Orientador: Nelson Eduardo Duran Caballero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-27T06:44:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bromberg_Natalia_M.pdf: 3622328 bytes, checksum: 9b72c2330df993f4a2f0dfe082c29828 (MD5) Previous issue date: 2000 / Mestrado

Orientador: Nelson Horacio Pezoa Garcia / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-27T08:50:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Torezan_GabrielaAparecidaPompeu_M.pdf: 32386133 bytes, checksum: fada3c62c4686f9cd67ba1061bee6c1d (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A tendência atual na procura por produtos com redução do valor calórico e dos teores de açúcares pelos consumidores, sejam eles dependentes de dietas restritivas devido a questões de saúde ou por opção, tem impulsionado o crescimento da indústria alimentícia nesse setor, com o comprometimento na formulação de produtos com qualidades sensoriais e nutricionais diferenciadas. Com base nisso, a finalidade deste trabalho foi promover enzimaticamente a redução de sacarose e glicose em suco de manga, e posterior produção de geléia sem adição de açúcares, mantendo a frutose naturalmente presente, e rica em sólidos da fruta. Para esse fim, foi processado suco simples de manga, variedade Keitt, e realizada sua caracterização química e microbiológica. Primeiramente foi realizado um estudo do tratamento do suco com as enzimas invertase, para hidrolisar a sacarose em frutose e glicose, e glicose oxidase, para promover a oxidação da glicose. Dessa forma, o suco com maior teor de frutose em relação aos outros dois açúcares pode ser consumido por indivíduos portadores de diabetes. Os ensaios foram realizados utilizando planejamento fatorial composto central, com cinco níveis para as variáveis independentes, sendo estas concentração de invertase (p/p) e concentração de glicose oxidase (v/p); as condições tempo de tratamento e temperatura, bem como agitação do sistema foram pré-determinadas e fixadas. Os resultados obtidos mostraram uma inversão de sacarose de até 100%, enquanto que a oxidação da glicose, após os inúmeros ensaios realizados, atingiu uma porcentagem máxima de 8%, devido provavelmente à baixa atividade da enzima glicose oxidase no suco de manga. Um segundo objetivo foi produzir geléia de manga rica em sólidos da fruta e sem adição de açúcares (sacarose, xarope de glicose ou outros), comparando com geléia convencional sob os aspectos físicos, químicos, sensoriais e microbiológicos. As geléias foram obtidas através de processos diferentes, sendo cocção a vácuo e processo contínuo. Os resultados da caracterização química e física das duas geléias mostraram concordância com os trabalhos encontrados na literatura e dentro das faixas estabelecidas de padrão de qualidade de geléia, principalmente os parâmetros pH, acidez e teor de sólidos solúveis, necessários para a formação do gel. ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: The new trend of searching for products with reduced caloric values and sugar contents by consumers dependent on restrictive diets, either for health related reasons or by personal option, has stimulated the growth of the food industry in this sector, with the commitment to formulate products of sensory and nutritional quality. Based on this context, the objective of this work was to promote sucrose and glucose reduction in mango juice and the production of mango jelly without the addition of sucrose and glucose, maintaining the natural fructose and rich in fruit solids. To accomplish this, whole mango juice (cv. Keitt) was processed and characterized chemically and microbiologically. First, a study of the nzymatic treatment of the juice with invertase was carried out, this enzyme hydrolyzing sucrose into fructose and glucose, and also with glucose oxidase, which promotes glucose oxidation. The idea was to produce juice with a greater proportion of fructose than other sugars, which may be eaten by diabetic individuais. The trials were planned using a central composite design, with five levels for each independent variable, namely, invertase concentration (w/w) and glucose oxidase concentration (v/w). Treatment time and temperature, as well as stirring, were predetermined and fixed. The results showed up to 100% of sucrose inversion, while glucose oxidation achieved a maximum levei of 8%, probably because of low glucose oxidase activity in mango juice. A second objective was to produce a mango jelly rich in fruit solids and without the addition of the commonly used sugars (sucrose, glucose syrup), which was compared to a conventional jelly with respect to physical, chemical, sensorial and microbiological aspects. The jellies were produced by different processes, namely, open-air process for the conventional jelly and a continuous method for the jelly without added sugars. The results of the chemical and physical characterization of both the jellies were compatible with articles found in the specialized literature and within the ranges established as standards for jelly quality, mainly in terms of the parameters pH, acidity and soluble solids content, essential for gel formation. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Maria Isabel Rodrigues / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-28T00:33:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Treichel_Helen_M.pdf: 14016044 bytes, checksum: 769e3abcbaca0a6cf259a65c2de60eb4 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Frutose é o açúcar natural mais doce, sendo uma alternativa segura para substituir a sacarose. A inulinase tem um importante papel na produção de frutose através da hidrólise enzimática da inulina, que pode ser realizada em uma única etapa e render até 95% de conversão. Este trabalho teve como objetivo estudar a produção da inulinase por Kluyveromyces marxianus varo bulgaricus ATCC 16045 utilizando diferentes fontes de carbono e nitrogênio, visando obter um meio viável comercialmente, nos mesmos níveis de produção do meio convencional. Técnicas de planejamento experimental e análise de superfície de resposta foram utilizadas para otimizar o meio de cultivo para produção da enzima. Foram estudadas as variáveis concentração de melaço, água de maceração de milho e extrato de levedura. Para este estudo utilizou-se quatro planejamentos fatoriais completos, sendo alcançada uma atividade enzimática máxima de l38U/mL. Após foi possível reduzir ainda mais o custo do meio, com a substituição do extrato de levedura pelo Prodexlac, extrato de levedura produzido pela indústria Prodesa que contém 44% de proteína, e retirando-se K2HPO4 do meio, atingido-se uma atividade enzimática de 113U/mL. Verificou-se que o primeiro e segundo meios otimizados representam 13% e 1,93% do custo do meio sintético otimizado, respectivamente. Assim neste trabalho foi possível a otimização na produção da enzima, utilizando meios alternativos, sem reduzir os níveis de produção obtidos com meio sintético, tornando ainda, o meio economicamente mais viável. / Abstract: Fructose is the sweetest sugar, being a safe alternative for sucrose. Inulinase may play an important role in fructose production by enzymatic hidrolysis of inulin. The reaction occurs in a single step and it is possible to obtain up to 95% of conversion. In this work the optimization of the conditions of inulinase production by Kluyveromyces marxianus varo bulgaricus ATCC 16045 using different carbon and nitrogen sources is carried out in order to obtain more suitable culture conditions for comercial exploration, with a similar production leveI to conventional culture conditions. Factorial design and surface response analysis were used to optimize the culture conditions for inulinase production and the enzymatic reaction parameters. In the enzyme production the following variables were studied: melass, AMM and yeast extract. The use of the technique of complete factorial design, resulted in a enzymatic activity of 138U/mL After that, it was possible to minimize the cost, changing the yeast extract by Prodexlac, produced by Prodesa Inc. wich contains 44% protein and removing K2HPO4 from the medium formulation, and with this medium the activity reached 113U/mL. It has been show that the first and second medium formulation represented 13% and 1,93% ofthe cost ofthe previous synthetic optimized medium, respectively. Finally, this work made possible the enzymatic production optimization, using low cost alternative medium, without reducing the production leveI achieved with the synthetic medium, turning this process economically more interesting. / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador: Hiroshi Aoyama / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T09:35:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Granjeiro_PauloAfonso_D.pdf: 6945763 bytes, checksum: 1bf35dc294eff2d10a98cde194872e8b (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O presente trabalho contém dados sobre estudos cinéticos, físico-químicos e conformacional da fosfatase ácida de sementes de mamona. Através do enfoque cinético foram estudados efeitos de inibidores e determinados os aminoácidos presentes no sítio ativo ou importantes para a catálise. Para fosfato, molibdato e o-vanadato as inibições foram do tipo competitiva, com valores de Ki 0,14 mM, 10 x 10-6 mM e 1,6 x 10-3 mM, respectivamente. Por outro lado, na presença de fluoreto a inibição foi do tipo mista, com valores de Kic e Kiu de 0,91 mM e 0,42 mM, respectivamente. Nos estudos sobre estabilidade térmica observou-se que a enzima perdeu 80% de sua atividade quando incubada a 60°C por 15 mino Na presença de 10 mM de p-nitrofenol e fosfato inorgânico, a perda foi de 40%. Na determinação dos aminoácidos presentes no sítio ativo da enzima utilizando-se agentes modificadores, observou-se que a fosfatase ácida de sementes de mamona era inativada em 5010 por ácido iodoacético (IA A), que atua em grupos SH, sendo esta inativação tempo e concentração dependente. Observou se a presença de duas cisteínas no sítio ativo, com valor de constante bimolecular igual 2,9 X 10-4 M-1 S-I. Do ponto de vista físico-químico e conformacional, determinou-se o ponto isoelétrico da enzima, o seu conteúdo em carboidrato e realizou-se um estudo de desnaturação da enzima, por temperatura e por agentes caotrópicos. A fosfatase ácida de sementes de mamo na apresentou um ponto isoelétrico de 4,6 e um conteúdo de carboidratos de 40%, sendo glicose o único monossacarídeo detectado. A desnaturação da enzima na presença de agentes caotrópicos, como uréia e cio reto de guanidina, mostrou ser reversível. Foram determinados os parâmetros termodinâmicos como variação de energia livre {_G(HzO)}, concentração do composto que causa 50'0 de desnaturação (D1/z) e o intercepto da transição desnaturante (m), cujos valores foram 4,9 Kcal mol-l, 4,95 M e 0,991 Kcal mol-l M-l, em presença de uréia, e 4,98 Kcal mol-l, 2,35 M e 2,118 Kcal mol-l M-l em presença de GndHCl, respectivamente. Na desnaturação térmica o desnovelamento da enzima resultou em aumento da absorbância, com formação de agregados quando a temperatura foi superior a 90°C. Porém, este efeito não foi observado quando a desnaturação da enzima ocorreu na presença de 10 mM de pNP e Pi. Porém, o processo de desnaturação térmica da enzima apresentou ser i rreversíve I em ambas as situações. Por fim foram estudadas algumas propriedades da enzima após remoção da porção de carboidrato pela endoglicosidase H. Observou-se o aparecimento de um pH ótimo adicional em 3,5, uma diminuição de duas vezes na constante de especificidade para o substrato p-nitrofenilfosfato, um aumento do ponto isoelétrico para 4,75 e uma diminuição da heterogeneidade da banda de proteína em eletroforese de gel de poliacrilamida. Nos estudos de germinação foram determinadas as atividades fosfatásicas dos extratos de plântulas germinadas durante um período. A enzima apresentou picos de atividade fosfatásica nos 79., 59. e 99. dias utilizando pNPP, PEP, PPi e Tyr-P como substratos, respectivamente. Porém, durante este período não foi observada atividade fosfatásica na presença de ácido fítico. A quantidade de proteínas aumentou durante a germinação ao passo que a quantidade de fosfato diminui / Abstract: This work contains results about kinetic, physico-chemical and conformationalstudies of castor bean seed acid phosphatase. About kinetic approaches we studied the effect of inhibitors and determined the amino acids present in the active site. Inorganic phosphate, molybidate and o vanadate were competitive inhibitors, with Ki values of 0,14 mM, 10 x 10-6 mM e 1,6 X 10-3 mM, respectively. On the other hand, fluoride inhibition was of the mixed type, with Kic and Kiu values of 0.91 mM and 0.42 mM, respectively. The thermal stability studies showed that the enzyme lost 80% of activity when incubated at 60°C for 15 mino But, in the presence of 10 mM of p-nitrophenol and Pi the enzyme lost 40% of activity. 5tudying the amino acids present in the active site by using modifying reagents, we observed that castor bean seed acid phosphatase was inactivated 50% in the presence of IAA, that acted sulfhydryl groups, in an inactivation time- and concentration-dependent. The acid phosphatase has two cysteines in its active site, with bimolecular constant value of 2.9 X 10-4 M-1 S-I. In the physico-chemical and conformational approaches, we determined the isoeletric point, the carbohydrate composition and denaturation studies in the presence of caotropic agents and temperature. The acid phosphatase has a pI value of 4.6 and contained 40% of carbohydrate in its structure, and glucose was the only monossacharide found in the composition. The enzyme denaturation in the presence of caotropic agents, as urea and GndHCl, showed to be reversible. The thermal parameters such as f1G (HzO), DlIz and m were determined to be 4.9 Kcal mol-l, 4.95 M and 0.991 Kcal mol-l, in the presence of urea, and 4.98 Kcal mol-l, 2.35 M and 2.118 Kcal mol-l, in the presence of GdnHCl, respectively. In the thermal denaturation, the enzyme unfolded as aggregate when the temperature was ligher than 90°C. This aggregation was not observed when the enzyme was incubated in the presence of 10 mM pNP and Pi. In both cases the process of denaturation was irreversible. Finally, we studied some properties of the enzyme after carbohydrate remotion by endoglicosidase H. We observed an additional optimum pH of 3.5, a decrease in the specificity constant using pNPP as substrate, a increasing in the pI value and a decrease in the carbohydrate heterogeneity migration in SDS-PAGE. This work contains also some germination studies of castor bean seeds, with determination of acid phosphates activity using pNPP, Tyr-P and PPi as substrates. The peaks of acid phosphatase activity using pNPP, PEP, PPi and Tyr-P as substrates were 7th, 5th and 9th, respectively. The protein concentration increase during germination whi le phosphate concentration decrease / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Helia Harumi Sato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-29T04:55:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brito_CarlosAlexandreKoguishide_M.pdf: 16046069 bytes, checksum: 515e6c62356908bf5476aa83ccc17451 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Foram desenvolvidos no IAC (Instituto Agronômico de Campinas) , clones de abacaxi (Ananas comosus (L.) Merrill), com características organolépticas mais desejáveis e resistentes à fusariose, resultantes de melhoramento genético por meiode cruzamentosdirigidose ao acaso(SPIRONELLOet a/ii, 1994)...Observação: O resumo, na integra, podera ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: New pineapple cultivars of Ananas comosus (L.) Merrill were developed at Campinas Agronomic Institute - IAC, with more desirable organoleptic characteristics and also fusariose resistant, resulting from genetic improvement by chance and programed crosses (SPIRONELLO et alii, 1994...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-10-04T17:32:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Kaliny Benicio Torres.pdf: 766977 bytes, checksum: c5fa6bc852279973e78534190cedf312 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-14T18:35:43Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Kaliny Benicio Torres.pdf: 766977 bytes, checksum: c5fa6bc852279973e78534190cedf312 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-14T18:35:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Kaliny Benicio Torres.pdf: 766977 bytes, checksum: c5fa6bc852279973e78534190cedf312 (MD5) Previous issue date: 2008-02-27 / CNPq / O método de água destilada esterilizada tem sido utilizado com sucesso na preservação de diferentes grupos de fungos, garantindo viabilidade, pureza e conservação de características morfofisiológicas. Este método é indicado para culturas de Oomycota, Zygomycota, Ascomycota e Basidiomycota, sendo comprovada a eficiência em preservar fungos patógenos. Os objetivos desta pesquisa foram avaliar viabilidade e autenticar taxonomicamente 215 culturas de fungos preservadas entre 1989 e 2002 em água destilada esterilizada na Micoteca URM e caracterizar quanto ao crescimento a 37°C e atividades proteinásica, fosfolipásica, queratinásica e ureásica as culturas patogênicas. Os substratos utilizados para detecção das atividades enzimáticas foram: protease - caseína e gelatina (apenas para Sporothrix schenckii); fosfolipase - lecitina de soja; queratinase - crina de cavalo; e urease - uréia (apenas para S. schenckii). Das 215 culturas preservadas, apenas 86 (40%) estavam viáveis, nenhuma apresentou contaminação e a autenticação taxonômica só não foi possível nas culturas de Epidermophyton, devido à ausência de esporulação. Com relação à caracterização, todos os dermatófitos cresceram a 37°C e produziram queratinase; nenhum produziu fosfolipase e, exceto dois isolados, todos produziram protease. Os isolados de S. schenckii cresceram a 37°C e apresentaram atividades proteinásica e queratinásica, sendo negativos para as atividades fosfolipásica e ureásica. O método de preservação em água destilada esterilizada garante maior viabilidade para culturas de Zygomycetes preservadas por até seis anos, já para os dermatófitos e S. schenckii, este período pode chegar a 16 anos. Para todos os fungos testados, este método garante a pureza e conservação morfofisiológica das culturas. Isolados de dermatófitos e de S. schenckii podem apresentar atividades proteinásica e queratinásica após 16 anos de preservação em água destilada esterilizada. / The method of sterilized distilled water has been used with success in the preservation of different fungi groups, assuring viability, purity and conservation of morphophysiologic characteristics. This method is indicated for cultures of Oomycota, Zygomycota, Ascomycota and Basidiomycota, being proven the efficiency in preserving pathogen fungi. The aims of this research were to evaluate viability and to taxonomically authenticate 215 cultures of fungi preserved between 1989 and 2002 in sterilized distilled water at the Micoteca URM and to characterize with relationship to the growth to 37°C and proteinasic, phospholipasic, keratinasic and ureasic activities the pathogenic cultures. The substrates used for detection of the enzymatic activities were: proteinase - casein and gelatin (just for Sporothrix schenckii); phospholipase - soy lecitin; keratinase - horse mane; and urease - ureia (just for S. schenckii). Of the 215 preserved cultures, only 86 (40%) were viable, none presented contamination and the taxonomic authentication was not only possible in the cultures of Epidermophyton, due to sporulation absence. With relationship to the characterization, all the dermatophytes grew to 37°C and produced keratinase; none produced phospholipase and, except two isolated, all produced protease. The isolated of S. schenckii grew to 37°C and presented proteinasic and keratinasic activities, being negative for the phospholipasic and ureasic activities. The preservation method in water distilled sterilized assure larger viability for cultures of Zygomycetes preserved for up to six years, already for the dermatophytes and S. schenckii, this period can arrive at 16 years. For all the tested fungi, this method assured the purity and morphophysiologic conservation of the cultures. Isolated of dermatophytes and S. schenckii can present proteinasic and keratinasic activities after 16 years of preservation by sterilized distilled water.

Orientador: Helia Harumi Sato / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-02T22:37:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_AnaMaria_D.pdf: 3544438 bytes, checksum: b74e28e9dd71d41466fc01eddf43ab8a (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: A peroxidase (EC 1.11. 7.1, doador: peróxido de hidrogênio oxidoredutase) do taperebá (Spondias lutea L.), um fruto nativo da Amazônia com aroma bem caracteristico e de grande uso na fabricação de sucos, geléias, néctar e sorvete, foi purificada e caracterizada. A extração da peroxidase ionicamente ligada da polpa do taperebá foi obtida pelo uso do tampão fosfato de sódio 0,2 M, pH 8,0 contendo lOmM EDTA, 0,2M CaCb and 2% PEG na proporção 1: 1 (polpa:tampão) (v/v). A peroxidase foi purificada por meio de precipitação com acetona seguida pela filtração em gel em coluna Sephacryl S-200 em sistema FPLC. A eletroforese da peroxidase purificada em gel de poliacrilamida mostrou uma banda de atividade peroxidativa. A peroxidase bruta do taperebá apresentou atividade ótima em pH 4,5 e 35°C e mostrou estabilidade numa ampla faixa de pH (2,6-10) e em temperaturas inferiores a 50°C. A peroxidase purificada foi caracterizada como uma glicoproteína e mostrou atividade específica igual a 514.320 D/mg, massa molecular 28,5 kDa e ponto isoelétrico 4,8. A peroxidase purificada apresentou atividade ótima a 35°C e pH 5,5. A enzima seguiu a cinética de Michaelis-Menten e o valor de Km foi igual a 20,3 mM para o substrato guaiacol. A enzima purificada mostrou-se estável numa ampla faixa de pH (pH 2,6-10). A estabilidade térmica da peroxidase purificada foi analisada na faixa 10°C-90°C. A enzima mostrou ser estável ao calor, sendo que após aquecimento a 70°C durante 60 min, aproximadamente 65% da atividade enzimática foi mantida. A inativação térmica da peroxidase purificada apresentou um perfil não linear com o tempo de aquecimento. A isoperoxidase foi totalmente inativada depois do aquecimento a 90°C por 2 min e a atividade enzimática da peroxidase purificada não regenerou quando foi mantida a 30°C durante 24 h e a 5°C por 24h, depois da inativação térmica. A peroxidase purificada foi completamente inibida pelo ácido ascórbico na concentração final 1 mM, metabissulfito de sódio e bissulfito de sódio na concentração final 10 mM, inibidores freqüentemente usados no processamento de alimentos. A atividade da peroxidase foi ativada pelo CaCb (1 OmM) e NaCI (1mM), mas foi fortemente inibida pelo CUSO4 (10 mM), Fe2(SO4)3 (lmM) e completamente inibida pelo KCN (lmM). A isoenzima purificada foi parcialmente afetada pelos sais MnSO4, MgSO4, KCl e Na2S04 e pelos compostos químicos SDS, EDTA, Nbromosuccinimida, iodoacetamida. A atividade da enzima foi totalmente inibida pelo mercaptoetanol na concentração final 10mM / Abstract: Peroxidase (EC 1.11. 7.1, donor: hydrogen peroxide oxidoreductase) ITom the "taperebá" :fi-uit (Spondias /utea L.), a native Amazonian fruit with a typical flavour and widely used for making juice, jellies, nectars and ice cream, was purified and characterized. Extraction ofthe ionically bound peroxidase was achieved using O.2M potassium phosphate buffer at pH 8.0 containing 10mM EDTA, 0.2M CaCh and 2% (w/v) PEG in a 1: 1 ratio of :fi-uit to buffer. The peroxidase was purified by means of acetone precipitation followed by gel filtration on a Sephacryl S-200 column using the FPLC system. One peroxidase isoenzyme was detected in "taperebá" :fi-uit. Electrophoresis of the purified enzyme using polyacrilamide gel, showed a single staining band for peroxidase activity. The crude peroxidase showed maximum activity at 3SoC and pH 4.5, and was stable over a wide range pH (2.6-10), showing great thermostability below at 50°C. The purified peroxidase was characterized as a glycoprotein and showed a specific activity of 514,320 -U/mg, molecular weight of 28.5 kDa and isoelectric point of 4.8. The effect oftemperature and pH on the enzymatic activity was analysed for the purified isoenzyme. The peroxidase showed maximum enzymatic activity at 3 SOC and pH 5. S. The enzyme followed the Michaelis-Menten kinetics and presented a Km value of 20.3 mM with guaiacol substrate. The enzyme was stable over a wide range pH (pH 2.6-10). The thermostability of the purified peroxidase was analysed in the 10°C-90°C temperature range and showed great thermostability. After heating at 70°C for 60 min, approximately 65% of the activity was retained. The heat inactivation of the purified peroxidase was found to be non-linear with heating time. The purified peroxidase was totally inactivated after heating at 90°C for 2 min and its enzymic activity did not regenerate when held at 30°C or SOC for 24h after heat inactivation. The purified peroxidase was completely inhibited by 1 mM ascorbic acid, 10mM sodium metabisulphite and 10mM sodium bisulphite, inhibitors often used in food processing. The peroxidase activity was activated by 10mM CaCh and lmM NaCl, but was strongly inhibited by 10mM CUSO4, 1 mM Fe2(SO4)3 and completely by 1 mM KCN. The purified enzyme was partially affected by the salts MnSO4, MgSO4, KCl and Na2S04 and by the compounds SDS, EDT A, N-bromosuccinimide and iodoacetamide. The enzymic activity was totally inhibited by 10 mM ß-mercaptoethanol / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Ranulfo Monte Alegre / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T09:32:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Weber_Adriana_M.pdf: 13048673 bytes, checksum: 7f6b614741a715cd20b2f7f38e9d7043 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Frutoligossacarídeos são oligômeros de frutose compostos principalmente de 1-kestose, nistose e frutosilnistose e podem ser produzidos a partir de sacarose através da ação de transfrutosilação de enzimas obtidas de vários microrganismos e plantas. Frutoligossacarídeos são utilizados como adoçantes não digeríveis na alimentação humana e considerados fisiologicamente úteis por melhorar a população intestinal das bifidobactérias. O objetivo deste trabalho foi estudar a produção de frutoligossacarídeos a partir de levanasacarase de Zymomonas mobílís imobilizada em reator de coluna. Para imobilização da enzima foram testados suportes como carvão ativado, resinas de troca catiônica e aniônica. A eficiência do suporte foi avaliada através da determinação da atividade de levanasacarase no sobrenadante do meio fermentado acrescido do suporte. O carvão ativado foi selecionado como suporte para imobilizar a enzima, visto que se obteve 46,25% de imobilização de levanasacarase (0,1 UI da enzima imobilizados por grama de carbono) com retenção de 50% desta atividade. A síntese de frutoligossacarídeos foi realizada com a enzima imobilizada em reator de coluna (20 x 0,6 cm) e a temperatura da coluna foi mantida a 50°C. O reator foi alimentado com diferentes vazões, com soluções de sacarose de 10 a 50% operando sem reciclo e nas proporções 3:1 a 7:1 para sacarose e frutose operando com reciclo. A vazão de alimentação dentro dos limites estudados não apresentou influência sobre o comportamento hidrolítico e de tranfrutosilação da enzima. A síntese de 0,42% (p/p) de frutoligossacarídeos foi observada em sistemas com reciclo e frutose adicionada ao meio. A caracterização do reator de coluna foi realizada através da determinação da distribuição do tempo de residência (DTR), sendo observados tempos médios de residência de 4,31 a 16,03 minutos quando operado com vazões de 1,31 a 6,75 cm3/min, respectivamente. / Fructoligosaccharides are fructose oligomers and are mainly composed of 1-kestose, nystose and fructosilnystose, and can be produced from sucrose through the transfructosylating action of enzymes obtained from various microrganisms and plants.The mixture of fructoligosaccharides is used as nondigestible sweetener for humans and regarded to be physiologically useful because it improves the intestinal population of Bifidusbacteria. The continuous production of fructoligosaccharides can be achieved by using immobilized enzyme fructoligosaccharides-producing. The objective of this work was to study the fructoligosaccharides synthesis by immobilized levansucrase from Zymomonas mobilis CCT 4494 in column reactor. Several resins were tested for the immobilization: activated carbon, cationic and anionic-exchange resins. The carriers efficiency was evaluated trough assay activity of levansucrase in the supematant of the fermented medium. Activated carbon was selected for enzyme immobilization, since 46.25% of levansucrase was immobilized with this support with 50% retention of activity (0.1 lU immobilized enzyme per gram of carbon). The fructoligosaccharides synthesis was operated in column reactor (20 x 0.6 em) through enzyme immobilization and the temperature of the column was maintained at 50°C. The column was fed with varied flow rates, with 10 to 50% sucrose solutions when operated without recycle. When operated with recycle, it was used sucrose and fructose solutions at the ratios of 3:1 and 7:1. The influence of varying flow rates was not observed in the hydrolytic and transfructosylating action of the enzyme. The synthesis of 0.42% (w/w) of fructoligosaccharides was observed at recycle systems when fructose was added. The column reactor was characterized by determination of distribution of residence time (RTD). It was observed average residence time as from 4.31 to 16.03 min with flow rate in the column varying from 1.31 to 6.75 cm3/min, respectively. / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientadores: Elizabete Jordão, Roberto Rodrigues de Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:59:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CurveloSantana_JoseCarlos_M.pdf: 5761130 bytes, checksum: db5fe8bc641b67bdacbf305f6e89297d (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Neste trabalho estudou-se o comportamento do sistema bifásico aquoso (SBA) PEGI CaCl2, a pH's 5,0; 6,0 e 7,0; e massas molares do polímero de 4000, 6000 e 8000, a condições ambientais de temperatura e pressão, bem como se determinou o coeficiente de partição com o sistema operando em batelada e contínuo, com a finalidade de recuperar as enzimas a e ß-amilases de malte de milho (Zea mays), e desta forma agregar valor a esta cultura. As enzimas foram obtidas pela germinação de sementes de milho selecionadas. Determinaram-se as atividades enzimáticas pelo método de Wohlgnuth modificado por Sandstedt, Kneen, Blich (1959) e pelo método do Laboratório Milles (1958) apresentados por REGULY (1996), bem como a concentração de proteína total pelo método de BRADFORD (1976). Comparou-se o comportamento cinético das enzimas em PEG e em malte, nas temperaturas e pHs ótimos. A recuperação foi feita em processo de extração em batelada e contínuo, com otimizações feitas a partir de planejamentos fatoriais dos experimentos. Ao se caracterizar o SBA PEG/ CaCl2 observou-se que seu comportamento foi semelhante aos descritos pela literatura. O modelo empírico que mais se ajustou aos dados da partição em batelada foi linear ao lnK. A combinação do coeficiente de partição otimizado e dos melhores dados de atividade enzimática indicou o SBA PEG 4000/ CaCl2, a pH 5,0; como sendo o melhor sistema a ser utilizado na extração contínua destas enzimas. O estudo cinético comparativo mostrou que as enzimas em PEG possuem um maior potencial catalítico que às em malte, com máxima atividade enzimática a 75°C. A otimização da extração contínua apresentou como equação de processo, que mais se ajustou aos dados experimentais, o modelo quadrático da rotação das palhetas e da razão entre as vazões com o coeficiente de partição, sendo que sua região ótima se direciona para os menores valores destas variáveis independentes. Desta forma contribuiu se na descoberta das condições ótimas de utilização do meio extrativo (SBA PEG/ CaCl2) e de operação da coluna de extração, para a recuperação das enzimas a e ß-amilases de malte de sementes de milho (Zea mays) / Abstract: Aqueous two-phase systems (A TPS) PEG/ CaCl2 was studying in pH 5,0; 6,0 and 7,0 and polymer molecular weight 4000, 6000 and 8000, in environment pressure and temperature. The enzymes a and ß-amylases from maize malt was recovered in bath and continuous extraction process, it was valorized this product. The enzymes were obtained by germination of maize seeds. It was determinate of the enzymatic activity by modify Wohlghnuth method, Sandstedt, Kneen, Blich (1959) and Milles Laboratory method (1958), showed in REGUL Y (1996), and protein total by BRADFORD method (1976). The kinetic study was making between the enzymatic extract in PEG and maize malt, in optimum condition of enzymes. The enzymes were recovered in bath and continuous process systems. It was making an experimental plain for process optimization. A TPS PEG/ CaCl2 had similar conduct to literature description. The adjusted empiric model to bath partition was linear with lnK. The combination of partition coefficient with enzymatic activity optimums showed the best system for recovery of the enzymes as been the A TPS PEG 4000/ CaCl2, at pH 5,0. The kinetic study introduced a high catalytic power in enzymatic extract in PEG. The optimization of the continuous extraction process carried to a quadratic model of the pallet rotation and flow rate with the partition coefficient, where optimum region showed it in the value minor of the independents variables / Mestrado / Sistema de Processos Quimicos e Informatica / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Carmen Silvia Bertuzzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:11:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pollice_ErikaLourenco_M.pdf: 5220972 bytes, checksum: 4c9ef357d894df5a392c096be985ba75 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: A Síndrome de Down (SD) e a Síndrome de Turner (ST) são aberrações cromossômicas muito freqüentes. Há evidências de que mutações em enzimas ligadas ao metabolismo da homocisteína, levariam a aberrações cromossômicas, devido a fenômenos de hipometilação. Os principais reguladores enzimáticos no metabolismo da homocisteína são Cistationina f3-Sintetase (CBS) e Metileno tetra-hidrofolato redutase (MTHFR). É importante notar que tecidos deficientes de CBS, parecem ser mais sensíveis a reverter SAHH e aumentar SAH. Estudos recentes mostraram que o aumento de SAH em paralelo com homocisteína, em mulheres jovens saudáveis foi associado com hipometilação de DNA. O gene da CBS foi mapeado no cromossomo 21q22.3, que tem aproximadamente 25 Kb e 23 exons. A maioria dos defeitos no gene da CBS são mutações de sentido trocado. Duas mutações são ditas como mais freqüentes a 1278T e a G307S. Outra mutação fteqüentemente encontrada em caucasianos é a 844ins68. No presente estudo foram analizadas as fteqüências das mutações 844ins68, G307S e 1278T no gene da CBS. O método de análise foi a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) associada à digestão enzimática. A prevalência dessas mutações foram analizadas em 53 portadoras de ST, em 81 mães de portadores de SD e em 80 indivíduos controle. Na amostra de pacientes com ST, a freqüência gênica da mutação 844ins68 foi de 0.09, da mutação G307S, 0.05 e da mutação 1278T, 0.08. Entre as mães de pacientes com SD, encontramos: 0.09, 0.05 e 0.09 respectivamente. Nenhuma diferença estatisticamente significativa foi encontrada em relação à amostra controle. Em relação à associação com os genótipos da MTHFR, não foi detectada nenhuma associação causal. A única prevalência encontrada foi a do genótipo C677T/A1298C da MTHFR, indicando ser esse heterozigoto composto um fator de risco para a Síndrome de Down / Abstract: The most common class of chromosome abnormality is Down Syndrome (DS) and Turner Syndrome (TS). Several investigators have reported that mutations in the metabolic homocysteine enzymes are associated with increased risk of chromosome abnormality due the hypometilation phenomena. The main enzymatic regulators in the metabolism of the homocystheine are Cystathionine beta-Synthase (CBS) and methylenetetrehydrofolate reductase (MTHFR.). It is important to note that tissues deficient of CBS, are waited to be more sensible to revert SAHH and to increase SAR. Recent studies shown that the mcrease of SAR m parallel with homocystheine, in healthful young women was associated with DNA hypomethilation. The CBS gene was mapped in the chromosome 21q22.3, has approximately 25 Kb and 23 exons. The majority mutations the CBS gene are missense. Two mutations, the I278T and G307S are said as more frequento Another mutation ftequently found m caucasians is 844ins68. We analyzed the frequency of the mutations 844ins68, G307S and I278T m the gene of the CBS. The analysis method was the Polymerase ChaID Reaction (PCR) associated with an restriction enzyme. The prevalence of the CBS mutations was determmed m 81 mothers of DS patients (MDS), 53 patients with TS and 80 healthy women. In TS patients, the 844ins68 were 0.09, G307S, 0.05 and I278T, 0.08. In MDS, the ftequencies ofthe mutations were respective: 0.09, 0.05 e 0.09. The mutations were found m a statistically identical prevalence among control and test groups. When these findIDgs were related to MTHFR genotypes, they did not show any preferential association. In this study the only finding were the higher prevalence of C677T/A1298C of MTHFR, indicating that this composition increased the risk factor for DS / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas