Made available in DSpace on 2015-04-14T13:30:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 456861.pdf: 2147908 bytes, checksum: b9bc5ecae0f349a191f0641931e9e7d7 (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / The effects on kinin B1 receptor (B1R) deletion were examined on bone regeneration in streptozotocin (STZ)-type-1 diabetic mice, subjected to a model of femoral critical-size defect. Diabetes induction in wild-type C57/BL6 (WT C57/BL6) mice was allied to decrease of body weight and hyperglycemia, in relation to the non-diabetic group of the same strain. The lack of B1R did not affect STZ-elicited body weight loss, although it partially prevented hyperglycemia. Type-1 diabetic mice presented a clear delay in bone regeneration, with large areas of loose connective tissue within the region corresponding to the defects, when compared to wide areas of newly-formed woven bone in non-diabetic WT C57/BL6 mice. Notably, either non-diabetic or diabetic B1R knockout (B1RKO) mice displayed bone regeneration levels comparable to that seen in control WT C57/BL6 mice. The improved bone regeneration in animals lacking B1R was further confirmed by analysis of collagen contents. WT C57/BL6 STZ-diabetic mice presented a marked reduction of collagen contents within the bone defect gap, whereas diabetic B1RKO displayed collagen levels comparable to those observed in non-diabetic WT C57/BL6 or B1RKO mice. The enhanced bone regeneration in diabetic mice lacking B1R does not seem to be associated to lessened osteoclast activity, as no prominent difference was detected in the levels of tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) positivity, or even in the immunolabeling for the proteins of the RANK/RANKL/OPG system thoughout all the experimental groups. Data brings novel evidence on the relevance of B1R under type-1 diabetes, especially concerning its role in bone regeneration after surgical procedures / Os efeitos da dele??o g?nica do receptor B1 das cininas na regenera??o ?ssea foram avaliados em camundongos com diabetes tipo 1 induzida por estreptozotocina, submetidos a um modelo de defeito cr?tico no f?mur. Como resultado da indu??o de diabetes nos camundongos wild-type C57/BL6, houve um decr?scimo do peso corporal e hiperglicemia em rela??o ao grupo n?o-diab?tico da mesma cepa. Os animais diab?ticos, com aus?ncia do receptor B1 apresentaram perda do peso corporal e, uma preven??o parcial da hiperglicemia. Camundongos diab?ticos do tipo 1 tiveram um atraso na regenera??o ?ssea, apresentando um tecido conectivo desorganizado na regi?o correspondente ao defeito cr?tico, quando comparados a extensas ?reas de tecido ?sseo rec?m-formado em camundongos WT C57/BL6 n?o diab?ticos. Camundongos B1R nocaute, diab?ticos ou n?o diab?ticos, exibiram n?veis de regenera??o ?ssea semelhantes aos observados no grupo controle WT C57/BL6. A melhora na regenera??o ?ssea nos animais sem o receptor B1 foi confirmada pela an?lise da quantidade de col?geno. Camundongos WT C57/BL6 diab?ticos apresentaram uma redu??o acentuada da distribui??o de col?geno na regi?o do defeito ?sseo, enquanto que os animais B1RKO diab?ticos exibiram n?veis de col?geno similares ?queles observados nos camundongos n?o diab?ticos, tanto WT C57/BL6, quanto B1RKO. A melhora da regenera??o ?ssea nos camundongos diab?ticos sem o receptor B1 n?o parece estar associado ? atividade osteocl?stica diminu?da. Ademais, nenhuma diferen?a marcante foi encontrada nos n?veis de fosfatase ?cida resistente ao tartarato (TRAP) ou, na imunomarca??o para as prote?nas do sistema RANK/RANKL/OPG, em todos grupos experimentais avaliados. Os resultados deste trabalho fornecem novas evid?ncias a respeito da relev?ncia dos receptores B1 no diabetes do tipo 1, especialmente no que diz respeito ao seu papel na regenera??o ?ssea ap?s procedimentos cir?rgicos

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:30:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 458701.pdf: 1213511 bytes, checksum: 5c4a01085ee74091dcd6f5af755a1eca (MD5) Previous issue date: 2013-11-29 / Studies on dental caries demonstrate inflammation on dental pulp tissues following infection. Cytokines are able to activate those cells linked to inflammatory and immune response thus neutralizing potentially aggressive agents and allowing tissue repair. Some of those cytokines, denominated chemokines, could contribute to the establishment of an immunotherapy able to control those cytokines involved with the triggering of dental pulp inflammation. Research on chronic inflammation has provided some relevant insights. However, the role of certain chemokines on acute inflammation is yet not conclusive. This study attempts to unveil the role of the chemokines CCL5/RANTES, CCR5 and RANKL on initial and acute pulpal inflammation. Methods: 18 Wistar rats were subjected to anesthesia. Access was performed on their first lower molars until pulp exposure. They were divided into three experimental groups considering the solution administered: Saline, lipopolysaccharide (LPS) and lipoteichoic acid (LTA) (n=6 each group). Higid second lower molars were used as controls. The cavities were sealed with amalgam and euthanasia occurred after 48 h and the jaws were dissected for histologic evaluation. CCL5/RANTES is expressed in all groups, unlike CCR5, that was not expressed. RANKL appears only in inflammatory cells, including control group. Only RANKL could be expressed during initial pulpal inflammation, being able to detect inflammatory cell activity. / Estudos de c?rie demonstraram aspectos inflamat?rios nos tecidos pulpares decorrentes de infec??o estabelecida. Citocinas seriam capazes de ativar c?lulas ligadas ? resposta inflamat?ria e imune no sentido de neutralizar potenciais agentes invasores e permitir o reparo dos tecidos pulpares. Algumas destas, denominadas quimiocinas, poderiam contribuir no estabelecimento de uma imunoterapia capaz de bloquear aquelas citocinas respons?veis pelo processo inflamat?rio. Na inflama??o cr?nica estas pesquisas j? possuem resultados satisfat?rios. Na inflama??o aguda, os estudos ainda est?o inconclusivos. Este estudo teve como objetivo testar as quimiocinas CCL5/RANTES, CCR5 e RANKL na inflama??o pulpar aguda. M?todos: 18 Ratos Wistar foram anestesiados. Foram feitas cavidades at? a exposi??o pulpar nos primeiros molares inferiores. Eles foram divididos em tr?s grupos onde se administrou solu??o salina est?ril, lipopolissacar?deo (LPS) e ?cido lipoteic?ico (LTA) (n= 6 por grupo). Os segundos molares inferiores h?gidos foram utilizados como controle. As cavidades foram seladas com am?lgama e a eutan?sia foi realizada ap?s 48h. As mand?bulas foram dissecadas para exame histol?gico e da imunoexpress?o das quimiocinas em estudo. Obteve-se como resultados: CCL5/RANTES ? expressa em todos os grupos, ao contr?rio do CCR5, que n?o foi expressa. RANKL aparece apenas em c?lulas inflamat?rias. Somente a express?o de RANKL foi capaz de demonstrar atividade celular na inflama??o pulpar inicial.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 455924.pdf: 866376 bytes, checksum: 11973f76ada2aeeeb6a5dcd6c7c51f89 (MD5) Previous issue date: 2014-01-02 / Paraquat (PQ) is an agrochemical agent commonly used worldwide, which is allied to potential risks of intoxication. This herbicide induces the formation of reactive oxygen species (ROS) that ends up compromising various organs, particularly the lungs (by the polyamine uptake system), and the brain (by dopaminergic neuronal cell loss). This study evaluated the deleterious effects of paraquat on the central nervous system (CNS) (changes in physiologic parameters, nociceptive responses, locomotor activity and motor coordination, and expression profile of some inflammatory markers), or peripherally (inflammatory cells in the blood and lungs), with special attempts to assess the putative protective effects of the selective CXCR2 receptor antagonist SB225002 on these parameters. PQ-toxicity was induced in male Wistar rats, in a total dose of 50 mg/kg, given by the intraperitoneal (i.p.) route (10 mg/kg each three days). Control animals received saline solution (10 ml/kg) at the same schedule of administration. Separate groups of animals were treated with the selective CXCR2 antagonist SB225002 (1 or 3 mg/kg, i.p.), administered 30 min before each paraquat injection. The major changes found in paraquat-treated animals were: decreased body weight and hypothermia, nociception behavior, impairment of locomotor and gait capabilities, enhanced TNF-α and IL-1β expression in the striatum, and cell migration to the lungs and blood. Some of these parameters were reversed when the antagonist SB225002 was administered, including recovery of physiological parameters, decreased nociception, improvement of gait abnormalities, modulation of striatal TNF-α and IL-1β expression, and decrease of neutrophil migration to the lungs and blood. Taken together, our results demonstrate that damage to the central and peripheral systems elicited by paraquat can be prevented by the pharmacological inhibition of CXCR2 chemokine receptors. The experimental evidence presented herein extends the comprehension on the toxicodynamic aspects of paraquat, and opens new avenues to treat intoxication induced by this herbicide. / O paraquat (PQ) ? um composto qu?mico bastante utilizado no mundo, o qual ? aliado a potenciais riscos de intoxica??o. Este herbicida induz a forma??o de esp?cies reativas de oxig?nio (ROS) que podem comprometer v?rios ?rg?os, especialmente os pulm?es (atrav?s da recapta??o de poliaminas), e o c?rebro (pela perda de neur?nios dopamin?rgicos). Este trabalho avaliou os efeitos delet?rios do paraquat frente ao Sistema Nervoso Central (SNC) (como mudan?as nos par?metros fisiol?gicos, respostas nociceptivas, atividade locomotora e coordena??o motora, e o perfil de express?o de alguns marcadores moleculares de inflama??o), e perif?rico (como c?lulas inflamat?rias no sangue e pulm?es), com o objetivo de avaliar o poss?vel papel protetor do antagonista de receptores de quimiocinas CXCR2, o SB225002, nestes par?metros. A toxicidade ao paraquat foi induzida em ratos machos Wistar, em uma dose total de 50 mg/kg, administrada intraperitonealmente (i.p.) (10 mg/kg a cada tr?s dias). Animais do grupo controle receberam solu??o salina (10 ml/kg) no mesmo protocolo de administra??o. Diferentes grupos de animais foram tratados com o antagonista SB225002 (1 ou 3 mg/kg, i.p.), administrado 30 minutos antes de cada aplica??o do paraquat. As prinicpais mudan?as encontradas nos animais tratados com paraquat foram: diminui??o do peso corporal e hipotermia, aumento da resposta nociceptiva, diminui??o da capacidade de marcha e locomo??o, aumento da express?o de TNF-α e IL-1β no estriado, e a migra??o de c?lulas inflamat?rias no sangue e pulm?es. Alguns destes par?metros foram revertidos quando administrado o antagonista SB225002, como recupera??o dos par?metros fisiol?gicos, diminui??o da nocicep??o, melhora na atividade de marcha, modula??o da express?o estriatal de TNF-α e IL-1β, e diminui??o da migra??o neutrof?lica para o sangue e pulm?es. Em conjunto, nossos resultados demonstram que os danos causados pelo paraquat ao sistema central e perif?rico podem ser prevenidos atrav?s da inibi??o farmacol?gica dos receptores de quimiocinas CXCR2. A evid?ncia experimental aqui apresentada extende a compreens?o dos efeitos toxicodin?micos do paraquat, e proporciona novas possibilidades para tratar a intoxica??o causada por este herbicida.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 455930.pdf: 2412584 bytes, checksum: f510a7887fb6fa3e2f006d9db557d511 (MD5) Previous issue date: 2014-01-24 / Spinal voltage-gated calcium channels (VGCC) are pivotal regulators of painful and inflammatory alterations, representing attractive therapeutic targets. We examined the effects of epidural administration of the selective P/Q- and N-type VGCC blockers Tx3-3 and Phα1β, respectively, isolated from the spider P. nigriventer, on symptomatic, inflammatory and functional changes allied to cyclophosphamide (CPA)-induced hemorrhagic cystitis (HC) in mice. The effects of P. nigriventer-derived toxins were compared to those displayed by MVIIC and MVIIA, extracted from the cone snail C. magus. HC was induced by a single intraperitoneal injection of CPA (300 mg/kg). The spinal blockage of P/Q-type VGCC by Tx3-3 and MVIIC, or N-type VGCC by Phα1β attenuated nociceptive and inflammatory events associated with HC, including bladder oxidative stress and cytokine production. Moreover, CPA produced an evident increase of bladder TRPV1 and TRPA1 mRNA expression, which was virtually reversed by all the tested toxins. Noteworthy, Phα1β strongly prevented bladder neutrophil migration, besides HC-related functional alterations. Finally, the spinal co-administration of the selective NK1 receptor antagonist CP-96345 heightened Phα1β antinociceptive effects. Our results shed new lights on the role of spinal P/Q and N-type VGCC in bladder dysfunctions, pointing out Phα1β as a promising alternative for treating complications associated to CPA-induced HC. / Os canais de c?lcio voltagem-dependentes (CCVDs), ao n?vel medular, s?o um dos principais reguladores das altera??es inflamat?rias e dolorosas, representando um interessante alvo terap?utico. Com isso, avaliamos os efeitos da administra??o intratecal dos bloqueadores seletivos dos CCVD do subtipo P/Q e N, Tx3-3 e Phα1β, respectivamente, isolados do veneno da aranha P. nigriventer, nas mudan?as sintom?ticas, inflamat?rias e funcionais, relacionadas com a cistite hemorr?gica (CH), induzido pelo quimioter?pico ciclofosfamida (CPA) em camundongos. Os efeitos dos pept?deos provenientes da aranha P. nigriventer foram comparados com os exibidos pelas toxinas MVIIC e MVIIA, obtidas do caramujo C. magus. A CH foi induzida por uma ?nica administra??o intraperitoneal de CPA (300 mg/kg). O bloqueio medular dos CCVD do subtipo P/Q atrav?s da Tx3-3 e MVIIC ou, o bloqueio dos CCVD do subtipo N pela toxina Phα1β atenuou as respostas nociceptivas e inflamat?rias associadas ? CH, incluindo estresse oxidativo e produ??o de citocinas na bexiga. Al?m disso, a CPA produziu um aumento evidente na express?o do RNAm de TRPV1 e TRPA1 na bexiga, o qual foi virtualmente revertido por todas as toxinas. Notavelmente, a isoforma Phα1β reduziu a migra??o de neutr?filos para a bexiga, al?m de reverter as disfun??es da bexiga relacionadas ? CH. Finalmente, a co-administra??o medular do antagonista seletivo dos receptores NK1, CP-96345, com o pept?deo Phα1β, intensificou o efeito antinociceptivo do mesmo. Nossos resultados trazem novas evid?ncias da fun??o dos CCVD do subtipo P/Q e N ao n?vel medular na disfun??o da bexiga, apontando a Phα1β como uma poss?vel alternativa de tratamento para complica??es associadas ? CH, induzida por CPA.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-06-22T19:27:40Z No. of bitstreams: 1 TES_TALITA_CARNEIRO_BRANDAO_PEREIRA_COMPLETO.pdf: 639031 bytes, checksum: 5fa4cd79fd277a716b47890fcca5b580 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-22T19:27:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_TALITA_CARNEIRO_BRANDAO_PEREIRA_COMPLETO.pdf: 639031 bytes, checksum: 5fa4cd79fd277a716b47890fcca5b580 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / First identified in Saccharomyces ceresvisie, the sirtuins (SIRTs) are a diverse family of histones deacilases that act as deacetilases, ADP-ribosil transferases, desuccinilases and demalonilases; using nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+) as co-substrate. Their regulatory involvement targeting histones, structural proteins and transcription factors implicate them in a broad range of biological processes and raised promising roles as therapeutic targets in apoptosis, oxidative stress and inflammation, among many others. These processes in turn, can be easily modeled in zebrafish (Danio rerio), a model organism with great developmental, genetic and economical advantages. Despite growing interest in this fresh water teleost as model organism and the regulatory and therapeutical potential of sirtuins in inflammation and associated processes, next to nothing is known about sirtuins in zebrafish. In order to contribute to this scenario and accelerate zebrafish potential as screening platform for sirtuins modulators, this work aimed to characterize sirtuins roles in a copper-induced inflammation model in zebrafish larvae. Alterations in locomotor behavior, sirtuin-related genes expression pattern and gene expression of inflammation, oxidative stress and apoptosis markers were observed after copper exposure. In order to further evaluate SIRT1 contribution to this scenario, a SIRT1 knockout line was developed using CRISPR-Cas9 technology, which showed an exarcebated inflammatory response after copper exposures. Additional studies will help to elucidate sirtuin roles in inflammation and associated processes, taking advantage of zebrafish?s translational potential. / Inicialmente identificadas em Saccharomyces cerevisie como reguladores de silenciamento de informa??o, as sirtu?nas (SIRTs) s?o uma diversa fam?lia de histonas desacilases da classe III (HDACs) que atuam como desacetilases, mono-ADP-ribosil transferases, desuccinilases e demalonilases; todas dependentes de nicotinamida adenina dinucleot?deo (NAD+). Presentes em todos os dom?nios de vida e tamb?m em v?rus, as sirtu?nas se tornaram promissores alvos terap?uticos devido seu envolvimento em diversos processos biol?gicos, incluindo apoptose, estresse oxidativo e inflama??o. Estes por sua vez s?o considerados denominadores comuns de diversas patologias e podem ser facilmente estudados utilizando os transl?cidos embri?es e larvas do zebrafish (Danio rerio) como organismo modelo. Apesar do crescente uso deste pequeno tele?steo de ?gua doce em diversas ?reas de estudo, e das sirtu?nas terem um promissor, mas pouco esclarecido, papel em eventos de inflama??o, apoptose e estresse oxidativo, pouco se sabe sobre as sirtu?nas no zebrafish - retardando seu uso como ferramenta de screening de drogas potencialmente moduladoras das SIRTs. Sob este cen?rio, o objetivo deste trabalho foi caracterizar o papel das sirtu?nas em modelo de inflama??o induzido por sulfato de cobre em larva de zebrafish. Altera??es em comportamento explorat?rio da larva, express?o de genes associados a sirtu?nas, bem como em marcadores de inflama??o, estresse oxidativo e apostose foram observados ap?s a exposi??o ao cobre. Para investigar o papel do mais conhecido e abrangente membro das sirtu?nas, desenvolvemos uma linhagem nocaute para SIRT1 utilizando a tecnologia CRISPR/Cas9, a qual apresentou reposta inflamat?ria exarcebada quando exposta ao cobre. Estudos adicionais neste modelo podem contribuir com descobertas sobre a biologia e modula??o das SIRTs ao usufruir do potencial translacional do zebrafish.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-11-10T16:14:13Z No. of bitstreams: 1 TES_MARIA_DAS_GRACAS_VILLELA_RODRIGUES_COMPLETO.pdf: 3711034 bytes, checksum: 8599c9dfdb61b14f16b029441393ea84 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-10T16:14:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_MARIA_DAS_GRACAS_VILLELA_RODRIGUES_COMPLETO.pdf: 3711034 bytes, checksum: 8599c9dfdb61b14f16b029441393ea84 (MD5) Previous issue date: 2016-08-30 / The investigation stems from the realization of the importance that the computer science area exerts a process of integration with the Health Sciences in that it offers mimicry possibilities station bodily functions which provides technology to support scientific research. As these research in the areas of Health Sciences can not always be carried out with humans for ethical reasons and even the use of animals has been restricted, technological innovations make it ever more necessary to advance such research. Thus, this thesis aims to determine whether the image display as vector digital methodology results in more efficiency and wider use compared to the analog image. The methodology used, with the participation of 210 travel volunteer medical students of PUCRS three class members. In each class, students were randomized into two groups of 35 students, the control group was exposed to an analog image sciatic nerve in the rat division, while the test group was exposed to the same nerve imaging, but vectored in Inkscape program, compared to a division of the sciatic nerve photograph captured by a scanning electron microscope. Each group viewed the received image, comparing it with the electron microscope image, identifying this picture the names of the nerves that are part of the division of the sciatic nerve. Later the control group viewed digital images to a post-test and with the test group answered a questionnaire of receptivity of the methodology. We used the comparison and statistical method to perform the analyzes which confirmed the greater efficiency of digital images with respect to the analog images, validating the use of digital images and digital methods. / A investiga??o surge da constata??o da import?ncia que a ?rea de Ci?ncias da Computa??o exerce num processo de integra??o com as Ci?ncias da Sa?de na medida em que oferece possibilidades de mimetiza??o de fun??es org?nicas posto que propicia recursos tecnol?gicos para o apoio das pesquisas cient?ficas. Como estas pesquisas nas ?reas das Ci?ncias da Sa?de nem sempre podem ser realizadas com seres humanos por raz?es ?ticas e mesmo a utiliza??o de animais tem sido restringida, as inova??es tecnol?gicas fazem-se sempre mais necess?rias para o avan?o de tais pesquisas. Assim, esta tese tem por objetivo determinar se a visualiza??o de imagem vetorizada como metodologia digital resulta em mais efici?ncia e mais ampla utiliza??o em compara??o com a imagem anal?gica. A metodologia utilizada, contou com a participa??o de 210 alunos volunt?rios do curso de medicina da PUCRS, integrantes de tr?s turmas. Em cada turma, os alunos foram randomizados em dois grupos de 35 alunos, o grupo controle foi exposto a uma imagem anal?gica da divis?o do nervo ci?tico do rato, enquanto o grupo teste foi exposto a mesma imagem do nervo, vetorizada no programa Inkscape, em compara??o com uma fotografia da divis?o do nervo ci?tico, capturada por um microsc?pio eletr?nico. Cada grupo visualizou a imagem recebida, comparando-a com a imagem capturada do microsc?pio eletr?nico, identificando nesta imagem os nomes dos ramos do nervo ci?tico. Posteriormente o grupo controle visualizou imagens digitais para um p?s-teste e juntamente com o grupo teste responderam um question?rio de receptividade da metodologia. Utilizou-se o m?todo comparativo e estat?stico para efetuar as an?lises que comprovou a maior efici?ncia das imagens digitais em rela??o ?s imagens anal?gicas, validando-se a utiliza??o de imagens digitais e a metodologia digital.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 457610.pdf: 991749 bytes, checksum: d91843d27688e0357561bae1a127e7a1 (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / This study investigated whether the spinal or systemic treatment with the lipid resolution mediators resolvin D1 (RvD1), aspirin-triggered resolvin D1 (AT-RvD1) and resolvin D2 (RvD2) might interfere with behavioral and neurochemical changes in the mouse fibromyalgia-like model induced by reserpine. Acute administration of AT-RvD1 and RvD2 produced a significant inhibition of mechanical allodynia and thermal sensitization in reserpine-treated mice, whereas RvD1 was devoid of effects. A similar antinociceptive effect was obtained by acutely treating animals with the reference drug pregabalin. Noteworthy, the repeated administration of AT-RvD1 and RvD2 also prevented the depressive-like behavior in reserpine-treated animals, according to assessment of immobility time, although the chronic administration of pregabalin failed to affect this parameter. The induction of fibromyalgia by reserpine triggered a marked decrease of dopamine and serotonin (5-HT) levels, as examined in total brain, spinal cord, cortex and thalamus. Reserpine also elicited a reduction of glutamate levels in total brain, and a significant increase in the spinal cord and thalamus. Chronic treatment with RvD2 prevented 5-HT reduction in total brain, and reversed the glutamate increases in total brain and spinal cord. Otherwise, AT-RvD1 led to a recovery of dopamine levels in cortex, and 5-HT in thalamus, whilst it diminished brain glutamate contents. Concerning pregabalin, this drug prevented dopamine reduction in total brain, and inhibited glutamate increase in brain and spinal cord of reserpine-treated animals. Our data provide novel evidence, showing the ability of D-series resolvins AT-RvD1, and mainly RvD2, in reducing painful and depressive symptoms allied to fibromyalgia in mice. / O presente estudo investigou o poss?vel efeito do tratamento central ou sist?mico com os mediadores lip?dicos de resolu??o da inflama??o, Resolvina D1 (RvD1), RvD1 ativada pela aspirina (AT-RvD1) e Resolvina D2 (RvD2) sobre mudan?as comportamentais e neuroqu?micas em um model de fibromialgia induzido por reserpina em camundongos. A administra??o aguda de AT-RvD1 e RvD2 produziu um efeito inibit?rio significativo sobre a alod?nia mec?nica e a hipersensibiliza??o t?rmica nos animais tratados com reserpina, sendo que nenhum efeito foi observado quando os animais foram tratados com RvD1. A administra??o aguda de pregabalina, f?rmaco de refer?ncia para o tratamento da fibromialgia, apresentou um efeito antinociceptivo similar ?quele observado para AT-RvD1 e RvD2. Interessante, a administra??o repetida e sist?mica de AT-RvD1 e RvD2 tamb?m preveniu o comportamento depressivo nos animais que receberam reserpina, de acordo com a avalia??o do tempo de imobilidade, enquanto que a administra??o cr?nica de pregabalina n?o apresentou efeito sobre esse par?metro. A indu??o de fibromialgia pela reserpina produziu uma redu??o marcante dos n?veis de dopamina e serotonina (5-HT), quando avaliados no c?rebro total, medula espinhal, c?rtex e t?lamo. A reserpina tamb?m promoveu uma redu??o nos n?veis de glutamato no c?rebro total e, um aumento significativo na medula espinhal e no t?lamo. O tratamento cr?nico com RvD2 preveniu a redu??o de 5-HT no c?rebro total e, reverteu o aumento do glutamato no c?rebro total e medula espinhal. Por outro lado, AT-RvD1 restaurou os n?veis de dopamina no c?rtex e de 5-HT no t?lamo, ao mesmo tempo em que, reduziu os n?veis de glutamato no c?rebro. Em rela??o ? pregabalina, ela preveniu a redu??o de dopamina no c?rebro total e inibiu o aumento do glutamato no c?rebro e na medula espinhal dos animais tratados com reserpina. Nossos resultados fornecem novas evid?ncias quanto aos efeitos da AT-RvD1 e, principalmente RvD2 na redu??o da dor e, ainda, da depress?o, no modelo de fibromialgia induzida por em camundongos.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 459166.pdf: 2547388 bytes, checksum: 27814fb2b5f7b670424cdc2d80523d6f (MD5) Previous issue date: 2014-03-06 / Disturbances in glutamatergic signaling have been proposed as the cause of many diseases of the nervous system. The zebrafish has been considered as an efficient model in the investigation of the neurochemical basis of various disorders, such as schizophrenia and epilepsy. Several neurotransmitter systems have been characterized in zebrafish, including the glutamatergic system. Moreover, a vast repertoire of behavioral responses to drugs has been characterized in particular in adults. However, little information is available about the ability to generate response to classic drugs of glutamatergic action in the early stages of development in zebrafish. Throughout development, ionotropic glutamate receptors have an orderly variability between the subunits that compose them, giving them different pharmacokinetic properties and degree of affinity for their ligands. In this way, we analyzed the locomotor/behavioral profile of zebrafish in response to the glutamate receptor antagonist, MK-801, in different doses in 30, 60, 120 days post-fertilization (dpf) and 2 years post-fertilization animals, as well the effect of caffeine pre-exposure on MK-801 action. Additionally, we analyzed the expression profile of subunits that comprise the NMDA receptor in whole brain of zebrafish during development. Locomotor/behavioral response to kainic acid (KA) was evaluated in different doses at ages 7, 15 and 30 dpf. Also, the pre-exposure to kainic acid in 24 hours post-fertilization (hpf) and 7 and 15 dpf animals was challenged by a second exposure to kainic acid at 2 months post-fertilization The results demonstrated that zebrafish has an age-dependent response to MK-801 and kainic acid, at least on the locomotor/behavior aspects. The peak of locomotor response to MK-801 occurred at 60-120 days post-fertilization, which was partially prevented by caffeine and able to alter the time on upper zone of aquarium as a measure of anxiety. Analysis of gene expression of NMDA receptor subunits in zebrafish brain demonstrated that NR2C and NR2D subunits have later expression in comparison to subunits NR1, NR2A and NR2B. The animals that were exposed to KA showed alterations in locomotor activity without displaying classic convulsive characteristics. However, pre- exposure to 7dpf KA was able to partially prevent the seizure events in response to KA injection (6 mg / K) at 2 months post- fertilization. / Dist?rbios na sinaliza??o glutamat?rgica s?o propostos como a causa de in?meras patologias do sistema nervoso. O peixe-zebra tem sido considerado um eficiente modelo na investiga??o das bases neuroqu?micas de diversos transtornos, tais como a esquizofrenia e a epilepsia. Diversos sistemas de neurotransmiss?o j? foram caracterizados em peixe-zebra, incluindo o sistema glutamat?rgico. Al?m disto, um vasto repert?rio de respostas comportamentais a f?rmacos j? foram caracterizados em especial em indiv?duos adultos. Entretanto, pouca informa??o ? dispon?vel a cerca da capacidade de gerar resposta a cl?ssicas drogas de a??o glutamat?rgica em fases iniciais do desenvolvimento em peixe-zebra. Ao longo do desenvolvimento, os receptores glutamat?rgicos apresentam uma ordenada variabilidade entre as subunidades que os comp?em, o que lhes confere diferentes propriedades farmacocin?ticas e grau de afinidade por seus ligantes. Desta forma, neste trabalho foi analisado o perfil de resposta locomotora/comportamental do peixe-zebra ao antagonista glutamat?rgico MK-801 em diferentes doses nas idades de 30, 60, 120 dias p?s-fertiliza??o (dpf) e 2 anos p?s-fertiliza??o(apf), bem como o efeito da pr?-exposi??o ? cafe?na sobre os efeitos do MK-801. Adicionalmente, foi analisado o perfil de express?o das subunidades que comp?em o receptor NMDA em c?rebro total de peixe-zebra ao longo do desenvolvimento. A resposta locomotora ao ?cido ca?nico (KA) tamb?m foi avaliada em diferentes doses nas idades de 7, 15 e 30 dpf. A pr?-exposi??o ao ?cido ca?nico em animais de 24 horas p?s-fertiliza??o (hpf) e 7 e 15 dpf foi confrontada pela exposi??o ao ?cido ca?nico aos 2 meses de vida do peixe-zebra. Os resultados encontrados neste trabalho demonstram haver uma resposta idade-dependente na atividade locomotora do peixe-zebra, tanto para MK-801 quanto para ?cido ca?nico. O pico de resposta locomotora ao MK-801 foi entre 60 e 120 dpf, o qual foi parcialmente prevenido pela pr?-exposi??o ? cafe?na e foi capaz de alterar de forma idade-dependente o tempo no topo do aqu?rio, utilizado como uma medida de ansiedade. A an?lise de express?o das subunidades dos receptores NMDA em c?rebro de peixe-zebra demonstrou que as subunidades NR2C e NR2D possuem express?o tardia em rela??o ?s subunidades NR1, NR2A e NR2B. Os animais que foram expostos ao KA apresentaram altera??o na atividade locomotora sem exibir caracter?sticas convulsivas cl?ssicas. Entretanto, a pr?-exposi??o ao KA aos 7dpf foi capaz de prevenir parcialmente os eventos convulsivos em resposta ? inje??o de KA (6 mg/Kg, i.p) aos 2 meses p?s-fertiliza??o.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:33:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 447555.pdf: 1643774 bytes, checksum: 08d299c36bd5f21a4341e9371e06362e (MD5) Previous issue date: 2013-03-04 / Introduction : The prenatal period is critical for the development and maturation of several organ systems essential. Objective : To evaluate the effects of prenatal stress on behavioral responses, as well as possible structural changes and standard cell lung in an experimental model with Balb/c. Materials and Methods : We used female Balb/c primiparous. After identification of pregnancy, the animals were divided into 3 groups: CTLE (control), PNS 1 (stress every other day from the 8th day of pregnancy) and PNS 2 (stress from day 15 of pregnancy until birth). The prenatal stress was accomplished through containment. The animals were weighed at birth, weaning and day 10 (day 21). As adults, we analyzed the behavior of fear/anxiety through field tests (AC) and elevated plus maze (EPM) was performed and bronchoalveolar lavage (BAL) and lung histopathology. Results : No differences were found in relation to animal weight among the three groups. Behavioral analysis of the males in the test AC and EPM, showed no significant difference between groups PNS 1 and PNS 2 relative to CTLE. In the analysis of the test AC, females PNS 1 group showed a decrease in the total distance covered (P <0.001) increased time on the periphery (p <0.001) and decreased time the center (p <0.001) compared to the group CTLE. The test EPM in females was not significantly different among the three groups. The analysis of the cellular profile in BAL and lung histology, there were no differences between groups. Conclusion : The prenatal stress induces changes in the behavior of fear/anxiety only in Balb/c mice and the stress model from the eighth day of pregnancy, suggesting that the effects of the programming are possible in this model. On the other hand, prenatal stress caused no alterations in basal lung. / Introdu??o : O per?odo pr?-natal ? de suma import?ncia para o desenvolvimento e a matura??o de diversos sistemas e ?rg?os essenciais. Objetivo : Avaliar os efeitos do estresse pr?-natal sobre as respostas comportamentais, assim como poss?veis altera??es estruturais e do padr?o celular no pulm?o em um modelo experimental com camundongos Balb/c. Materiais e M?todos: Foram utilizadas f?meas Balb/c prim?paras. Ap?s a identifica??o da prenhez, os animais foram divididos em 3 grupos: CTLE (controle), PNS 1 (estresse em dias intercalados a partir do 8? dia da prenhez) e PNS 2 (estresse a partir do 15? dia da prenhez at? o nascimento). O estresse pr?-natal foi realizado atrav?s de conten??o. Os animais foram pesados ao nascimento, dia 10 e no desmame (dia 21). Quando adultos, foram analisados o comportamento de medo/ansiedade por meio dos testes de campo aberto (CA) e labirinto em cruz elevada (LCE) e foi realizado lavado broncoalveolar (LBA) e an?lise histopatol?gica do pulm?o. Resultados : N?o foram encontradas diferen?as em rela??o ao peso dos animais entre os tr?s grupos. A an?lise comportamental dos machos no teste do CA e LCE, n?o apresentou diferen?a significativa entre os grupos PNS 1 e PNS 2 em rela??o ao CTLE. Na an?lise do teste CA, as f?meas do grupo PNS 1 apresentaram uma diminui??o da dist?ncia total percorrida (p<0,001), aumento do tempo na periferia (p<0,001) e diminui??o do tempo no centro (p<0,001) quando comparado ao grupo CTLE. O teste de LCE nas f?meas n?o teve diferen?a significativa entre os tr?s grupos. Quanto ? an?lise do perfil celular no LBA e histologia pulmonar, tamb?m n?o houve diferen?as entre os grupos. Conclus?o : O estresse pr?-natal induz a altera??es no comportamento de medo/ansiedade somente em camundongos Balb/c f?meas e no modelo de estresse a partir do oitavo dia da prenhez, evidenciando que os efeitos do programming s?o poss?veis nesse modelo. Por outro lado, o estresse pr?-natal n?o provocou altera??es basais no pulm?o.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 443581.pdf: 2098354 bytes, checksum: 0b5ec85f1b50d0c42f83f9793d9e1af5 (MD5) Previous issue date: 2012-08-29 / Lateral amyotrophic sclerosis (ALS) is a neurodegenerative disease characterized by the selective loss of both lower and upper motoneurons in the spinal cord, brain stem and motor cortex. Loss of motoneurons leads to progressive paralysis, and death in 2 to 5 years. Treatment is based on symptomatic measures and pharmacological therapy available is not curative. Thus, it is of great importance to develop new therapeutic strategies to manage this disease. Alternatively, stem cells to replace could be used to replace degenerating neurons or to stop/delay neuronal death. The aim of this study was to verify if bone marrow mononuclear cells (BMMC) have therapeutic potential in transgenic mice superexpressing SOD1G93A. These animals phenotypic and physiopathological characteristics mimic those of ALS. Seventy-day-old or 110-day-old mice were administered with 107 BMMC in the tail vein. BMMC were obtained from C57BL/6-EGFP or SOD1G93A donors. Control animals received saline. In order to determine disease onset and progression, animals were evaluated in the Rotarod test, by electromyography and had their body weight measured. Survival was also evaluated. Tissue samples were collected for PCR analysis of cell migration. Additional groups of animals were euthanized at 120-days-old for histological analysis and the alkaline comet assay. Our results indicate that EGFPBMMC transplantation in 70-day-old mice (pre-symptomatic) mice prolong survival, preserve motor function and preserve motoneurons in the ventral horn of the spinal cord. However, for mSOD1BMMC the observed effect is intermediary. Furthermore, in 110-day-old (symptomatic) mice, only EGFPBMMC prolonged survival. This effect was more discrete than the one observed for pre-symptomatic-treated animals. Finally, systemically administered BMMC migrate into the spinal cord where fragments of their DNA were identified by PCR. There were no differences between the experimental groups in the electromyographical evaluation or DNA integrity measured by the alkaline comet assay. Our results suggest that BMMC have therapeutic potential in ALS since we observed improved motor performance and prolonged survival in animals that received the transplant. Nonetheless, outcomes were better when intervention was early and the transplanted cells did not express the mutated SOD1. Thus, our data represent a step forward in making cell-based therapy available for ALS patients. However, questions associated to the time of intervention and the source of the cells should be carefully addressed. / A esclerose lateral amiotr?fica (ELA) ? uma doen?a neurodegenerativa caracterizada por uma perda seletiva de neur?nios motores na medula espinhal, tronco encef?lico e c?rtex motor. A perda de motoneur?nios d? in?cio a uma paralisia progressiva, levando o paciente a ?bito em 2 a 5 anos. O tratamento se baseia principalmente em medidas sintom?ticas e a terapia farmacol?gica existente n?o ? curativa. Assim, ? de m?xima import?ncia o desenvolvimento de novas estrat?gias terap?uticas. Como alternativa, existe a perspectiva do uso de c?lulas-tronco para substituir neur?nios em degenera??o, ou impedir/retardar o processo de morte neuronal. O objetivo deste estudo foi verificar se as c?lulas mononucleares da medula ?ssea (CMMO) apresentam potencial terap?utico em camundongos transg?nicos que superexpressam SOD1G93A. Estes animais apresentam caracter?sticas fisiopatol?gicas e fenot?picas que se assemelham ? ELA. Aos 70 dias (pr?-sintom?tico) ou 110 dias (sintom?tico) de vida os animais receberam 107 CMMO pela veia da cauda. Camundongos C57BL/6-EGFP ou SOD1G93A foram utilizados como doadores. Animais controle receberam solu??o salina. Para determinar a idade em que os animais passam a apresentar sintomas da doen?a e diferen?as na progress?o, foram utilizados o teste motor do Rotarod, eletroneuromiografia e o peso corporal dos animais. A sobrevida dos animais tamb?m foi analisada. Ap?s a eutan?sia foram coletadas amostras para avalia??o da migra??o celular por PCR. Grupos adicionais de animais foram tratados conforme previamente descrito e eutanasiados aos 120 dias de vida para avalia??o histol?gica e ensaio do cometa alcalino. Nossos resultados indicam que o transplante intravenoso de EGFPCMMO aumenta a sobrevida de animais tratados aos 70 ou aos 110 dias de vida. Quando a interven??o ? feita no per?odo pr?-sintom?tico, o aumento da sobrevida ? acompanhado de preserva??o da fun??o motora e de motoneur?nios do corno ventral da medula espinhal. Entretanto, quando as c?lulas transplantadas s?o mSOD1CMMO, o efeito observado nos mesmos par?metros ? apenas intermedi?rio. Al?m disso, quando o transplante ocorre no per?odo sintom?tico, somente as EGFPCMMO promovem aumento na sobrevida, embora discreto. A perda de fun??o motora e a progress?o n?o se modificam. Finalmente, embora as c?lulas tenham sido administradas sistemicamente, migram para a medula espinhal, onde foram identificados fragmentos de seu DNA. N?o foram identificadas diferen?as entre os grupos na avalia??o por eletroneuromiografia, nem da integridade de do DNA avaliada pelo ensaio do cometa alcalino. Nossos resultados at? o momento sugerem que a fra??o mononuclear da medula ?ssea tem potencial terap?utico no tratamento da ELA, uma vez que verificamos melhora de desempenho motor e aumento de sobrevida em animais submetidos ao transplante. Apesar disso, os desfechos s?o mais favor?veis quando o tratamento ? precoce e as c?lulas n?o expressam a muta??o da SOD1 desencadeadora da ELA. Assim, nossos dados representam avan?o na disponibiliza??o do tratamento com c?lulas-tronco para pacientes com ELA, mas quest?es relacionadas ao per?odo de interven??o e fonte das c?lulas devem ser cuidadosamente avaliadas.