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Estudo e otimização da produção da dextranasacarase e caracterização da dextrana produzida por Leuconostoc mesenteroides FT045B /Vettori, Mary Helen Palmuti Braga. January 2011 (has links)
Orientador: Jonas Contiero / Banca: Valéria Marta Gomes de Lima / Banca: Ranulfo Monte Alegre / Resumo: Um estudo comparativo de onze métodos para determinação da atividade da dextranasacarase e de enzimas relacionadas foi realizado. Atualmente existem dois métodos usualmente empregados na determinação da atividade da dextranasacarase. Um método relativamente difundido para a reação da enzima com a sacarose consiste na medição dos valores redutores da D-frutose pelo reagente 3,5-dinitrosalicilato (DNS). Outro método é a reação da enzima com 14Csacarose, pela adição de uma alíquota da reação em papel de filtro Whatman 3MM, que posteriormente é lavado com metanol para a remoção da 14C-D-frutose e da 14C-sacarose não reagida, seguido da quantificação de 14C-dextrana por contador de cintilação líquida (CCL). Foi mostrado, pelo estudo realizado, que ambos os métodos geram dados errados. O método por quantificação do valor redutor proporciona resultados extremamente altos devido à oxidação tanto da D-frutose quanto da dextrana, e o método do 14C-papel gera resultados significativamente baixos devido à remoção de parte da 14C-dextrana do papel, pela lavagem em metanol. Neste trabalho, foram testados onze métodos, dentre os quais, dois apresentaram resultados idênticos, sendo considerados métodos confiáveis de medição da atividade da dextranasacarase. Este trabalho também reporta a caracterização físico-química de uma nova dextrana produzida por Leuconostoc mesenteroides FT045B. A estrutura química do polímero foi caracterizada por Espectroscopia de Infravermelho com Transformada de Fourier e por Espectroscopia de 1H Ressonância Magnética Nuclear. A dextrana produzida foi hidrolisada por endodextranase e seus produtos da reação do aceptor com maltose foram analisados por cromatografia em camada delgada e comparados com a dextrana comercial B512F obtida da Sigma Company. A massa molecular media e o grau de polimerização da dextrana produzida... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: A comparative study of nine assay methods for dextransucrase and related enzymes has been made. A relatively widespread method for the reaction of the enzyme with sucrose, is the measurement of the reducing value of D-fructose by alkaline 3,5- dinitrosalicylate (DNS). Another method is the reaction with 14C-sucrose, with the addition of an aliquot to Whatman 3MM paper squares that are washed 3-times with methanol to remove 14C-D-fructose and unreacted 14C-sucrose, followed by counting of 14C-dextran on the paper by liquid scintillation counting (LSC). It is shown that both methods give erroneous results. The reducing value method gives extremely high values due to over-oxidation of both D-fructose and dextran, and the 14C-paper square method gives significantly low values due to the removal of some of the 14Cdextran from the paper, by the methanol washes. In the present study, we have examined nine methods and find two that give values that are identical and are an accurate measurement of the dextransucrase reaction. This work also reports the physical and chemical characterization of a new dextran produced by Leuconostoc mesenteroides FT045B. The chemical structure of the polymer was characterized through Fourier transform infrared spectroscopy and 1H nuclear magnetic resonance spectroscopy. The dextran produced was hydrolyzed by endodextranase and its products from the acceptor reaction with maltose were analyzed using thin layer chromatography and compared with those of a commercial native dextran B512-F obtained from the Sigma Company. The average molecular weight and degree of polymerization of the dextran produced were determined through the measurement of the reducing value using the copper bicinchoninate method and the measurement of the total carbohydrates using the phenol-sulfuric acid method. All data revealed a very similar structure to that of the commercial dextran B512F from... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Produção de alfa-amilase e glucoamilase termoestável pelo fungo termofílico Thermomyces lanuginosus TO-03 por fermentação submersa e em estado sólido e caracterização das enzimas /Gonçalves, Aline Zorzetto Lopes. January 2006 (has links)
Orientador: Eleni Gomes / Banca: Maria de Lourdes Teixeira de Moraes Polizeli / Banca: Érika Barbosa Neves Graminha / Resumo: As amilases, envolvidas na degradação do amido, constituem um grupo de enzimas com diferentes pontos de atuação na molécula de amido, hidrolisando ligações glicosídicas a-1,4 e/ou a-1,6, como as a-amilases e glucoamilases. A característica de termoestabilidade para essas enzimas é bastante desejável visto que, além de serem mais estáveis sob várias condições, ainda permitem a condução de processos de hidrólise do amido em temperaturas elevadas. O presente trabalho visou o estudo da produção de a- amilase e glucoamilase termofílica por Thermomyces lanuginosus TO-03, por fermentação submersa (FSm) e em estado sólido (FES), avaliando-se os efeitos do tempo de cultivo e da fonte de carbono. Foram estudadas também, as propriedades bioquímicas das enzimas produzidas e o efeito das mesmas na hidrólise dos diferentes tipos de amido na produção de xarope. Os resultados mostraram que as produções máximas de atividade de amilase dextrinizante, sacarificante e da glucoamilase por FES foram 3973,6; 95,2 e 235,2 U/g, em 144, 120 e 168h, respectivamente. Em FSm foram obtidos 181,6; 5,0 e 27,1 U/mL para amilase dextrinizante e amilase sacarificante e para Glucoamilase em 168 h fermentação. A glucoamilase obtida por FSm apresentou as seguintes propriedades: temperatura e pH ótimos de 70ºC e 5,5 quando o amido solúvel foi o substrato e de 65ºC e 4,5 quando o substrato foi a maltose. A a-amilase apresentou temperatura ótima de 60°C e pH ótimo 5,5. Quando obtida por FES, a glucoamilase apresentou temperatura ótima de 65ºC, para hidrólise de ambos os substratos e pH ótimo 5,5 para hidrólise do amido solúvel e pH 4,5 para a hidrólise da maltose. A a-amilase de FES apresentou temperatura E pH ótimos de 60°C e pH 5,5. / Abstract: Amylases, involved in starch degradation, constitute a group of enzymes with different action sites on the starch molecule, hydrolysing glycosidic bonds á-1.4 and/or á-1.6, such as á-amylases and glucoamylases. Thermostability for these enzymes is a very desirable characteristic since it makes them more stable under many conditions and it allows hydrolytic processes of starch to take place at high temperatures. This work had the purpose of studying the production of thermophilic á-amylase and glucoamylase by Thermomyces lanuginosus TO-03, in submerged fermentation (SmF) and solid state fermentation (SSF), evaluating the effect of cultivation time and carbon source. Biochemical properties of the enzymes were also studied along with the effect they had on hydrolysis of different types of starch for syrup production. The results show that maximum production of dextrinogenic and saccharogenic amylase and glucoamylase activities by SSF were 3973.6, 95.2 and 235.2 U/g in 144, 120 and 168 h, respectively. In SmF the results were 181.6, 5.0 and 27.1 U/mL for dextrinogenic and saccharogenic amylase and glucoamylase activities in 168 h of fermentation. Glucoamylase from SmF exhibited the following properties: temperature and pH optimum at 70°C and 5,5 when soluble starch was used as substrate and 65°C and 4.5 when maltose was used as substrate. á-amylase from SmF exhibited optimum temperature at 60°C and pH optimum at 5.5. Glucoamylase from SSF exhibited optimum temperature at 65°C, for the hydrolysis of both substrates and pH optimum at 5.5 when hydrolysing soluble starch and 4.5 when hydrolysing maltose. á-amylase from SSF exhibited optimum temperature and pH at 60°C and 5.5. / Mestre
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Atividade de enzimas digestivas de Lithobates catesbeianus durante o desenvolvimento larval /Santos, Luiz Flávio José dos. January 2011 (has links)
Orientador: João Martins Pizauro Junior / Coorientador: Marta Verardino de Stéfani / Banca: Pietro Ciancaglini / Banca: Cyntia Peralta de Almeida Prado / Resumo: Todos os seres vivos necessitam de um suprimento energético, que deve ser obtido de fontes externas. As substâncias simples da dieta dos animas, como a água, os sais minerais e as vitaminas (exceto a vitamina B12), podem ser absorvidas ao longo do trato digestório sem sofrer transformações físicas ou químicas. Entretanto, macromoléculas tais como carboidratos, proteínas e lipídeos, têm de ser convertidas em moléculas pequenas e menos complexas para serem absorvidas. A digestão química dos nutrientes é realizada por hidrólise enzimática, que consiste na cisão de uma ligação química e inserção de uma molécula de água, sendo este processo catalisado pela ação das enzimas digestivas. O objetivo deste estudo foi o de se analisar a variação nas atividades de cinco hidrolases do sistema digestório de rã-touro (Lithobates catesbeianus) durante o desenvolvimento larval, para fornecer subsídios a nutrição animal. Os girinos foram mantidos em aquários, à 27ºC e separados por estádios de desenvolvimento. Amostras de estômago, pâncreas e intestino foram retiradas de 100 animais de cada estádio, congeladas em nitrogênio liquido e armazenadas a -70ºC para posterior homogeneização e determinação da atividade enzimática. A atividade das enzimas tripsina, -amilase e lipase pancreáticas (44,30 U.mg-1, 3,17 U.mg-1, 2,99 U.mg-1 respectivamente), e da maltase intestinal (26,99 U.mg-1), foram detectadas desde o início da fase de alimentação (estádio 26) enquanto que a atividade de catepsina-E gástrica (13,82 U.mg-1), foi estudada a partir do estádio 28, devido a dificuldade de se obter de estômagos antes deste estádio. Durante a pré-metamorfose a catepsina-E não apresentou grande variação em sua atividade, sendo observado aumento ao final do período da prómetamorfose. A atividade das demais... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: All living beings require energy supply, wich must be obtained from external sources. Simple substances in the diet of the animals, such as water, minerals and vitamins (except vitamin B12) can be absorbed along the digestive tract without undergoing chemical or physical changes. However, macromolecules such as carbohydrates, proteins and lipids, must be converted into smaller and less complex molecules to be absorbed. The chemical digestion of nutrients is accomplished through enzymatic hydrolysis, which means to break a chemical bond and inserti a water molecule. This process is catalysed by the action of digestive enzymes. The aim of this study was to analyze the activity variation of five hydrolases of the bullfrog's (Lithobates catesbeianus) digestive system during larval development, to provide subsidies to animal nutrition. The tadpoles were kept in aquaria, at 27 °C and separated by stages of development. Samples of stomach, pancreas and intestine were taken from 100 animals of each stage, frozen in liquid nitrogen and stored at -70ºC for later homogenization and enzyme activity determination. The activity of trypsin, -amylase and pancreatic lipase (44.30 U.mg-1, 3.17 U.mg-1, 2.99 U.mg-1 respectively), and intestinal maltase (26.99 U.mg-1) were detected since the start of feeding (stage 26) while the gastric cathepsin E (13.82 U.mg-1) activity was studied since stage 28, due to difficulty in obtaining stomachs before this stage. During pre-metamorphosis cathepsin-E did not show great variation in its activity, but an increase was observed at the end of the period of prometamorphosis. The other enzymes activity increased significantly in periods that precede metamorphosis, with the highest activities in stage 38 (261.97 U.mg-1 for trypsin, 28.19 U.mg-1 for -amylase and... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Purificação, carcterização físico-química e termodinâmica de ß-glicosidases produzidas pelos microrganismos Aureobasidium pullulans e Thermoascus aurantiacus : aplicação em isoflavonas e terpenos glicosilados /Leite, Rodrigo Simões Ribeiro. January 2007 (has links)
Orientador: Roberto da Silva / Banca: Maria de Lourdes T.M. Polizeli / Banca: Adalberto Pessoa Júnior / Banca: Rubens Monti / Banca: Mauricio Boscolo / Resumo: Neste trabalho as ß-glicosidases produzidas pelos microrganismos Thermoascus aurantiacus e Aureobasidium pullulans foram purificadas, caracterizadas termodinamicamente, físico-quimicamente e aplicadas em terpenos e isoflavonas. O processo de purificação da enzima do T. aurantiacus apresentou rendimento final de 63,6% e fator de purificação de 46,3 vezes. Após a purificação da enzima do A. pullulans, esta apresentou fator de purificação de 35,5 vezes e rendimento de 19%. A ß-glicosidase do T. aurantiacus apresentou atividade ótima em pH 4,5 a temperatura de 75ºC. Esta manteve-se estável na faixa de pH 4,5 a 6,5 e reteve sua atividade original após 1 hora a 70ºC. A enzima purificada do A. pullulans apresentou maior atividade catalítica nos valores de pH 4,0-4,5 a temperatura de 80ºC. A mesma foi estável em ampla faixa de pH 4,0 a 9,5, e, reteve sua atividade original após 1 hora a 75ºC. A maior termoestabilidade, da enzima produzida pelo microrganismo mesofílico, A. pullulans, foi comprovada pela análise dos parâmetros termodinâmicos. A ß-glicosidase do T. aurantiacus apresentou valores menores de t(1/2), ∆G, ∆H e Ea em todas as temperaturas analisadas. As duas enzimas foram fortemente inibidas por Hg+2 e Ag+, sugerindo que o grupo tiol (SH) é essencial para atividade das mesmas. O pNPßG foi utilizado para a determinação dos parâmetros cinéticos, os valores de Km e Vmax obtidos foram 0,53 mM e 590,8 μmol/ min/mg de proteína para a enzima do T. aurantiacus, e, 0,93 mM e 29,9 μmol/ min/mg de proteína para a enzima do A. pullulans. A presença de etanol no meio de reação ativou a ß-glicosidase do T. aurantiacus, indicando atividade glicosil transferase, o mesmo não foi observado para enzima do A. pullulans. As duas ß-glicosidases atuaram em diferentes substratos glicosídicos, inclusive sobre terpenos e isoflavonas, o que confirma a ampla especificidade das enzimas. / Abstract: In this work, ß-glucosidases produced by the microorganisms Thermoascus aurantiacus and Aureobasidium pullulans were purified, thermodynamically and physical-chemically characterized and applied on terpenes and isoflavones. Purification process of the enzyme from T. aurantiacus exhibited final yield of 63.6% and purification factor of 46.3 -fold. Purification process of the enzyme from A. pullulans resulted in 19% yield and purification factor of 35.5-fold. ßglucosidase from T. aurantiacus exhibited optimum activity at pH 4.5 and at temperature of 75ºC. It remained stable at pH range of 4.5 to 6.5 and maintained its original activity after 1 hour at 70ºC. Purified enzyme from A. pullulans exhibited a higher catalytic activity in pH values of 4.0-4.5 at an optimum temperature of 80ºC. It was stable over a wide pH range, from 4.0 to 9.5, and, maintained its original activity after 1 hour at 75ºC. The higher thermal stability of the enzyme produced by the mesophilic microorganism, A. pullulans, was confirmed by analysis of the thermodynamic parameters. ß-glucosidase from T. aurantiacus exhibited lower values for t(1/2), ∆G, ∆H and Ea in all temperatures tested. Both enzymes were strongly inhibited by Hg+2 and Ag+, suggesting that a thiol group (SH) is essential for their activities. pNPßG was used for the kinetic parameters determination and the values for Km and Vmax were 0.53 mM and 590.8 μmol/ min/mg of protein for the enzyme from T. aurantiacus, and, 0.93 mM and 29.9 μmol/ min/mg of protein for the enzyme from A. pullulans. The presence of ethanol in the reaction mixture activated the ß-glucosidase from T. aurantiacus, indicating glucosil transferase activity, which was not observed for the enzyme from A. pullulans. Both ß-glucosidases exhibited activity on different glucosidic substrates, including terpenes and isoflavones, confirming the broad specificity of the enzymes. / Doutor
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Produção de β-glucanases por Trichoderma reesei e Trichoderma harzianum e aplicação na hidrólise de β-glucanas /Carneiro, Andréia Aparecida Jacomassi. January 2012 (has links)
Orientador: Roberto da Silva / Banca: Adalberto Pessoa Junior / Banca: Inês Conceição Roberto / Banca: Eleonora Cano Carmona / Banca: Eleni Gomes / Resumo: As glucanas fúngicas têm sido muito estudadas por apresentarem respostas biológicas benéficas à saúde. O Agaricus blazei, conhecido popularmente como cogumelo do sol, é um basidiomiceto que apresenta propriedades funcionais devido às β-glucanas. Os fungos Trichoderma harzinaum e Trichoderma reesei foram capazes de se desenvolverem em Agaricus blazei em pó como única fonte de carbono produzindo β-1,3-glucanases, analisadas por superfície de resposta. As enzimas hidrolisaram β-glucanas de A. blazei e produziu glucose e diferentes glucooligossacarídeos. As enzimas brutas do T. harzianum e T. reesei hidrolisaram menos de 15 % de glucana e em torno de 40 % de laminarina (β-1,3 glucana comercial), após 60 minutos, respectivamente. Utilizando a β-1,3-glucanase bruta de T. harzianum foram detectados gentiobiose e laminaritriose nos hidrolisados enzimáticos de β- glucana e laminarina, enquanto a laminaritetraose, celotetraose e celotriose foram identifificados e quantificados apenas nos hidrolisados de β-glucana de A. blazei. A ação da β- 1,3-glucanase bruta de T. reesei sobre a laminarina e glucana de A. blazei resultou em glicose e gentiobiose. O que sugere uma possível diferença na ação catalítica das duas enzimas. As enzimas parcialmente purificadas do T. harzianum e T. reesei hidrolisaram 47 e 85 % de laminarina, respectivamente. A β-1,3-glucanase purificada de T. harzianum não degradou a glucana de A. blazei, e a enzima purificada de T. reesei degradou 2,6 % de glucana, após 60 minutos, no entanto, gentiobiose e laminaritriose foram detectados no hidrolisado de laminarina. Utilizando a enzima parcialmente purificada de T. reesei gentiobiose foi detectado no hidrolisado de glucana e de laminarina, e celotriose e laminaritriose foram detectados apenas no hidrolisado de laminarina. A fim de conhecer melhor... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fungal glucans have been studied extensively because of their biological responses, which have been shown to possess health benefits. Agaricus blazei, commonly known as "mushroom of the sun," is a basidiomycete that has functional properties because of its β-glucans. The fungi Trichoderma harzinaum and Trichoderma reesei were able to develop in a powdered form of A. blazei, which served as the only carbon source. The result was the production of β- 1,3-glucanases, which were analyzed using response surface methodology. The enzymes hydrolyzed the β-glucans of A. blazei, and produced glucose and different glucooligosaccharides. The crude enzymes of T. harzianum and T. reesei hydrolyzed less than 15% of glucan and approximately 40% of laminarin after 60 minutes, respectively. Using crude β-1,3-glucanase from T. harzianum, gentiobiose and laminaritriose were detected in enzymatic hydrolysates of β-glucan and laminarin, while laminaritetraose, cellotriose and celotetraose were identified and quantified only in the hydrolysates of the β-glucan of A. blazei. The action of the crude β-1,3-glucanase of T. reesei on the laminarin and glucan of A. blazei resulted in glucose and gentiobiose. These results suggest a possible difference in the catalytic action of the two enzymes. The partially purified enzymes of T. harzianum and T. reesei hydrolyzed 47% and 85% of laminarin, respectively. The purified β-1,3-glucanase from T. harzianum did not degrade the glucan of A. blazei, and the purified enzyme from T. reesei degraded 2.6% of the glucan after 60 minutes; however, gentiobiose and laminaritriose were detected in the hydrolyzates of laminarin. Using partially purified enzymes from T. reesei, gentiobiose was detected in the hydrolyzates of both glucan and laminarin, and laminaritriose and cellotriose and were detected... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Expressão de genes relacionados à qualidade da carne do músculo longissimus dorsi em Nelore (Bos indicus) e canchim (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus) /Giusti, Juliana. January 2011 (has links)
Resumo: Todas as características de um organismo vivo são controladas pela expressão de genes específicos, e na qualidade da carne não é diferente. O presente estudo teve como objetivo correlacionar a expressão dos genes μ-Calpaína (CALP 1), m-Calpaína (CALP 2), Calpastatina (CAST), Tireoglobulina (TG), Diacilglicerol aciltransferase 1 (DGAT1) e a Leptina (LEP) com a qualidade da carne do Longissimus dorsi em dois grupos genéticos: Nelore (Bos indicus) e Canchim (5/8 de Bos taurus x 3/8 Bos indicus) em dois períodos (carne não maturada e com sete dias de maturação), e utilizá-la como marcador genético. Foram analisados 30 touros jovens, 15 Nelore e 15 Canchim, todos mantidos nas instalações do confinamento experimental da FMVZ-UNESP Botucatu, recebendo a mesma dieta e mesmo manejo. Alcançando peso de 370 kg e espessura de gordura de cobertura de 4 mm, foram abatidos e amostras do músculo Longissimus dorsi foram coletadas para análises de: lipídeos totais (LT), força de cisalhamento (FC), índice de fragmentação miofibrilar (MFI) e análise da expressão gênica por RT-qPCR. Entre as características de qualidade da carne, LT e MFI0 apresentaram diferença entre as raças (P<0,01), sendo MFI0 superior no Canchim e LT no Nelore. Quanto à expressão gênica, as CALPs não mostraram expressão diferencial entre os grupos (P>0,05), assim como DGAT1, TG e LEP. CAST foi mais expresso na raça Nelore (P<0,05). Quanto às correlações, foi observada apenas uma positiva entre DGAT1 e MFI0 (r=0,79, P<0,01) no Canchim. Diante dos resultados, sugere-se que a maior expressão de CAST no Nelore propiciou aos animais uma carne mais dura, quando comparados ao Canchim, e que a expressão gênica não pode ser usada como um marcador genético / Abstract: All the features of a living organism are controlled by the expression of specific genes, and the quality of the meat is no different. The present study was performed to correlate gene expression μ-calpain (CALP 1), m-calpain (CALP 2), calpastatin (CAST), thyroglobulin (TG), Diacylglycerol acyltransferase 1 (DGTA1) and leptin (LEP) with the meat quality of Longissimus dorsi muscle in two genetic groups: Nellore (Bos indicus) and Canchim (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus) in two periods, and use it as a genetic marker. We analyzed 30 young bulls, 15 and 15 Canchim Nellore. The animals were kept on the installation of the experimental confinement FMVZ-UNESP-Botucatu, receiving the same diet and management. When reached a weight of approximately 370 kg and a subcutaneous fat thickness of 4 mm, they were slaughtered and samples of the Longissimus dorsi muscle were collected for analysis of the: total lipids (TL), shear force (SF), myofibrillar fragmentation index (MFI) and analysis of gene expression by RT-qPCR. Among the characteristics of meat quality, LT and MFI0 showed differences between breeds (P<0,01), higher MFI0 in Canchim and LT higher in Nellore. Regarding gene expression, the CALPs showed no differential expression between groups (P>0.05), as well as DGAT1, TG, and LEP. CAST was more expressed in Nellore (P<0.05). Regarding the correlation was only observed a positive relationship between DGAT1 and MFI0 (r = 0.79, P <0.01) in Canchim. Considering the results, it is suggested that the increased expression of CAST in Nellore animals led to a tougher meat compared to Canchim, and that gene expression can not be used as a genetic marker / Orientador: Henrique Nunes de Oliveira / Coorientador: Maeli Dal Pai Silva / Banca: Simone Cristina Méo Niciura / Banca: Luiz Arthur de Loyola Chardulo / Mestre
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Efeitos fisiológicos da piraclostrobina em plantas de feijão (Phaseolus vulgaris L.) condicionado sob diferentes tensões de água no solo /Jadoski, Cleber Junior, 1983. January 2012 (has links)
Orientador: João Domingos Rodrigues / Banca: Elizabeth Orika Ono / Banca: Durval Dourado Neto / Banca: Rogério Peres Soratto / Resumo: A deficiência hídrica destaca-se como um dos principais fatores limitantes na produção vegetal. A fotossíntese possui relação direta na produtividade das plantas e é um dos processos fisiológicos afetados pelo estresse hídrico. Há uma interação entre a cultura, elementos ambientais e manejo. Neste último, a aplicação de fungicidas vem apresentando resultados significativos nos processos metabólicos das plantas, além do controle de doenças. O fungicida piraclostrobina possui efeito verdejante, influências na regulação hormonal, assimilação de carbono e nitrogênio e retardo na senescência. Baseado nos efeitos fisiológicos que as estrobilurinas desenvolvem nas plantas, em função de seu modo de ação na fotossíntese; este trabalho teve por objetivo avaliar seus efeitos em plantas sob diferentes tensões de água no solo. O delineamento experimental utilizado parcelas subdivididas no esquema fatorial 4x4, quatro doses de piraclostrobina (zero, 0.050, 0.075 e 0.1 L.ha-1) e quatro tensões de água no solo (-10, -20, -30 e -40 kPa) em dois momentos, inicio da fase reprodutiva R5 e no inicio da fase de enchimento de grãos R7 na cultura do feijoeiro cultivar Carioca precoce (Phaseolus vulgaris L.) de crescimento determinado e ciclo médio de 70 a 90 dias. A semeadura ocorreu em canteiros de 2X5 m, na qual a população de plantas utilizada foi de 250.000 plantas.ha-1 com espaçamento de 40 cm entre linhas e 12,5 sementes por metro. O sistema de irrigação foi constituído de uma linha principal de onde saíam às fitas gotejadoras diretamente na linha de semeadura, na qual a irrigação era controlada por tensiômetros. Na primeira aplicação da piraclostrobina (R5) aplicou-se as tensões de irrigação e fizeram-se coletas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The water deficit stands out as one of the major limiting factors in crop production. Photosynthesis has a direct relationship in the productivity of plants and is one of the physiological processes affected by water stress. There is an interaction between culture, environmental factors and management. In the latter application of fungicides has shown significant results in the metabolic processes of plants beyond the control of diseases. The fungicide pyraclostrobin has green effect, influences the hormonal regulation, carbon and nitrogen assimilation and delayed senescence. Based on the physiological effects that strobilurins develop in plants, due to its mode of action in photosynthesis; before that this work was to evaluate its effects on plants under water stress. The experimental design was split-plot factorial design in four doses of pyraclostrobin (zero, 0,050, 0,075 and 0.1 L.ha-1) and four soil water tensions (-10, -20, -30 and -40 kPa) in two stages, beginning of reproductive stage (R5) and during early grain filling stage R7 in the bean crop to cultivate early Carioca (Phaseolus vulgaris) Growth determined and average cycle of 70 to 90 days. Sowing occurred in beds of 2x5 m, where the plant population of 250,000 was used plants.ha-1 with 40 cm spacing between rows and 12.5 seeds per meter. The irrigation system consisted of a main line to the left of where drip tape directly in the row in which irrigation was controlled by tensiometers. In the first application of pyraclostrobin (R5) was applied tensions irrigation where they were collecting material for the enzymatic determination. Three days after the application of... (complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Purificação e caracterização bioquímica de poligalacturonases produzidas pelo fungo Penicillium viridicatum RFC3 em fermentação em estado sólido e submersa /Silva, Dênis. January 2006 (has links)
Orientador: Eleni Gomes / Banca: Eleonora Cano Carmona / Banca: Rubens Monti / Banca: Iracema de Oliveira Moraes / Banca: Márcia Luzia Rizzatto / Resumo: A poligalacturonase (PG) é uma pectinase que degrada a molécula de pectina atuando internamente, ao acaso, liberando oligossacarídeos (Endo-PG) ou por ataque a partir da extremidade não redutora da cadeia, liberando moléculas de ácido galacturônico (Exo-PG). As pectinases, como várias outras enzimas, têm sido obtidas a partir de microrganismos, em processos fermentativos em estado sólido (FES) e fermentação submersa (FSM). A purificação e caracterização destas enzimas podem possibilitar o estudo das diferenças de suas propriedades funcionais, bem como, permitem avaliar suas possibilidades de aplicação, em diferentes condições, em processos industriais. Este trabalho teve por objetivos estudar a produção, purificação e caracterização da PG produzida por Penicillium viridicatum RFC3 através de FES e FSM. Para FSM foram testados os resíduos agroindustriais (farelo de trigo, bagaço de laranja, uma mistura de ambos) a 3% (p/v) além da água amarela (resíduo do processamento da indústria cítrica) no seu estado bruto e com diluições (2, 4 e 10x). Os pHs iniciais foram corrigidos para 4,5, 5 e 5,5 e a fermentação ocorreu por 24 - 96 h. A ANOVA mostrou que o extrato do bagaço de laranja (pH 5,5 e 96 h) foi o melhor meio para a produção da PG em FSM. A purificação da PG produzida em FSM iniciou-se pela ultrafiltração do extrato bruto (membranas de 50 e 10 kDa, repectivamente) seguida pela aplicação da amostra em uma coluna de filtração em gel Sephadex G75 e posterior aplicação em uma Q Sepharose. A fração isolada e desorvida revelou, após 2 eletroforese (PAGE-SDS) a homogeneidade da banda cuja massa molar foi estimada em 92,24 kDa e pI de 5,4. A enzima mostrou ser uma exopoligalacturonase (Exo-PG) com pH e temperatura ótimos em 5,0 e 50-55ºC / Abstract: The polygalacturonase (PG) is a pectinase that degrade pectin acting internally, releasing olygossacharide (Endo-PG) or by atack to a non reducing chain extremity, releasing galacturonic acid (Exo-PG). The pectinases, like many others enzymes, have been obtained from microorganisms by solid state fermentation (SSF) and submerged fermentation (SMF). The purification and characterization of these enzymes besides the study of differences of its functional properties permit its application on industrial process, on different conditions. This work aimed the study of production, purification and characterization of PG from Penicillium viridicatum RFC3 by SSF and SMF. In SMF they were assayed agroindustrial wastes (wheat bran, orange bagasse and a mixture of both) at 3% (w/v 1:1) and citric industry liquid waste (yellow water) in crude state and with dilutions (2, 4 and 10x). It was also evaluated the variation of the initial pH of the medium (4.5, 5.0 nd 5.5) and the time of fermentation (24 96 h). The ANOVA test revealed that the culture medium composed by orange bagasse extract, at pH 5.5 and 96 h, was the best condition for production of PG in SMF. The purification process of PG from SMF was carried out by the ultrafiltration of the crude extract (50 and kDa membranes, respectively) and by gel filtration in Sephadex G75 and Q Sepharose columns. The fraction with PG activity show by eletrophoresis (SDSPAGE), an homogeinity of a band with estimated molar mass of 92.24 KDa and pI 5.4. The enzyme revealed to be an Exo-PG with optimal pH and temperature of 5.0 and 50-55 °C. It also revealed to be Ca2+ dependent, which increased its 4 activity and stability. The Km of the enzyme was 1.30 and 1.16 mg/ml on Ca2+ presence. The Vmax was 1.76 and 2.07 ?mol/min/mg when Ca2+ was added. The better fermentation conditions in SSF was wheat bran mixed with orange bagasse (1:1 w/w) at 80% moisture as an culture medium and 336h of fermentation / Doutor
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Purificação e caracterização da poligalacturonase termoestável produzida pela linhagem fúngica Thermomucor indicae-seudaticae N31 em fermentação em estado sólido e submersa /Martin, Natalia. January 2010 (has links)
Orientador: Eleni Gomes / Coorientador: Heloiza Ferreira Alves do Prado / Banca: Luis Henrique Souza Guimarães / Banca: Eleonora Cano Carmona / Banca: Lara Durães Sette / Banca: Valéria Marta Gomes de Lima / Resumo: Organismos termofílicos produzem enzimas que, em geral, são mais termoestáveis que aquelas produzidas por mesofílicos. Além disso, essas enzimas geralmente apresentam várias características importantes sob o ponto de vista de aplicação industrial, como estabilidade em ampla faixa de pH e maior tolerância a solventes e outros desnaturantes proteicos. O tipo de processo fermentativo usado também pode influênciar a produção e as propriedades das enzimas obtidas. Foram isoladas várias cepas fúngicas termofílicas e pectinolíticas e entre elas, o fungo termofílico Thermomucor indicae-seudaticae N31 foi o que apresentou maior potencial de produção de poligalacturonase (PG) usando meios a base de resíduos agro-industriais. Em fermentação em estado sólido (FES) usando como meio de cultura uma mistura de farelo de trigo e bagaço de laranja (1:1) a 70% de umidade, o fungo produziu 14 U/mL em 48 horas e em fermentação submersa (FSm) com 1% farelo de trigo e 1% bagaço de laranja como substrato foram obtidas 13 U/mL em 96 horas de fermentação. A PG presente na solução enzimática bruta obtida de FSm foi mais termoestável do que aquela de FSS e mais estável em ampla faixa de pH. As exo-PGs produzidas em FSm e FSS foram purificadas até homegeneidade, com um fator de purificação de 8 e 2,5 vezes e um rendimento de 27,7% e 15,5% para FSm e FSS, respectivamente. A PG da FSm apresentou um massa molar de 38,9 kDa e a de FSS 37,1, kDa. O pH e temperatura ótimos foram de 5,5 e 4,5-5,0 e 55° e 60°C, para enzimas de FSm e FES, repectivamente. Ambas as PGs mostraram perfil de exo-PG, liberando ácido galacturônico por hidrólise de pectina com baixo grau de esterificação (DE). O km foi 590,9 e 661,6 e o Vmax de 4 e 4,9 umol min-1mg-1, para PG de FSm e FES, respectivamente. A termoestabilidade foi comprovada pela análise dos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Thermophilic organisms produce enzymes that, in general, are more thermostable than the ones produced by mesophilic. Moreover, these enzymes generally exhibit many important characteristics under the perspective of industrial application, such as stability in a wide range of pH and more tolerance to solvents and other protein denaturating substances. The type of fermentative process can also influence the production and properties of the enzymes obtained. Numerous strains of thermophilic and pectinolytic fungi were isolated and among them, the Thermomucor indicae-seudaticae N31 was the one that presented the highest potential for polygalacturonase (PG) production using media containing agro industrial residues. In solid state fermentation (SSF) using a mixture of wheat bran and orange bagasse (1:1) as substrate, at 70% moisture, the fungus produced 14 U/mL in 48 hours and in submerged fermentation (SmF) with 1% wheat bran and 1% orange bagasse as substrate, 13 U/mL were obtained in 96 hours of fermentation. PG in the crude enzymatic extract obtained from SmF was more thermostable than the one produced in SSF and stable in a wider range of pH. The exo-PGs produced in SmF and SSF were purified to homogeneity, with a final purification of 8 and 2.5- fold and overall recovery of 27.7% and 15.5%, respectively. PG from SmF exhibited a molecular mass of 38.9 kDa and PG from SSF 37.1 kDa. Optimum pH and temperature were 5.5 and 4.5-5.0 and 55°C and 60°C for the enzymes from SmF and SSF, respectively. Both PGs exhibited exo-PG profile, releasing galacturonic acid through the hydrolysis of low esterification level pectin. Km was 590.9 and 661.6 and Vmax was 4 and 4.9 umol min-1mg-1, for PG from SmF and SSF, respectively. The thermostability was confirmed by analyzing the enzymes thermodynamic parameters with PG produced in SmF being the most thermostable exhibiting higher values... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Estresse oxidativo em clones de seringueira sob ataque de antracnose-das-folhas /Fiori, Maíra dos Santos, 1984- January 2011 (has links)
Resumo : As plantas defendem-se continuamente contra ataques de bactérias, vírus, fungos, invertebrados e outras plantas. O estresse oxidativo é um tipo de resposta fisiológica da planta após o reconhecimento do patógeno, podendo resultar em sintomas diversos, dependendo da sensibilidade, e dos mecanismos de defesa da planta hospedira. Situações de estresse impostas por diversos fatores, como de estresse biótico, que resulta da ação de micro-organismos patogênicos, nematóides e artrópodes e de interações simbióticas bactéria/cianobactéria/fungoplanta, são de enorme relevância para o crescimento, desenvolvimento, produtividade e sobrevivência dos hospedeiros. A antracnose causada por Colletotrichum gloeosporoides, constitui um sério problema para a cultura da seringueira [Hevea brasiliensis (Willd. Ex Adr. De Juss) Müell. Arg.] no Estado de São Paulo. Este fungo ataca diversas partes da planta ou atua como saprófita associado a outros patógenos, prejudicando o crescimento, desenvolvimento e a produtividade. Foram analisadas alterações bioquímicas em folhas de mudas de três clones de seringueira RRIM 600, GT1 e PR255 infectadas pelo fungo C. gloeosporoides, observando os indicadores de estresse oxidativo (lipoperóxidos, peróxido de hidrogênio, pigmentos fotossintéticos e açúcares solúveis) e enzimas antioxidantes (glutationa S-transferase- GST, superóxido dismutase-SOD e peroxidase-POD) relacionadas com proteção contra estresse. Neste trabalho foi observado que a infecção por C. gloesosporoides em plantas H. brasiliensis causa estresse oxidativo, detectado pelo aumento dos teores de peróxido de hidrogênio, acúmulo de carboidratos solúveis e degradação dos teores de clorofila a, b e total. A elevação da atividade das enzimas antioxidantes, GST, SOD e POD nos clones... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Plants defend themselves against attacks by continuously bacteria, viruses, fungi, invertebrates and plants. Oxidative stress is a type of physiological response of plants after pathogen recognition and may result in various symptoms, depending on the sensitivity of the host and the mechanisms of plant defense. Situations of stress imposed by various factors such as the examples of biotic stress, which results from the action of pathogenic microorganisms, nematodes and arthropods and symbiotic interactions of bacteria / cyanobacteria / plant-fungus are of great significance to the level of growth, development, productivity and survival of the hosts. The anthracnose caused by Colletotrichum gloeosporoides, is a serious problem for the cultivation of rubber [Hevea brasiliensis (Willd. Ex Adr. De Juss) Müell. Arg.] in São Paulo State. This fungus attacks the plant parts or acts as a saprophyte associated with other pathogens hampering growth, development and productivity. It was analyzed biochemical changes in leaves of seedlings of three tree clones RRIM 600, PR255 GT1 and infected by C. gloeosporoides, such as, indicators of oxidative stress (lipoperoxides, hydrogen peroxide, photosynthetic pigments and soluble sugars) and antioxidant enzymes (glutathione Stransferase- GST, superoxide dismutase-SOD and peroxidase-POD) related to protection against stress. In this study it was observed that... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Ana Catarina Cataneo / Coorientador: Edson Luiz Furtado / Banca: Jurema Schons / Banca: Luciana Francisco Fleuri / Mestre
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