Les cancers de l’ovaire épithéliaux (EOC) sont parmi les affections néoplasiques gynécologiques les plus meurtrières dans les sociétés occidentales. Il n’existe actuellement aucune méthode de dépistage efficace de la maladie dans ses phases précoces de développement. Les travaux de ce doctorat furent articulés autour de deux objectifs relatifs à la recherche de biomarqueurs des EOC. Le premier fût le développement des méthodes d’analyses par spectrométrie de masse MALDI pour le criblage global des marqueurs des différents types d’EOC. Une procédure d’extraction des protéines de hautes masses moléculaires sur coupes de tissus à été créée afin de repousser les limites de sensibilité de la méthode. Ensuite, des analyses multivariées ont permis la comparaison des informations spectrales contenues entre des zones histologiques de natures différentes. Tous ces développements ont conduit à la validation au niveau histopathologique d’un biomarqueur de l’immunosuppression associée au cancer de l’ovaire, le fragment C-terminal de PA28 ou Reg-Alpha. Une autre problématique, la détermination de l’origine des EOC, a également pu être étudiée. Le deuxième objectif fût l’exploration de l’implication relative des différents membres des proprotéines convertases dans les EOC, des enzymes clés dans la maturation de nombreux acteurs moléculaires de la progression tumorale. Pour ce faire, des lignées cellulaires SKOV-3, Knock Down des différents membres de ces enzymes ont été créées pour l’étude de la redondance fonctionnelle de celles-ci. Il a alors été possible de déterminer, in cellulo et in vivo que PACE4 est particulièrement influente sur la progression du cancer de l’ovaire séreux. / Epithelial ovarian Cancers (EOC) are amongst the most deadly gynecological neoplastic afflictions in western countries. As this time, there is no method for the efficient screening of the disease in its early steps of development. The topics of this PhD are based on two objectives related to biomarkers research of EOC. The first one was the development of analytical methods for MALDI Mass Spectrometry for global biomarkers screenings in different types EOC. An extraction procedure for high molecular mass proteins on tissue sections has been designed in order to push back the limits of sensitivity of the method. Then, multivariate analyses allowed us to compare spectral informations contained in histological regions of different natures. All these developments conducted to the histopathological validation of a biomarker of immunosupression associated to ovarian cancer, namely the C-terminal fragment of PA28 (Reg-Alpha). Another issue, the determination of EOC origin, has also been studied. The second goal of this PhD has been the exploration of the relative implication of the different members of proproteine convertases (PCs) in EOC, which are keys enzymes involved in the maturation of many molecular actors of tumoral progression. To do so, SKOV-3 cell lines have been knocked-down for different PCs to study the functional redundancy of these enzymes. It has then been possible to determine, in cellulo and in vivo, that PACE4 is particularly influent on ovarian cancer progression.

Les îles Kerguelen (40°S, 70°E) renferment des écosystèmes d’eau douce parmi les plus isolés du monde des activités anthropiques directes. Le but de ce travail était d’étudier les facteurs bio-écologiques influençant les niveaux de bioaccumulation des contaminants chimiques dans les tissus des salmonidés des îles Kerguelen (truite commune, Salmo trutta et omble de fontaine, Salvelinus fontinalis) et les effets toxiques potentiellement associés. Nos travaux ont permis de démontrer que les teneurs hépatiques et musculaires en Cd et en Cu, mais aussi les teneurs musculaires en PCB étaient élevées et comparables à celles détectées chez des populations de salmonidés de zones géographiques plus anthropisées. Par ailleurs, des différences de contamination selon l’espèce, la saison et le morphotype (lac, rivière et base) ont été mises en évidence. L’analyse histologique des foies des truites a mis en évidence des atteintes hépatiques (fibrose, infiltration des cellules immunitaires, développement de centres mélanomacrophagiques) et hepatocytaires (nécrose, altérations nucléaires) nettes de l’ensemble des poissons étudiés qui révelent un état de stress important en cohérence avec les forts taux de toxiques dans cet organe. D’autre part, les biomarqueurs des défenses anti-oxydantes ont mis en évidence des différences entre les morphotypes étudiés. Par ailleurs, l’analyse de l’activité sérique de lysozyme a montré que ces salmonidés sont caractérisés par des niveaux de compétences immunitaires réduits. Les îles Kerguelen constitue un site atelier pour les études écotoxicologiques. Le suivi sur le long terme, devrait améliorer la connaissance des variations des réponses écophysiologiques des populations de poissons d'eau douce face à la pression chimique globale. / The Kerguelen Islands (40°S, 70°E) contain freshwater ecosystems among the most isolated from human activities in the world. The aim of this work was to study the bio-ecological factors influencing levels of chemical bioaccumulation in Kergueln salmonids tissue (brown trout, Salmo trutta and brook trout, Salvelinus fontinalis) and their potential toxic effects. Our work demonstrated that the hepatic and muscular Cu and Cd levels, and also, the muscular PCB levels were hight and similar to those of salmonids from impacted areas. Moreover, differences in contamination according to species, season and morphotype (lake, river and base) were noted. Histological analysis of trouts livers showed clear damage of liver (fibrosis, infiltration of immune cells, development centers mélanomacrophagiques) and of hepatocytes (necrosis, nuclear alteration) in all studied fish traducing an important level of stress consistently with the high concentration of toxicant in this organ. On the other hand, antioxidant defenses biomarkers revealed differences between the studied morphotypes. Moreover, analysis of serum lysozyme activity showed that these salmonids were characterized by reduced immune competences. Kerguelen Islands constitute a workshop site for ecotoxicological studies. The long-term monitoring should improve the knowledge of changes in eco-physiological responses of freshwater fish populations dealing with the global chemical pressure.

L'objectif de ce projet consiste à identifier des molécules fluorescentes, naturellement présentes dans les cellules, et dont l'évolution de leur concentration sera représentative du comportement métabolique de cellules en suspension. Ces molécules pourront servir au suivi du métabolisme cellulaire en temps réel durant une culture. Un besoin pour ce type d'outils se fait sentir afin de pouvoir développer et optimiser des bioprocédés, dont ceux utilisant des cellules végétales indifférenciées en suspension. La première étape fut la sélection et la caractérisation expérimentale de 11 molécules candidates à l'aide d'un spectrophomètre équipé d'un monochromateur quadruple. Après la réalisation des empreintes optiques des molécules, 16 zones d'intérêt dans le spectre d'autofluorescence furent identifiées et suivies dans le temps. Les signaux de la suspension complète, du milieu et des cellules filtrées furent analysés afin d'identifier 10 marqueurs métaboliques, caractérisés par 10 couples de longueurs d'ondes corrélés à des variables de culture. Cette méthode a permis d'identifier dix marqueurs métaboliques dans la suspension complète et laisse entrevoir la possibilité de plusieurs autres dans le milieu et les cellules filtrées. Le fait que certains marqueurs puissent se valider entre eux rajoute à la puissance de cette méthode. Il a donc été démontré que l'autofluorescence des cellules de plante indifférenciées en suspension contient assez d'information pour permettre le suivi de la croissance cellulaire en temps réel. La prochaine étape sera donc de valider ces marqueurs sur d'autres types de cellules.

L’objectif de cette thèse est de définir des biomarqueurs relatifs à l’immunothérapie allergénique (ITA). Il peut s’agir de biomarqueurs prédictifs d’une réponse au traitement qui vont permettre aux cliniciens d’adapter les schémas thérapeutiques ou de biomarqueurs d’efficacité facilitant le suivi clinique des patients au cours du traitement. La stratégie de recherche est basée sur une hypothèse qui consiste à dire que les cellules dendritiques (DCs) sont impliquées dans le succès de l’immunothérapie. En particulier, nous supposons que le traitement induit une baisse des DCs effectrices et une augmentation des DCs tolérogènes.Dans une première partie, un criblage de molécules biologiques et pharmacologiques a été entrepris sur les DCs dérivées des monocytes afin de générer in vitro des DCs effectrices de type DC1 etDC17 et des DCs régulatrices. Quatre molécules ont ainsi été identifiées pour leurs propriétés polarisantes. En particulier, les protéases d’Aspergillus oryzae se sont révélées être des inducteurs forts de tolérance. Le phénotype des DCs régulatrices obtenu a été étudié en détail ainsi que la polarisation et la fonctionnalité des lymphocytes T générés après cocultures.Dans une deuxième partie, deux approches de protéomique quantitative (la 2D-DIGE et la LCMS/MS sans marquage) ont été utilisées pour comparer les protéomes des DCs régulatrices et desDCs effectrices. Le différentiel d’expression des protéines les plus pertinentes a été validé au niveau transcriptionnel et protéique dans différents modèles. Le suivi des marqueurs dans des cellules du sang de patients traités ou non par ITA lors d’une étude clinique randomisée, contrôlée, en double aveugle, a permis de définir deux nouveaux biomarqueurs d’efficacité précoce de l’immunothérapie. Ces marqueurs pourront être suivis lors des traitements de désensibilisation pour distinguer les patients répondeurs des non-répondeurs. Par ailleurs, le suivi de ces biomarqueurs pourrait être essentiel dans d’autres pathologies comme les maladies auto-immunes ou encore la transplantation. / The aim of this thesis is to define biomarkers of allergen-specific immunotherapy (SIT).These biomarkers can be predictive of a clinical response or could be efficacy biomarkersable to discriminate responders versus non responder patients. The research strategy is based on the following hypothesis: if immunotherapy works, effector DCs are decreased where as regulatory DCs are increased locally or in the peripheral blood.First, we screened several biological or pharmacological agents to identify effector orregulatory DCs polarization agents. Four distinct molecules lead to the generation of eitherDC1, DC17 or regulatory DCs. In particular, proteases from Aspergillus Oryzae were clearinducer of tolerogenic DCs. The phenotype of those cells and the CD4+ T cell polarization induced after coculture were characterized extensively.In a second part, two proteomic approaches were used to compare the whole cell proteome of generated DCs. Most pertinent markers of polarization were validated in several cellular models. Markers were also followed in a randomized, double blind, placebo controlled clinical trial testing the efficacy of grass pollen tablets. Two markers were up regulated in patients who responded to the treatment pointing to a potential role of these proteins as early efficacy biomarkers. These markers are of crucial interest in the follow up of patients after SIT and could also be used in other diseases like autoimmune diseases or transplantation.

La découverte, la caractérisation et le dosage de biomarqueurs ont permis douvrir de nouveaux horizons tant en thérapeutique que dans létablissement dune médecine personnalisée. Dans un contexte danalyse en milieu complexe, lapplication de techniques fiables, sensibles, exactes et de haute résolution est de rigueur. Dans ce but, le couplage de la spectrométrie de masse à une technique séparative telle que la chromatographie liquide (LC-MS) ou lélectrophorèse capillaire (CE-MS) offre des potentialités intéressantes. Une méthode de dosage de la cysdopa, un marqueur du mélanome, dans le plasma par LC-MS a été mise au point. Une étape préliminaire dextraction en phase solide sur un support hybride alliant des interactions de type hydrophobe, hydrophile et échangeurs de cations a conduit à lobtention dexcellents taux de récupération. Les conditions chromatographiques assurant la séparation de la cysdopa des composés endogènes susceptibles dinterférer et les paramètres de la détection par spectrométrie de masse en tandem ont été optimisés. La présence déventuels effets de la matrice a été investiguée en détails. Une étude de la stabilité de la cysdopa dans les différentes conditions opératoires a été réalisée répondant ainsi aux normes préscrites par la FDA. Ensuite, une validation complète de la méthode en milieu plasmatique selon lapproche faisant appel aux profils dexactitude sur une gamme de concentration allant de 1,6 à 200 ng/ml a été menée avec succès démontrant ladéquation de la méthode. Enfin, une étude pilote ainsi quune validation en cours détude ont permis de tester cette méthode de dosage. La seconde technique mise en oeuvre consiste en lapplication du couplage CE-MS à lanalyse de lhepcidine, un petit peptide régulant le métabolisme du fer. Les conditions électrophorétiques assurant la séparation de ce peptide des constituants dun mélange type ont été déterminées. Le traitement de la paroi interne du capillaire et laddition dune cyclodextrine nont pas permis dans la présente application daméliorer la sélectivité et lefficacité des pics. Lutilisation dun électrolyte de haute force ionique associé à laddition dun modificateur organique a par contre offert les meilleures performances. Une approche multivariée en deux temps (criblage puis modélisation) a été appliquée pour loptimisation des paramètres CE-MS. Les effets principaux du voltage du capillaire et de la pression du gaz nébulisant se sont révélés être significatifs tout comme leffet quadratique de ce dernier ainsi que les interactions entre la concentration en électrolyte et le voltage du capillaire dune part et la pression du gaz nébulisant dautre part. Finalement, la sensibilité en terme de rapport signal/bruit a été comparée en CE-UV et CE-MS établissant les potentialités du couplage CE-MS pour lanalyse de peptides. Discovery, caracterization and determination of biomarkers provide new perspectives in therapeutics and establishment of personnal medecine. Analysis in complex matrix requires reliable, sensitive, accurate and high resolution techniques. To achieve this, coupling of mass spectrometry with separative techniques such as liquid chromatography (LC-MS) or capillary electrophoresis (CE-MS) offer interesting potentialities. A method for the determination of cysdopa, a melanoma biomarker, in human plasma was developed using LC-MS. Solid phase extraction in mixed mode, combining hydrophobic, hydrophilic and cation exchange interactions led to excellent recovery. The chromatographic conditions ensuring separation of cysdopa from potential by interfering endogenous compounds and tandem mass spectrometry detection parameters were optimised. The presence of matrix effect was investigated in detail. A full stability study was then performed according to FDA requirements. Finally, a complete validation of the method in plasma following the approach of accuracy profiles over a concentration range from 1,6 to 200 ng/ml was successfully performed, demonstrating adequacy of the developed method. A pilot study and an in-study validation were finally perfomed to test this assay method. The second implemented technique consists in the application of CE-MS coupling to hepcidin analysis, a small peptide regulating iron metabolism. Electrophoretic conditions ensuring separation of hepcidin from model peptides have been determined. Resolution and/or efficiency were not improved by using coated capillaries or by adding a cyclodextrin. A high ionic strength electrolyte associated to the addition of an organic modifier provided the best performance. A multivariate approach (screening and modeling) was applied to the optimisation of CE-MS parameters. The principal effet of capillary voltage and nebulizing gas pressure were significant as well as the quadratic effet of the last parameter and the interactions of electrolyte concentration and, for one part, capillary voltage and, for another part, nebulizing gas pressure. Finally, sensitivity with respect to signal/noise ratio was compared between CE-UV and CE-MS, assessing potentialities of CE-MS for peptide analysis.

Les perturbations environnementales peuvent induire des changements au niveau génétique, biochimique et physiologique chez les organismes exposés. Pour faire face à ces perturbations, les bivalves possèdent des défenses antioxydantes telles que la métallothionéine (MT), la superoxide dismutase (SOD), la catalase (CAT), la glutathion peroxidase sélénium dépendante (Se-GPx) et la glutathion S-transférase de classe pi (pi-GST). L'objectif de ce travail est de contribuer à la compréhension des mécanismes de détoxication chez les bivalves d'eau douce Unio tumidus et Corbicula fluminea. Les mollusques bivalves sont largement utilisés comme espèce sentinelle pour étudier la qualité de l'écosystème aquatique. Ce sont des organismes sédentaires, filtreurs, pouvant bioaccumuler une grande quantité de micropolluants environnementaux et qui peuvent être facilement transférés dans des milieux contaminés. La séquence codante de MT de Corbicula fluminea, ainsi que les séquences codantes de MT, SOD et CAT d'Unio tumidus ont été identifiées par RT-PCR en utilisant des amorces dégénérées. L'expression de ces gènes, ainsi que ceux de la Se-GPx et de la GST-pi, a ensuite été étudiée au niveau des ARNm dans différents cas d'études : (i) chez des bivalves prélevés sur une période d'un an dans le but d'identifier une éventuelle variation de l'expression en fonction de la saison, (ii) chez Corbicula fluminea exposée au cuivre et au cadmium, (iii) et chez Unio tumidus transférée au niveau de stations situées le long de la Moselle. Nous avons mis en évidence des variations du niveau d'expression des gènes dues à des paramètres saisonniers tels que la température de l'eau et le cycle de reproduction, principalement chez Unio tumidus. Nos résultats ont montré que les niveaux d'expression des ARNm de MT, SOD, CAT, Se-GPx et GST-pi peuvent être utilisés en tant que biomarqueurs précoces d'exposition au cuivre et au cadmium chez Corbicula fluminea. Des variations d'expression de tous les gènes étudiés ont également été observées chez Unio tumidus, mettant en évidence une anthropisation du milieu aquatique, non détectée par les analyses physicochimiques. Les approches biologiques apparaissent donc comme des outils indispensables à la détection de perturbations environnementales. / Environmental perturbations can induce genetic, biochemical and physiological changes in exposed organisms. To protect from oxidative stress, bivalves possess defences such as metallothionein (MT), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), selenium-dependent glutathione peroxidase (Se-GPx) and pi class glutathione S-transferase (pi-GST). The aim of this study is to contribute to the understanding of the detoxification mechanisms in the freshwater bivalves Unio tumidus and Corbicula fluminea. Bivalve molluscs are appropriate sentinel species to study the quality of the aquatic environment. They are sedentary, filter-feeding species, bioaccumulating high amounts of environmental micropollutants and can easily be transferred to contaminated areas. The MT coding sequence of Corbicula fluminea and the MT, SOD and CAT coding sequences of Unio tumidus were identified by RT-PCR using degenerated primers. Then, the mRNA expression level of MT, SOD, CAT, Se-GPx and pi-GST was measured in different studies: (i) in bivalves sampled during a 1-year period in order to identify possible seasonal variations of the expression pattern, (ii) in Corbicula fluminea exposed to copper and cadmium, (iii) and in Unio tumidus transplanted in stations located along the Moselle River. Fluctuations of the mRNA level, supposed to correspond to seasonal parameter such as water temperature and reproductive statute, were noted, principally in Unio tumidus. Our results pointed out that MT, SOD, CAT, Se-GPx and GST-pi mRNA expression level could be used as early exposure biomarkers of copper and cadmium exposure in Corbicula fluminea. Variations of gene expression were observed in Unio tumidus, highlighting anthropic impacts on aquatic ecosystem no detected by chemical analysis. Biological approaches appear as essential tools to detect environmental degradations

Pour valider une suite de biomarqueurs cellulaires en milieu dulçaquicole, nous avons étudié la structure des systèmes lysosomal et peroxysomal et les variations de contenus en lipofuscines et lipides neutres insaturés dans les tissus digestifs de plusieurs invertébrés, à travers une approche couplant histochimie et analyse d’images. Les expérimentations in situ et bioessais à plus ou moins long terme ont montré la pertinence des réponses cellulaires étudiées pour la mise en évidence de gradients de contamination. Les profils de réponse les plus communs chez les mollusques incluent un gonflement lysosomal, des déplétions de lipides neutres insaturés, une accumulation de lipofuscines et/ou un système peroxysomal plus volumineux. Ces réponses cellulaires précoces peuvent être associées, au niveau individuel, à une désynchronisation de la reproduction entre individus ou à une diminution de l’indice de condition. L’étude mensuelle à long terme (2 ans) a souligné l’absence de niveaux de base saisonniers de ces biomarqueurs et l’influence importante de la disponibilité trophique sur les contenus tissulaires en lipides neutres. Une mise en dépuration de 15 jours du bivalve, Dreissena polymorpha, sur son site d’origine, n’a pas montré de réversibilité du profil des réponses cellulaires à un gradient de contamination in situ, mais elle a tout de même de limité la déplétion des lipides neutres. Les réponses cellulaires les plus précoces et discriminatives sont le gonflement lysosomal et la déplétion en lipides neutres. Une comparaison d’outils d’analyse intégrative a montré le pouvoir discriminatif accru de la suite de biomarqueur entière, par rapport aux réponses individuelles / To validate a cellular biomarker suite, we studied the lysosomal and peroxisomal structures as well as the variations of the lipofuscin and unsaturated neutral lipid contents in the digestive tissues of several freshwater invertebrates, by using histochemistry coupled to image analysis. Cellular responses, studied through field and laboratory experiments proved relevant to highlight contamination gradients. The most frequent response profiles in molluscs were lysosomal enlargement, unsaturated neutral lipid depletions, lipofuscin accumulations and a more voluminous peroxisomal system. These early cellular responses may be associated, at the individual level, to a desynchronisation of the reproduction or to decreased condition index. A long-term monthly experiment showed no seasonal baseline levels of these biomarkers and underlined the important influence of trophic factors on the unsaturated neutral lipid contents. A 15-day depuration period of the bivalve, Dreissean polymorpha, at the site of origin after an exposure to a comparison of integrative analysis tools proved that the whole biomarker suite discriminates better between sites than individual responses

On propose ici des méthodes statistiques qui tiennent compte de la structure complexe des bases de données et des interactions entre les variables. Parmi ces méthodes, certaines permettront de vérifier la stabilité et la robustesse des résultats obtenus. Nous utilisons l'analyse en composantes principales afin de détecter la présence de systèmes complexes. Nous utilisons la distance de Mahalanobis afin de décrire la dérèglement de ces systèmes et nous utilisons une méthode de bootstrap afin de vérifier la stabilité des résultats. Deux articles sont mis de l'avant afin de présenter l'application de ces outils dans le cadre du vieillissement et des systèmes biologiques sous-jacents.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

La moule zébrée Dreissena polymorpha constitue une espèce sentinelle intéressantes en raison de traits bioécologiques (e.g. régime filtreur, mode de vie sessile, large aire de répartition) autorisant une utilisation pratique de cet organisme dans la surveillance de différents types d'hydrosystèmes (de Lafontaine et al., 2000). Les nombreuses études menées sur la dreissène ont d'ailleurs permis de développer depuis une dizaine d'années un ensemble de marqueurs biologiques destinés à évaluer l'impact des diverses activités anthropiques (activités agricoles, domestiques et industrielles) sur la qualité des milieux aquatiques. Ces biomarqueurs constituent des paramètres biologiques individuels (ou infra-individuels) dont la modulation par rapport à une valeur de référence est révélatrice d'une exposition, présente ou passée, à un ou plusieurs contaminants de l'environnement (e.g. pesticides, métaux lourds) (Lagadic et al., 1997a). Souvent associés à des mécanismes de défense de l'organisme (e.g. système de défense antioxydant, système de détoxication des métaux), les marqueurs usuels ne permettent toutefois pas d'évaluer concrètement les effets d'un stress toxique sur la " fitness " d'un individu (i.e. fécondité, survie) et au-delà sur le maintien de sa population (Forbes et al., 2006). La caractérisation de marqueurs génétiques associés au métabolisme énergétique pourrait constituer une solution potentielle à cet écueil dans la mesure où les fonctions d'entretien et de reproduction d'un individu sont sous l'étroite dépendance de sa capacité à exploiter les ressources alimentaires disponibles dans son milieu. L'étude de biomarqueurs énergétiques potentiels tels que les réponses enzymatiques digestives pourrait dès lors constituer une approche intéressante à développer dans le cadre de stratégies de biosurveillance multimarqueurs (Lagadic et al., 1994 ; De Coen et al., 1998b). Le prrésent travail de thèse a eu ainsi pour principal objectif d'analyser l'intérêt informatif potentiel des réponses enzymatiques digestives de la dreissène dans l'évaluation des risques associés à la présence de contaminants dans les milieux aquatiques. / The zebra mussel Dreissena polymorpha is a useful sentinel species because of bio-ecological traits (e.g. filtering activity, sessile lifestyle, range-wide distribution) allowing practical use of this organism for monitoring of various types of water systems (de Lafontaine et al., 2000). The numerous studies led on the zebra mussel allowed to develop, over the last ten years, a set of biomarkers to assess the impact of various human activities (agricultural, domestic and industrial ones) on the quality of aquatic environments. These biomarkers are individual (or infra-individual) biological parameters whose variation from a reference value is indicative of an exposure, past or present, to one or several environmental contaminants (e.g. pesticides, heavy metals) (Lagadic et al., 1997a). Often associated with individual defense systems (e.g. antioxydant defense system, metal detoxication system) 'core' biomarkers do not allow, however, to effectively assess the impacts of toxicants on individual " fitness " (i.e. fecundity, survival) and beyond, on the maintenance of population (Forbes et al., 2006). Characterization of generic markers associated with energy metabolism could be a potential solution to this problem since the maintenance and reproduction functions of an individual are closely related to its ability to exploit food resources. The study of potential energy biomarkers such as digestive enzyme responses could therefore be an interesting approach to develop as part of multimarker biomonitoring studies (Lagadic et al., 1994 ; De Coen et al., 1998b). The main objective of the present PhD thesis was to analyze the potential informative interest of zebra mussel's digestive enzyme responses in evaluating the potential risks associated with the presence of contaminants in aquatic environnments.