A odontologia moderna, mesmo usando as suas técnicas mais primorosas, na prática, ainda recupera a perda dental com implantes metálicos recobertos por coroas protéticas. Há um empenho coletivo dos cientistas em criar técnicas de desenvolvimento dental in vitro na busca por maneiras de recuperar, de maneira biológica, a ausência dental. Já é possível criar estruturas similares a dentes a partir de células-tronco de origem dental (polpa de dentes permanentes e decíduos) e não dental (células-tronco embrionárias, células-tronco da medula óssea e da crista neural) por meio de recombinação dos tecidos epiteliais e mesenquimais de germes dentais. As técnicas de reconstrução tecidual nunca estiveram tão perto do desenvolvimento da terceira dentição mas a ciência ainda tem muito a aprender no que concerne o estudo da biologia dental e engenharia de tecidos. Não basta saber como um dente se desenvolve; há de se entender como ele interage com o organismo do qual faz ou fará parte. É com esta preocupação que nos propomos a estudar se pode haver uma correlação entre o desenvolvimento do sistema nervoso e vascular de um germe dental transplantado com a posição que ele é implantado e/ou com a presença de tecido ósseo que no leito receptor. Ademais, buscamos saber se o estágio de desenvolvimento do germe dental a ser transplantado pode influenciar a formação de tecido nervoso e vascular na polpa dental ou não. Nossos resultados revelaram que o local do sítio do implante influencia diretamente o desenvolvimento dental e que isto é tempo dependente. A vascularização e a reinervação da polpa dental nos espécimes implantados nas tíbias é mais semelhante ao grupo controle que os implantados nos rins e isto independe da posição de implantação dental. Entretanto, a polpa dental dos germes implantados nos rins parece estar comumente mais sadia, conter mais odontoblastos viáveis e ser capaz de produzir tecidos mineralizados como a osteodentina. / Contemporary dentistry, even using modern techniques, still deal with missing teeth using metal implants coated by prosthetic crowns. However, there is a worldwide effort to develop a biotooth using in vitro techniques. In this way it is already possible to generate structures similar to teeth using recombination of odontogenic and non odontogenic cells in tissue engineering experiments. The transplant of the recombined cells into a host is a necessary and major step to obtain the biotooth. In this context, at the same time that the development of an appropriate sensorial and vascular system in the biotooh is required, there are many unclear questions about it. Therefore, herein we intend to analyze (I) whether may exist a correlation between the stage of development and vascular and nervous re-growth in the dental pulp after tooth transplantation; (II) if the absence or presence of bone could influence this processes or (III) if the position of implantation could change the vascular and/or nervous development in the transplanted tooth. Our results showed that the site of implantation directly alter tooth development modifying morphogenesis and expression of different vascular, perivascular and neural markers in a time dependant way. The re-growth of the vascular and neural tissue on samples transplanted to the tibia is more similar to the control group than the kidney ones and it is non dependant of the position of implantation. However, the pulp tissue of the samples transplanted under the kidney capsule seemed to be healthier as they were capable of producing mineralized tissue such as osteodentin and still had live odontoblasts.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-03-17T12:57:37Z No. of bitstreams: 1 DIS_GIOVANNA_RAMOS_GARCEZ_COMPLETO.pdf: 5976123 bytes, checksum: 9c877744ccee252f8823d2473ec77be8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-17T12:57:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_GIOVANNA_RAMOS_GARCEZ_COMPLETO.pdf: 5976123 bytes, checksum: 9c877744ccee252f8823d2473ec77be8 (MD5) Previous issue date: 2015-08-31 / Peripheral nerve injuries are a common clinical problem and the development of new approaches to assist in its repair has been shown to be a growth area. The use of microstructured channels has been investigated, in order to promote cell growth guided by assisting in the damaged tissue recovery. Biocompatible and biodegradable materials can be applied for the construction of these devices by eliminating the need for a second procedure to remove the implant. This work proposes the preparation of microstructured film along channels aligned with polydimethylsiloxane (PDMS) and blends of polycaprolactone (PCL) and poly (lacticco- glycolic acid) (PLGA) for potential application in peripheral nerve regeneration. PDMS films were prepared by the method of mixing the solution with oligomers based curing agent. Blends of PCL (Mn = 80.00) and PLGA (85:15) with different ratios of PCL / PLGA (100/0, 90/10, 80/20 and 70/30) were prepared by the solvent evaporation method. The mold used to produce the films consisted of channels with different widths (5, 10, 15 and 20 ?m) and constant height (25 ?m). The materials were characterized by Scanning Electron Microscopy (SEM), Infrared Spectroscopy Fourier Transform (ATR / FT-IR), thermal gravimetric analysis (TGA), Atomic Force Microscopy (AFM). To evaluate the degradation time of the films was carried out in vitro degradation test of PCL blends and PCL / PLGA observing weight loss 0.4 to 9.9% until 90 days testing. It was found that the addition of the PLGA PCL is an effective way to control the degradation rate of the blend and there is no significant difference in the degradation of flat and microstructured films. / Les?es no nervo perif?rico s?o um problema cl?nico comum e a constru??o de novos dispositivos para auxiliar no seu reparo tem se mostrado uma ?rea em crescimento. A utiliza??o de condutos microestruturados vem sendo investigada, com o objetivo de promover um crescimento celular guiado, auxiliando na recupera??o do tecido lesado. Materiais biocompat?veis e biodegrad?veis podem ser aplicados para a constru??o destes dispositivos eliminando a necessidade de um segundo procedimento para remo??o do implante. Este trabalho prop?e a prepara??o de filmes microestruturados com canais longitudinalmente alinhados de polidimetilsiloxano (PDMS) e blendas de policaprolactona (PCL) e poli(?cido l?cticoco- glic?lico) (PLGA) para potencial aplica??o em regenera??o de nervo perif?rico. Filmes de PDMS foram preparados pelo m?todo de mistura da solu??o base de olig?meros com agente de cura. Blendas de PCL (Mn = 80,00) e PLGA (85:15) com diferentes raz?es de PCL/PLGA (100/0, 90/10, 80/20 e 70/30) foram preparadas pelo m?todo de evapora??o do solvente. O molde utilizado para produzir os filmes era constitu?do de canais com diferentes larguras (5, 10, 15 e 20 ?m) e altura constante (25 ?m). Os materiais foram caracterizados por Microscopia Eletr?nica de Varredura (MEV), Espectroscopia no Infravermelho por Transformada de Fourier (ATR/FT-IR), An?lise termogravim?trica (TGA), Microscopia de For?a At?mica (AFM). Para verificar o tempo de degrada??o dos filmes foi realizado ensaio de degrada??o in vitro das blendas de PCL e PCL/PLGA, observando-se perda de massa de 0,4-9,9 % at? o per?odo de 90 dias de ensaio. Constatou-se que a adi??o de PLGA ao PCL ? uma forma efetiva de controlar a taxa de degrada??o das blendas e que n?o h? diferen?a significativa entre a degrada??o dos filmes lisos e microestruturados.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:30:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 454708.pdf: 503289 bytes, checksum: ad5f0c77d8fc1163a56cb76e1be4884d (MD5) Previous issue date: 2014-01-15 / In recent decades, tissue engineering techniques have been reported in the literature as an alternative to conventional autogenous grafts for bone defects and subsequent installation of dental implants, combining a material with the same biological properties of autogenous bone without its limiting factors. This technology requires a carrier for the cells, where hyaluronic acid, a natural glycosaminoglycan, appears to have suitable characteristics to carry out this role. It exerts various biological functions depending on its molecular weight, which can be classified as high (> 1000 kDa), low (from 50 to 1000 kDa) or very low (<50 kDa). Furthermore, there is the hyaluronidase, an enzyme that degrades hyaluronic acid into smaller fragments, influencing the cellular response. Thus, this study aimed to evaluate in vitro the influence of the enzyme hyaluronidase (HYAL) on the high hyaluronic acid (HA-HMW) and low molecular weight (HA-LMW) and their potential cytotoxicity on NIH - 3T3 cells. The MTT assay was performed analyzing cell viability of the following groups: (G1) Cells + HA-HMW; (G2) Cells + HA- LMW; (G3) Cells + HA-HMW + HYAL; (G4) Cells + HA-LMW + HYAL; (G5) Cells + HA-HMW + hydroxyapatite; (G6) Cells + HA-LMW + hydroxyapatite; (G7) Cells + HA-HMW + HYAL + hydroxyapatite; (G8) Cells + HA-LMW + HYAL + hydroxyapatite; (G9) Cells (positive control); (G10) Cells + hypochlorite (negative control). The cell viability for each group were as follows: (G1) 76,0%, (G2) 63,3%, (G3) 67,4%, (G4) 76,5%, (G5) 57,6%, (G6) 60,8%, (G7) 64,4%, (G8) 74,3%, (G9) 100% e (G10) 12,4%. It was found that all groups had significantly higher cell viability compared to the negative control. And although there was no significant difference between experimental groups, only the G1, G4 and G8 groups did not differ significantly from the positive control. Therefore, HA-HMW had better viability in the absence of enzyme hyaluronidase, although HA-LMW provided greater cell viability in the presence of the enzyme. Results indicated that the low-weight hyaluronic acid might be applicable for tissue engineering grafting techniques. / Nas ?ltimas d?cadas, t?cnicas envolvendo engenharia tecidual t?m sido reportadas na literatura como op??o alternativa aos enxertos aut?genos convencionais para corre??o de defeitos ?sseos e posterior instala??o de implantes dent?rios. Estas buscam basicamente um material que apresente as mesmas propriedades biol?gicas do osso aut?geno sem seus fatores limitantes. Tal tecnologia necessita, entre outros componentes, de um scaffold para as c?lulas, onde o ?cido hialur?nico, um glicosaminoglicano natural, parece ter caracter?sticas adequadas para exercer este papel. Ele exerce fun??es biol?gicas diferentes dependendo do seu peso molecular, que pode ser classificado em alto (> 1000 kDa), baixo (de 50 a 1000 kDa) ou baix?ssimo (< 50 kDa). Al?m disso, no organismo humano h? a presen?a da hialuronidase, enzima que degrada o ?cido hialur?nico em fragmentos menores, elementos estes que possivelmente podem influenciar a resposta celular. Desta forma, este estudo buscou avaliar, in vitro, a influ?ncia da enzima hialuronidase (HIAL) sobre o ?cido hialur?nico de alto (AH-APM) e baixo peso molecular (AH-BPM), bem como seu poss?vel potencial citot?xico sobre c?lulas da linhagem NIH-3T3. Para tal, foi realizado o teste de MTT analisando a viabilidade celular dos seguintes grupos: (G1) C?lulas + AH-APM; (G2) C?lulas + AH-BPM; (G3) C?lulas + AH-APM + HIAL; (G4) C?lulas + AH-BPM + HIAL; (G5) C?lulas + AH-APM + Hidroxiapatita; (G6) C?lulas + AH-BPM + Hidroxiapatita; (G7) C?lulas + AH-APM + HIAL + Hidroxiapatita; (G8) C?lulas + AH-BPM + HIAL + Hidroxiapatita; (G9) C?lulas (controle positivo); (G10) C?lulas + hipoclorito (controle negativo). A viabilidade celular m?dia de cada grupo foi: (G1) 76,0%, (G2) 63,3%, (G3) 67,4%, (G4) 76,5%, (G5) 57,6%, (G6) 60,8%, (G7) 64,4%, (G8) 74,3%, (G9) 100% e (G10) 12,4%. Os resultados indicaram que todos os grupos apresentaram viabilidade celular significativamente superior ao controle negativo. E apesar de n?o haver diferen?a significativa entre os grupos experimentais, somente os grupos G1, G4 e G8 n?o diferiram do controle positivo. O AH-APM apresentou melhor viabilidade na aus?ncia da enzima hialuronidase, enquanto que o AH-BPM proporciona uma melhor viabilidade celular na presen?a desta enzima.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:30:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 459191.pdf: 819229 bytes, checksum: 3f5f2f0e1d369ad5b2e6c1504cd4c144 (MD5) Previous issue date: 2014-03-27 / The reposition of a lost osseous structure is challenging in oral rehabilitations involving osseointegrated implants. Tissue engineering techniques aiming reposition of lost calcified tissues has evolved in the last years as an alternative to the autologous bone graft, without the need of a donor site. Among the required techniques and biomaterials, the hyaluronic acid (HA) presents itself as promising alternative for tissue engineering. HA is present in the extracellular matrix of all living tissues, and also allows modifications in its structure, serving as a carrier for several compounds utilized in bone repair. Depending on its molecular weight, studies show that different cytotoxic effects might be observed. Thus, the present study evaluated, in vitro, the cytotoxicity of high and low molecular weight HA on NIH-3T3 cells, following the ISO 10993-12 test standards for cytotoxicity analysis. A MTT test was conducted with the following groups: (G1) cells + high molecular weight hyaluronic acid; (G2) cells + low molecular weight hyaluronic acid; (G3) cells + high molecular weight hyaluronic acid + hydroxyapatite; (G4) cells + low molecular weight hyaluronic acid + hydroxyapatite; (G5) cells (positive control); (G6) cells+ hypochlorite (negative control). The results show that most groups presented higher cellular viability when compared to the negative control and lower than the positive control group (p<0.05). Group G1 presented no statistical difference when compared to the positive control (G5) (p<0.05), indicating that high molecular weight HA might be applicable as a cell carrier for tissue engineering. / A reposi??o de base ?ssea perdida ? um fator de grande complexidade nas reabilita??es orais envolvendo implantes osseointegrados. A engenharia tecidual tem evolu?do nos ?ltimos anos por apresentar-se como uma alternativa ao enxerto ?sseo aut?geno, n?o exigindo um sitio doador de tecido para tal. Dentre as principais t?cnicas e biomateriais utilizados em engenharia tecidual, o acido hialur?nico (AH) apresenta-se como um composto promissor como ve?culo celular. Presente na matriz extracelular de todos os tecidos vivos, ele permite sua modifica??o estrutural, maximizando seu potencial como ve?culo celular em reparos ?sseos. Dependendo do seu peso molecular, estudos mostram diferentes efeitos citot?xicos podem ser verificados. Desta forma, este estudo procurou avaliar, in vitro, a citotoxicidade do AH de alto e de baixo peso molecular, sobre c?lulas da linhagem NIH-3T3, segundo o teste padr?o da norma ISO 10993-12 para analise de citotoxicidade. Para isso, um teste de MTT foi realizado com o seguinte arranjo de grupos: (G1) C?lulas + AH de alto peso molecular; (G2) C?lulas + AH de baixo peso molecular; (G3) C?lulas + AH de alto peso molecular + Hidroxiapatita; (G4) C?lulas + AH de baixo peso molecular + Hidroxiapatita; (G5) C?lulas (controle positivo); (G6) C?lulas + hipoclorito (controle negativo). Os resultados mostram que todos os grupos apresentam viabilidade superior ao controle negativo e inferior ao controle positivo exceto o grupo G1, onde verificou-se aus?ncia de diferen?a estat?stica entre este e o controle positivo. Resultados preliminares apontam para o emprego do AH de alto peso molecular como compat?vel para ve?culo celular em engenharia tecidual.

A questão central para a engenharia tecidual é induzir as células a recapitularem o seu fenótipo normal quando integradas a um arcabouço manufaturado. O objetivo deste trabalho foi examinar as variações na diferenciação celular do músculo liso e urotélio durante as etapas de produção de tecidos urinários in vitro. Quinze espécimes cirúrgicos geraram as culturas analisadas e os fenótipos das populações foram verificados por citometria de fluxo, imunofluorescência e expressão gênica. Houve uma associação entre o cultivo em superfícies plásticas e alterações no fenótipo de ambos os tipos celulares, os quais foram restaurados, em alguma extensão, após sua semeadura em matrizes temporárias. Enquanto o músculo liso recuperou o seu marcador contrátil, o urotélio apresentou atributos de uma camada basal. O estudo destacou como a perda da diferenciação secundária à expansão in vitro representa um desafio para a formação de neotecidos funcionais. / The key issue of tissue engineering is how to induce cells to recapitulate their normal phenotype when placed within a scaffold. The aim of this work was to examine the smooth muscle and urothelium differentiation changes during the steps of urinary tissue production in vitro. Fifteen surgical specimens generated the analyzed cultures and phenotypes of cell populations were monitored by flow cytometer, immunofluorescence and gene expression. For both cellular types, there was an association of cell culture on plastic with phenotypic changes, but they were regained to some extent after cell seeding onto scaffolds. Smooth muscle cells restored their contractile marker, while urothelium showed attributes of a basal layer. The study highlights how the loss of differentiation due to propagation of cells in vitro represents a challenge to development of full functional neotissue.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:43:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 HaroldoAOJ_DISSERT.pdf: 2217261 bytes, checksum: 1a1221344f95ad964f692521743b5714 (MD5) Previous issue date: 2013-03-01 / The regeneration of bone defects with loss of substance remains as a therapeutic challenge in the medical field. There are basically four types of grafts: autologous, allogenic, xenogenic and isogenic. It is a consensus that autologous bone is the most suitable material for this purpose, but there are limitations to its use, especially the insufficient amount in the donor. Surveys show that the components of the extracellular matrix (ECM) are generally conserved between different species and are well tolerated even in xenogenic recipient. Thus, several studies have been conducted in the search for a replacement for autogenous bone scaffold using the technique of decellularization. To obtain these scaffolds, tissue must undergo a process of cell removal that causes minimal adverse effects on the composition, biological activity and mechanical integrity of the remaining extracellular matrix. There is not, however, a conformity among researchers about the best protocol for decellularization, since each of these treatments interfere differently in biochemical composition, ultrastructure and mechanical properties of the extracellular matrix, affecting the type of immune response to the material. Further down the arsenal of research involving decellularization bone tissue represents another obstacle to the arrival of a consensus protocol. The present study aimed to evaluate the influence of decellularization methods in the production of biological scaffolds from skeletal organs of mice, for their use for grafting. This was a laboratory study, sequenced in two distinct stages. In the first phase 12 mice hemi-calvariae were evaluated, divided into three groups (n = 4) and submitted to three different decellularization protocols (SDS [group I], trypsin [Group II], Triton X-100 [Group III]). We tried to identify the one that promotes most efficient cell removal, simultaneously to the best structural preservation of the bone extracellular matrix. Therefore, we performed quantitative analysis of the number of remaining cells and descriptive analysis of the scaffolds, made possible by microscopy. In the second stage, a study was conducted to evaluate the in vitro adhesion of mice bone marrow mesenchymal cells, cultured on these scaffolds, previously decellularized. Through manual counting of cells on scaffolds there was a complete cell removal in Group II, Group I showed a practically complete cell removal, and Group III displayed cell remains. The findings allowed us to observe a significant difference only between Groups II and III (p = 0.042). Better maintenance of the collagen structure was obtained with Triton X-100, whereas the decellularization with Trypsin was responsible for the major structural changes in the scaffolds. After culture, the adhesion of mesenchymal cells was only observed in specimens deccelularized with Trypsin. Due to the potential for total removal of cells and the ability to allow adherence of these, the protocol based on the use of Trypsin (Group II) was considered the most suitable for use in future experiments involving bone grafting decellularized scaffolds / A regenera??o de defeitos ?sseos com perda de subst?ncia permanece um desafio terap?utico na ?rea m?dica. ? consenso ser o osso aut?geno, o material mais adequado para esta finalidade, por?m h? limita??es at? para o seu uso, especialmente a quantidade insuficiente no pr?prio doador. Pesquisas de engenharia tecidual evidenciam que os componentes da matriz extracelular (MEC) s?o geralmente conservados entre as diferentes esp?cies sendo bem toleradas, mesmo em receptores xen?genos. Assim, diversos estudos t?m sido realizados na busca por um arcabou?o substituto do osso aut?geno atrav?s da t?cnica de descelulariza??o. Para a obten??o destes arcabou?os, os tecidos devem passar por um processo de remo??o celular, que cause m?nimos efeitos adversos na composi??o, atividade biol?gica e integridade mec?nica na matriz extracelular remanescente. Entretanto, h? controv?rsias acerca do melhor protocolo de descelulariza??o, j? que cada um desses tratamentos interfere de maneira diferente na composi??o bioqu?mica, ultraestrutura e comportamento mec?nico da matriz extracelular, afetando o tipo de resposta imunol?gica ao material. Ademais o baixo arsenal de pesquisas envolvendo a descelulariza??o de tecidos ?sseos representa mais um obst?culo ? chegada de um consenso protocolar. O presente estudo teve como objetivo avaliar a influ?ncia dos m?todos de descelulariza??o na produ??o de arcabou?os biol?gicos a partir de ?rg?os ?sseos de camundongos, visando sua utiliza??o para enxertia. Trata-se de um estudo laboratorial, sequenciado em duas etapas distintas. Na primeira fase foram avaliadas 12 hemi-calv?rias de camundongos, divididas em tr?s grupos (n=4) e submetidas a tr?s diferentes protocolos de descelulariza??o (SDS [Grupo I], Tripsina [Grupo II], Triton X-100 [Grupo III]). Buscou-se identificar aquele que promove a mais eficiente remo??o celular, simultaneamente a melhor preserva??o estrutural da MEC ?ssea. Para tanto, foi realizada an?lise quantitativa do n?mero de c?lulas remanescentes e an?lise descritiva dos arcabou?os, possibilitadas por microscopia. Na segunda etapa, foi realizado um estudo in vitro para avaliar a ades?o de c?lulas mesenquimais da medula ?ssea de camundongos, cultivadas sobre arcabou?os previamente descelularizados. Atrav?s da contagem manual de c?lulas nos arcabou?os, verificou-se total remo??o celular no Grupo II, remo??o praticamente completa no Grupo I, e perman?ncia de c?lulas e remanescentes no Grupo III. Os achados permitiram observar diferen?a significativa apenas entre os Grupos II e III (p=0,042). Melhor manuten??o da estrutura col?gena foi obtida com o Triton X-100, ao passo que a descelulariza??o com Tripsina foi respons?vel pelas maiores altera??es estruturais nos arcabou?os. Ap?s o cultivo, a ades?o de c?lulas mesenquimais s? foi observada nas calv?rias descelularizadas com Tripsina. Devido ao potencial de remo??o total das c?lulas e ? capacidade de permitir a ades?o destas, o protocolo baseado no uso da Tripsina (Grupo II) foi considerado o mais adequado para uso em experimentos futuros, que envolvam enxertia de arcabou?os ?sseos descelularizados

A odontologia moderna, mesmo usando as suas técnicas mais primorosas, na prática, ainda recupera a perda dental com implantes metálicos recobertos por coroas protéticas. Há um empenho coletivo dos cientistas em criar técnicas de desenvolvimento dental in vitro na busca por maneiras de recuperar, de maneira biológica, a ausência dental. Já é possível criar estruturas similares a dentes a partir de células-tronco de origem dental (polpa de dentes permanentes e decíduos) e não dental (células-tronco embrionárias, células-tronco da medula óssea e da crista neural) por meio de recombinação dos tecidos epiteliais e mesenquimais de germes dentais. As técnicas de reconstrução tecidual nunca estiveram tão perto do desenvolvimento da terceira dentição mas a ciência ainda tem muito a aprender no que concerne o estudo da biologia dental e engenharia de tecidos. Não basta saber como um dente se desenvolve; há de se entender como ele interage com o organismo do qual faz ou fará parte. É com esta preocupação que nos propomos a estudar se pode haver uma correlação entre o desenvolvimento do sistema nervoso e vascular de um germe dental transplantado com a posição que ele é implantado e/ou com a presença de tecido ósseo que no leito receptor. Ademais, buscamos saber se o estágio de desenvolvimento do germe dental a ser transplantado pode influenciar a formação de tecido nervoso e vascular na polpa dental ou não. Nossos resultados revelaram que o local do sítio do implante influencia diretamente o desenvolvimento dental e que isto é tempo dependente. A vascularização e a reinervação da polpa dental nos espécimes implantados nas tíbias é mais semelhante ao grupo controle que os implantados nos rins e isto independe da posição de implantação dental. Entretanto, a polpa dental dos germes implantados nos rins parece estar comumente mais sadia, conter mais odontoblastos viáveis e ser capaz de produzir tecidos mineralizados como a osteodentina. / Contemporary dentistry, even using modern techniques, still deal with missing teeth using metal implants coated by prosthetic crowns. However, there is a worldwide effort to develop a biotooth using in vitro techniques. In this way it is already possible to generate structures similar to teeth using recombination of odontogenic and non odontogenic cells in tissue engineering experiments. The transplant of the recombined cells into a host is a necessary and major step to obtain the biotooth. In this context, at the same time that the development of an appropriate sensorial and vascular system in the biotooh is required, there are many unclear questions about it. Therefore, herein we intend to analyze (I) whether may exist a correlation between the stage of development and vascular and nervous re-growth in the dental pulp after tooth transplantation; (II) if the absence or presence of bone could influence this processes or (III) if the position of implantation could change the vascular and/or nervous development in the transplanted tooth. Our results showed that the site of implantation directly alter tooth development modifying morphogenesis and expression of different vascular, perivascular and neural markers in a time dependant way. The re-growth of the vascular and neural tissue on samples transplanted to the tibia is more similar to the control group than the kidney ones and it is non dependant of the position of implantation. However, the pulp tissue of the samples transplanted under the kidney capsule seemed to be healthier as they were capable of producing mineralized tissue such as osteodentin and still had live odontoblasts.

Os transtornos que afetam a traqueia podem levar a graves complicações de saúde e reduzir significativamente a qualidade de vida das pessoas. Até o presente não existe uma opção clinicamente viável disponível para pacientes com distúrbios severos dessa via aérea. As técnicas de Engenharia de Tecidos apresentam um cenário promissor na tentativa de produzir um substituto traqueal satisfatório, com características mecânicas e biológicas compatíveis com os tecidos do paciente. Nesse trabalho, apresenta-se um sistema de aquisição de imagens de vídeo que permite medir as variações da área da projeção bidimensional de traqueias autotransplantadas de ratos, in vivo, com o objetivo de apresentar uma ferramenta que possa caracterizar as suas propriedades mecânicas e acelerar a avaliação das técnicas e dos tecidos gerados. Seis ratos, da linhagem Wistar, tiveram exposição de toda a traqueia cérvico-mediastinal, foram ventilados e submetidos a um protocolo experimental com diferentes cenários de broncoconstrição, a fim de se poder relacionar os dados obtidos a partir da ventilação mecânica com as imagens da movimentação das paredes da traqueia antes e depois de um autotransplante e aprofundar a discussão do sistema respiratório nas situações de maior broncoconstrição. Os resultados do pré-transplante, no cenário de maior broncoconstrição, mostraram um aumento médio da área da projeção da traqueia de 0,9 ± 0,24% nas fases inspiratórias das perturbações quasi-senoidais e, nas fases expiratórias, reduções de 5,2 ± 6,1%. No pós-transplante, o aumento médio foi de 0,7 ± 0,26% e a redução foi de 1,7 ± 0,73%, para o mesmo cenário de broncoconstrição. As diferenças das fases inspiratórias e expiratórias sugerem uma maior cautela para interpretar os parâmetros da mecânica ventilatória nos cenários de maior broncoconstrição das vias aéreas. Por intermédio das imagens da traqueia, também foi possível observar os diferentes instantes de tempos de resposta para a ação de um agente constritor da musculatura lisa. Pode-se concluir que essa técnica de aquisição de imagens apresenta resolução e frequência de aquisição suficientes para monitorar as variações do calibre de traqueias autotransplantadas de ratos e trazem uma boa perspectiva para o seu uso na avaliação das propriedades mecânicas de enxertos traqueais produzidos por Engenharia Tecidual. / Tracheal disorders can lead to serious health complications and significantly reduce the people life´s quality. There is no clinically feasible option available for patients with several airway disorders. Tissue Engineering techniques present a promising scenario to produce a satisfactory tracheal replacement, with compatible mechanical and biological characteristics with the patient\'s tissues. This work presents a video image acquisition system that allows measure in vivo two-dimensional projection area variations of auto transplanted rat\'s tracheas with the objective of presenting a tools that can characterize its mechanical properties and accelerate the evaluation of techniques and tissues. Six Wistar rats were exposed to the entire cervical-mediastinal trachea, ventilated and submitted to an experimental protocol in different bronchoconstriction scenarios, before and after an auto transplantation in order to correlate the data obtained from the mechanical ventilation and images of the trachea walls movement before and after the auto transplantation and improve the discussion about respiratory system in greater bronchoconstriction status. The pre-transplant results, in the greater bronchoconstriction scenario, showed an average increase of 0.9 ± 0.24% in the inspiratory phases of the quasi-sinusoidal perturbations and, in the expiratory phases, a reduction of 5.2 ± 6.1%. In the post-transplant, the mean increase was 0.7 ± 0.26% and the reduction was 1.7 ± 0.73%, for the same bronchoconstriction scenario. Differences between inspiratory and expiratory phases suggest caution in interpreting the parameters of the ventilatory mechanics in the scenarios of greater bronchoconstriction. Through the trachea\'s images it was also possible to observe different response times for the action of a smooth muscle constriction agent. It can be concluded that this technique of acquisition of images presents sufficient resolution and frequency of acquisition to monitor the calibers variations of auto transplanted rat´s tracheas and bring a good perspective for its use in the evaluation of the mechanical properties of tracheal grafts produced by Engineering Tissue.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-10-17T15:52:43Z No. of bitstreams: 1 TES_MARIANE_GIACOMINI_SCHARDOSIM_COMPLETO.pdf: 4815510 bytes, checksum: c2182071d7270693c96a8dbc2f142391 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-17T15:52:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_MARIANE_GIACOMINI_SCHARDOSIM_COMPLETO.pdf: 4815510 bytes, checksum: c2182071d7270693c96a8dbc2f142391 (MD5) Previous issue date: 2016-08-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Bone injuries are a common form of trauma, being reported about 15 million fractures each year worldwide. Some of these lesions require the use of grafts to achieve bone regeneration. Currently, the main method used for treatment of these lesions is the use of autologous grafts. Although this technique is considered the gold standard of bone regeneration, there are some disadvantages such as the need for surgery to collect material and the lack of it. The application of composite biodegradable polymers such as poly (lactic-co-glycolic acid), calcium phosphates and bioactive ceramics such as apatite and bioglasses, represent an alternative in treatment of bone lesions. This is due to the possibility of combining characteristics of both materials. The objective of this research is to produce porous matrices PLGA:apatite/bioglass via two methodologies: salt leaching and lyophilization. The loads used in this study were synthesized by coprecipitation and evaluated by XRD, FTIR, SEM and DLS. The obtained porous structures are characterized by SEM, mercury porosimetry, compression, microtomography, in vitro degradation and in vitro biocompatibility. Highly porous composite scaffolds were obtained by the two methods studied. The load concentration and the type of load added to the polymeric matrix altered the mechanical properties and generated different surface features. Furthermore, the degradation rate of the supports is highly influenced by the added inorganic filler. / Danos ao tecido ?sseo s?o formas comuns de les?es, sendo reportadas cerca de 15 milh?es de fraturas a cada ano, em escala mundial. Parte destas les?es exige a utiliza??o de enxertos para regenera??o ?ssea. Atualmente, a principal metodologia utilizada para tratamento destas les?es ? a utiliza??o de enxertos aut?logos. Esta t?cnica ? considerada o padr?o ouro da regenera??o ?ssea, por?m, existem algumas desvantagens como a necessidade de uma cirurgia para coleta de material. A aplica??o de comp?sitos de pol?meros biodegrad?veis, como o ?cido poli (l?tico-co-glic?lico), fosfatos de c?lcio e cer?micas bioativas, como as apatitas e os biovidros, representa uma alternativa no tratamento de defici?ncias ?sseas. O objetivo desta pesquisa ? produzir matrizes porosas de PLGA: apatita/biovidro atrav?s de duas metodologias: lixivia??o de sal e liofiliza??o. As cargas utilizadas neste trabalho foram sintetizadas atrav?s de coprecipta??o e metodologia sol-gel e ent?o avaliadas por DRX, FTIR, MEV e DLS. As estruturas porosas obtidas foram caracterizadas por MEV, porosimetria a merc?rio, compress?o, microtomografia, degrada??o in vitro e biocompatibilidade in vitro. Foram obtidos arcabou?os comp?sitos altamente porosos atrav?s das duas metodologias estudadas. A concentra??o de carga e o tipo de carga adicionada a matriz polim?rica alteram as propriedades mec?nicas e diferentes caracter?sticas de superf?cie. Al?m disso, a velocidade de degrada??o dos arcabou?os ? altamente influenciada pela carga inorg?nica adicionada.

Submitted by Salete Sartori (ssartori@pucrs.br) on 2017-01-16T13:46:11Z No. of bitstreams: 1 DIS_EMANUELLI_LOURENCO_CABRAL_COMPLETO.pdf: 2324920 bytes, checksum: cdf79816569d7d9b352a5a2d9b93437f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-16T13:46:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_EMANUELLI_LOURENCO_CABRAL_COMPLETO.pdf: 2324920 bytes, checksum: cdf79816569d7d9b352a5a2d9b93437f (MD5) Previous issue date: 2016-04-19 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The use of biomaterials that can replace or restore damaged tissues in the human body is necessary to improve the quality and life expectancy of the population. In this sense, the present project aims the study and development of different membranes based on biostable polyurethane, the incorporation of rapamycin, an antithrombogenic drug that can help about the inhibition of blood vessel narrowing, and the evaluation to verify its potential application in vascular area. Therefore, the obtained membranes showed three different morphologies, a membrane with porous surface (average pore size 3,3 ?m ? 0,8 ?m) ? named porous PU ? other membrane with an irregular surface, but without porous ? dense PU ? and for the last, a membrane with internal interconnections ? leached PU. There were realized for each membrane the tests of wettability and contact angle. The leached PU showed higher average of body fluid absorption and porous PU showed higher hydrophilicity, however after the addition of rapamycin, dense PU showed more hydrophilicity. About calcification test, both of three membranes showed minerals deposition, but this did not happen with dense PU after incorporation of drug. The thermal characterizations of the membranes were according with literature for polyurethanes, as the mechanical behavior. Lastly, the membranes did not showed in vitro cytotoxicity, which means that they could be used within our bodies. Thus, the obtained membranes showed their interesting and high potential for use and improvement / O uso de biopol?meros que possam substituir ou restaurar tecidos danificados no corpo humano ? necess?rio para a melhoria na qualidade e expectativa de vida da popula??o. Neste sentido, o presente projeto visa o estudo e desenvolvimento de diferentes membranas baseadas em poliuretano bioest?vel, a incorpora??o da rapamicina, um f?rmaco antitrombog?nico que pode auxiliar na inibi??o do estreitamento dos vasos sangu?neos, e a avalia??o para verificar sua potencial aplica??o na ?rea vascular. Sendo assim, as membranas obtidas apresentaram tr?s morfologias distintas, uma membrana com superf?cie totalmente porosa (tamanho m?dio de poros de 3,3 ?m ? 0,8 ?m) ? denominada PU poroso ? outra com irregularidades em sua superf?cie, por?m sem poros ? PU denso ? e por fim, uma membrana com interconex?es internas ? PU lixiviado. Para cada membrana foram realizados ensaios como teste de inchamento e an?lise do ?ngulo de contato. O PU lixiviado apresentou maior m?dia de absor??o de fluido corp?reo e o PU poroso apresentou maior hidrofilicidade, contudo, ap?s a adi??o da rapamicina o PU denso mostrou-se mais hidrof?lico. Em rela??o ao teste de calcifica??o, as tr?s membranas apresentaram dep?sito de minerais, o que n?o ocorreu para o PU denso ap?s a adi??o do f?rmaco. As caracteriza??es t?rmicas das membranas mostraram-se de acordo com a literatura para poliuretanos, assim como o comportamento mec?nico. Por fim, os estudos de citotoxicidade mostraram que as membranas n?o s?o citot?xicas, podendo ser utilizadas dentro do nosso organismo. Dessa maneira, as membranas obtidas mostram-se interessantes e com grande potencial de uso e aperfei?oamento