Seminario de Título para optar al Título de Ingeniera en Biotecnología Molecular. / La enzima convertidora de endotelina-1 (ECE-1) es una metaloproteasa de membrana encargada de la conversión del péptido Endotelina-1 a su forma activa. Presenta cuatro isoformas, las cuales solo difieren en sus extremos citoplasmáticos N-terminales. Elevados niveles de expresión de ECE-1 han sido reportados en diferentes cánceres, siendo solo la isoforma ECE-1c asociada a características malignas en líneas celulares de cáncer de próstata y de colon. Resultados de nuestro grupo señalan que la fosforilación de ECE-1c en sus residuos Thr-9, Ser-18 y Ser-20, promueve la estabilidad al evitar su degradación proteasomal, aumentando además la capacidad invasiva de células de cáncer colorrectal DLD-1 de manera dependiente de la caseína kinasa-2 (CK2). Pese a que solo se comprobó la fosforilación de Ser-18 y Ser-20 por CK2, resultados obtenidos usando mutantes fosfo miméticas de estos dos residuos y una mutante súper estable de ECE-1c, hacen sospechar que el residuo Thr-9 estaría involucrado en el aumento de la estabilidad y sus efectos celulares. De esta manera, el objetivo general fue determinar el efecto de la fosforilación del residuo Thr-9 en la estabilidad proteica de ECE-1c y su participación en el potencial migratorio y tumorigénico de células de cáncer de colon DLD-1. Mediante ensayos de estabilidad proteica se determinó que la fosforilación en Thr-9 aumenta la estabilidad de ECE-1c incluso en presencia de un inhibidor de CK2. Además, se observó que la fosforilación en Thr-9 promueve la capacidad migratoria y tumorigénica de células DLD-1. Los resultados funcionales obtenidos en este trabajo constituyen el primer paso xiii en el estudio del mecanismo mediante el cual ECE-1c promueve proliferación, invasión y tumorigénesis en células de cáncer colorrectal DLD-1.

It is a major clinical problem that survival rates after out-of-hospital cardiac arrest have not markedly improved during the last decades, despite extensive research and the introduction of new interventions. However, recent studies have demonstrated promising treatments such as targeted temperature management (TTM) and methylene blue (MB). In our first study, we investigated the effect of MB administered during experi-mental cardiopulmonary resuscitation (CPR) in the setting of postponed hypother-mia in piglets. We set out to study if MB could compensate for a delay to establish targeted TTM. The study demonstrated that MB more than compensated for 30 min delay in induction of TTM. The effect of MB added to that of TTM. The second study examined the effects of TTM and S-PBN on the endothelin system and nitric oxide synthases (NOS) after prolonged CA in a porcine CPR mod-el. The study was designed to understand the cardioprotective mechanism of S-PBN and TTM by their influence on the endothelin system and NOS regulation. We veri-fied for the first time, that these two cardioprotective postresuscitative interventions activate endothelin-1 and its receptors concomitantly with eNOS and nNOS in the myocardium. We concluded that nitric oxide and endothelin pathways are implicated in the postresuscitative cardioprotective effects of TTM. The third study compared survival and hemodynamic effects of low-dose amio-darone and vasopressin to vasopressin in a porcine hypovolemic CA model. The study was designed to evaluate whether resuscitation with amiodarone and vasopressin compared to vasopressin alone would have an impact on resuscitation success, survival, and hemodynamic parameters after hemorrhagic CA. We found that combined resuscitation with amiodarone and vasopressin after hemorrhagic circulatory arrest resulted in greater 3-hour survival, better preserved hemodynamic parameters and smaller myocardial injury compared to resuscitation with vasopressin only. In our fourth study we planned to compare hemodynamic parameters between the treatment group (milrinone, esmolol and vasopressin; MEV) and control group (vasopressin only) during resuscitation from prolonged cardiac arrest in piglets. The study was designed to demonstrate if MEV treatment improved hemodynamics or cardiac damage compared to controls. We demonstrated that MEV treatment reduced cardiac injury compared with vasopressin alone.