadherin and overexpression or this phosphatase was sufficient to prevent the migration, invasion and metastasis promoting role of caveolin-1, even in the absence of E-cadherin. Finally we show that the expression caveolin-1 induced a metabolic switch to an aerobic glycolytic phenotype, likely by blocking the mitochondrial complex IV. These effects coincided in metastatic melanoma cells with changes in the metabolome. Moreover, the expression of E-cadherin blocked the metabolic changes induced by caveolin-1 leading to a quiescent metabolic phenotype in metastatic cells / Conicyt-FONDAP; Fondecyt ; Anillo ACT / 31 de diciembre de 2018

Introdução: O molusco contagioso (MC) é um vírus da família Poxviridae que infecta os queratinócitos epidérmicos levando a hiperplasia e formação de inclusões eosinofílicas intracitoplasmáticas os corpos de molluscum. Poucos estudos analisam as alterações induzidas por este Mollucipox vírus nas estruturas que compõem o citoesqueleto e a adesão celular dos queratinócitos. Objetivos: Verificar o padrão de expressão de citoqueratinas, filagrina, involucrina, E-caderina e p63 pela técnica de imuno-histoquímica em lesões de MC e compará-las com a epiderme adjacente aparentemente normal (EAAN). Método: Através de técnica de imuno-histoquímica, estudou-se a expressão de K1, K10, K14, K16, filagrina, involucrina, E-caderina e p63 em lesões de MC de 41 pacientes imunocompetentes. Os padrões de expressão nas lesões de MC foram comparados com a EAAN. Resultados: A expressão de K1/K10 ocorreu como o habitual nas camadas suprabasais da epiderme. A marcação de K14 foi observada nas camadas epidérmicas basal e suprabasal nas lesões de MC e EAAN. A K16, que é expressa somente em processos hiperproliferativos, foi demonstrada na camada espinhosa tanto nos focos de MC como na EAAN. Filagrina e involucrina expressaram-se nas camadas granulosa, espinhosa e em alguns casos até mesmo na camada basal na epiderme infectada e EAAN. A E-caderina esteve presente até a porção inferior dos corpos de molusco enquanto na EAAN apresentou-se nas camadas basal e espinhosa. A expressão nuclear do p63 ocorreu nas camadas basal e espinhosa tanto no MC como EAAN. Conclusão: A infecção pelo Molluscipox vírus parece interferir no processo de diferenciação terminal dos queratinócitos. A expressão tardia de K14 e p63 na camada espinhosa, assim como a expressão precoce de filagrina e involucrina, associada ao estado hiperproliferativo demonstrado pela presença aberrante de K16, refletem um distúrbio no processo de maturação dos queratinócitos infectados. As alterações observadas na EAAN podem representar evento precoce no distúrbio de queratinização induzido pelo vírus na pele infectada. / Background: Molluscum contagiosum (MC) is a Molluscipox virus infection of the epidermal keratinocytes with hyperplasia and intracytoplasmic inclusions the molluscum bodies (MB). Few studies address cytokeratins (K) profile in MC, mainly focusing the terminal epidermal keratinization process. Methods: In order to verify K1, K10, K14, K16, involucrin, filaggrin, E-cadherin and p63 expression in MC, 41 lesions were subjected to immunohistochemical technique. The immunolabeling pattern of MC was compared to adjacent normal appearing epidermis (ANAE). Results: K1 and K10 were expressed in supra basal layers of MC and ANAE. K14 was expressed in basal and suprabasal layers in MC and also in ANAE. K16 was expressed in MC and ANAE, through all spinous layers. Involucrin and filaggrin were observed in granular, spinous and even in basal layer of ANAE and MC. E-cadherin was present up to the first layers of epidermis with MB while ANAE exhibited E-cadherin labeling at basal and spinous layers. Basal and spinous layers keratinocytes nuclei, in both MC and ANAE, express p63. Conclusion: Infection by Molluscipox virus may noticeably alter keratinocyte differentiation status and cell adhesion. The presence of K14 and p63 in spinous layer, as well as early expression of involucrin and filaggrin, associated to a hyperproliferative state disclosed by the presence of K16, may be a result of a disruption in keratinocytes maturation process. The changes observed at ANAE may represent early events in keratinization disturbance.

Introdução: O molusco contagioso (MC) é um vírus da família Poxviridae que infecta os queratinócitos epidérmicos levando a hiperplasia e formação de inclusões eosinofílicas intracitoplasmáticas os corpos de molluscum. Poucos estudos analisam as alterações induzidas por este Mollucipox vírus nas estruturas que compõem o citoesqueleto e a adesão celular dos queratinócitos. Objetivos: Verificar o padrão de expressão de citoqueratinas, filagrina, involucrina, E-caderina e p63 pela técnica de imuno-histoquímica em lesões de MC e compará-las com a epiderme adjacente aparentemente normal (EAAN). Método: Através de técnica de imuno-histoquímica, estudou-se a expressão de K1, K10, K14, K16, filagrina, involucrina, E-caderina e p63 em lesões de MC de 41 pacientes imunocompetentes. Os padrões de expressão nas lesões de MC foram comparados com a EAAN. Resultados: A expressão de K1/K10 ocorreu como o habitual nas camadas suprabasais da epiderme. A marcação de K14 foi observada nas camadas epidérmicas basal e suprabasal nas lesões de MC e EAAN. A K16, que é expressa somente em processos hiperproliferativos, foi demonstrada na camada espinhosa tanto nos focos de MC como na EAAN. Filagrina e involucrina expressaram-se nas camadas granulosa, espinhosa e em alguns casos até mesmo na camada basal na epiderme infectada e EAAN. A E-caderina esteve presente até a porção inferior dos corpos de molusco enquanto na EAAN apresentou-se nas camadas basal e espinhosa. A expressão nuclear do p63 ocorreu nas camadas basal e espinhosa tanto no MC como EAAN. Conclusão: A infecção pelo Molluscipox vírus parece interferir no processo de diferenciação terminal dos queratinócitos. A expressão tardia de K14 e p63 na camada espinhosa, assim como a expressão precoce de filagrina e involucrina, associada ao estado hiperproliferativo demonstrado pela presença aberrante de K16, refletem um distúrbio no processo de maturação dos queratinócitos infectados. As alterações observadas na EAAN podem representar evento precoce no distúrbio de queratinização induzido pelo vírus na pele infectada. / Background: Molluscum contagiosum (MC) is a Molluscipox virus infection of the epidermal keratinocytes with hyperplasia and intracytoplasmic inclusions the molluscum bodies (MB). Few studies address cytokeratins (K) profile in MC, mainly focusing the terminal epidermal keratinization process. Methods: In order to verify K1, K10, K14, K16, involucrin, filaggrin, E-cadherin and p63 expression in MC, 41 lesions were subjected to immunohistochemical technique. The immunolabeling pattern of MC was compared to adjacent normal appearing epidermis (ANAE). Results: K1 and K10 were expressed in supra basal layers of MC and ANAE. K14 was expressed in basal and suprabasal layers in MC and also in ANAE. K16 was expressed in MC and ANAE, through all spinous layers. Involucrin and filaggrin were observed in granular, spinous and even in basal layer of ANAE and MC. E-cadherin was present up to the first layers of epidermis with MB while ANAE exhibited E-cadherin labeling at basal and spinous layers. Basal and spinous layers keratinocytes nuclei, in both MC and ANAE, express p63. Conclusion: Infection by Molluscipox virus may noticeably alter keratinocyte differentiation status and cell adhesion. The presence of K14 and p63 in spinous layer, as well as early expression of involucrin and filaggrin, associated to a hyperproliferative state disclosed by the presence of K16, may be a result of a disruption in keratinocytes maturation process. The changes observed at ANAE may represent early events in keratinization disturbance.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000411926-Texto+Completo-0.pdf: 537628 bytes, checksum: ad84cc7d4a6b34220ad5f86256433b5f (MD5) Previous issue date: 2009 / Cadherins play a crucial role in tissue homeostasis by maintaining cell-cell adhesion, and therefore have been implicated in cancer progression. The synthetic antagonist of the gastrin-releasing peptide receptor RC-3095 have been shown to inhibit tumor growth by repressing cell proliferation, motility and morphogenesis, and is pointed as a promising anti-cancer drug. This work aimed to evaluate the effect of RC-3095 treatment on colorectal adenocarcinoma HT-29 cell line upon E and N cadherin expression. Our results corroborate previous findings demonstrating the negative effect of RC-3095 on cell viability, reinforcing its potential anti-cancer effect. However, our results failed to establish a correlation between RC-3095 treatment and cadherin expression, suggesting that modulation of cell adhesiveness is not a target of RC-3095 under these conditions. N cadherin was not detected while E cadherin expression decreased progressively along the 48h period tested. / As caderinas desempenham um papel-chave na manutenção das adesões célula-célula e alterações em sua expressão tem implicações significativas na homeostasia tecidual, estando envolvidas na progressão do câncer. O RC-3095 e um antagonista sintético do receptor do peptídeo liberador de gastrina capaz de restringir o crescimento de tumores pela ação inibitória sobre proliferação, aumento da motilidade e morfogênese de células tumorais, representando uma nova e promissora estratégia farmacológica no tratamento anti-tumoral. O objetivo deste trabalho foi analisar o efeito do tratamento com RC-3095 durante a progressão tumoral da linhagem de adenocarcinoma colorretal HT-29 sobre a expressão de caderinas dos tipos E e N. Nossos resultados corroboram achados prévios que demonstraram o efeito negativo do RC-3095 sobre a viabilidade celular, reforçando seu potencial no tratamento do câncer colorretal. O tratamento com RC-3095, contudo, não alterou o perfil de expressão de caderinas durante o período de 48h estudado. Neste período não foi detectada expressão de caderina do tipo N, enquanto a expressão de caderina E diminui progressivamente independente do tratamento com RC-3095, sugerindo que a adesividade celular não e alvo do antagonista do receptor do peptídeo liberador de gastrina nas condições estudadas.

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A dissociação das células tumorais devido à alteração na adesão célula-célula representa um dos princípios chave da invasão tumoral e da TEM. O tumor odontogênico queratocístico (TOQ) tem como características principais o seu comportamento clínico agressivo e altas taxas de recorrência. O conhecimento das características moleculares da TEM no TOQ pode fornecer marcadores úteis que auxiliem no prognóstico e na condução terapêutica individualizada desse tumor odontogênico. O presente estudo analisou a imunoexpressão das proteínas E-caderina, N-caderina, Snail, Slug e Vimentina, por estarem envolvidas no processo da TEM, em casos de TOQ em comparação com cistos radiculares (CRs) e folículo dentais (FDs) a fim de fornecer melhores perspectivas na compreensão do comportamento agressivo desses tumores. Foram utilizados 32 casos de TOQ, 15 CRs e 08 FDs para a técnica imunoistoquímica. A análise do perfil de imunoexpressão nos TOQs demonstrou expressão preservada de E-caderina na maioria dos casos, sendo que a N-caderina demonstrou um ganho de expressão em epitélio tumoral em relação ao estroma, o que esteve correlacionado com a expressão positiva de Slug em epitélio, e este por sua vez com a expressão positiva de Snail. No estroma dos TOQs, a N-caderina correlacionou-se positivamente com Slug, e a Vimentina com o Snail no epitélio. Ao comparar os três grupos estudados, a imunoexpressão das proteínas foi influenciada de forma marcante pela inflamação. As expressões aumentadas de N-caderina no epitélio e no estroma, do Slug no epitélio e da Vimentina no estroma estiveram associadas com a localização em mandíbula. A grande maioria dos casos que apresentaram localização posterior (quer isoladamente ou em conjunto com a anterior) apresentou expressão preservada de E-caderina. Estas proteínas provavelmente desempenham papéis diferenciados na mediação da invasividade local em TOQs. Apesar da expressão da E-caderina estar preservada na maioria dos TOQs, há indícios de ocorrência da TEM nesses tumores. A alta intensidade de marcação do Slug nos TOQs sugere que esta proteína é provavelmente o fator de transcrição principal envolvido na indução de TEM nos TOQs. / The epithelial-mesenchymal transition (EMT) is the process where cells lose their epithelial features and acquire properties of typical mesenchymal cells. The dissociation of tumor cells due to changes in cell-cell adhesion is one of the key principles of tumor invasion and EMT. The keratocyst odontogenic tumor (KOT) has as main features its aggressive clinical behavior and high recurrence rates. Knowledge of the molecular features of EMT in KOT can provide useful markers to aid in the prognosis and individualized therapeutic management of this odontogenic tumor. The present study examined the immunoreactivity of proteins E-cadherin, Ncadherin, Snail, Slug and vimentin, as they are involved in the process of EMT, in cases of KOT compared with radicular cysts (RCs) and dental follicles (DFs) to provide better perspectives in understanding the aggressive behavior of these tumors. Thirty-two cases of KOTs, 15 RCs and 08 DFs were used for immunohistochemistry. The analysis of immunoreactivity profile in KOTs showed preserved expression of E-cadherin in most cases, and N-cadherin showed a gain of expression in tumor epithelium relative to stroma which has been positively correlated with the expression of Slug in epithelium, and this in turn with positive expression of Snail. In the stroma of KOTs, N-cadherin correlated positively with Slug and vimentin, and this with Snail in the epithelium. When comparing the three groups, the immunoreactivity of the proteins was markedly influenced by inflammation. Increased expression of N-cadherin in the epithelium and stroma, Slug in the epithelium and vimentin in the stroma were associated with the location in the jaw. The majority of patients who had tumors in posterior location (either alone or in combination with the anterior) showed preserved expression of E-cadherin. These proteins probably play different roles in mediating local invasiveness in KOTs. Despite the expression of E-cadherin being preserved in most KOTs, there is evidence of the occurrence of EMT in these tumors. The high intensity staining of Slug in KOTs suggests that this protein is probably the main transcription factor involved in induction of MET in KOTs.