Orientador: Fosca Pedini Pereira Leite / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T15:02:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Turra_Alexander_D.pdf: 7645434 bytes, checksum: b7aa49b635500eb97b45ea4361570ed1 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O presente estudo foi realizado com o objetivo de ampliar o conhecimento sobre a história natural de espécies de caranguejos ermitões (Crustacea, Decapoda, Anomura) com ocorrência no sudeste brasileiro. Para tanto, experimentos foram realizados enfocando aspectos comportamentais, reprodutivos e da ecologia destes animais. Um estudo inicial sobre o período de atividade de algumas espécies (Clibanarius antillensis, C. sclopetarius, C. vittatus e Pagurus criniticornis) mostrou que o padrão de atividade varia entre espécies e pode ser regido por estímulos circadianos e circamereais, embora todas as espécies tenham apresentado alta atividade no período noturno. O comportamento reprodutivo destas espécies também foi avaliado e não revelou alterações marcantes frente a descrições prévias para as espécies, gêneros ou famílias estudados. Entretanto, demonstrou-se a existência de novos comportamentos bem como a possibilidade de indivíduos intersexo das três espécies de Clibanarius, com característica tanto de machos como de fêmeas, copularem com sucesso como machos. Estes indivíduos foram mantidos em laboratório para acompanhar o destino dos poros genitais e, com base em informações morfológicas, comportamentais e populacionais, foi elaborada uma discussão sobre uma eventual possibilidade de hermafroditismo sequencial protogínico em ermitões. Um estudo descritivo sobre o desenvolvimento embrionário destas espécies de ermitão revelou que o tamanho dos embriões e o tempo de duração do desenvolvimento varia entre espécies, bem como algumas características morfológicas como c1ivagem e momento do surgimento da mancha ocelar. No entanto, sete estágios puderam ser identificados com base em características morfológicas e três em função da duração relativa desses. A relação entre o tamanho de ermitões e conchas selecionadas revelou que eles utilizam conchas sub-ótimas na natureza e que nem o tipo de concha (arquitetura) nem a espécie de ermitão têm influência sobre as relações entre suas dimenções (exceto para medidas da abertura das conchas). A hipótese do modelamento, ou seja, do efeito da experiência prévia dos ermitões com determinados tipos de concha na forma e padrões futuros de seleção de concha, foi comprovada. Ermitões criados em conchas com abertura estreita tomam-se dorso-ventralmente achados e tendem a selecionar estas conchas com mais frequência que indivíduos mantidos em conchas com abertura arredondada. Também foi demonstrado o efeito da partilha de recursos nos padrões de utilização de conchas por duas espécies simpátricas de ermitões, C. antillensis e P. criniticornis, bem como a influência de diferentes estratégias competitivas (exploração e interferência) na dinâmica de troca de conchas entre elas. Demonstrou-se ainda que P. criniticornis é um bom explorador, apresentando grande capacidade de resposta a eventos simulados de predação de gastrópodes. Entretanto, esta espécie perde as conchas recentemente obtidas para C. antillensis, o qual o domina em brigas por conchas. Por fim, verificou-se que a predação de caramujos por caranguejos quebradores de conchas pode influenciar positivamente a disponibilidade de conchas e sua futura utilização por ermitões, mas que este efeito depende da espécie de concha (diferentes graus de proteção) e de predador (diferentes estratégias e habilidades de predação), do tamanho do predador e do tamanho da presa em relação ao predador / Abstract: This study was conducted to furnish information on the natural history of hermit crab species (Crustacea, Decapoda, Anomura) from South-eastern Brazil. Some experiments were designed to focus behavioral, reproductive and ecological aspects of the biology of these organisms. A study on the periods of activity of some hermit crab species (C. antillensis, C. sclopetarius, C. vittatus and Pagurus criniticornis) showed that the activity patterns vary among species and may be related to circadian and circatidal cues, although all species presented high nocturnal activity. The reproductive behavior of these species was also evaluated and did not reveal marked differences in relation to previous descriptions for the studied species, genera and families. However, new behaviors were described as well as the possibility of intersex individuals of the three species of Clibanarius, with both mal e and female external characteristics, copulate successfully as males. Such intersex individuals were maintained in the laboratory to follow the fate of the gonopores and, based on morphological, behavioral and populational information, a discussion about an eventual possibility of sequential protogynic hermaphroditism in hermit crabs was elaborated. A descriptive study on the embryonary development of these species revealed that egg size and developmental time varied among species as well as some morphological characteristics as cleavage and the time the eye pigment appeared. However, seven stages were identified based on morphological characteristics and three on their relative duration time. The relationship between the sizes of hermit crabs and selected shells revealed that the crabs are using sub-optimal shells in nature and that neither shell (architecture) nor hermit crab species influence the size relationships between crabs and selected shells (except for measures of shell aperture). The molding hypothesis, i.e., the effect of previous utilization of certain shell types on form and future patterns of shell selection in hermit crabs, was corroborated. Hermit crabs maintained in narrow-aperture shells become dorso-ventrally compressed and tend to select such shells in a higher frequency than individuals maintained in rounded-aperture shells. The effect of resource partitioning on the shell utilization patterns of two sympatric hermit crab species (C. antillensis and P. criniticornis) was also demonstrated, as well as the influence of different competitive strategies (exploitation and interference) in shell exchange dynamics between them. It was shown that P. criniticornis is a good exploiter, presenting high ability to attend gastropod simulated predation events, but looses such newly acquired shells to C. antillensis, which dominates the former species in shell fights. Finally, the positive influence of shell-breaking crabs on shell availability and its future utilization by hermit crabs was demonstrated to be dependent on shell (variable protective degrees) and predator species (different predatory strategies and abilities), predator size and relative prey-predator size / Doutorado / Doutor em Ecologia

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-15Bitstream added on 2014-06-13T20:54:01Z : No. of bitstreams: 1 pereirajunior_ej_me_sjrp.pdf: 1176824 bytes, checksum: ea26888e0c90e98ae7bc9367c03e1901 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Caracteres embriológicos possuem valor sistemático e sua utilidade foi demonstrada por diversos autores para elucidar o posicionamento filogenético de certas famílias de angiospermas. Este estudo visa analisar a ontogenia das estruturas reprodutivas de Cybistax antisyphilitica, com o propósito de acrescentar dados embriológicos relevantes ao delineamento filogenético da família, ou de categorias taxonômicas infrafamiliares. As características embriológicas observadas demonstraram similaridade com espécies pertencentes à ―Tabebuia alliance‖ cuja embriologia já foi investigada. Observou-se durante a ontogenia do óvulo de C. antisyphilitica que apenas o ginósporo calazal se desenvolve e, durante sua diferenciação em célula-mãe do saco embrionário, a face micropilar de sua parede celular assume uma conformação côncava, na qual há grande deposição de calose. No estádio octonuclear, há acúmulo de uma substância fibrogranular entre o endotélio e a parede do ginófito fazendo com que o saco embrionário apresente um característico afunilamento mediano. Em relação a ontogenia da antera da espécie estudada, verificou-se que as camadas tapetais são dimórficas, embora ao final do estádio pré-meiótico se tornem similares; embora, após a meiose, o dimorfismo se acentua novamente nas camadas tapetais. Os amiloplastos das células-mãe dos andrósporos são herdados pelos andrósporos e grãos de pólen deles resultantes. Os amiloplastos dos grãos de pólen gradualmente aumentam em número e tamanho em um único ciclo de amilogênese/amilólise. Com base nos dados obtidos conclui-se que a configuração da parede distal do ginósporo calazal e o acúmulo de secreção na porção mediana do saco embrionário são características não relatadas para outras espécies da família e podem... / Embryological characters have systematic value and its usefulness has been demonstrated by several authors to elucidate the phylogenetic position of certain angiosperms families. This study aims to analyze the ontogeny of reproductive structures of Cybistax antisyphilitica, with the purpose of adding relevant embryological data to the phylogenetic design of the family or, infra-familiar taxonomic categories. The embryological features observed was similar to species belonging to ―Tabebuia alliance‖ whose embryology has been investigated. During the ontogey of C. antisyphilitica ovule, only the chalazal megaspore develops, and in the course of its differentiation in the embryo sac mother cell, the micropylar side of its cell wall assumes a concave conformation in which there is an expressive deposition of callose. In the octonuclear stage, there is an accumulation of a fibrogranular substance between the endothelium and megagametophyte wall causing a bottleneck in the middle portion of embryo sac. For anther ontogeny of the species studied, the tapetal layers are dimorphic, although becoming similar at the late pre-meiotic stage. After meiosis, the dimorphism is accentuated between the two tapetal layers. The microspore mother cell amyloplasts are inherited by the microspores and the resulting pollen grains. The pollen grain amyloplasts gradually increasing in number and size in a single amylogenesis/amylolyse cycle. Based on the obtained data we concluded that the configuration of the distal wall of the chalazal megaspore and the accumulation of secretion in the median portion of embryo sac are characters not reported for other species of the family, and may possibly be autapomorphic characters. Regarding the ontogeny of the anther, Cybistax antisyphilitic showed a multistratified fibrous endothecium... (Complete abstract click electronic access below)

Dissertação (mestrado) - Universidade de São Paulo. Instituto de Biociencias / Made available in DSpace on 2012-10-16T02:38:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006Bitstream added on 2014-06-13T18:46:35Z : No. of bitstreams: 1 pyles_escs_dr_botfmvz.pdf: 345793 bytes, checksum: f8cd21a8887d03897e049aa3fce53820 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Neste estudo vitrificou-se em OPS ovócitos (Experimentos 1, 2 e 3) e embriões bovinos (Experimentos 4, 5 e 6) em três soluções de vitrificação distintas: Experimentos 1 e 4) 20%EG + 20%DMSO + 0,5M sacarose; Experimentos 2 e 5) 20%DF + 20%EG + 0,5M sacarose; Experimentos 3 e 6) 20%DF + 20%DMSO + 0,5M sacarose. Os embriões foram vitrificados na presença ou não de citocalasina B. Os ovócitos foram vitrificados ou somente expostos aos crioprotetores imaturos (G0h e G0hexp), ou após 6 horas (G6h e G6hexp), 12 horas (G12h e G12hexp) ou 22 horas de MIV (G22h e G22hexp). Após a exposição ou aquecimento, parte dos ovócitos completou as 22 horas de MIV e foi destinada à PIV, para avaliação da capacidade de se desenvolverem até blastocisto. No restante avaliou-se o estágio de maturação nuclear e a distribuição dos grânulos corticais e das mitocôndrias. Observou-se que a exposição dos ovócitos imaturos (0 ou 6 horas de MIV) aos crioprotetores nos experimentos 1, 2 e 3 resultou em perda substancial de viabilidade, avaliada pelas taxas de clivagem (GC=79,4%; 1G0hexp=37,1%; 1G6hexp=51,1%; 2G0hexp=33%; 2G6hexp=52,5%; 3G0hexp=36,2%; 3G6hexp=49,8%), o que foi menos notável nos ovócitos expostos após 12 ou 22 horas de MIV (1G12hexp=59,1%; 1G22hexp=71,1%; 2G12hexp=61,5%; 2G22hexp=62,5%; 3G12hexp=58,8%; 3G22hexp=68,6%). A realização da MIV antes da vitrificação foi benéfica. Apesar de nenhuma das soluções de crioprotetores ter sido capaz de promover proteção adequada aos ovócitos submetidos à vitrificação em qualquer momento da MIV, no Experimento 1 foi observada clivagem (1G12h=7,3%; 1G22h=4,2%) indicando que a mistura de crioprotetores EG+DMSO foi a mais eficiente nas condições utilizadas. Entretanto, não houve produção de blastocistos em nenhum experimento. Nos Experimentos 4, 5 e 6 notou-se que em todos os grupos... / In this study bovine oocytes (Experiments 1, 2 and 3) and embryos (Experiments 4, 5 and 6) were vitrified in OPS using 3 different cryoprotectant solutions: Experiments 1 and 4) 20%EG + 20%DMSO + 0,5M sucrose; Experiments 2 and 5) 20%DF + 20%EG + 0.5M sucrose; Experiments 3 and 6) 20%DF + 20%DMSO + 0.5M sucrose. Embryos were vitrified in the presence or not of cytocalasin B. Oocytes were vitrified or just exposed to the cryoprotectant solutions after 0h (G0h and G0hexp), 6h of IVM (G6h and G6hexp), 12h of IVM (G12h and G12hexp) and 22h of of in vitro maturation (IVM) (G22h and G22hexp). Oocytes from groups 0 and 6h were considered immature and from 12 and 22h groups were considered mature. After exposure to cryoprotectants or warming, part of the oocytes that completed 22h of IVM were submitted to IVF to evaluate their developmental ability. Another part of the oocytes were used to evaluate nuclear maturation in the distribution of mitochondria and cortical granules. The results showed that the exposure of immature oocytes (0 and 6 hours of MIV) to cryoprotectants reduce their viability, since cleavage rates of all groups were significantly lower compared to control group (GC=79.4%; 1G0hexp=37.1%; 1G6hexp51.1%; 2G0hexp=33%; 2G6hexp=52.5%; 3G0hexp=36.2%; 3G6hexp=49.8%). This effect was less evident in the groups of mature oocytes submitted to IVM for 12 or 22 hours (1G12hexp=59.1%; 1G22hexp=71.1%; 2G12hexp=61.5%; 2G22hexp=62.5%; 3G12hexp=58.8%; 3G22hexp=68.6%). The previous IVM is beneficial to vitrification. Although none of the cryoprotectant solutions utilized were totally efficient in protecting the oocytes form cryodamage, in Experiment 1 cleavage was observed (1G12h=7.3%; 1G22h=4.2%) indicating that the combination of EG+DMSO was more effective than the other two. However in none of the groups blastocyst was formed. When embryos... (Complete abstract click electronic access below)

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-03-01T17:02:44Z No. of bitstreams: 1 2017_AnaLuizaSilvaGuimarães.pdf: 1865058 bytes, checksum: 038ca84fb0206df2d9c2d9e242c09491 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-03-09T20:29:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_AnaLuizaSilvaGuimarães.pdf: 1865058 bytes, checksum: 038ca84fb0206df2d9c2d9e242c09491 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-09T20:29:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_AnaLuizaSilvaGuimarães.pdf: 1865058 bytes, checksum: 038ca84fb0206df2d9c2d9e242c09491 (MD5) Previous issue date: 2018-03-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / O presente estudo objetivou determinar o melhor sistema de cultivo individual a ser utilizado e a quantidade relativa de RNAm de genes candidatos à marcadores de competência em biópsias de células do cumulus (CC) imaturas e maturadas de ovócitos com alta e baixa capacidade de produzir embriões in vitro. Foram realizados dois experimentos, sendo que no primeiro foram testados o efeito de dois tipos de cultivo individual (microgotas 20 μL e Cell Tak) na produção de embriões, o uso de ácido fólico como antioxidante em diferentes concentrações (0, 10, 20, 50 e 500 μM) na produção embrionária e no padrão de metilação de regiões do α- satélite e IGF2 e, o uso de ácido fólico isolado ou conjugado com ITS durante o cultivo em sistema individual na produção e qualidade dos embriões. Já no segundo foi determinada a quantidade relativa de RNAm para os genes GPC4, PTGS2, LUM, ALCAM, FSHR, PGR, GPX3, SERPINE2, HAS2, PRDX3, por PCR em tempo-real (qPCR) em biópsias de CC imaturas e maturadas. As biópsias utilizadas para o qPCR foram agrupadas conforme o resultado da produção de embriões em: CCOs que formaram blastocisto em D7(embrião); CCOs que não clivaram (não clivado) e, CCOs que clivaram, mas que não chegaram a blastocisto (clivado). No primeiro experimento, foi observado que o grupo Cell Tak apresentou menor taxa de clivagem (P≤0,05) e menor produção de embriões (P≤0,05) em D7 e D8 em relação ao grupo controle e microgotas de 20 μL. Em relação às diferentes concentrações de ácido fólico, o grupo 500μM apresentou uma redução nas taxas de clivagem em D6 (P≤0,05) em relação aos demais. Em D7, não houve diferença entre os grupos quando comparados ao grupo controle. Em relação a metilação da região α- Satélite, os grupos Controle, 20 μM e 500 μM apresentaram padrão semelhantes (P>0,05), que era hipometilado. Já para a região do éxon 10 do gene IGF2, o padrão de metilação foi diferente nos grupos 20 μM e 500 μM em relação ao controle (P ≤0,05). Quanto ao uso de ácido fólico e ITS, isolados ou associadosdurante o cultivo individual, foi observado que somente no grupo individual na presença de ITS, produção de embriões foi semelhante ao cultivado em grupo (P>0,05). No segundo experimento, dos 10 genes avaliados nas biópsias de CCs imaturas e maturadas, 2 genes apresentaram diferenças no nível de RNAm entre os grupos. O gene LUM mostrou-se mais expresso (P=0,02), enquanto que FSHR mostrou-se menos expresso (P= 0,09), ambos em CC maturadas de CCOs que desenvolveram em embrião, comparado as do grupo que não desenvolveu embrião. Conclui-se que o cultivo em gotas na presença de ITS proporcionou as melhores taxas de embriões e, que apesar do ácido fólico não afetar a produção altera o padrão de metilação do DNA. A expressão dos genes LUM e FSHR, em CCs maturadas está associada a capacidade do ovócito de formar embrião, podendo ser utilizados como marcadores não invasivos da competência ovocitária. / The present study aimed to determine the best individal culture system to be used in vitro embryo production and to determine the quantity of genes transcrits in immature and matures cumulus (CC) cells biopsies obtained from cumulus-oocytes-complexes (COCs) with high and low capacity to produce embryos. Two experiments were carried out, in the first one the effect of two types of individual culture (microdroplets 20 μL and Cell Tak) on embryo production, the use of folic acid at different concentrations (0, 10, 20, 50 and 500 μM) on embryo production and methylation pattern, and the use of folic acid alone or in combination with ITS during individual culture on embryo production and quality were evaluated. In the second experiment, the relative amount of mRNA for GPC4, PTGS2, LUM, ALCAM, FSHR, PGR, GPX3, SERPINE2, HAS2 and PRDX3 genes was determined by real-time PCR (qPCR) in immature and mature CC biopsies. The biopsies were pooled according to the embryo production results as CCOs that formed blastocyst in D7 (embryo); CCOs that did not cleave (not cleaved) and CCOs that cleaved but did not reach the blastocyst (cleaved). On the first experiment, it was observed that the Cell Tak group presented lower cleavage at D2 and blastocyst rates at D7 and D8 compared to the control and the 20 μL microdroplets groups. Regarding the different concentrations of folic acid, the 500μM group showed lower rates of cleavage and blastocyst at D6 (P≤0.05), compared to the others groups. On D7, no differences were observed between the groups and the control. As for methylation, α-Satellite region, all treatments were similar, (P> 0.05) and presented a hypomethylated pattern. For the exon 10 region of the IGF2 gene, it observed that, the groups exposed to acid folic, either 20 μM or 500 μM, had a difference methylation pattern compared to the control group (P ≤0.05). The results for the use of folic acid and ITS isolated or in combination during individual culture, showed that only the individual group exposed to ITS had similar embryo production to the control group (P> 0.05). In the second experiment, from 10 genes evaluated in CCs biopsies, two genes had differences in mRNA levels. The LUM gene was more expressed (P = 0.02), whereas FSHR was less expressed (P = 0.09) in maturated CC obtained from CCOs that developed into embryo, compared to the ones that did not. It can be concluded that individual culture in microdrops in the presence of ITS gave the highest embryo production and that although folic acid does not increase embryo development it changes their methylation pattern. In addition, the expression of the LUM and FSHR genes in CC is associated with the ability of the oocyte to form an embryo and can used as noninvasive markers of oocyte competence.

Orientador: Vera Lucia Sactena / Banca: Adelita Ap. Sartori Paoli / Banca: Denise Maria Trombert Oliveira / Banca: Simone Pádua Teixeira / Banca: Daniela Guimarães Simão / Resumo: A embriologia e o desenvolvimento pós-seminal de Olyra humilis, Sucrea monophylla (Bambusoideae), Axonopus aureus, Paspalum polyphyllum (Panicoideae), Eragrostis solida e Chloris elata (Chloridoideae) foram estudadas visando à caracterização dessas subfamílias de Poaceae. As anteras são bitecas e tetrasporangiadas; apresentam tapete secretor; microsporogênese sucessiva; tétrades isobilaterais, grãos de pólen esféricos, tricelulares, monoporados, com anel e opérculo. Apresentam óvulo bitegumentado; saco embrionário tipo Polygonum; endosperma nuclear e embrião lateral. As espécies apresentam raiz embrionária de origem endógena (adventícia), cotilédone dividido em hiperfilo (escutelo), bainha reduzida e hipofilo (coleóptilo), coleorriza (raiz primária reduzida), mesocótilo (eixo entre escutelo e coleóptilo) e epiblasto (folha embrionária). O desenvolvimento pósseminal inicia-se com a emissão da coleorriza, seguida do coleóptilo e primeira folha desenvolvida semelhante ao metafilo, exceto em Bambusoideae, que é modificada em catafilo. Essas características embriológicas e do desenvolvimento pós-seminal se assemelham com as demais espécies de Poaceae já estudadas. Algumas características são diagnósticas para as subfamílias como grãos de pólen com exina granulosa em Bambusoideae, insular com espínulos densamente agrupados em Panicoideae e com espínulos esparsamente agrupados em Chloridoideae; óvulo hemianátropo pseudocrassinucelado em Bambusoideae e Panicoideae e campilótropo tenuinucelado em Chloridoideae; tegumento externo restrito à base do óvulo em Bambusoideae, estendendo até um terço do nucelo em Panicoideae e alongado até a região próxima à micrópila em Chloridoideae. / Abstract: The embryology and post-seminal development of Olyra humilis, Sucrea monophylla (Bambusoideae), Axonopus aureus, Paspalum polyphyllum (Panicoideae), Eragrostis solida and Chloris elata (Chloridoideae) were studied here in order to characterize the respective subfamilies within Poaceae. The bithecous and tetrasporangiate anthers present: secretory tapetum, successive microsporogenesis, isobilateral tetrads, and spherical pollen grains, which are tricellular and monoporate and have annulus and operculum. The ovule is bitegmic and the embryo sac is of the Polygonum type. The endosperm is nuclear and the embryo is lateral. The studied species have endogenous embryonic root (adventitious); cotyledon divided into hyperphyll (scutellum), reduced sheath and hypophyll (coleoptile); coleorhiza (reduced primary root); mesocotyl (axis between the scutellum and the coleptile); and epiblast (embryonic leaf). The post-seminal development starts with the emission of the coleorhiza, followed by the coleoptile and the first leaf, which is similar to the metaphyll except for Bambusoideae, in which it converts into a cataphyll. These embryological and post-seminal developmental features resemble the ones already known for species of Poaceae. Some features are diagnostic within the subfamilies: the exine of the pollen grain is granulose in Bambusoideae, insular with densely grouped spinules in Panicoideae, and insular with scarcely grouped spinules in Chloridoideae; the ovule is hemi-anatropous and pseudocrassinucelate in both Bambusoideae and Panicoideae, but it is campylotropous and tenuinucellate in Chloridoideae; the outer integument is restricted to the base of the ovule in Bambusoideae, whereas in Panicoideae it reaches up to one third of the nucellus, and in Chloridoideae it extendes until the micropyle. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-04Bitstream added on 2014-06-13T20:00:06Z : No. of bitstreams: 1 almeida_iro_me_botib.pdf: 1159803 bytes, checksum: 8b692d8d747287b1fa84a1b81e1c3540 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este projeto de pesquisa teve como objetivo analisar o desenvolvimento de embriões provenientes dos cruzamentos interespecíficos entre as espécies de teleósteos neotropicais, pintado (Pseudoplatystoma corruscans) e jandiá (Leiarius marmoratus). As coletas foram realizadas no Centro Nacional de Pesquisa e Conservação de Peixes Continentais - CEPTA/ICMBIO, Pirassununga – SP e na Piscicultura Muriti, Nova Mutum – MT. A reprodução foi feita através de indução hormonal, utilizando extrato bruto de hipófises de carpa. Os ovos foram incubados em incubadoras verticais e coletados desde o momento da fertilização até a eclosão das larvas. Os ovos dos parentais P. corruscans e L marmoratus e seus híbridos, são esféricos, demersais, córion nítido e espaço perivitelínico pequeno após a hidratação, não sendo observada a presença de gota de óleo na vesícula vitelínica durante todo o desenvolvimento embrionário. A média do espaço perivitelínico do L. marmoratus foi de 215,9μm, do P. corruscans foi de 352,5μm, do híbrido I foi de 561μm e do híbrido II foi de 247,2μm. O diâmetro médio do ovo do L. marmoratus foi de 589,6μm, do P. corruscans foi de 867,3μm, do híbrido I foi de 765,3μm e do híbrido II foi de 581μm. O período de incubação do P. corruscans e do híbrido I foi de 13 horas, à temperatura média de 28,7°C respectivamente. Já para o L. marmoratus e do híbrido II foi de 14 horas para o parental e 12 horas para o híbrido, a uma temperatura média de 28,3°C. Sendo estabelecidos os seguintes estágios embrionários: zigoto, clivagem, gástrula, organogênese e eclosão e estes divididos em fases. O estágio de clivagem foi dividido nas fases de 2, 4, 8, 16, 32, 64 células e na fase de mórula. O estágio de gástrula apresentou as fases de 25%, 50%, 75%, 90% e 100% do movimento morfogenético de epibolia e o estágio de organogênese... / The main of this research project was analyze the embryos development from the inter-specific crossing between the neotropical teleostei species, pintado (Pseudoplatystoma corruscans) e jandiá (Leiarius marmoratus). The samples were realized in the National Research and Conservation Nucleus of Continental Fishes – CEPTA/ICMBIO, Pirassununga – SP in the Buriti Fish Farming, Nova Mutum – MT. The reproduction was made through the hormonal induction, using gross extract of pituitary from carpa. The eggs were incubated in vertical incubators and collected since the fertilization time until the larval hatching. The eggs of the parents P. corruscans e L. marmoratus and their hybrids, are spherical, demersal, distinct chorion and small perivitelline space after the hydration without observation of the presence of drop oil in the vitelline vesicle during all embryonic development. The mean of the perivitelline space of the L. marmoratus was 215,9μm, in the P. corruscans was 352,5μm, in the hybrid I was 589,6μm and 247,2μm in the hybrid II. The mean diameter of the egg in L. marmoratus was 589,6μm, in P. corruscans was 867,3μm, in the híbrido I was 765,3μm and 581μm in the hybrid II. The incubation period of P. corruscans and the híbrido I was 13 hours , in the mean temperature of 28,7°C. However in L. marmoratus and Hybrid II was 14 hours for the parental and 12 hours for the hybrid in the mean temperature of 28,3°C. It was established the following embryonic stages: zygote, cleavage, gastrula, organogenesis and hatching and this divided in phases. The cleavage stage was divided in the phases 2, 4, 8, 16, 32, 64 cells and in the morula phase. The gastrula stage showed the phases 25%, 50%, 75%, 90% and 100% of morphogenetic movements of epiboly and the organogenesis stage was divided in the neurula, segmentation and larval phases... (Complete abstract click electronic access below)

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-19T18:35:48Z No. of bitstreams: 1 2009_EmivaldoSiqueiraFilho.pdf: 2750634 bytes, checksum: fab5082eeb2ad7b70158ed164d8d33b8 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-04-01T02:12:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_EmivaldoSiqueiraFilho.pdf: 2750634 bytes, checksum: fab5082eeb2ad7b70158ed164d8d33b8 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-04-01T02:12:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_EmivaldoSiqueiraFilho.pdf: 2750634 bytes, checksum: fab5082eeb2ad7b70158ed164d8d33b8 (MD5) Previous issue date: 2009-05-29 / Apesar do enorme crescimento obtido pela técnica de produção in vitro de embriões nos últimos anos, uma limitação continua evidente, os embriões são mais susceptíveis à criopreservação que embriões produzidos in vivo. Pesquisadores buscam melhorar a qualidade do embrião produzido in vitro ou alterar os sistemas de criopreservação visando obter melhores resultados no procedimento de criopreservação. O presente trabalho teve como objetivo definir os melhores parâmetros para o uso da pressão hidrostática como nova ferramenta no processo de criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro e avaliar ultraestruturalmente e pela análise de expressão gênica os efeitos causados pela pressão hidrostática e pelo procedimento de criopreservação nestes embriões. Os resultados indicaram que a pressurização de embriões a partir de 80 MPa passou a ser deletéria para o desenvolvimento embrionário. Mas o uso da pressão no nível de 60 MPa por 1 hora promoveu um incremento na taxa de eclosão dos embriões após a vitrificação comparado ao grupo apenas vitrificado (79% vs 66%). E que 1 hora após a pressurização seria o melhor momento para a vitrificação, com melhores taxas de re-expansão, eclosão (90% e 74%, respectivamente), maior velocidade de re-expansão após vitrificação/desvitrificação e maior abundância de transcritos do gene ERG 25 nesse momento comparados com grupo controle, imediatamente e 2 horas após a pressão. Ultraestruturalmente embriões submetidos a pressão apresentavam maior quantidade de microvilosidades e aumento de mitocôndrias tipo hooded que os embriões controle. No grupo de embriões vitrificados após a pressão observou-se uma maior quantidade de núcleos por área de MCI quando comparados ao grupo apenas vitrificado. Determinados níveis de tratamento com pressão hidrostática melhoraram a sobrevivência in vitro de embriões bovinos vitrificados. Células embrionárias reagem em resposta ao estresse, aumentando a expressão de genes específicos, como o ERG 25 e alterando sua ultraestrutura, o que pode promover uma maior resistência a outros processos estressantes, como a vitrificação. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Despite the enormous growth achieved by the technique of bovine embryo in vitro production in recent years, a limitation is still evident, these embryos are more susceptible to cryopreservation than their counterparts in vivo produced. To obtain better results in the cryopreservation procedure, researchers are seeking improve embryos in vitro produced quality or change cryopreservation systems. The aim of this work was to define parameters for the use of hydrostatic pressure as a new tool in the process of vitrification of bovine embryos produced in vitro by evaluating the effects of it on ultrastructurally and gene expression on these embryos. The results indicated that embryo pressurization at 80 MPa had become deleterious to embryonic development. But pressure level at 60 MPa for 1 hour improved hatching rate after embryo vitrification compared to only vitrified group (79% vs 66%). And 1 hour after pressurization would be the best time to vitrification, with higher rates of re-expansion, hatching (90% and 74% respectively), increased speed of re-expansion after vitrification/devitrification and higher abundance of ERG 25 transcripts at this time, compared with the control group, immediately and 2 hours after the pressure. Ultrastructurally, embryos submitted to pressure had greater amount of microvilli and increased mitochondria hooded that control embryos. In the group of vitrified embryos after pressure there were a greater number of nuclei per area when compared to the only vitrified group. Certain levels of hydrostatic pressure treatment improved the in vitro survival vitrified bovine embryos. Embryonic cells react in response to stress, xiii increasing the expression of specific genes, such as ERG 25, and changing ultrastructure, which may promote increased resistance to other stressful procedures, such as vitrification.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-11-29T14:31:37Z No. of bitstreams: 1 2013_LairGabrieldaRosaeSilva.pdf: 2573372 bytes, checksum: f687a55bdeccb609ae152ae658fd76f3 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-12-05T13:23:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_LairGabrieldaRosaeSilva.pdf: 2573372 bytes, checksum: f687a55bdeccb609ae152ae658fd76f3 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-05T13:23:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_LairGabrieldaRosaeSilva.pdf: 2573372 bytes, checksum: f687a55bdeccb609ae152ae658fd76f3 (MD5) / A técnica de produção in vitro de embriões (PIVE) refere-se a uma série de procedimentos in vitro, maturação (MIV), fertilização (FIV) e cultura do zigoto (CIV), necessárias para produzir embriões a partir de oócitos imaturos. Para avaliar a viabilidade e a competência do embrião é evidente que a transferência deste para fêmea receptora (TE) e a análise do neonato é o que vai definir a real efetividade dos processos de PIVE. O nosso objetivo é a montagem e padronização das técnicas de PIVE e TE, validação das técnicas in vitro pela produção de embriões provenientes de oócitos captados por aspiração folicular e maturados em meio TCM-199; e oócitos de matadouro maturados em meios testes de α-MEM e controle comercial. Em busca de melhores condições de cultura e de um sistema in vitro que fosse menos variável e, ao mesmo tempo, que simulasse a maturação do oócito observada no animal in vivo, desenvolvemos vários sistemas de cultura para a MIV, nos quais meios definidos foram formulados, testados e alguns patenteados. Os meios foram: α-MEMC, α-MEMB e α–MEMO. O primeiro meio, mais complexo, utiliza hormônios e agentes oxidantes, o segundo meio, não contém hormônios e o terceiro é composto pelo diluente. Ao serem comparados com o meio controle TCM-199, inibiram a maturação nuclear, produziram menor grau de poliespermia (α-MEMC), produziram a mesma porcentagem de embriões. FSH de suíno foi usado nos meios α-MEMB e α–MEMO e não houve diferenças na porcentagem de embriões produzidos calculados com base no número de oócitos. Estes experimentos foram realizados com ovários provenientes de abatedouros. In vivo foram coletados 600 oócitos de doadoras mestiças girolandas, maturados no meio controle TCM-199, sendo os embriões transferidos para as fêmeas receptoras aneloradas, previamente escolhidas, e preparadas por protocolo hormonal para a sincronização do cio e avaliadas com ultrassom para receber o embrião de FIV. Os demais embriões formados nos meios testes foram congelados para estudos futuros de expressão de gens de competência e viabilidade e epigenética. Após a TE as fêmeas receptoras foram monitoradas e avaliadas 30 e 90 dias após PIVE para verificar a taxa de gestação; sendo confirmada a prenhez, as fêmeas receptoras foram separadas para acompanhamento da gestação até o momento do parto. As taxas de prenhez foram de 40%, as de nascimentos 25% e de neonatos saudáveis 20%, valores iguais ou maiores dos relatados na literatura. De maneira importante, a metodologia apresentada neste trabalho é a parte prática realizada in vivo, que envolve a captação de oócitos por aspiração folicular, a preparação da receptora, a transferencia dos embriões de PIVE, a avaliação da prenhez e do neonato; representam uma alternativa viável para serem utilizadas em experimentos futuros e para a aplicação comercial. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The technique of production in vitro embryos (PIVE) refers to a series of procedures in vitro maturation (IVM), fertilization (IVF) and zygote culture (MIC) needed to produce embryos from Immature oocytes. To assess the viability and competence of the embryo is evident that this transfer to recipient female (TE) and the analysis of the neonate is what will define the actual process effectiveness PIVE. Our goal is the assembly and standardization of techniques and PIVE TE, and validation techniques in vitro by the production of embryos from oocytes by ovum and matured in TCM-199; slaughterhouse and oocytes matured in means tests of α-MEM and commercial control. In search of a better culture and a system in vitro that was less variable and at the same time, to simulate oocyte maturation observed in animal in vivo, developed several systems for IVM culture, in which defined media were formulated, tested and patented some. The means were: MEMC-α, α-MEMB and α-MEM. The first half, more complex, uses oxidizing agents hormones and the second half contains no hormones and the third consists of the diluent. To be compared with the control medium TCM-199, inhibited nuclear maturation, produced a low degree of polyspermy (α-MEMC), produced the same percentage of embryos. FSH pig was used in the media and MEMB α-α-MEM and there were no differences in the percentage of embryos produced calculated based on the number of oocytes. These experiments were performed with ovaries from slaughterhouses. In vivo 600 oocytes were collected from crossbred donors Girolanda, matured in control medium TCM-199, and the embryos transferred (ET) for females receiving graded Nelore, previously chosen and prepared by hormonal protocol for synchronization of estrus and evaluated with receiving ultrasound to IVF embryos. The remaining embryos formed in means tests were frozen for future studies of expression of genes of competence and viability and epigenetics. After receiving TE females were monitored and evaluated 30 and 90 days after PIVE to verify pregnancy rate, pregnancy is confirmed, the recipient females were separated for the monitoring of pregnancy until delivery. Pregnancy rates were 40%, the 25% of births and 20% of healthy neonates, equal or higher values reported in the literature. Importantly, the methodology presented in this paper is the practical performed in vivo, which involves the collection of oocytes by ovum, the preparation of the recipient, the transfer of embryos PIVE, assessment of pregnancy and the newborn, represent a viable alternative for use in future experiments and for commercial application.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Botânica, Programa de Pós-Graduação em Botânica, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-01-13T13:31:39Z No. of bitstreams: 1 2013_PauloCesarAlvesdeSousa.pdf: 2751877 bytes, checksum: eb53f7827fae946f8607c11f3efa17d0 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-01-13T14:30:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_PauloCesarAlvesdeSousa.pdf: 2751877 bytes, checksum: eb53f7827fae946f8607c11f3efa17d0 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-13T14:30:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_PauloCesarAlvesdeSousa.pdf: 2751877 bytes, checksum: eb53f7827fae946f8607c11f3efa17d0 (MD5) / Este trabalho teve como objetivo desenvolver a organogênese e embriogênese somática e avaliar o uso do óleo mineral na propagação e conservação in vitro de Piper aduncum e Piper hispidinervum, bem como avaliar a estabilidade genômica dos acessos regenerados. Plantas germinadas in vitro foram utilizadas como material vegetal. Inicialmente, as sementes passaram por processo de desinfestação, antes da inoculação em meio de crescimento. Para os testes de germinação foram utilizados os meios de cultura de MS e WPM, com incubação nas temperaturas de 25 ºC e 30 ºC, nas condições de luz e escuro. Foi avaliada a taxa de germinação (%), o tempo médio de germinação e a velocidade de germinação. Os resultados sobre a germinação das sementes cultivadas em meio de cultura de MS e WPM a 25 ºC foram: taxa de Germinação = 84% e 81% (P. aduncum MS/WPM), 100% e 100% (P. hispidinervum MS/WPM); tempos médios de germinação = 253,429 e 240,593 horas (P. aduncum MS/WPM), 202,320 e 190,320 horas (P. hispidinervum MS/WPM); velocidades médias de germinação = 3,94 h-1 e 4,14 h-1 (P. aduncum MS/WPM); 4,94 h-1 e 5,25 h-1 (P. hispidinervum MS/WPM). As médias de germinação ficaram com valores próximos em ambos os meios de cultura testados. A germinação das sementes cultivadas em meio WPM a 25 ºC e 30 ºC foram: taxa de Germinação = 81% e 74% (P. aduncum 25 ºC / 30 ºC), 100% e 96% (P. hispidinervum 25 ºC / 30 ºC), tempo médio de germinação = 240,593 e 333,081 horas (P. aduncum 25 ºC / 30 ºC); 190,320 e 215,250 horas (P. hispidinervum 25 ºC / 30 ºC), velocidades médias de germinação = 4,14 h-1 e 3,00 h-1 (P. aduncum 25 ºC / 30 ºC); 5,25 h-1 e 4,64 h1 (P. hispidinervum 25 ºC / 30 ºC). A temperatura de 25 ºC proporcionou maior percentagem de germinação dentro do menor espaço de tempo para ambas as espécies. Nos testes de micropropagação foi avaliado o cultivo de microestacas em meios de cultura com diferentes concentrações de sais de MS e WPM (50, 70 e 100%), e em outra etapa, o cultivo em meio de MS adicionado de diferentes concentrações dos reguladores BAP (6-benzilaminopurina) e KIN (Cinetina) (0,00; 0,01; 0,05; 0,1; 0,5; 1,0 e 2,0 mg.L-1). Na primeira etapa os dados apresentaram diferenças significativas no que diz respeito ao número de formação de gemas e à altura em ambas as espécies. P. aduncum apresentou melhores resultados, tanto no número de gemas quanto na altura, quando cultivada em meio com concentrações de 50% e 75% de sais de MS e em 75% e 100% de sais de WPM, enquanto P. hispidinervum apresentou melhor desempenho quando cultivada em meio de WPM nas concentrações de 75% e 100%. Com relação ao meio de cultura adicionado dos reguladores de crescimento, P. aduncum apresentou melhores resultados nos tratamentos com 0,50 mg.L-1 de KIN e 0,05 mg.L-1 de BAP, com maior número de brotos; para P. hispidinervum as concentrações dos reguladores foram significativas apenas quando se utilizou o BAP, com melhores resultados obtidos na concentração de 1,0 mg.L-1. Para se determinar um protocolo visando a embriogênese somática a partir de explantes foliares de P. hispidinervum e P. aduncum foram realizados testes combinando diferentes concentrações de ANA (ácido α-naftalenoacético) e BAP adicionados ao meio de MS, formando 5 tratamentos: T1 (5 mg.L-1 de ANA + 0 mg.L-1 de BAP), T2 (10 mg.L-1 de ANA + 0 mg.L-1 de BAP,) T3 (0 mg.L-1 de ANA + 2,5 mg.L-1 de BAP), T4 (5 mg.L-1 de ANA + 2,5 mg.L-1 de BAP) e T5 (10 mg.L-1 de ANA + 2,5mg.L-1 de BAP). Aos 60 dias de cultivo, no escuro, o tratamento T4 proporcionou os melhores resultados para a indução de calos primários em P. aduncum com 80% de formação de calos. A transferência dos calos primários para o meio T5 (10 mg.L-1 de ANA + 2,5mg.L-1 de BAP) ocasionou a formação de calos embriogênicos e surgimento de embriões somáticos. De maneira geral, a regeneração dos embriões somáticos teve início 15 dias após a transferência para meio de crescimento de MS, sob condições de luz. As plantas regeneradas a partir dos embriões de P. aduncum apresentaram crescimento mais lento, portanto, apenas as plantas regeneradas a partir dos embriões de P. hispidinervum foram pré-aclimatizadas e levadas para casa de vegetação. A citometria de fluxo foi utilizada verificar a estabilidade genômica das plantas de P. hispidinervum regeneradas, no que diz respeito à quantidade de DNA. Os resultados revelaram que o conteúdo médio estimado de DNA de P. hispidinervum provenientes de plantas da embriogênese somática e da casa de vegetação foi de 1,8329 ± 0,02 pg e 1,8666 ± 0,05 pg, respectivamente, não havendo existência de instabilidade genômica nas plantas avaliadas. Para a conservação de germoplasma in vitro foi testada a estratégia de conservação por de imersão em óleo mineral (OM). Microestacas de P. aduncum e P. hispidinervum foram inoculadas em tubos de ensaio e cobertas completamente com óleo mineral, sendo cultivadas durante 30 e 180 dias. Aos 30 dias de cultivo, as estacas de P. aduncum e P. hispidinervum submersas em óleo mineral (OM) apresentaram taxa de 100% e 80% de sobrevivência, respectivamente. As estacas vivas foram transferidas para meio de crescimento e após 120 dias de cultivo apenas as estacas de P. aduncum apresentaram sobrevivência (30 %). Na etapa de 180 dias de cultivo, apenas as estacas de P. aduncum sobreviveram, obtendo taxa sobrevivência 40%. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This study aimed to develop the organogenesis, somatic embryogenesis and mineral oil as in vitro propagation and conservation strategies of Piper aduncum and Piper hispidinervum as well as assess the genomic stability of regenerated plants. Germinated seeds passed through the process of disinfecting before inoculation into the growth medium. In order for germination tests were used MS and WPM growing medium, with incubation at 25 º C and 30 º C, under the conditions of light and dark. It was evaluated the rate of germination (%), the germination mean time and the speed of germination. The measures of seed germination grown on MS and WPM medium at 25 °C were: rate of germination= 84% and 81% (P. aduncum MS/WPM), 100% and 100% (P. hispidinervum MS/WPM); germination mean time= 253,429 and 240,593 hours (P. aduncum MS/WPM), 202,320 and 190,320 hours (P. hispidinervum MS/WPM); speed of germination= 3,94 h-1 and 4,14 h-1 (P. aduncum MS/WPM); 4,94 h-1 and 5,25 h-1 (P. hispidinervum MS/WPM). The measures germination have demonstrated similar values in both growing medium. The measures of seed germination grown on WPM medium at 25 °C and 30 ºC were: rate of germination= 81% and 74% (P. aduncum 25 ºC / 30 ºC), 100% and 96% (P. hispidinervum 25 ºC / 30 ºC); germination mean time= 240,593 and 333,081 hours (P. aduncum 25 ºC / 30 ºC); 190,320 and 215,250 hours (P. hispidinervum 25 ºC / 30 ºC); speed of germination= 4,14 h-1 and 3,00 h-1 (P. aduncum 25 ºC / 30 ºC); 5,25 h-1 and 4,64 h-1 (P. hispidinervum 25 ºC / 30 ºC). The temperature 25 °C had proportioned higher percentage of germination into the shortest time in both species. In the micropropagation tests were evaluated microshoots growing in MS and WPM medium with different concentrations of salts (50, 70 and 100%), and in another step, the culture in MS medium supplemented with different concentrations of BAP (6-benzylaminopurine) and kinetin regulators. (0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0 and 2.0 mgL-1). In the first step the results showed significant differences regarding the number of bud formation and height in both species. P. aduncum achieved better results, as numbers of buds as height when grown in medium with 50%, 75%, 100% MS and 50%, 75% and 100% WPM salts concentrations, on the other hand, P. hispidinervum showed the best performance when cultivated in 75% and 100% WPM medium concentrations. Regarding to the culture medium supplemented with regulators, P. aduncum achieved better results in the treatments with 0.50 mgL-1 kinetin and 0.05 mgL-1 BAP which resulted in larger number of shoots, for P. hispidinervum concentrations of regulators were significant only with the use of BAP, and the best results obtained in the concentration of 1.0 mg.L-1. In order to determine a protocol aiming the formation of callus from leaf explants of P. hispidinervum and P. aduncum tests were conducted by combining different concentrations of NAA (α-naphthaleneacetic acid) and BAP added to MS medium, forming 5 treatments: T1 (5 mg.L-1 NAA + 0 mg.L-1 BAP), T2 (10 mgL-1 NAA + 0 mg.L-1 BAP) T3 (0 mg.L-1 + NAA 2.5 mg.L-1 BAP), T4 (5 mg.L-1 + NAA 2.5 mg.L-1 BAP) and T5 (10 mg.L-1 NAA + 2.5 mg.L-1 BAP). Treatment T4 showed the best result in the primary callus induction after 60 days of culture in the dark (P. aduncum with 80% and P. hispidinervum 32% of primary callus formation). The transfer of calluses primary for the treatment T5 (10 mg.L-1 de NAA + 2.5 mg.L-1 de BAP) resulted in the formation of embryogenic callus and somatic embryo emergence. The regeneration of the embryos began 15 days after transfer to growth medium with salts and nutrients of MS and cultivation under light conditions. Plants regenerated from the embryos of P. aduncum grew slower, so only the plants regenerated from the embryos of P. hispidinervum were pre-acclimatized and taken to a greenhouse. The flow cytometry was used to verify the stability of the genome of P. hispidinervum plants regenerated with regard to the amount of DNA. The results showed that the estimated DNA contents of P. hispidinervum from somatic embryogenesis and greenhouse (1.8329 ± 1.8666 ± 0.02 pg and 0.05 pg) with a coefficient of variation below 5% leads to the conclusion about the absence of genomic instability in plants obtained by somatic embryogenesis. For Germplasm in vitro conservation was tested conservation strategy by immersion in mineral oil (MO). Microshoots from P. aduncum and P. hispidinervum were inoculated into sampling tubes and completely covered with mineral oil and cultured for 30 and 180 days. After 30 days of culture, the stakes of P. aduncum and P. hispidinervum submerged in mineral oil (MO) had a survival rate of 100% and 80% respectively. The live cuttings were transferred to growth medium and after 120 days of cultivation only cuttings of P. aduncum showed a survival rate (30%). In the stage 180 days of cultivation, cuttings P. aduncum and P. hispidinervum submerged in mineral oil (MO) had survival rates of 40% and 0% respectively.