In normal pregnant women, reactivation of Epstein-Barr virus (EBV) frequently occurs. Cellular immune response is apparently supperessed, but the antibodies cross the placenta and protect the infant against primary infection for many months. The Epstein¡VBarr virus (EBV) encoded latent membrane protein 1 (LMP1) which plays a crucial role in the long-term persistence of this virus within the cells of the immune system. Not only is this protein critical for the transformation of resting B cells by EBV, it also displays pleiotropic effects on various cellular proteins expressed in the host cell. These include upregulation of express- ion of B cell activation antigens, adhesion molecules, and various components of the antigen processing pathway. Here we test 45 human placenta samples for LMP1 of Epstein¡VBarr virus (EBV) by RT-PCR and immunohistochemistry. Eight of forty five (18%) are positive , and thirty seven of forty five (82%) are negative for LMP expression. It is noticed that all LMP protein expression were shown on the maternal side but not on the fetal side. The placenta may serve as a protection barrier for fetus against Epstein-Barr virus infection.

Approximately 10% of all gastric cancer cases worldwide are associated with Epstein-Barr virus (EBV) infection. This subgroup differs from non-infected equivalents through a distinct mutational and epigenetic signature, which is crucial for the establishment and maintenance of the viral latent state. Disruption of the latent state and subsequent induction of the lytic cycle, called reactivation, can be used as a therapeutic strategy for this cancer type through either combination with antiviral agents or by induction of an EBV-specific immune response. In this study, epigenetic inhibitors were tested for their potential to reactivate EBV using a novel screening method based on the expression of Zebra, a key regulator of EBV reactivation. Histone deacetylase inhibitors (HDACis), more specifically benzamide-based HDACis, were the most potent group of reactivating agents in this screen. Those HDACis induced the expression of lytic cycle genes as well as targeted cell killing in combination with antiviral agents. Moreover, the reactivation through those agents was sufficient to activate cytotoxic T-cells and thereby ensured a supportive role of the immune system in targeted cell killing. In an additional screen, topoisomerase inhibitors and other chemotherapeutic agents showed synergistic effects on Zebra expression together with HDACis, which was linked to the induction of p53 expression through those compounds. While p53 is known to be involved in the expression of Zebra, the viral DNA processivity factor Ea-D and the viral DNA binding protein DNBI were identified as a potential novel binding protein of p53 and could thus point towards a novel role of p53 in EBV lytic replication. Taken together, this study identifies potential novel therapeutic compound combinations for the treatment of EBV-associated epithelial cancers that could be translated into the clinic after further assessment.

archives@tulane.edu / A-to-I RNA editing, catalyzed by a family of enzymes called adenosine deaminases acting on RNA (ADARs), brings broad significance in various biological processes. To date, the roles of ADARs and its associated RNA editing in Epstein-Barr virus (EBV)’s life cycle and pathogenesis are still largely unknown. To fill this significant knowledge gap, we utilized our well-established next-generation RNA sequencing-based computational approaches and traditional molecular biology methodologies to elucidate the triangle relationship between ADARs, RNA-editing, and EBV infection. The expression of ADARs was first evaluated in a cohort of EBV-associated lymphoma cells. A constitutive expression of ADAR1, the predominant form of ADARs, was observed in the examined cells. In synchronous EBV reactivation cell models, we found that EBV reactivation led to a decreased expression of ADAR1 as well as a global suppression of A-to-I RNA editing. Further, we found that expression of the key viral trans-activator Zta inhibited ADAR1 expression in EBV-associated lymphoma cells. Analyses of the ADARs-mediated RNA editing events revealed novel editing sites on viral lytic transcripts. Knockdown of ADAR1 led to a global suppression of RNA-editing accompanied by a more robust EBV reactivation. Meanwhile, the enhanced expression of ADAR1 inhibited Zta’s expression and transactivation function. Together, our findings reveal a novel mechanism controlling the balance of EBV life cycle, in which ADAR1 and associated RNA editing events help maintain the viral latency by silencing Zta; whereas a bona fide lytic signal leads to high-level Zta expression by inhibiting ADAR1 and ADARs-mediated RNA editing. / 1 / Yi Yu

Les lymphocytes B mémoires circulants incluant ceux infectés par EBV de façon latente retournent périodiquement vers les territoires lymphoïdes secondaires où ils subissent une différenciation en cellules productrices d'immunoglobulines permettant au virus d'initier la réplication virale. Cependant, le suivi et la gestion de la réactivation de EBV et son association avec des néoplasies lymphoïdes chez les sujets infectés par le VIH restent un sujet de controverse et nécessite une meilleure compréhension des mécanismes impliqués. Dans cette étude, nous avons proposé de nouveaux outils biologiques pour la quantification de l'ADN EBV permettant la discrimination entre le réservoir latent et le cycle lytique du virus. Nous avons montré que la taille de ces réservoirs est étroitement associée à une activation polyclonale plus ou moins importante des cellules B. Nous avons également observé une association entre les marqueurs d'activation immunitaire et de réactivation de EBV avec la survenue de lymphome B. En outre, nous avons décrit l'évolution de gammapathies monoclonales chez des sujets infectés par le VIH sous traitement antirétroviral, et la persistante du pic monoclonal d'immunoglobulines était associée à des charges virales EBV plus élevés. Par conséquent, l'activation des lymphocytes B et subséquemment la réactivation EBV joueraient vraisemblablement les rôles principaux dans la survenue de tumeurs bénignes ou malignes des lymphocytes B au cours de l'infection VIH. / It is assumed that circulating memory B cells including those latently infected by EBV return periodically to lymphoid nodes where they are stimulates and undergo differentiation into immunoglobulin-producing cells allowing the virus to initiate viral replication. However, the monitoring and the management of EBV reactivation and it association with lymphoid malignancies in HIV-infected patients are still being controversies and need a better understanding of the probable mechanisms involved. In this study, we proposed novel biological tools for EBV DNA quantification allowing discriminating latent and lytic reservoir. We showed that the EBV reservoir levels are closely associated with the polyclonal B-cell activation. We also observed an association between immune activation and EBV reactivation markers with the occurrence of B-cell lymphoma. Moreover, we described a long term evolution of monoclonal gammapathies in HIV-infected subjects and the persistence of the immunoglobulis monoclonal pike was found to be associated with higher EBV reservoir levels. Therefore, the B-cell activation and subsequently EBV reactivation likely play the main roles on the occurrence of B lymphocytes malignancies during HIV infection.

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Made available in DSpace on 2014-06-12T18:07:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo786_1.pdf: 1734258 bytes, checksum: 4c36030a28c129a7be1b991361c6a5d5 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O Linfoma de Hodgkin (LH) é uma neoplasia maligna caracterizada histologicamente pela presença de células denominadas Hodgkin-Reed-Sternberg (H-RS) no microambiente tumoral. A interleucina-10 (IL-10) é uma citocina imunoregulatória que exerce função linfoproliferativa nas células B. A regulação do produto do IL-10 pode ser controlado por diferentes genótipos no promotor do gene ou por transcritos do vírus Epstein-Barr (EBV) em células B infectadas, já que o EBV possui a capacidade de produzir uma IL-10 (vIL-10) similar a IL-10 humana (hIL-10). Os polimorfismos de base única (SNP) na posição proximal do promotor do gene IL-10 já foram relacionados com diversas doenças, entre elas o LH em algumas populações. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar a existência de associação entre os polimorfismos proximais do IL-10 com LH e a possível associação com EBV. O estudo foi do tipo analítico com caso-controle, consistindo de 64 pacientes (2-18 anos) com LH, atendidos no CEONPE/HUOC e 131 indivíduos saudáveis compondo o grupo de controles. A investigação dos SNPs nas posições - 1082 e -592, e de dos seus possíveis haplótipos, foi realizada por PCR alelo específica (AS-PCR). A análise do EBV foi realizada por hibridização in situ fluorescente da detecção do RNA do vírus Epstein-Barr (EBER-ISH). Indivíduos com genótipo -1082GG apresentaram 4,5 vezes menos chance de desenvolver LH que os portadores dos demais genótipos (OR = 4,45, IC95% 1,5-13,3 p = 0,007). Indivíduos com o genótipo -592CC apresentaram cerca de cinco vezes menos chance de desenvolver o LH que portadores dos demais genótipos (OR = 5,27, IC95% = 1,53- 18,1 p = 0,007). Em relação aos haplótipos, portadores do haplótipo ACC apresentaram três vezes mais chances de desenvolver LH, em comparação aos demais haplótipos (OR= 3,28 IC95% 1,18 9,07 p= 0,03). Indivíduos com os haplótipos combinados ATA/ATA e GCC/GCC apresentaram menos chances de desenvolvimento do LH, em comparação às demais combinações (OR= 0,19 IC 95% 0,05 0,65 p= 0,007 e OR= 0,225 IC 95% 0,07 0,66 p= 0,007). A presença do EBV foi verificada em 36,8% das amostras analisadas. A amostra de casos de EBV apresentou maior freqüência do haplótipo ACC nos indivíduos EBV +; Já nos indivíduos EBV-, o haplótipo ATA apresentou maior freqüência; Em conclusão, as variantes genéticas das posições -1082 e -592 e os haplótipos sugerem associação ao risco de desenvolvimento de LH nos indivíduos do grupo estudado; A associação com o EBV não pode ser inferida nesta análise

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:29:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1145_1.pdf: 2388404 bytes, checksum: d5d1c640b2454e7af3e22d1b54b5df68 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O vírus Epstein Barr (EBV) apresenta ampla distribuição mundial, estimando-se que aproximadamente 90% da população está infectada. É agente etiológico da mononucleose infecciosa e está também associado a várias doenças linfoproliferativas. Tem sido relacionado ainda como fator desencadeador de algumas doenças auto-imunes, como o lúpus eritematoso sistêmico (LES), que envolve múltiplos órgãos, com variadas manifestações clínicas. O papel etiológico do EBV no LES ainda é pouco elucidado, mas há evidências de um mimetismo molecular do vírus com os auto-antígenos típicos desta síndrome, que induziria a produção dos auto-anticorpos. Muitos autores demonstraram associação entre EBV e LES através de métodos sorológicos. No entanto, há poucos estudos que pesquisaram o DNA viral, e os resultados são controversos. O objetivo deste estudo foi verificar a associação entre o LES e a infecção pelo EBV, mensurada pela detecção do EBV-DNA no sangue e do anti-EBV IgG no plasma, num estudo caso-controle. Foram recrutados 116 indivíduos atendidos no Ambulatório de Reumatologia do Hospital das Clínicas/UFPE, de dezembro de 2009 a maio de 2010. O grupo de casos foi composto por 59 pacientes com LES, os quais preencheram os critérios estabelecidos pelo Colégio Americano de Reumatologia (1997). O grupo controle foi constituído de 57 indivíduos sem LES e que não apresentavam outras doenças auto-imunes. O protocolo do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa do Hospital Agamenon Magalhães, e o termo de consentimento livre e esclarecido foi obtido de todos pacientes. Foi realizada PCR in house para detecção do EBV-DNA em células mononucleares do sangue periférico (PBMC), e teste de avidez do anti-EBV IgG. Os dados da pesquisa foram analisados com o programa Epi-Info versão 6.04. O EBV-DNA não foi detectado nas amostras analisadas e o anti-EBV IgG foi reagente em 100% dos casos e controles, com alto índice de avidez, indicando infecção passada pelo vírus. Portanto, neste estudo não foi demonstrada a associação entre a infecção pelo EBV e o LES, tanto por métodos sorológicos como pela PCR

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:01:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo953_1.pdf: 2093985 bytes, checksum: 8b4450c55f586a38ac608ece3ee4fb50 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Os vírus Epstein- Barr (EBV) e Citomegalovirus (CMV) apresentam ampla distribuição na população e são responsáveis pelo desenvolvimento de várias doenças. A saliva pode conter uma grande quantidade desses herpes vírus e é um veículo comum de transmissão horizontal entre indivíduos próximos. O objetivo do presente estudo foi determinar a detecção de DNA do EBV e do CMV na saliva de indivíduos infectados pelo HIV ou não e em seus familiares, avaliando papel exercido pela imunodeficiência na transmissão salivar. O grupo de estudo foi constituído por 240 indivíduos. Grupo 1: 40 indivíduos infectados pelo HIV; grupo 2: 40 indivíduos não-HIV; grupo 3: 2 parentes de cada indivíduo do grupo 1 (n=80), não parceiros-sexuais, residentes no mesmo domicílio; grupo 4: 2 parentes de cada indivíduo do grupo 2 (n=80), não parceiros-sexuais, residentes no mesmo domicílio. Foi coletada saliva não estimulada de cada participante e o DNA foi extraído usando o Kit Geneclean® II (BIO 101, La Jolla, CA, USA). A amplificação do DNA do EBV e do CMV foi realizada usando um protocolo de nested PCR. O DNA do EBV e do CMV foi detectado respectivamente em 7/40 (17,5%) e 5/40 (12,5%) indivíduos do grupo 1; 8/40 (20%) e 3/40 (7,5%) indivíduos do grupo 2; 11/80 (13,8%) e 2/80 (2,5%) familiares do grupo 3 e 8/80 (10%) e 1/80 (1,3%) familiares do grupo 4. Entre os 7 indivíduos HIV/EBV co-infectados, 5 (71,4%) tinham um parente também infectado pelo EBV (OR= 11,25, CI [1,75- 72,5], p= 0,011). Com relação ao grupo 2, entre os 8 indivíduos não HIV e infectados pelo EBV, 3 (37,5%) tinham um parente também positivo para EBV (p= 0,320). Entre os 5 indivíduos HIV/CMV co-infectados, nenhum tinha um parente infectado pelo CMV (p= 1,00). Com relação ao grupo 2, entre os 3 indivíduos não HIV e infectados pelo CMV, 1 (33,3%) tinha um parente também infectado pelo CMV (p= 0.075). Baseado nos resultados do presente estudo, o DNA dos vírus EBV e CMV é freqüentemente amplificado na saliva. Os indivíduos infectados pelo HIV e os controles saudáveis apresentaram uma freqüência de detecção de DNA viral similar. Parentes de indivíduos HIV/EBV coinfectados apresentam um risco maior de adquirir EBV através de contato não sexual

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