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Epstein-Barr virus, or EBV, is a human herpesvirus that is nearly universally present in most of the human population. The infection rate in adults is quickly approaching an astonishing 95% worldwide. While the most common clinical manifestation of EBV infection is infectious mononucleosis, there are multiple malignancies strongly associated with the virus, such as nasopharyngeal carcinoma (NPC). A contemporary problem in public health is the scarcity of markers to predict the development of EBV-associated malignancies, which prevents a possible cure or a suitable treatment. Of the approximately 85 proteins that the virus expresses, EBV serological tests rely on detection of antibodies against only three antigens: BFRF3 (viral capsid antigen or VCA), BMRF1 (early antigen or EA), and BKRF1 (nuclear antigen or NA). Antibodies against two of these antigens, VCA and NA, are produced by almost all EBV carriers for their entire lifetime, and so detection of these antibodies can make it difficult to differentiate between non-cancerous EBV carriers and EBV-associated cancer patients. To address this problem, the project aimed to identify a set of markers to diagnose NPC and treat it. To test this, 3 EBV genes were cloned with a 3X FLAG-tag into a mammalian expression vector, then expressed and detected by immunoblotting with a monoclonal FLAG antibody and each of the 9 human serum samples used in this study. Our results were generally inconclusive, and further studies are warranted to explore possible diagnostic and prognostic biomarkers.

En pathologie tumorale, l’étude du micro-environnement tumoral doit prendre en compte différents modes de communication cellulaire : contacts directs entre membranes plasmiques, émission et réception de cytokines et enfin émission et internalisation d’objets biologiques plus complexes comme les microvésicules et les exosomes qui peuvent être assimilés à de véritables organites extra-cellulaires. Le virus d’Epstein-Barr (EBV) participe à l’oncogenèse de plusieurs affections malignes humaines d’origine épithéliale (carcinomes nasopharyngés ou NPC) ou lymphocytaire (lymphomes post-transplantation). Dans ces tumeurs, les cellules malignes qui sont infectées de façon latente par EBV libèrent des exosomes et des microvésicules qui contiennent des protéines et des acides nucléiques d’origine virale. L’étude de ces éléments doit permettre de mieux comprendre les interactions hôte-tumeur et de mettre en évidence de nouveaux biomarqueurs utiles pour le diagnostic précoce et la surveillance de la maladie sous traitement. Le premier objectif de ma thèse consistait à étudier la sécrétion par les cellules malignes d’une famille de microARN viraux appelés miR-BART et leur diffusion dans le sang périphérique chez les sujets porteurs de tumeurs associées à EBV. Pour la première fois j’ai mis en évidence une sécrétion d’exosomes porteurs de miR-BART par les cellules de NPC en culture in vitro. J’ai également montré que les miR-BART, particulièrement miR-BART7, sont détectables dans le plasma de sujets porteurs de NPC. Contrairement à ce qui se passe in vitro les miR-BART plasmatiques ne sont pas transportés par des exosomes. Des données obtenues chez la souris montrent qu’ils peuvent être transportés par des complexes extra-cellulaires que l’on peut précipiter au moyen d’anticorps anti-ago2. Nous cherchons à confirmer ces données sur des échantillons de plasma provenant de patients porteurs de NPC. Ces données pourront guider à l’avenir l’utilisation des miR-BART circulants comme source de biomarqueurs.Le deuxième volet de ma thèse avait pour but d’étudier les modifications du protéome des exosomes induites par une oncoprotéine du virus d’Epstein-Barr appelée LMP1 (latent membrane protein 1). J’ai montré que la LMP1, lorsqu’elle est exprimée dans les cellules lymphocytaires ou épithéliales, infectées ou non par EBV, induit la libération de la protéine PARP1 dans le milieu extra-cellulaire. Cette PARP1 extra-cellulaire n’est pas associée aux exosomes ni aux microvésicules mais à des nano-objets non-vésiculaires contenant notamment des histones et de l’ADN. Nous avons désignés ces objets sous le terme de complexes ADN-protéines extra-cellulaires. Nous ne savons presque rien de la biogenèse de ces complexes ; nous pensons qu’ils ne proviennent pas uniquement de cellules en apoptose. En revanche, des expériences préliminaires suggèrent que la présence de PARP1 dans ces complexes coïncide avec une activation permanente de la PARP1 induite dans les cellules productrices par l’expression de l’oncoprotéine LMP1. Cette hypothèse est en cours de vérification grâce à des expériences menées sur des lignées cellulaires exprimant différentes formes sauvages ou mutées de la LMP1. Ces données sur l’activation de la PARP1 et sur sa sécrétion induite par la LMP1 auront des retombées intéressantes pour notre compréhension des mécanismes d’oncogenèse et d’auto-immunité liés à l’infection par le virus d’Epstein-Barr. / The study of tumoral microenvironment should take into account different modes of intercellular communications: direct contacts between extracellular membranes, secretion and uptake of cytokines and finally emission and uptake of complex biological objects like exosomes and microvesicles.Epstein-Barr virus (EBV) is associated with several human malignancies of epithelial origin (Nasopharyngeal carcinoma or NPC) or of lymphoïd origin (post-transplant lymphoproliferative disorder or PTLD). In these tumors, malignant cells are latently infected by EBV and release exosomes and microvesicles containing viral nucleic acids and proteins. Studying them will enable a better understanding of tumor-host interactions and the discovery of new markers which could be useful for early diagnostic and the follow-up of the disease under treatment.The first aim of this thesis was to study the release by malignant cells of EBV microRNAs belonging to the BART family and their blood diffusion in patients bearing NPC tumors. For the first time, I’ve shown that exosomes released by NPC cells in vitro contain EBV miR-BART microRNAs. Moreover, ebv-miR-BART7 can be detected in the plasma of NPC patients. Unlike what is observed in vitro, circulating BART microRNAs are not carried by exosomes. Recent data from studies in xenografted mice show that they are carried by extra-cellular complexes which can be immunoprecipitated by anti-Ago2 antibodies. We are currently trying to confirm these data in plasma from NPC patients. This work will ease the use of miR-BARTs as potential biomarkers.The second aim was to study the proteome modifications induced by the EBV Latent Membrane Protein 1 protein (LMP1). I’ve shown that LMP1 expression in lymphoid or epithelial cells infected or not by EBV induces the release of PARP1 in the extra-cellular space. This extra-cellular PARP1 is not carried by exosomes or microvesicles but is embedded in non-vesicular nano-objects containing histones and DNA. We have called these objects “DNA-proteins complexes”. We don’t know how they are produced and released by cells. We think that they are not only secreted by apoptotic cells. Recent data show that this release of extra-cellular PARP1 is associated with PARP1 activation by LMP1 oncoprotein expression. We are trying to prove this hypothesis using cell lines expressing wild type or mutated LMP1. The release and the activation of PARP1 induced by LMP1 expression will help to understand the mechanisms of EBV-associated oncogenesis and auto-immunity.

The Epstein–Barr Virus (EBV) principal oncoprotein Latent Membrane Protein 1 (LMP1) is a member of the Tumor Necrosis Factor Receptor (TNFR) superfamily with constitutive activity. LMP1 shares many features with Pathogen Recognition Receptors (PRRs), including the use of TRAFs, adaptors, and kinase cascades, for signal transduction leading to the activation of NFκB, AP1, and Akt, as well as a subset of IRFs and likely the master antioxidative transcription factor NRF2, which we have gradually added to the list. In recent years, we have discovered the Linear UBiquitin Assembly Complex (LUBAC), the adaptor protein LIMD1, and the ubiquitin sensor and signaling hub p62, as novel components of LMP1 signalosome. Functionally, LMP1 is a pleiotropic factor that reprograms, balances, and perturbs a large spectrum of cellular mechanisms, including the ubiquitin machinery, metabolism, epigenetics, DNA damage response, extracellular vehicles, immune defenses, and telomere elongation, to promote oncogenic transformation, cell proliferation and survival, anchorage‐independent cell growth, angiogenesis, and metastasis and invasion, as well as the development of the tumor microenvironment. We have recently shown that LMP1 induces p62‐mediated selective autophagy in EBV latency, at least by contributing to the induction of p62 expression, and Reactive Oxygen Species (ROS) production. We have also been collecting evidence supporting the hypothesis that LMP1 activates the Keap1‐NRF2 pathway, which serves as the key antioxidative defense mechanism. Last but not least, our preliminary data shows that LMP1 is associated with the deregulation of cGAS‐STING DNA sensing pathway in EBV latency. A comprehensive understanding of the LMP1 signaling landscape is essential for identifying potential targets for the development of novel strategies towards targeted therapeutic applications.

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L’infection chronique est à l’origine de 15-20% des cancers dans le monde. Dans la plupart des cas, les infections sont éliminées par le système immunitaire, sans incidence importante sur les hôtes infectés. Toutefois, les oncovirus peuvent échapper au système immunitaire et induire une transformation cellulaire, ce qui constitue deux éléments clés de la cancérogenèse associée aux virus. L’EBV est un herpesvirus ubiquitaire à ADN double brin qui infecte plus de 90% de la population, avec un tropisme spécifique pour les cellules B. Après primo-infection, le virus persiste dans l’hôte pour toujours. L’EBV est responsable de la mononucléose infectieuse bénigne et est associé à plusieurs tumeurs malignes telles que le lymphome de Burkitt, le lymphome de Hodgkin et certaines formes de cancers gastriques. Les récepteurs Toll-like (TLRs) mammaires jouent un rôle important dans la défense de l’hôte lors de l’infection pathogène en régulant et reliant les réponses immunitaires innées et adaptatives. Dans cette étude, nous avons montré que l’EBV pouvait altérer la régulation et l’expression de TLR9, une des molécules effectrices majeures de la réponse immunitaire innée. L’infection par l’EBV des lymphocytes B primaires humains a entraîné l’inhibition de la fonctionnalité de TLR9. Nous avons observé que l’EBV exerçait sa fonction inhibitrice en diminuant les niveaux d’ARNm et de la protéine du récepteur TLR9. De plus, nous avons établi que LMP1, oncoprotéine majeure de l’EBV, inhibait fortement la transcription de TLR9. La sur-expression de LMP1 par transfection transitoire ou transduction des cellules B réduit l’activité du promoteur de TLR9, l’ARNm et les niveaux protéiques. Bloquer la voie de signalisation de NF-κB induite par la signalisation de LMP1 permet de récupérer l’activité du promoteur de TLR9 et l’expression de la protéine. L’ensemble de nos résultats mettent en évidence un nouveau mécanisme utilisé par l’EBV pour supprimer la réponse immunitaire de l’hôte en dérégulant la transcription de TLR9 via l’activation de NF-κB par LMP1 / Chronic infection causes about 15-20% of cancer worldwide. In most cases, infections are cleared by the immune system with no dramatic consequence for the infected hosts. However, oncoviruses can escape the immune system and induce cellular transformation, two key events in cancer mediated by viruses. EBV is a ubiquitous double-stranded DNA herpesvirus, which infects more than 90% of the population with a specific tropism to B-cells. Upon primo-infection the virus persists in the host for lifetime. EBV is responsible of the benign infectious mononucleosis and is associated to several malignancies such as the Burkitt lymphoma, Hodgkin’s lymphoma and some forms of gastric cancers. Mammalian Toll-like receptors (TLRs) play a key role in host defense during pathogen infection by regulating and linking the innate and adaptive immune responses. TLRs belong to a family of receptors that recognize pathogen-associated molecular patterns and are expressed on immune and non-immune cells, endowing them with the capacity to sense pathogen-derived products and to alert the immune system . In this study we show that EBV can alter the regulation and expression of TLR9, one of the key effector molecules of the innate immune response. EBV infection of human primary B cells resulted in the inhibition of TLR9 functionality. Stimulation of TLR9 on primary B cells led to the production of IL-6, TNFα and IgG, which was inhibited in cells infected with EBV. We observed that EBV exerts its inhibitory function by decreasing TLR9 mRNA and protein levels. This event was observed twelve hours post EBV infection of primary cells as well as in an immortalized B cell line, demonstrating the specific role of the virus to turn down TLR9 levels. In addition, we determined that the EBV oncoprotein LMP1 is a strong inhibitor of TLR9 transcription. Over expression of LMP1 by transient transfection or transduction of B cells, reduced TLR9 promoter activity, mRNA and protein levels. Blocking the NF-κB pathway induced by LMP1 signaling, recovered TLR9 promoter activity and protein expression. Moreover LMP1 mutants deficient in activating the NF-κB pathway inversely restored TLR9 transcription. Taken together, our study reveals a novel mechanism used by EBV to suppress the host immune response by deregulating the TLR9 transcript through LMP1-mediated NF-κB activation

L'objectif de notre travail est de mieux comprendre le rôle de LMP1 et de ses variants délétés de 30 ou 69pb en C-terminal dans le développement du lymphome de Hodgkin (LH) chez les patients VIH+. Le séquençage de LMP1 dans des échantillons de sang total et de cellules oropharyngées de patients de la cohorte Lymphovir (LH/VIH+) et de deux populations contrôles (VIH+ et LH) a permis d'étudier la fréquence des variants de LMP1 in vivo. Ce travail a révélé que le variant LMP1-del30 semble plus fréquent chez les patients avec une immunosuppression modérée, durant laquelle l'incidence des LH est élevée. Par ailleurs, nous avons établi un modèle cellulaire dérivé de LH, exprimant LMP1 de façon inductible, montrant des différences d'expression des cytokines et de progression du cycle cellulaire en fonction des variants de LMP1. Notre travail supporte l'hypothèse d'une plus grande oncogénicité du variant LMP1-del30 et suggère qu'il pourrait être un facteur de risque de développer un LH. / The aim of this work was to improve our understanding of the role of LMP1 and its 30bp and 69bp deletion variants in the development of Hodgkin's lymphoma (HL) among HIV+ people. Blood and saliva samples were collected from HL/HIV+ patients recruited in the Lymphovir cohort, as well as in two control populations (HIV+ and HL). Next-Generation Sequencing allowed us to determine the frequency of LMP1 variants in these samples. This work showed that the del30-LMP1 variant seems to be more frequent in patients with a moderate immunosuppression, associated with a higher HL incidence. Besides, we established three HL-derived cell lines expressing WT-LMP1 or its variants and showed differences of cytokine expression and progression of the cell cycle depending on the variant. Our work supports the hypothesis of a greater oncogenicity of del30-LMP1 variant and suggests that it could be a risk factor for the development of HL.

Il a récemment été rapporté que l'interaction physiologique entre la protéine nucléaire SMRT et le facteur de transcription cellulaire STAT3 pouvait être rompue par la protéine EBNA2 du virus Epstein-Barr (EBV). La liaison de SMRT à STAT3 diminue son activité de transcription. EBNA2 libère SMRT de ce complexe augmentant ainsi la transcription des gènes régulés par STAT3. STAT3 régule de nombreux effets immunodépresseurs mais aussi anti-prolifératifs et anti-apoptotiques dans l'organisme hôte, et pourrait jouer un rôle important dans la stratégie de survie du virus Epstein-Barr. EBNA2 et STAT3 sont tous deux intrinsèquement désordonnés (IDPs) comme un tiers de toutes les protéines eucaryotes et 70% des protéines associées aux cancers. Toutefois, malgré leur abondance, notre compréhension de leurs fonctions reste limitée notamment à cause de la difficulté à les produire en quantités suffisantes pour réaliser des études structurales et biophysiques. Afin de surmonter cette difficulté, la technologie ESPRIT a été utilisée pour générer des fragments de SMRT et EBNA2 solubles et stables. Ces fragments se répartissaient sur une grande partie des gènes d'EBNA2 et SMRT pour lesquels les protéines exprimées étaient de tailles compatibles avec des expériences de RMN. Ceci a permis de réaliser des études d'interaction avec STAT3. Les deux protéines étant majoritairement intrinsèquement désordonnées, toutes les données d'interaction ont été analysées pour EBNA2 et SMRT avec une attention particulière sur les propriétés de protéines désordonnées. Des fragments des deux protéines, EBNA2 et SMRT, ont été soumis à des tests d'interaction avec le dimère de STAT3 en utilisant des méthodes biophysiques variées. Ainsi la cinétique de liaison et la séquence d'acides aminés impliqués dans l'interaction ont pu être déterminées. Etant donné son importance biologique et son interaction de haute affinité, l'accent a été porté sur l'interaction EBNA2-SMRT. Ainsi des résultats préliminaires provenant d'investigations en cellules de mammifères ont pu être obtenus. En outre l'interaction entre EBNA2 et d'autres protéines cellulaires a été brièvement étudiée. Les résultats obtenus ont pour objectif d'améliorer notre compréhension de la stratégie avec laquelle EBV parvient, avec succès, à persister toute une vie dans l'organisme hôte. / It was recently reported that the physiological interaction between the nuclear protein SMRT and the cellular transcription factor STAT3 could be disrupted by the Epstein-Barr-virus protein EBNA2. Binding of SMRT to STAT3 decreases its transcriptional activity. EBNA2 releases SMRT from this complex and therefore enhances the transcription of both host and viral STAT3 regulated genes. STAT3 regulates several immunosuppressive as well as pro-proliferative and anti-apoptotic effects in the host organism and so may have importance for the viral survival strategy of Epstein-Barr-virus. Both EBNA2 and SMRT are intrinsically disordered proteins (IDPs) in common with about one third of all eukaryotic proteins and 70% of cancer-related. Despite their abundance, our understanding of how they function is limited, in part due to difficulties in production of stable samples in the large quantities necessary for structural and biophysical studies. The EPRIT technology was used to overcome these problems and generate well-behaving and -expressing EBNA2 and SMRT fragments. These fragments covered large parts of the EBNA2 and SMRT genes and were in a suitable size for NMR experiments. This enabled interaction studies of these proteins with STAT3. As both proteins are mainly intrinsically disordered all interaction data were analysed with attention to the disordered properties of both proteins. In order to complement the interaction data all fragments used for the interaction studies were as well characterized as IDPs using biochemical and biophysical methods. Fragments of both proteins, EBNA2 and SMRT together with the STAT3 dimer were subjected to binding analysis using various biophysical methods. The kinetics of the binding could be determined and the binding regions could be narrowed down to the amino acid level. Because of its biological significance and higher affinity interaction the EBNA2-STAT3 part was prioritized and first preliminary results investigating the interaction in mammalian cells could be obtained. Also, the interaction between EBNA2 and other cellular proteins was studied briefly. The obtained results aim to improve our understanding of how EBV succeeds to persist lifelong in the host organism.

Le cancer représente la deuxième cause de mortalité dans les pays industrialisés. Il a été démontré que 20% des cancers sont d'origine infectieuse. Nous nous sommes intéressés à deux oncovirus HPV (virus du papillome humain) et EBV (Epstein-Barr Virus) responsable du cancer de l'utérus et de divers lymphome B réciproquement. Les événements clés pour le développement d'un cancer viro-induit sont la persistance du virus via la dérégulation des réponses immunitaires et l'induction d'une instabilité gé¬nomique via une dérégulation du cycle cellulaire. Nous avons donc cherché si EBV était capable d'altérer la réponse immunitaire innée. Nous avons montré que EBV était capable d'inhiber TLR9 un acteur clef de la réponse immunitaire innée. Comme TLR9 est inhibé dans un certain nombre de cancers, nous nous sommes demandé si ce récepteur pouvait également, avoir un rôle dans l'oncogenèse. Nous avons montré que la réexpression de TLR9 induisait un ralentissement transitoire de la prolifération cellulaire. Nous nous sommes par la suite intéressés aux mécanismes de dérégulation du cycle cellulaire induits par E6 une oncoprotéine de HPV16. Nous avons trouvé un nouveau mécanisme d'inhibition de l'inhibiteur du cycle cellulaire, p21. HPV16E6 se lie et inhibe les fonctions de du facteur de transcription p150Sal2, ce qui induit une inhibition de p21 dans un contexte p53 indépendant / Cancer represents the second most common cause of death in industrialized countries. Epidemiological and biological studies have now conclusively proved that a variety of infectious agents constitute one of the main causes of cancer worldwide. It has been pointed out that more than 20% of cancers are from infectious origin. HPV high-risk mucosal types are associated to 98% of all cervical cancer cases. Regarding EBV, over 90% of the world’s population is infected and can give rise to malignancies such as Burkitt lymphoma or Hodgkin disease.(Young and Rickinson 2004) Keys features for oncoviruses to induce cancer are firstly to per¬sist by dampening host immune responses and to induce genomic instability in the host by altering the regulation of the cell cycle leading the infected cells to an uncontrolled proliferation. The purpose of this thesis was to find new mechanisms by which EBV and HPV can promote carcinogenesis. We have shown that EBV can alter the regulation and expression of TLRs, the key effectors molecules of the innate immune response. EBV infection of human primary B cells resulted in the inhibition of TLR9 functionality. Our study described a mechanism used by EBV to suppress the host immune response by deregulating the TLR9 transcript through LMP1-mediated NF-κB activation. As TLR was found deregulated in many cancers, we hypothesized that TLR9 may also a direct role in the process of cell cycle control and that loss of its expression may lead to transformation of the cell. Our overall objective here was to study the role of TLR9 in suppressing the events that initiates transformation of epithelial cells in the setting of cervical cancer (virus-associated) and in head and neck cancer (non–virus-associated). A third project dealt with the mechanism cell cycle deregulation by the oncoprotein E6 which expressed during infection with HPV16. We reported that HPV16E6 targets the cellular factor p150Sal2, which positively regulates p21 transcription. HPV16E6 associates with p150Sal2, inducing its functional inhibition by preventing its binding to cis elements on the p21 promoter. These data described a novel mechanism by which HPV16E6 induces cell cycle deregulation with a p53-independent pathway preventing G1/S arrest and allowing cellular proliferation and efficient viral DNA replication

Le virus Epstein-Barr (EBV), un membre de la famille des Herpesviridae, est associé à la mononucléose infectieuse et à différents types de cancers comme le lymphome de Burkitt, les lymphomes post-transplantation ou encore le carcinome du nasopharynx. Ce virus est capable de persister à vie dans l’organisme en combinant des phases de latence et des phases de multiplication active. L’autophagie est un processus cellulaire primordial qui conduit à la dégradation et au recyclage de protéines à longue durée de vie et d’organites endommagés ou vieillissants. Elle contribue non seulement à maintenir l’homéostasie cellulaire mais aussi à s’adapter aux conditions environnementales. Souvent décrite comme un mécanisme antiviral, l’autophagie est contrecarrée par de nombreux virus. Elle peut également être détournée à leur profit. Il a été démontré que l’EBV est capable de stimuler l’autophagie durant le cycle lytique et d’échapper à la dégradation dans les autolysosomes en bloquant la maturation des autophagosomes. Le but de cette étude était d’identifier des protéines virales impliquées dans la modulation du processus autophagique par l’EBV. Nous avons démontré que l’expression ectopique de BHRF1, une protéine transmembranaire de 17kDa orthologue de la protéine cellulaire Bcl-2, module l’autophagie.Alors que Bcl-2 est une protéine anti-autophagique, nous avons établi par différentes approches que l’expression de BHRF1 conduit à l’accumulation d’autophagosomes. De plus, en utilisant une sonde tandem bifluorescente LC3 (mRFP-GFP-LC3) pour étudier le flux autophagique, nous avons montré que BHRF1 stimule l’autophagie. BHRF1 est engagée dans un complexe avec Beclin1, une protéine de la machinerie autophagique. Nous avons établi que BHRF1 est localisée au niveau des membranes mitochondriales et du réticulum endoplasmique (RE). L’expression de BHRF1 est associée à une réorganisation du réseau mitochondrial conduisant à la formation d’agrégats mitochondriaux juxta-nucléaires. Considérant l’importance des microtubules dans l’autophagie et le transport des mitochondries, nous avons exploré la dynamique des microtubules et les modifications post-traductionnelles de la tubuline après expression de BHRF1. Nous avons observé un recrutement d’acétyl-tubuline autour des mito-aggresomes associé à un réseau intact de microtubules. Nos résultats ont montré que le réseau de microtubules et l’hyper-acétylation de l’alpha-tubuline sont nécessaires pour former les mito-aggrésomes induits par BHRF1. Par différentes approches, nous avons démontré le rôle de BHRF1 dans l’induction de la mitophagie, un processus qui entraine la clairance des mitochondries endommagées par autophagie. Considérant le rôle des mitochondries endommagées dans l’induction de l’apoptose, nous suggérons que le rôle anti-apoptotique de BHRF1 pourrait être associé à l’induction de la mitophagie. / Epstein-Barr virus (EBV), a member of the Herpesviridae family, is associated with infectious mononucleosis and with several types of cancers including Burkitt’s lymphoma, post-transplant B-cell lymphoma disease and nasopharyngeal carcinoma. This virus is able to establish persistent infection and to undergo lytic cycle after reactivation. Autophagy is a critical cellular process leading to degradation of long lasting proteins and damaged or aging organelles. It contributes not only to maintain cell homeostasis but also to the adaptation to environmental stresses. Sometimes, autophagy is described as an antiviral mechanism, and viruses have evolved multiple strategies to subvert it or to hijack it to their own profit. It has been reported that EBV is able to stimulate autophagy during lytic cycle and then to escape degradation within autolysosomes by blocking autophagosomes maturation. The aim of my study was to identify EBV viral proteins involved in this modulation. Among the numerous viral proteins encoded by EBV, we have identified BHRF1, a transmembrane protein homolog of cellular protein Bcl-2, which was able to modulate autophagy by ectopic expression.Whereas Bcl-2 is an anti-autophagic protein, we demonstrated by different approaches that BHRF1 expression leads to accumulation of autophagosomes. Moreover, using tandem-fluorescent-tagged LC3 (mRFP-GFP-LC3), which is based on different pH stability of GFP and mRFP fluorescent proteins, for monitoring autophagic flux, we clearly confirmed that BHRF1 stimulates autophagy. By co-immunoprecipitation we demonstrated that BHRF1 is part of acomplex including Beclin1, a protein of the autophagic machinery. We characterized the subcellular localization of BHRF1, and report that BHRF1 is localized in mitochondria and ER membranes. Expression of BHRF1 leads to a complete reorganization of the mitochondria network to form juxtanuclear mitochondrial aggregates. Based on the importance of microtubules on both autophagy and mitochondria transport, we explored microtubule dynamics and tubulin post-translational modifications after BHRF1 expression. We observed a clustering of acetyl-tubulin around the mito-aggresomes associated with an intact microtubules network. Our results showed that the microtubules network and the hyperacetylation of alpha-tubulin were both required to form BHRF1-induced mito-aggresomes.By different approaches, we demonstrated the role of BHRF1 in the induction of mitophagy, a process which promotes the clearance of impaired mitochondria by autophagy. We hypothesized that the role of BHRF1 to protect against apoptosis and to promote cell survival is related to the induction of selective autophagy.