Orientadores: José Luiz Pereira, Maristela Nascimento / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-18T16:21:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_IvoneFranciscada_M.pdf: 1262965 bytes, checksum: 1fe0878a62acfd4e2e373d7b14691653 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Os microrganismos são extremamente importantes no processamento do cacau, sob dois aspectos. O primeiro é o aspecto tecnológico, porque desempenham um papel fundamental no desenvolvimento do sabor do chocolate. O segundo é o aspecto de saúde pública, porque podem transmitir doenças de origem alimentar. O chocolate já foi incriminado em vários surtos de salmonelose e, em alguns deles, a contaminação por Salmonella originou-se dos ingredientes de cacau. O objetivo do presente estudo foi verificar a ocorrência de enterobactérias, incluindo Salmonella em cada etapa do processamento do cacau até a obtenção do chocolate além de determinar características fisico-químicas como pH e atividade de água. Foram analisadas 364 amostras, obtidas de produtores e processadores de cacau da Bahia e comerciantes de chocolate do Estado de São Paulo, sendo 119 amostras de cacau durante o pré-processamento nas fazendas produtoras; 150 amostras de derivados processados de cacau e 65 amostras comerciais de chocolate. As polpas de cacau apresentaram resultados microbiológicos e físico-químicos de acordo com a legislação vigente. As sementes que chegam do campo, antes de entrarem na fermentação, não apresentaram contaminação por E. coli, o que indica que a matéria prima é uma fonte menos provável de entrada de enteropatógenos, dentre eles Salmonella, no pré-processamento do cacau. Na etapa de fermentação não houve o isolamento de Salmonella, nem foi observada correlação entre a presença ou contagem de E. coli e o tempo de fermentação. Todas as fazendas produtoras apresentaram contaminação por E. coli. Durante a etapa de secagem das amêndoas não foi detectada presença de Salmonella, já a porcentagem de amostras contaminadas por E. coli aumentou em todas as fazendas (40% de amostras contaminadas) com relação a etapa anterior. Nas amêndoas fermentadas e secas foi detectada a presença de Salmonellaem uma amostra, além de ter sido verificado um aumento na porcentagem de amostras contaminadas por E. coli em relação a etapa anterior. Quanto cacau processado, nas amostras de Nibs analisadas houve o isolamento de bactérias do grupo enterobactérias e coliformes totais em 17 e 20% das amostras, mesmo após terem sido submetidos a um processo de torração com temperaturas acima de 110°C. Para os demais produtos foi verificada contaminação de até 7% das amostras analisadas. Em relação ao chocolate as amostras analisadas apresentaram resultados microbiológicos dentro dos padrões estabelecidos pela legislação. Os resultados obtidos nos levam a concluir que: o pré-processamento do cacau é uma etapa onde ocorre a introdução e multiplicação de microrganismos indicadores e patogênicos como a Salmonella, sendo que as etapas de secagem e armazenamento se mostraram as mais críticas; a etapa de processamento também oferece risco de introdução e/ou sobrevivência de microrganismos patogênicos como Salmonella / Abstract: Microorganisms are extremely important in the processing of cocoa for many reasons. First of all is the technological aspect because some microorganims play a key role in the improvement of chocolate flavor. The other aspect is on public health, mainly on the transmission of food-borne diseases. Chocolate has already in several outbreaks of salmonellosis, in some of them Salmonella source was cocoa ingredient. Therefore, the aim of this study was to investigate the occurrence of been Enterobacteriaceae, including Salmonella, throughout cocoa and chocolate chain incremented. Furthermore, physico-chemical properties such as pH and water activity were determined. The amount of 364 samples, obtained from manufacturers of Bahia state and cocoa traders from São Paulo state, were analyzed, including 119 samples of cocoa during the pre-processing on farms, 150 samples of cocoa processed products and 65 samples of commercial chocolate. The results indicated that the microbiological and physical-chemical analyses of the cocoa pulp were according to law. Cocoa sucs before the fermentation process are not. source of Salmonella and E.coli. In the fermentation stage, Salmonella was not isolated, but all farms showed contamination by E. coli, without correlation between the counting of pathogens and fermentation time. In the drying step, Salmonella was not detected as opposed to E. coli counting, that increased 40% in all farms with respect to the previous step. In the storage only one sample showed Salmonella. In Nibs samples were isolated Enterobacteriaceae and total coliforms in respectively 17% and 20% of samples, despite of roasting processing with temperatures above 110ºC. For other products the contamination of 7%. Commercial chocolate samples showed results seconding to the standards established by law.The results lead us to conclude that the pre-processing of cocoa is the stage where there is the introduction and multiplication of indicators microorganisms and Salmonella. The drying and storage were the most critical steps. The processing stages, also offer risk of introduction and survival of pathogens such as Salmonella / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestre em Ciência de Alimentos

As metalo-β-lactamases (MBL) são capazes de hidrolisar os carbapenêmicos, a classe de antimicrobianos com maior potência para o tratamento de infecções graves e de maior uso clinico. Dentre as MBL, o grupo mais recentemente descrito e que apresentou rápida disseminação em todo o mundo é o da New-Delhi-Metalo- β-lactamases (NDM). Nas enterobactérias, os genes que codificam essas enzimas estão mais frequentemente localizados em plasmídeos. O estudo da estabilidade de plasmídeos que albergam o gene blaNDM-1 é importante para entender a predominância de espécies que carregam esses plasmídeos, desvendar mecanismos moleculares envolvidos na sua persistência e para desenvolver novas drogas que possam diminuir a sua persistência. Estudos recentes sobre estabilidade plasmidial evidenciaram que a maprotilina é capaz de induzir perda plasmidial de até 90% em E. coli K12. Neste trabalho, foi estudado o efeito da maprotilina na indução de cura de plasmídeos, que albergam o gene blaNDM-1, em diferentes espécies da família Enterobacteriaceae. Nove isolados pertencentes a diferentes espécies foram incluídas no estudo. Os plasmídeos foram caracterizados quanto ao seu tamanho por eletroforese e por sequenciamento de DNA no sistema Illumina. A persistência plasmidial foi determinada pelo método de contagem em placa em LB ágar com e sem tratamento com maprotilina em concentrações sub-inibitórias (50mg/L). O experimento foi conduzido por 10 dias, representando aproximadamente 100 gerações. Neste estudo evidenciou-se que o grupo das enterobactérias estão envolvidas na disseminação de plasmídeos com blaNDM-1, sendo que plasmídeos do grupo IncF estão mais relacionados a essa dispersão. A maprotilina teve efeito de cura plasmidial em todos os isolados exceto em E. hormaechei \"subsp. oharae\" e C. freundii. O isolado P. rettgeri apresentou maior taxa de perda plasmidial e a análise comparativa da sequência nucleotídica do plasmídeo indicou que a presença da IS5 pode estar relacionada com a diminuição da persistência plasmidial. Diferenças na persistência plasmidial, quando tratados com maprotilina, entre E. hormaechei \"subsp. steigerwaltii\" e E. hormaechei \"subsp. oharae\" sugerem que E. hormaechei \"subsp. oharae\" pode ser um possível disseminador de plasmídeos albergando blaNDM-1, devido a processos de adaptação co-evolutivos. / Metallo- β-lactamases (MBL) are able to hydrolase carbapenems, an antimicrobial class in clinical use with high potency in the treatment of severe infections. The most recently decribed group of MBL is the New-Delhi-Metallo-β-lactamases (NDM). This group is mostly correlated to the spread of resistance mediated by plasmid in Enterobacteriaceae. Understanding the plasmid persistence pattern is important in order to understand the predominance of a given species related to antimicrobial resistance plasmids spread, to unveil molecular mechanisms involved in the increase of plasmid persistence and to develop new drugs which could decrease its persistence. Recent studies have associated maprotiline to a decrease in 90% of plasmid persistence in E. coli K12. In this work, we evaluated the effect of maprotiline in curing plasmids carrying blaNDM-1 in different species of Enterobacteriaceae. Nine isolates belonging to different species were evaluated. Plasmids were characterized by agarose gel electrophoresis and by DNA sequencing with Illumina platform. The plate counting method was used to determine plasmid persistence, with and without sub-inhibitory (50 mg/L) concentration of maprotiline during 10 days, representing approximately 100 generations. We found that Enterobacteriaceae are involved in the spread of NDM-1 plasmid-mediate resistance and the IncF group is the plasmid incompatibility group more frequently involved in this dissemination. Maprotiline showed a plasmid-curing effect in all isolates, except against plasmids of E. hormaechei \"subsp. oharae\" and C. freundii. The P. rettgeri isolate had the highest plasmid-curing rate. Sequencing analysis revealed an IS5 in the plasmid, which could be associated to a decrease in plasmid persistence. The difference between plasmid persistence pattern of plasmids isolated from E. hormaechei \"subsp. steigerwaltii\" and E. hormaechei \"subsp. oharae\", when treated with maprotiline, suggest that E. hormaechei \"subsp. oharae\", could be associated to the spread of plasmids carrying blaNDM-1 due to co-evolution adaptation.

A fim de pesquisar a presença de yersinia pseudotuberculosis em quadro de diarreia bovina, foram analisadas 220 amostras de fezes, 60 conteudos de intestino delgado e 56 conteudos de intestino grosso. Obteve-se isolamento positivo em 46 (21%), 9 (15%) e 5 (9%) das amostras respectivamente, totalizando 60 cepas do microrganismo. As 60 cepas de yersinia pseudotuberculosis pertenciam ao sorogrupo o iii., Apresentando identica sensibilidade aos antibioticos e quimioterapicos quando testados in vitro. Estatisticamente comprovou-se haver relação entre os isolamentos das cepas de yersinia pseudotuberculosis e os meses mais frios do ano. A cepa y. Pseudotuberculosis mostrou-se patogenica aos cobaios, quando administrada via oral. Apesar dos resultados bacteriologicos negativos, não se descartou a possibilidade do envolvimento de roedores silvestres e comensais na transmissão do microrganismo aos bovinos, podendo os proprios bovinos ou o solo, servirem como reservatorios do microrganismo. A metodologia utilizada no isolamento das cepas de y. Pseudotuberculosis possibilitou que 73,3% das mesmas fossem isoladas no cultivo primario e 26,66% apos o crioenriquecimento na temperatura de 4 GRAUS c por 7, 14 e 21 dias. / The main purposes of this research was to search for Yersinia pseudotuberculosis in faecal samples from bovine with diarrhea, from farms in the State of Paraná. We have analyzed 220 faecal samples, 60 samples from small intestine contents and 56 samples from large intestine contents. Yersinia pseudotuberculosis isolation was positive in 46 (21%), 9 (15%) and 5 (9%), respectively, totalizing 60 strains of the microrganism. The 60 strains of Yersinia pseudotuberculosis belong to serogroup 0 III, and they shown identical sensibility to antibiotics and other drugs, when tested in vitro. Through the statistical methods, X2 test, we found a positive correlation between Yersinia pseudotuberculosis isolation and the winter season. To establish the morbidity and mortality rates, cattle population was separated into three age related categories, wich are: calfs, yearlings and adults. In 1987 and 1988, the morbidity rates were 0%, 10,3% and 6,7%; 0%, 13,4% and 11,7%, respectively. In relation to mortality rates, they were 0%, 1,0% and 2,6% in 1987, and 0%, 2,1% and 2,6% in 1988. The strains of Yersinia pseudotuberculosis placed on serogroup 0 III, were pathogenic to guinea pigs, when giver per-os. We didn\'t get any isolation of Yersinia pseudotuberculosis from wild rodents and others, but we still think that may be incriminated in the transmission of the microrganism to bovines, although the bovines as well as the soil, may function as reservoires of the bacteria. Isolation of Yersinia pseudotuberculosis in primary cultures was possible in 73,33% although 26,66% of the isolations were successfull only after cold-temperature enrichment, with incubation at 4 C for 7, 14 an 21 days.

A fim de pesquisar a presença de yersinia pseudotuberculosis em quadro de diarreia bovina, foram analisadas 220 amostras de fezes, 60 conteudos de intestino delgado e 56 conteudos de intestino grosso. Obteve-se isolamento positivo em 46 (21%), 9 (15%) e 5 (9%) das amostras respectivamente, totalizando 60 cepas do microrganismo. As 60 cepas de yersinia pseudotuberculosis pertenciam ao sorogrupo o iii., Apresentando identica sensibilidade aos antibioticos e quimioterapicos quando testados in vitro. Estatisticamente comprovou-se haver relação entre os isolamentos das cepas de yersinia pseudotuberculosis e os meses mais frios do ano. A cepa y. Pseudotuberculosis mostrou-se patogenica aos cobaios, quando administrada via oral. Apesar dos resultados bacteriologicos negativos, não se descartou a possibilidade do envolvimento de roedores silvestres e comensais na transmissão do microrganismo aos bovinos, podendo os proprios bovinos ou o solo, servirem como reservatorios do microrganismo. A metodologia utilizada no isolamento das cepas de y. Pseudotuberculosis possibilitou que 73,3% das mesmas fossem isoladas no cultivo primario e 26,66% apos o crioenriquecimento na temperatura de 4 GRAUS c por 7, 14 e 21 dias. / The main purposes of this research was to search for Yersinia pseudotuberculosis in faecal samples from bovine with diarrhea, from farms in the State of Paraná. We have analyzed 220 faecal samples, 60 samples from small intestine contents and 56 samples from large intestine contents. Yersinia pseudotuberculosis isolation was positive in 46 (21%), 9 (15%) and 5 (9%), respectively, totalizing 60 strains of the microrganism. The 60 strains of Yersinia pseudotuberculosis belong to serogroup 0 III, and they shown identical sensibility to antibiotics and other drugs, when tested in vitro. Through the statistical methods, X2 test, we found a positive correlation between Yersinia pseudotuberculosis isolation and the winter season. To establish the morbidity and mortality rates, cattle population was separated into three age related categories, wich are: calfs, yearlings and adults. In 1987 and 1988, the morbidity rates were 0%, 10,3% and 6,7%; 0%, 13,4% and 11,7%, respectively. In relation to mortality rates, they were 0%, 1,0% and 2,6% in 1987, and 0%, 2,1% and 2,6% in 1988. The strains of Yersinia pseudotuberculosis placed on serogroup 0 III, were pathogenic to guinea pigs, when giver per-os. We didn\'t get any isolation of Yersinia pseudotuberculosis from wild rodents and others, but we still think that may be incriminated in the transmission of the microrganism to bovines, although the bovines as well as the soil, may function as reservoires of the bacteria. Isolation of Yersinia pseudotuberculosis in primary cultures was possible in 73,33% although 26,66% of the isolations were successfull only after cold-temperature enrichment, with incubation at 4 C for 7, 14 an 21 days.

As metalo-β-lactamases (MBL) são capazes de hidrolisar os carbapenêmicos, a classe de antimicrobianos com maior potência para o tratamento de infecções graves e de maior uso clinico. Dentre as MBL, o grupo mais recentemente descrito e que apresentou rápida disseminação em todo o mundo é o da New-Delhi-Metalo- β-lactamases (NDM). Nas enterobactérias, os genes que codificam essas enzimas estão mais frequentemente localizados em plasmídeos. O estudo da estabilidade de plasmídeos que albergam o gene blaNDM-1 é importante para entender a predominância de espécies que carregam esses plasmídeos, desvendar mecanismos moleculares envolvidos na sua persistência e para desenvolver novas drogas que possam diminuir a sua persistência. Estudos recentes sobre estabilidade plasmidial evidenciaram que a maprotilina é capaz de induzir perda plasmidial de até 90% em E. coli K12. Neste trabalho, foi estudado o efeito da maprotilina na indução de cura de plasmídeos, que albergam o gene blaNDM-1, em diferentes espécies da família Enterobacteriaceae. Nove isolados pertencentes a diferentes espécies foram incluídas no estudo. Os plasmídeos foram caracterizados quanto ao seu tamanho por eletroforese e por sequenciamento de DNA no sistema Illumina. A persistência plasmidial foi determinada pelo método de contagem em placa em LB ágar com e sem tratamento com maprotilina em concentrações sub-inibitórias (50mg/L). O experimento foi conduzido por 10 dias, representando aproximadamente 100 gerações. Neste estudo evidenciou-se que o grupo das enterobactérias estão envolvidas na disseminação de plasmídeos com blaNDM-1, sendo que plasmídeos do grupo IncF estão mais relacionados a essa dispersão. A maprotilina teve efeito de cura plasmidial em todos os isolados exceto em E. hormaechei \"subsp. oharae\" e C. freundii. O isolado P. rettgeri apresentou maior taxa de perda plasmidial e a análise comparativa da sequência nucleotídica do plasmídeo indicou que a presença da IS5 pode estar relacionada com a diminuição da persistência plasmidial. Diferenças na persistência plasmidial, quando tratados com maprotilina, entre E. hormaechei \"subsp. steigerwaltii\" e E. hormaechei \"subsp. oharae\" sugerem que E. hormaechei \"subsp. oharae\" pode ser um possível disseminador de plasmídeos albergando blaNDM-1, devido a processos de adaptação co-evolutivos. / Metallo- β-lactamases (MBL) are able to hydrolase carbapenems, an antimicrobial class in clinical use with high potency in the treatment of severe infections. The most recently decribed group of MBL is the New-Delhi-Metallo-β-lactamases (NDM). This group is mostly correlated to the spread of resistance mediated by plasmid in Enterobacteriaceae. Understanding the plasmid persistence pattern is important in order to understand the predominance of a given species related to antimicrobial resistance plasmids spread, to unveil molecular mechanisms involved in the increase of plasmid persistence and to develop new drugs which could decrease its persistence. Recent studies have associated maprotiline to a decrease in 90% of plasmid persistence in E. coli K12. In this work, we evaluated the effect of maprotiline in curing plasmids carrying blaNDM-1 in different species of Enterobacteriaceae. Nine isolates belonging to different species were evaluated. Plasmids were characterized by agarose gel electrophoresis and by DNA sequencing with Illumina platform. The plate counting method was used to determine plasmid persistence, with and without sub-inhibitory (50 mg/L) concentration of maprotiline during 10 days, representing approximately 100 generations. We found that Enterobacteriaceae are involved in the spread of NDM-1 plasmid-mediate resistance and the IncF group is the plasmid incompatibility group more frequently involved in this dissemination. Maprotiline showed a plasmid-curing effect in all isolates, except against plasmids of E. hormaechei \"subsp. oharae\" and C. freundii. The P. rettgeri isolate had the highest plasmid-curing rate. Sequencing analysis revealed an IS5 in the plasmid, which could be associated to a decrease in plasmid persistence. The difference between plasmid persistence pattern of plasmids isolated from E. hormaechei \"subsp. steigerwaltii\" and E. hormaechei \"subsp. oharae\", when treated with maprotiline, suggest that E. hormaechei \"subsp. oharae\", could be associated to the spread of plasmids carrying blaNDM-1 due to co-evolution adaptation.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:39Z : No. of bitstreams: 1 Publico-056a.pdf: 696691 bytes, checksum: 64c4289072c6f1c83f49be3d7e27f3ae (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:39Z : No. of bitstreams: 2 Publico-056a.pdf: 696691 bytes, checksum: 64c4289072c6f1c83f49be3d7e27f3ae (MD5) Publico-056b.pdf: 486744 bytes, checksum: 8df649e134c8e80fb3b1eb63056a2d16 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:39Z : No. of bitstreams: 3 Publico-056a.pdf: 696691 bytes, checksum: 64c4289072c6f1c83f49be3d7e27f3ae (MD5) Publico-056b.pdf: 486744 bytes, checksum: 8df649e134c8e80fb3b1eb63056a2d16 (MD5) Publico-056c.pdf: 204395 bytes, checksum: 0a9399461d184b10dd67c8512f955943 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:39Z : No. of bitstreams: 4 Publico-056a.pdf: 696691 bytes, checksum: 64c4289072c6f1c83f49be3d7e27f3ae (MD5) Publico-056b.pdf: 486744 bytes, checksum: 8df649e134c8e80fb3b1eb63056a2d16 (MD5) Publico-056c.pdf: 204395 bytes, checksum: 0a9399461d184b10dd67c8512f955943 (MD5) Publico-056d.pdf: 92501 bytes, checksum: 4a4f09b7509f54629374a97140a233c0 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:39Z : No. of bitstreams: 5 Publico-056a.pdf: 696691 bytes, checksum: 64c4289072c6f1c83f49be3d7e27f3ae (MD5) Publico-056b.pdf: 486744 bytes, checksum: 8df649e134c8e80fb3b1eb63056a2d16 (MD5) Publico-056c.pdf: 204395 bytes, checksum: 0a9399461d184b10dd67c8512f955943 (MD5) Publico-056d.pdf: 92501 bytes, checksum: 4a4f09b7509f54629374a97140a233c0 (MD5) Publico-056e.pdf: 123013 bytes, checksum: dc0c475a97611d23f9b3ea520f457740 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:39Z : No. of bitstreams: 6 Publico-056a.pdf: 696691 bytes, checksum: 64c4289072c6f1c83f49be3d7e27f3ae (MD5) Publico-056b.pdf: 486744 bytes, checksum: 8df649e134c8e80fb3b1eb63056a2d16 (MD5) Publico-056c.pdf: 204395 bytes, checksum: 0a9399461d184b10dd67c8512f955943 (MD5) Publico-056d.pdf: 92501 bytes, checksum: 4a4f09b7509f54629374a97140a233c0 (MD5) Publico-056e.pdf: 123013 bytes, checksum: dc0c475a97611d23f9b3ea520f457740 (MD5) Publico-056f.pdf: 101976 bytes, checksum: 3e0e09307406333a692f7a6edbd0aeeb (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:39Z : No. of bitstreams: 7 Publico-056a.pdf: 696691 bytes, checksum: 64c4289072c6f1c83f49be3d7e27f3ae (MD5) Publico-056b.pdf: 486744 bytes, checksum: 8df649e134c8e80fb3b1eb63056a2d16 (MD5) Publico-056c.pdf: 204395 bytes, checksum: 0a9399461d184b10dd67c8512f955943 (MD5) Publico-056d.pdf: 92501 bytes, checksum: 4a4f09b7509f54629374a97140a233c0 (MD5) Publico-056e.pdf: 123013 bytes, checksum: dc0c475a97611d23f9b3ea520f457740 (MD5) Publico-056f.pdf: 101976 bytes, checksum: 3e0e09307406333a692f7a6edbd0aeeb (MD5) Publico-056g.pdf: 196417 bytes, checksum: e02be5502e9abb89b43a0babe5c18229 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:39Z : No. of bitstreams: 8 Publico-056a.pdf: 696691 bytes, checksum: 64c4289072c6f1c83f49be3d7e27f3ae (MD5) Publico-056b.pdf: 486744 bytes, checksum: 8df649e134c8e80fb3b1eb63056a2d16 (MD5) Publico-056c.pdf: 204395 bytes, checksum: 0a9399461d184b10dd67c8512f955943 (MD5) Publico-056d.pdf: 92501 bytes, checksum: 4a4f09b7509f54629374a97140a233c0 (MD5) Publico-056e.pdf: 123013 bytes, checksum: dc0c475a97611d23f9b3ea520f457740 (MD5) Publico-056f.pdf: 101976 bytes, checksum: 3e0e09307406333a692f7a6edbd0aeeb (MD5) Publico-056g.pdf: 196417 bytes, checksum: e02be5502e9abb89b43a0babe5c18229 (MD5) Publico-056h.pdf: 515301 bytes, checksum: c7220ffc7dce6c18217b5d5381d750a4 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:39Z : No. of bitstreams: 9 Publico-056a.pdf: 696691 bytes, checksum: 64c4289072c6f1c83f49be3d7e27f3ae (MD5) Publico-056b.pdf: 486744 bytes, checksum: 8df649e134c8e80fb3b1eb63056a2d16 (MD5) Publico-056c.pdf: 204395 bytes, checksum: 0a9399461d184b10dd67c8512f955943 (MD5) Publico-056d.pdf: 92501 bytes, checksum: 4a4f09b7509f54629374a97140a233c0 (MD5) Publico-056e.pdf: 123013 bytes, checksum: dc0c475a97611d23f9b3ea520f457740 (MD5) Publico-056f.pdf: 101976 bytes, checksum: 3e0e09307406333a692f7a6edbd0aeeb (MD5) Publico-056g.pdf: 196417 bytes, checksum: e02be5502e9abb89b43a0babe5c18229 (MD5) Publico-056h.pdf: 515301 bytes, checksum: c7220ffc7dce6c18217b5d5381d750a4 (MD5) Publico-056i.pdf: 427783 bytes, checksum: 4ae5386148110b18d8d553a59fd8fc92 (MD5) / As cefaloporinas de amplo espectro, geralmente, representam a principal opção terapêutica contra as infecções causadas por enterobactérias. Em nosso meio, a resistência às cefalosporinas de amplo espectro em enterobactérias tem sido associada à produção de β-lactamases de espectro ampliado (ESβL). Porém, nos últimos anos, a produção de cefalosporinases do tipo AmpC mediadas por genes plasmídiais (pAmpC) também tem sido responsabilizada pela resistência a essas drogas. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de pAmpCs entre amostras de enterobactérias isoladas de pacientes internados no Hospital São Paulo que apresentaram infecção de corrente sangüínea, entre janeiro e julho de 2006. Foram estudadas 133 amostras de enterobactérias identificadas como K. pneumoniae (65 amostras), K. oxytoca (5 amostras), E. coli (41 amostras), P. mirabilis (18 amostras) e Salmonella spp. (4 amostras). O perfil de sensibilidade aos antimicrobianos selecionados foi avaliado pela técnica de diluição em ágar, segundo as recomendações do CLSI. A detecção fenotípica da produção de pAmpC foi realizada pelos testes tri-dimensional e de Hodge modificado. Adicionalmente, foi realizada a detecção fenotípica da produção de ESβL. A pesquisa e identificação dos genes que codificam pAmpC foram realizados pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) e seqüenciamento. Entre os antimicrobianos testados, imipenem (99,2%) apresentou a maior taxa de sensibilidade, seguido pela cefoxitina (80,5%). De forma geral, os isolados de K. pneumoniae apresentaram alto grau de resistência aos β- lactâmicos e os isolados de P. mirabilis apresentaram a menor taxa de sensibilidade para ciprofloxacino (27,8%). Entre as 133 amostras estudadas, 59 (44,4%) foram classificadas fenotipicamente como produtoras de ESβL pela metodologia de disco aproximação. Foi observada discordância entre os resultados dos testes fenotípicos para detecção de pAmpC. A produção de pAmpC foi observada em seis isolados de acordo com o teste tri-dimensional, enquanto, o método de Hodge modificado classificou 19 isolados como possíveis produtores de pAmpC. Além disso, resultados duvidosos foram observados em ambas as técnicas. Um único isolado de K. pneumoniae foi identificado como produtor de CMY-2. Este isolado foi corretamente identificado como produtor de pAmpC por ambos métodos fenotípicos empregados. / The broad-spectrum cephalosporins are the main therapeutic options to Enterobacteriaceae infections and the resistance to these agents has been associated to ESβL production. However, plasmid-mediated AmpC β-lactamases (pAmpC) have been associated with this resistance phenotype. The aim of this study was to determine the occurrence of pAmpC among clinical isolates recovered from bloodstream from patients hospitalized at a Brazilian teaching hospital, collected between January and July 2006. A total of 133 non-repetitive Enterobacteriaceae per patients (65 K. pneumoniae, 41 E. coli, 18 P. mirabilis, 05 K. oxytoca and 04 Salmonella spp.) were studied. The antimicrobial susceptibility profile was determined by CLSI agar dilution method. ESβL phenotype was detected by doubledisk diffusion method while pAmpC production was evaluated by two phenotypic methods: modified three-dimensional and modified Hodge tests and the presence of pAmpC genes was confirmed by PCR and sequencing. Among tested antimicrobial, imipenem showed the highest susceptibility rate (99.2%), followed by cefoxitin (80.5%). K. pneumoniae presented high resistance to β-lactams. P. mirabilis isolates showed the lower susceptibility rate to ciprofloxacin (27.8%). Fifty-nine (44.4%) of studied isolates were phenotypically classified as ESβL producers. Modified threedimensional and Hodge methods classified 06 and 19 Enterobacteriaceae strains as pAmpC producers, respectively. Discordant results were observed between phenotypic pAmpC detection methods. Of those, a single K. pneumoniae isolate was confirmed as CMY-2 producer. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Les taux de multi-résistance aux antibiotiques chez les entérobactéries sont croissants en milieu hospitalier en Tunisie. Cette évolution remet notamment en cause l'efficacité de certaines molécules d'importance clinique majeure telles que les ß-lactamines.Par ailleurs, la résistance aux ß-lactamines n'est pas restreinte aux bactéries responsables d'infections humaines, elleest également rencontrée chez les bactéries issues du milieu vétérinaire. C'est dans ce cadre que s'est inscrit ce travail de thèse, qui avait pour objectif d'identifier les mécanismes de résistance aux céphalosporines de dernière génération chez des souches bactériennes isolées des deux contextes (humain et animal), et de faire une caractérisation moléculaire des plasmides responsables dans le but de contribuer à une meilleure connaissance de l'épidémiologie comparée Homme/animal.La caractérisation génotypique a montré que, dans les deux contextes, l'enzyme CTX-M est largement dominante parmi les?-lactamases à spectre étendu (BLSE) identifiées. Plus spécifiquement, le plasmide CTX-M-1/IncI1/ST3, déjà bien implanté chez l'animal en Europe, est également très prévalent chez l'animal en Tunisie, qu'il s'agisse d'animaux de production ou de compagnie. Chez l'Homme, les souches hospitalières de K. pneumoniaeproduisent principalement l'enzyme CTX-M-15, dont le gène codant est porté par des plasmides de type IncFII.Egalement, une carbapénémase très récemment décrite (OXA-204) a été identifiée dans notre hôpital, associée à un plasmide du type IncA/C. Des gènes de résistance plasmidique aux fluoroquinolones ont également été décrits.Ces résultats d'épidémiologie moléculaire sont essentiels pour une meilleure compréhension des risques de transmission croisée entre l'Homme et l'animal, ainsi qu'entre différents contextes de soins (communauté et hôpital) en Tunisie / Multidrug resistance in Enterobacteriaceae is rising up dramatically at hospital in Tunisia. Such an evolution impairs the clinical efficacy of antibiotics for humans, in particular of the widely used ß-lactams.On the other hand, resistance to ß-lactamsis not restricted to bacteria affecting humans but has also been abundantly recognized in bacteria isolated in veterinary medicine. The aimof this thesis was to identify the resistance mechanisms to broad-spectrum cephalosporins in bacteria isolated from humans and animals and to fully characterize the plasmids carrying those genes in order to contribute to a better knowledge of the molecular epidemiology of resistance in both contexts.Genotypic characterization showed that the CTX-M was the Extended-Spectrum Beta-Lactamases (ESBL) dominant type in both cases. In particular, the CTX-M-1/IncI1/ST3 plasmid, which was already found to circulate in animals in Europe, was also found very prevalent both in food- and companion animals in Tunisia. On the other hand, in humans at hospital, we highlighted the dominance ofK. pneumoniaeisolates producing CTX-M-15 associated with the spread of IncFIIk-type plasmids. We also reported the recently described blaOXA-204carbapenemasegene located on an IncA/C-type plasmid. In addition, plasmid-mediated fluoroquinolone resistance genes were reported.Those data are essential for a better understanding of the comparative molecular epidemiology of resistance to ß-lactams (in particular to broad-spectrum cephalosporins) in Tunisia in order to accurately assess the risk of inter-transmission between humans and animals

MSc (Microbiology) / Department of Microbiology