La première implication des récepteurs aux interférons de type 1 (IFNAR1) dans le contrôle de la voie Jak/STAT induite par les IFNs a été établie par mon laboratoire il y a une dizaine d'années (Marchetti et al., 2006). Une des questions fondamentales était alors de déterminer comment et pourquoi l'endocytose des IFNARs pouvait contrôler la voie Jak/STAT. Deux acteurs clés du tri endosomal ont attiré notre attention : Hrs (Hepatocyte growth factor-Regulated tyrosine kinase Substrate) et STAM (Signal Transducing Adaptor Molecule). Ces deux protéines constituent le complexe ESCRT-0 (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport-0) les localisant, de manière idéale, à l'interface entre signalisation cellulaire et trafic membranaire.La combinaison de la biologie moléculaire et cellulaire, de la biochimie et de la microscopie à fluorescence, nous a permis d'établir que STAM s'associe au complexe IFNAR1 à la membrane plasmique afin d'y exercer son effet inhibiteur sur la signalisation Jak/STAT. Cette inhibition est levée lorsqu'IFNAR est libéré dans l'endosome et qu'il peut ainsi être recruté par Hrs sous la dépendance de l'IFN-α. En nous basant sur des expériences de déplétion par shRNA ou d'inhibition pharmacologique, nous avons identifié PTP1B (Protein Tyrosine Phosphatase 1B) en tant qu'activateur de la voie Jak/STAT induite par les IFNs. Le blocage sélectif de l'endocytose d'IFNAR par déplétion de clathrin, nous a permis de montrer que l'activation de PTP1B est inhibée à la membrane plasmique. Cela a été confirmé par des expériences d'interaction protéine-protéine (Proximity Ligation Assay) indiquant que STAM est constitutivement associé à IFNAR1, tandis que l'interaction entre IFNAR1 et Hrs a seulement lieu à l'endosome.Ainsi, nos résultats permettent d'établir un modèle dans lequel, à la membrane plasmique, STAM est un frein permanent à la signalisation Jak/STAT, qui est levé après l'endocytose d'IFNAR et sa libération dans l'endosome de tri. De plus, nous avons montré que l'interaction Hrs/STAM dans l'endosome précoce permet de différencier, de manière sélective, l'activation de la signalisation Jak/STAT médiée par l'IFN-α ou l'IFN-β. / A decade ago, my laboratory established the first role of type I IFNs receptor (IFNAR) endocytosis in the control of Jak/STAT signaling induced by type 1 IFNs (Marchetti et al., 2006). A salient question is now to elucidate why and how IFNAR endocytosis could control the Jak/STAT pathway. Two key players of endosomal sorting retained our interest: Hrs (Hepatocyte growth factor-Regulated tyrosine kinase Substrate) and STAM (Signal Transducing Adaptor Molecule). These two classical components of the ESCRT-0 (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport-0) complex were ideally placed at the interface between signaling and membrane trafficking. By using a combination of molecular and cellular biology, biochemistry, and fluorescent microscopy, we could establish that STAM binds to the IFNAR complex at the plasma membrane to exert an inhibitory effect on Jak/STAT signaling. This inhibition is removed when IFNAR is delivered to the sorting endosome by interacting with Hrs upon IFN-α stimulation. Based on shRNA down-expression and pharmacological inhibition, we further involve the PTP1B (Protein Tyrosine Phosphatase 1B) as it activates Jak/STAT signaling upon IFN stimulation. We could also show that PTP1B activation is inhibited by STAM at the plasma membrane from experiments where IFNAR endocytosis was blocked by siRNA-mediated clathrin down-expression. This was further confirmed by protein-protein interaction experiments (Proximity Ligation Assay) showing that STAM was constitutively associated with IFNAR1, whereas the interaction between IFNAR1 and Hrs occured only at the sorting endosome. Our results therefore allow to draw a model where STAM is a constitutive handbrake on Jak/STAT signaling at the plasma membrane that is released after IFNAR endocytosis and delivery to the sorting endosome. We further show that Hrs/STAM interaction at the early endosome allows to selectively distinguish the activation of Jak/STAT signaling mediated by IFN-α or IFN-β.

TSG101 was identified as a tumor susceptibility gene by Stanley Cohen. In a variety of human cancers, no genomic deletion in TSG101 gene has been reported but many aberrant TSG101 transcripts has been found. Some studies have revealed that TSG101 participates in MDM2/p53 regulatory circuitry¡Bmembrance trafficking and receptor recycling. Other reports also showed that TSG101 might be a transcription regulatory factor. However, mechanism of these TSG101 function awaits further characterization. To further scrutinize the function of TSG101 and its subcellular localization, a varieties of GFP-based recombinant plasmids which contain various length of TSG101 cDNA have been constructed and transfected into cells. Western blot analysis had shown that these constructs could express GFP-TSG101 fusion protein of expected size. The fluorescence and confocal microscopy have shown that wild type TSG101 localized in ER, Golgi and endosome compartments, also amino acid residues 136-233 and 316-390 of TSG101 are two important regions for its subcellular localization. Previous reports had shown that TSG101 interact with OP18 which is an important regulator for spindle formation in M phase. To elucidate the localization of TSG101 and OP18 in M phase cell, we have cloned OP18 and generate GST-OP18 fusion protein for anti-OP18 antiserum production.Then, pDsRed-OP18 fusion protein expressed in OP18/pDsRed recombinant plasmid transfected cell was detected by western blotting analysis using this anti-OP18 antiserum. The subcellular localization of DsRed-OP18 and GFP-TSG(1-390) fluorescence were recorded in double transfected cells which were arrested in M phase by nocodzole treatment. We observed the evenly distribution of pDsRed-OP18 red fluorescence and punctate vesicular localization of GFP-TSG(1-390) green fluorescence. Whether these two protein interact functionally awaits further investigation.

Abstract The role of vacuolar H+-ATPase (V-ATPase) in exocytic and endocytic membrane transport processes was studied by using its specific inhibitor, bafilomycin A1 (Baf A1), as a tool. On the exocytic pathway, both brefeldin A- and nocodazole-induced retrograde transport of Golgi proteins to the endoplasmic reticulum (ER) were inhibited by Baf A1. Furthermore, p58/ERGIC-53, which normally cycles between the ER, the intermediate compartment (IC), and cis-Golgi, was arrested in pre-Golgi tubules and vacuoles, and the number of p58-positive 80-nm Golgi (COPI) vesicles was reduced, suggesting that the drug inhibits the vesicle-mediated retrieval of the protein from post-ER compartments. The small GTPase rab1p was efficiently recruited to the tubules, accumulating in the presence of Baf A1. In contrast, these tubules showed no enrichment of anterogradely transported proteins, indicating that they participate in retrograde transport. Interestingly, acidic lumenal pH could only be detected in the more central pre-Golgi elements. The forward (anterograde) transport of newly synthesized Semliki Forest virus (SFV) and vesicular stomatitis virus (VSV) glycoproteins from the ER to the cis-Golgi was largely unaffected by Baf A1. However, maturation processes occurring in the trans-Golgi were inhibited, and the amounts of viral glycoproteins appearing at the cell surface were reduced. Newly synthesized VSV glycoprotein accumulated into rab1p-positive Golgi membranes in the presence of Baf A1, indicating that the transport from cis-Golgi was affected. Furthermore, O-glycosylation of the expressed CD8 chimeras and lectin cytochemistry experiments indicate that Baf A1 affects the transport from cis-Golgi. Instead, Baf A1 did not affect the transport of viral glycoproteins from the trans-Golgi network to the cell surface. We propose, that anterograde intra-Golgi traffic may be affected indirectly by Baf A1, as it inhibits retrograde vesicle-mediated transport and thus cisternal maturation. Baf A1 inhibited the entry of SFV into BHK-21 cells. Thus, V-ATPase was responsible for the acidification of the endosomes needed for virus entry. In cells infected with VSV and subsequently treated with Baf A1, virus particles were found to be accumulated in tubular membrane structures, which also contained endocytosed BSA-gold. Neither VSV nor BSA-gold particles were detected in lysosomal glycoprotein (lgp) 120-positive lysosomes, however. Thus, secreted and further endocytosed virus particles accumulate into tubulated endocytic organelles, apparently early endosomes, in Baf A1-treated cells. We conclude that the transport from endosomes to lysosomes is inhibited by Baf A1. The bulk of rab7 GTPase, which participates in vesicle fusion to late endosomes, was localized to the ruffled border (RB) membrane of bone-resorbing osteoclast. This indicates that the membrane has some characteristics of late endosomal membranes and that endocytic membrane transport is oriented towards the RB. Consistently, both endocytosed lumenal horseradish peroxidase and receptor-bound transferrin were delivered to the RB. The delivery of membrane-associated transferrin to the RB further indicates that the RB has some endosomal characteristics and suggests that the endocytic pathway contributes to the maintenance of functional RB. The endocytic pathway could act in balancing the membrane traffic associated with transcytosis from the RB to the basal plasma membrane. Endocytic processes in osteoclasts appeared to be very sensitive to Baf A1. Thus, blocking of the endocytic membrane traffic towards the RB could explain the inactivation of cells by low concentrations of the drug.

京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(生命科学) / 甲第18431号 / 生博第311号 / 新制||生||41(附属図書館) / 31289 / 京都大学大学院生命科学研究科高次生命科学専攻 / (主査)教授 豊島 文子, 教授 藤田 尚志, 教授 松田 道行 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Philosophy in Life Sciences / Kyoto University / DFAM

Angiogenesis is a crucial process under both physiological and pathological conditions. Vascular endothelial growth factor (VEGF) A and its cognate receptor, vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR2) are key regulators of angiogenesis. Plasma membrane (PM) levels of VEGFR2 are regulated by de novo synthesis, and by both exocytic and endocytic trafficking. VEGF-binding to VEGFR2 induces phosphorylation of key tyrosine residues located in the cytosolic domain of the receptor, followed by clathrin-mediated endocytosis and signal transduction leading to vascular morphogenesis. Disabled protein 2 (Dab2) is a cytosolic, clathrin-adaptor protein that is known to regulate endocytosis of certain cell surface receptors. Studies of Dab2 function have revealed its role in the development of embryonic vasculature. However, the mechanism of Dab2 function, particularly in conjunction with endosomal VEGFR2, remains poorly understood. Our results show that Dab2 interacts with VEGFR2 and that upon VEGF stimulation the two proteins co-localize within Rab5-positive early endosomes. Knockdown of Dab2 reduces levels of VEGF-induced phosphorylation of VEGFR2 at residue Y1175. This is significant because phosphorylation of VEGFR2-Y1175 is crucial for pro-angiogenic signal transduction. Moreover, knockdown of Dab2 causes an increased trafficking of VEGFR2 to late endosomes (LE). Finally, this altered VEGFR2 trafficking following Dab2 knockdown has major functional consequences for endothelial cells, as they are unable to undergo morphogenesis into tube-like structures in an in vitro assay of angiogenesis. Collectively, our data show that Dab2 plays a crucial role in VEGFR2 trafficking in the endocytic system and this impacts receptor signaling and endothelial cell morphogenesis during angiogenesis.

L’endocytose est le processus qui permet l’entrée, dans la cellule, de portions de la membraneplasmique ainsi que du milieu extracellulaire et des substances qu’il contient. Ces dernièresannées, plusieurs mécanismes d’endocytose ont été identifiés, mais la voie médiée par la clathrine(CME) reste la mieux caractérisée à l’heure actuelle. Au cours de ce travail, nous nous sommesintéressés à Alix, une protéine adaptatrice qui s’associe avec de nombreux partenaires de la voieendolysosomale mais dont le rôle dans l’endocytose reste encore peu connu. Ce travail derecherche a pour objectif de mieux comprendre le rôle d’Alix dans l’endocytose, grâcenotamment à l’utilisation de fibroblastes embryonnaires de souris (MEF) ko pour laprotéines Alix. Au cours de ce travail, nous avons montré que l’endocytose indépendante de laclathrine (CIE) est inhibée dans les cellules ko Alix, alors que la CME demeure intacte. En effet,l’internalisation de plusieurs cargos empruntant la CIE est affectée par la déplétion d’Alix alorsque des cargos entrant par CME sont endocytés normalement dans les cellules ko Alix. La CIEpeut être restaurée par l’expression d’Alix sauvage dans les MEF ko Alix, mais pas par un mutantd’Alix incapable d’interagir avec les endophilines A, protéines qui ont récemment été décritescomme contrôlant une voie CIE. De plus, la déplétion de l’endophiline A2 dans les MEF ko Alixn’a aucun effet sur la CIE. Nos résultats indiquent donc qu’Alix et les endophilines A agissent deconcert dans le contrôle de la CIE. Enfin, en accord avec une inhibition de la CIE, nous montronsque la migration des MEF ko Alix (qui dépend notamment de la CIE de l’intégrine ß1) estralentie et que la signalisation induite par l’IL2R, un cargo CIE, est perturbée. Ces donnéesdémontrent donc pour la première fois que la protéine Alix, en partenariat avec les endophilines,contrôle spécifiquement la CIE et que l’inhibition de cette fonction d’Alix affecte la physiologiecellulaire. / Endocytosis is the process permitting entry to the cell of portions of membrane as well as ofextracellular milieu and the substances it contains. In recent years, several endocytic mechanismshave been identified but clathrin-mediated endocytosis (CME) is the best characterised so far. Inthe present work, we have been interested in Alix, an adaptator protein which associates withnumerous partners involved in the endolysosomal pathway, although its exact role in endocytosisremains poorly understood. The goal of this research was to better understand Alix role inendocytosis using Alix ko Mouse Embryonic Fibroblasts (MEFs). Using this model, we showthat Clathrin Independent Endocytosis (CIE) is impaired in these cells while Clathrin MediatedEndocytosis (CME) is unaffected. Indeed, CIE cargo internalization is disrupted by Alixdepletion while CME cargoes are endocytosed normally in Alix ko cells. CIE in Alix ko MEFscan be restored by wild-type Alix expression but not by an Alix mutant deleted of its interactionsite with endophilin A, proteins recently identified as involved in the control of a CIE. Moreover,endophilin A2 depletion has no effect in Alix ko MEFs. Our results thus indicate that Alix andendophilin A2 act together in the control of CIE. Finally, in agreement with a role of Alix in CIEinhibition, we show that Alix ko MEF migration (depending on CIE of ß-integrin) is slower andthat IL2R- (a CIE cargo) induced signalling is impaired in the absence of Alix. Our resultsdemonstrate, for the first time, that Alix, together with endophilins, specifically controls CIE andthat inhibition of this function of Alix affects cell physiology.

Pour survivre et se multiplier dans leurs cellules hôtes les bactéries intracellulaires ont élaboré divers mécanismes d'échappement à la réponse immunitaire. L’altération du trafic intracellulaire est une des stratégies utilisée par ces agents pathogènes. Ainsi Coxiella burnetii, bactérie intracellulaire stricte responsable chez l’homme de la fièvre Q, bloque la maturation du phagosome afin de résider et se multiplier dans un compartiment incapable de fusionner avec les lysosomes. Ce défaut de fusion est associé à la virulence bactérienne. Pour analyser le défaut de maturation du phagosome de C. burnetii, j’ai étudié le rôle du lipopolysaccharide (LPS) de C. burnetii dans le trafic intracellulaire de cette bactérie. J’ai montré que le LPS de C. burneti, unique par sa structure, ne permet pas l’activation de la MAPKinase p38α, entrainant un défaut dans le recrutement du complexe HOPS (homotypic fusion and vacuole protein sorting complex) nécessaire à la conversion phagosomale. J’ai en effet montré que le recrutement du complexe HOPS requiert la phosphorylation de la protéine Vps (vacuolar protein sorting) 41. La transfection de macrophages permettant la surexpression d’un activateur de p38 et l’utilisation de mutants phosphomimétiques de Vps41 ont montré une restauration de la conversion phagosomale. Il apparaît ainsi que la MAPK-p38α et son dialogue avec Vps41 jouent un rôle central dans la maturation du phagosome de C. burnetii en phagolysosome. L’utilisation de la structure atypique de son LPS permet ainsi à C. burnetii de se soustraire à la réponse protectrice de l'hôte. / To survive and replicate in their host, microbes have evolved several strategies to hijack the microbicidal properties of the immune cells. C. burnetii, the q fever agent, survive and replicate in macrophages through the alteration of the phago-lysosome biogenesis. To further analyze the nature of the defect phagosome maturation of C. burnetii, I studied the role of lipopolysaccharide (LPS) of C. burnetii in the intracellular trafficking of the bacteria. The LPS is unable to activate the p38α MAPKinase, which explains that the virulent bacteria are not directed to a degradative compartment . The lack of activation of the p38α MAPKinase , which involves a commitment TLR4 antagonist by LPS, has the effect of preventing the recruitment of the HOPS complex ( homotypic fusion and vacuole protein sorting complex) , a complex require for the phagosomal conversion. I have shown that the recruitment of HOPS requires phosphorylation of protein Vps (vacuolar protein sorting) 41. Transfection of macrophages by an activator of p38 and using phosphomimétiques mutants VPS41 showed restoration of phagosome maturation. It thus appears that the p38α MAPK and his dialogue with VPS41 play a central role in phagosome maturation of C. burnetii in the phagolysosome. Use of the unique structure of the LPS allows C. burnetii to evade the protective response of the host.

Chez la levure et les mammifères le complexe rétromère est impliqué dans différentes étapes de trafic intracellulaire qui modulent divers processus cellulaires et développementaux. Chez les mammifères, le rétromère se compose des protéines Vacuolar Protein Sorting (VPS) 35, VPS26, VPS29 et d’un dimere de Sorting Nexins (SNX). Les composants du rétromère sont conservés chez les plantes et sont localisés dans le même endosome de tri. Dans ce travail, nous avons étudié le mécanisme d’assemblage et de recrutement du complexe à la membrane et analysé le rôle du rétromère dans le développement d’Arabidopsis. Nos resultsts montrent que chez les plantes, contrairement aux mammifères, VPS35 recrute le sous-complexe VPS à la membrane, indépendamment des SNXs. Ceci nous a permis de proposer un modèle d’assemblage du rétromère très original. L’analyse de mutants perte de fonction pour le rétromère révèle que VPS26, VPS29 et VPS35 n’ont pas de fonctions indépendantes, mais agissent ensemble dans la régulation de processus développementaux. De plus, par un crible double hybride chez la levure, nous avons isolé un interacteur de VPS35 : Ethylene Insensitive 2 (EIN2). EIN2 est une protéine localisée au Réticulum Endoplasmique et impliquée dans la voie de signalisation d’une hormone végétale : l’éthylène. Nous montrons que des mutants perte de fonction pour le rétromère présentent des défauts dans la réponse à l’éthylène, indiquant un rôle du rétromère dans la perception de cette hormone par les plantes. Ces résultats, combinés avec nos données antérieures montrant que le rétromère est impliqué dans la voie de signalisation de l’auxine, révèlent un lien entre signalisation de l’auxine et de l’éthylènevia le complexe rétromère. / In yeast and mammals, the retromer complex mediates various steps of intracellular trafficking and regulates a variety of cellular and developmental processes. In mammals, it is composed of Vacuolar Protein Sorting (VPS) 35, VPS26, VPS29 and a dimer of Sorting Nexins (SNX). Retromer components are conserved in plants and we showed that they colocalize to the same sorting endosome. In this work, we have investigated the mechanism of assembly and recruitment of the retromer to the endosomal membrane and studied its function in Arabidopsis development. We report that, unlike animals, plant VPS35 recruits the other VPS retromer components to the membrane of endosomes, independently of SNXs. This data allowed us to propose an original model of assembly of the plant retromer complex. By analyzing a series of retromer loss-of-function mutants, we show that VPS26, VPS29 and VPS35 always act together in modulating developmental processes. To identify retromer partners, we carried out a Yeast-2-Hybrid (Y2H) screen using VPS35 as a bait. We found that VPS35 can bind, among other proteins, Ethylene Insensitive 2 (EIN2). EIN2 is an Endoplasmic Reticulum-located protein involved in the signaling pathway of a plant hormone: ethylene. We demonstrate that retromer mutants are affected in ethylene signaling, which indicates that the retromer complex participates in a proper perception of ethylene by plants. Combined with our previous data in which we showed that the retromer is involved in the auxin signalling pathway, our present work reveals a link between auxin and ethylene signaling through the retromer complex.

L'ACTH stimule son récepteur au niveau du cortex surrénalien afin d'enclencher la synthèse et la sécrétion de cortisol chez l'humain.L'hypothèse du projet propose qu'il existe une régulation moléculaire de MC2R (melanocortin-2 receptor) qui permet les [i.e. aux] cellules corticosurrénaliennes de s'adapter aux variations physiologiques d'ACTH. Mon projet de doctorat a consisté à utiliser MC2R et MRAP (MC2R accessory protein) recombinés dans les cellules embryonnaires de rein humain (HEK) 293/FRT (Flp recombinase target). J'ai développé ce modèle entièrement humain afin de contourner les problèmes d'expression fonctionnelle de MC2R (avant 2005) dans le but d'approfondir nos connaissances sur la régulation fonctionnelle de MC2R. Les objectifs spécifiques étaient de : 1) Déterminer le rôle des isoformes MRAP1 dans l'expression fonctionnelle de MC2R. 2) Déterminer les différences entre MRAPs. 3) Analyser l'internalisation et le recyclage de MC2R. 4) Déterminer la contribution des 9 serines (S) et thréonines (T) intracellulaires de MC2R dans sa régulation fonctionnelle. 5) Déterminer si la phosphorylation des MAPKs (mitogen-activated protein kinases) induite par l?ACTH est liée au processus d'internalisation de MC2R. Premièrement, MC2R est exprimé à la membrane plasmique des cellules 293/FRT mais de manière non-fonctionnelle. La co-expression de l'une ou l'autre des isoformes MRAP1 (MRAP[alpha] ou MRAP[béta]) humaines augmente l'expression membranaire de MC2R. MRAP[alpha] n'induit pas autant l'expression membranaire de MC2R que MRAP[béta], ce qui se répercute sur la capacité de liaison de l?ACTH et aussi sur les réponses maximales d'AMPc. Par contre, MRAP[alpha] permet une plus grande affinité pour l?ACTH que MRAP[béta], ce qui se traduit par une plus grande sensibilité des cellules à l?ACTH (section 3.1). Deuxièmement, MC2R est N-glycosylé sur ses deux sites de N-glycosylation, mais cette dernière n'est pas requise pour sa fonctionnalité (article non-présenté). Troisièmement, le système ACTH/MC2R/MRAP1/MRAP2 du poisson zèbre a été caractérisé (article non-présenté) et s'est soldé par l'observation que zfMRAP1 procure 10 fois plus de sensibilité à l?ACTH que MRAP[alpha]. Quatrièmement, chaque domaine C-terminal semble servir au triage des protéines MRAP1 au niveau de l'appareil de Golgi car MRAP[alpha] (pré-Golgi), MRAP[béta] (post-Golgi) et leur version tronquée, MRAPdCT (au Golgi), sont préférentiellement localisées dans différents compartiments cellulaires. Les MRAP1s et les MRAP2 modulent l'expression de MC2R. En retour, MC2R augmente l'expression et le ciblage membranaire des MRAP1s (section 3.2). Cinquièmement, l'internalisation de MC2R est clathrine-, dynamine- et arrestine-dépendente. Le recyclage et la resensibilisation de MC2R permet à l?ACTH d'entretenir une production d'AMPc soutenue. Les isoformes MRAP1 internalisent avec MC2R dans des endosomes positifs pour Rab4, Rab5 et Rab11 (section 3.3). Sixièmement, plusieurs S/T sont susceptibles d'être impliquées dans la désensibilisation, l'internalisation et dans la régulation de l'expression membranaire de MC2R. Le résidu T143, cible potentielle de la protéine kinase C (PKC), est critique à l'expression membranaire de MC2R (section 3.3). Finalement, l'activation des voies MAPK n'est pas liée à l'interaction MC2R-arrestine durant l'internalisation (article non-présenté).

Peroxisomes are ubiquitous organelles found in almost all eukaryotes. They are sensitive to changes in cellular homeostasis and involved in various metabolic processes. Deficiencies in peroxisome function cause severe neurological problems. Here I report, investigation of peroxisome motility and its relation to peroxisomal functions in the fungal model system Ustilago maydis. Peroxisomes are mostly motile in Ustilago maydis. Motile peroxisomes show different motility patterns: short-range pulse type movements and long range bidirectional motility. Motility behaviour is not static as oscillating peroxisomes may start long-range motility. Here, I present evidence that long-range bidirectional peroxisome motility is an energy driven process and is essential for homogeneous distribution of peroxisomes. Similar to early endosomes and endoplasmic reticulum, microtubule motors kinesin-3 and dynein are responsible for long-range peroxisome transport. In addition to using the same molecular motors for transport, early endosomes, endoplasmic reticulum and peroxisomes have the same transport velocity. Interestingly, motile peroxisomes and endoplasmic reticulum tubules co-localize with early endosomes. Functional investigation of early endosome mutants, Δrab5a and Yup1ts has revealed a novel transport mechanism where endoplasmic reticulum and peroxisomes hitch hike on early endosomes. Additionally, I report functional characterization of an AAA-ATPase, um05592, which has high homology to human protein NP_055873. Altogether these results reveal molecular mechanism of peroxisome transport in Ustilago maydis. Similarities in transport machinery illustrate Ustilago maydis as a model system to study peroxisome function in mammalian cells.