A hipótese desta pesquisa foi que a maturação epididimária dos espermatozoides caninos envolve modificações nas proteínas e ácidos graxos do fluido sintetizado pelos distintos segmentos epididimários, além de alterações no perfil de ácidos graxos da membrana plasmática, organização celular e morfológica dos espermatozoides. Para tanto, este projeto foi realizado com 20 cães em idade reprodutiva e negativos para Brucella canis. Após a orquiectomia bilateral, os testículos e epidídimos foram acondicionados a 5°C por no máximo 24 horas, em seguida, as amostras foram colhidas por incisões na cauda, corpo e cabeça do epidídimo. As amostras foram imediatamente processadas por avaliação subjetiva e automática da motilidade e vigor espermático, concentração, morfologia espermática, integridade da membrana plasmática, acrossomal e atividade mitocondrial. Foi possível observar determinar maior número de espermatozoides dentro da normalidade na cauda do epidídimo, especialmente, referindo-se à motilidade, integridade de membrana e atividade mitocondrial. A avaliação das modificações ultraestruturais dos espermatozoides permitiu observar a migração da gota citoplasmática e alterações acrossomais. No perfil de ácidos graxos observaram-se variações na quantidade e presença dos ácidos durante o traje epididimário, destacando o acréscimo do DHA na região da cauda epididimária. Ainda, no perfil protéico do plasma epididimário canino, foi possível identificar um padrão regional de secreção de proteínas, maior nas regiões da cabeça e corpo em relação à cauda do epidídimo. Apesar das importantes informações geradas a partir do presente trabalho, mais estudos são necessários para a compreensão da fisiologia reprodutiva, especialmente da maturação espermática epididimária na espécie canina. / The hypothesis of this research is that the canine maturation of epididymal spermatozoa involves progressive changes in the protein and fatty acid content of the fluid synthesized by the different epididymal segments, as well as changes in the fatty acid profile of the sperm plasma membrane, cell organization and morphology of the canine sperm. Therefore, this experiment was conducted with 20 dogs in reproductive age and free of Brucella canis. After bilateral orchiectomy, testes and epididymis were stored at 5°C for up to 24 hours and then the samples were harvested through incisions of the tail, corpus and caput of the epididymis. The samples were immediately processed for subjective and automatic motility and sperm vigor, sperm count, morphology, plasma membrane integrity, acrosomal and mitochondrial activity. It was possible to observe a greater number of mature sperm in the epididymal tail compared to the corpus and caput, especially referring to motility, membrane integrity and mitochondrial activity. The evaluation of ultrastructural changes of the spermatozoa allowed to observed the migration of the cytoplasmic droplets and acrosomal changes. In the fatty acid profile was observed variations in the amount and presence of acids during epididymal maturation, highlighting the addition of DHA in the epididymal tail region. Moreover, in the protein profile of the canine epididymal plasma, it was possible to identify a regional pattern of protein secretion, higher in the caput and corpus in relation to the tail epididymis. In spite of the important data generated from this study, further studies are needed for understand the reproductive physiology, especially the epididymal sperm maturation in dogs.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Este trabalho teve como objetivo correlacionar parÃmetros reprodutivos de fÃcil mensuraÃÃo, que sejam representativos da capacidade reprodutiva de um macho ovino como reserva epididimÃria. Foram mensurados 38 genitais masculinos de ovinos deslanados sem padrÃo racial definido quanto os parÃmetros biomÃtricos do testÃculo e epidÃdimo comprimento, a largura, a espessura e do peso, bem como concentraÃÃo espermÃtica da cauda do epidÃdimo e volume do fluido contido da cauda. Antes do abate cada animal doador do genital teve mensurado a circunferÃncia escrotal (CE), peso e idade pela cronologia dentÃria. No tocante a reserva epididimÃria esta foi determinada pela concentraÃÃo espermÃtica do conteÃdo epididimÃrio. Todos os resultados foram expressos em media e erro padrÃo, bem como tambÃm o Coeficiente de VariaÃÃo (CV). As correlaÃÃes foram calculadas pelo mÃtodo de Pearson utilizando o procedimento âProc Corrâ do SAS (1999). Destes genitais nÃo foi observada diferenÃa (p > 0,05) entre os valores dos lados direito e esquerdo da biometria testicular. As mÃdias e erros padrÃo obtidas para PE, PT, CT, LT, ET, PTE, PCE, PCOE, PCAE, CCAE, LCAE, ECAE foram: 27,82 Â 1,77cm; 123,97 Â 26,58g; 7,83 Â 0,79cm; 5,74 Â 0,48cm; 4,57 Â 0,54cm; 18,63 Â 3,96g; 6,95 Â 1,48g; 3,45 Â 0,87g; 8,36 Â 2,13g; 3,03 Â 0,44cm; 2,22 Â 0,22cm e 1,65 Â 0,23cm respectivamente. No tocante a reserva espermÃtica da cauda do epidÃdimo, a concentraÃÃo encontrada foi de 2,47 Â 1,00 bilhÃes de sptz por mL. Das medidas biomÃtricas em estudos a que melhor se comportou nas correlaÃÃes foi o peso vivo, dos testÃculos e dos epidÃdimos mostrando sempre correlaÃÃes moderadas e significativas. O peso vivo teve correlaÃÃo mÃdia e ignificativa (p<0,0001) com as medidas biomÃtricas da cauda do epidÃdimo CCAE, LCAE e ECAE (r=0,59; r=0,60 e r= 0,59) spectivamente. A LT, comportou-se neste estudo com bom indicador do desenvolvimento testicular e epididimÃria, podendo ser extrapolado para funÃÃo reprodutiva sendo esta fortemente correlacionada com o PT (r=0,88), CE (r=0,57), PTE (r=0,60). Neste estudo a CE mostrou correlaÃÃes moderadas variando r = 0,38 a 0,69 o com as medidas testiculares e epididimÃrias e as medidas que melhor se correlacionaram foram o PT com r=0,69, CT e LT com r=0,57 respectivamente. A mensuraÃÃo CCAE foi a que apresentou melhor relaÃÃo com a grande maioria dos parÃmetros estudados, principalmente as caracterÃsticas testiculares (r= 0,54 a 0,58) e epididimÃrias (r= 0,48 a 0,73), bem como apresentou correlaÃÃo positiva e mÃdia (r=0,50) com o xv volume coletado da cauda do epidÃdimo, mostrando que esta mensuraÃÃo estar muito ligada ao desenvolvimento epididimÃrio que por conseguinte se relacionam com o desenvolvimento testicular. A CONC e VC mostraram baixas e moderadas correlaÃÃes embora positivas com as medidas testiculares e epididimÃrias. A caracterÃstica que menos se correlacionou com todas as outras mensuraÃÃes inclusive expressando coeficientes negativos foi a espessura da dobra escrotal. Contribuindo pouco quanto ao desenvolvimento testÃculo epididimÃrio e com as caracterÃsticas da reserva espermÃtica da cauda do epidÃdimo. Podemos utilizar a LT e CCAE no auxÃlio das mensuraÃÃes biometrias (Peso Vivo, PE ....) para seleÃÃo precoce de machos ovinos por sua facilidade de obtenÃÃo nos animais vivos. / The aim of this study is to correlate reproductive parameters of easy measurement to represent the reproductive capacity of a male sheep The biometric parameters of the testis and epididymis (length, midth, thickness and weight) of 38 SPRD ram were measured as well as the sperm concentration of the epididymis tail (CECE) and epididymis fluid volume (VFE) contained in the tail. The scrotal circunference (SC) and weight of each animal was measured before slaughter. The age was determined by dental chronology. The spermatozoids epididymis concentration was determined in a Neubauer chamber. All results were expressed by mean and standard deviations. The correlations were calculated by the Person method using the procedure âProc Corrâ of SAS (1999). No significant difference was observed (p>0,05) between the measured parameters of right and left sides of the testis and epididymis biometry. The means and standard deviations obtained for CE, PT, LT, ET, PTE, PCE, PCOE, PCAE, CCAE, LCAE, ECAE were:27,82 + 1,77 cm; 123,97 + 26,58 g; 7,83 + 0,79 cm; 5,74 + 0,48 cm; 4,57 + 0,54 cm; 18,63 + 3,96 g; 6,95 + 1,48 g; 3,45 + 0,87 g; 8,36 + 2,13 g; 3,03 + 0,44 cm;2,22 + 0,2 cm and 1,65 + 0,23 cm, respectively. The sperm concentration of the sperm reserve in the epididymis tail was 2,47 + 1,00 sptz billion for mL. The weight parameters (alive, of the testis and epididymis) showed moderate and significant correlations. The alive weight had medium and significant correlation (p> 0,0001) with biometrics measures of the epididymis tail:CCAE, LCAE and ECAE ( r=0,59; r=0,60 and r=0,59 respectively). LT behaved as good indicator of testis and epididymis development, and could be extrapolated with PT (r=0,88), CE (r=0,57), PTE (r=0,60). CE presented moderate correlations (r=0,38 to 0,69) varying with testis and epididymis measures, and the better correlated measures were PT with r=0,69, CT and LT with r=0,57, respectively. The CCAE parameter presented a better relationship with the majority measurements, mainly the testis (r=0,54 to 0,58) and epididymis characteristics (r=0,48 to 0,73); CCAE parameter also presented positive and moderate correlation (r=0,50) with the epididymis tail volume collected.CECE and VFE presented low and medium correlations, although positive, with the testis and epididymis measures. The characteristic less correlated with all the others measurements, besides the ones expressing negative coefficients, was the thickness of the scrotal fold. The LT and CCAE parameters can be included in the biometry measurements (Live Weight, PEâ) of the male reproductive tract to help the precocious selection of male sheep.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-05-26T20:02:59Z No. of bitstreams: 1 2016 - Phillipe Bauer de Ara?jo D?ria.pdf: 2728729 bytes, checksum: 9a6172b97d933c398e4d0dd04647cad7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-26T20:02:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016 - Phillipe Bauer de Ara?jo D?ria.pdf: 2728729 bytes, checksum: 9a6172b97d933c398e4d0dd04647cad7 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / The current study aims to develop a minimally invasive surgical technique with the use of cryosurgery that provides sterilization of sheep for different purposes. It was used eighteen rams, half blood Santa In?s x Dorper, pubescent, with aged between 8 and 12 months and scrotal circumference greater than or equal to 25 cm, kept in confinement. The animals were weighed, clinical and hematological tests were done. By ultrasonographic, testes, epididymides and spermatic cords were evaluated and was made breeding soundness examination, serum testosterone dosage and libido test. After being considered suitable, were divided into two groups, with nine animals each group: TEST GROUP (TG) and CONTROL GROUP (CG). The surgical technique in TG consisted in the transfixing of the tail of the epididymis in the medial latero direction, with sterile and disposable hypodermic needle of 0.80 x 40mm, 21G x 1 ?, is being coupled to a circuit composed of stainless steel adapter attached to a flexible rubber tube with 15 cm in length, diameter of 7,05mm and 4,50mm of lumen, connected to unit Cryogun CryAc, then receiving the application of two cycles of freeze / thaw, by time of 60 / 45 seconds respectively by repeating the procedure on the contralateral organ. In CG proceeded only epididymis tail transfixion as previously described, without cryosurgery, waiting for the same time interval as in TG. The animals were observed for a period of 33 days, repeating to the end of this stage all tests performed before surgery, followed by orchiectomy to obtain the testis, the epididymides and tunics for macroscopic and histological in stained laminas by hematoxylin and eosin observed in optical microscopy. Semen analysis performed at 33 days revealed azoospermia in six of the nine sheep allocated in TG which was not observed in CG sheep. The statistical analysis showed no significant changes in body weight, scrotal circumference and libido of TG animals. Serum testosterone measurements before and after the procedure in TG were within the curve. Ultrasonography in the TG showed no changes in the testicular parenchyma, however demonstrating changes in the shape and increased epididymal tail dimensions with heterogeneous echo texture and the presence of cystic cavities occupying a large area of the epididymis tail, with hypoechoic homogeneous content inside. Microscopy revealed changes in the testicles of eight TG animals as contracted seminiferous tubules, diffuse vacuolation of germ cells, absence of sperm cells in the lineage, reduction in sperm production and the presence of sperm cells dead. It was noted in the epididymal tail semen extravasation into the interstitial space, with the formation of spermatic granuloma, adjacent fibrosis, and the presence of large vacuoles with stasis of the sperm cells inside and thickening of the coats in some patients. It concludes that the proposed technique in TG is safe, fast, easy to perform, with low cost, minimally invasive and free of the occurrence of postoperative complications, providing sterilization of six of the nine sheep evaluated in the 33-day period. / O presente estudo visa o desenvolvimento de t?cnica cir?rgica minimamente invasiva com o emprego da criocirurgia que proporcione a esteriliza??o de carneiros para diferentes fins. Foram utilizados 18 ovinos, mesti?os Santa In?s x Dorper, machos, inteiros, p?beres, com idade entre 8 e 12 meses e circunfer?ncia escrotal maior ou igual a 25 cm, mantidos em confinamento. Os animais foram submetidos a pesagem, avalia??o cl?nica, hematol?gica, ultrassonografia de test?culo/epid?dimo e cord?o esperm?tico, exame androl?gico, dosagem de testosterona s?rica e teste de libido. Ap?s serem considerados aptos, foram divididos em dois grupos experimentais, com nove animais cada, denominados GRUPO TESTE (GT) e GRUPO CONTROLE (GC). A t?cnica cir?rgica aplicada nos pacientes do (GT) consistiu da transfixa??o da cauda do epid?dimo com agulha hipod?rmica est?ril descart?vel 0,80 x 40mm, 21G x 1 ?, no sentido latero medial, estando esta acoplada a um circuito composto por adaptador de a?o inox ligado um tubo de borracha flex?vel de 15cm de comprimento, 7,05mm de di?metro e l?men de 4,50mm, conectado a aparelho Cryogun CryAc, recebendo ent?o a aplica??o de dois ciclos de congelamento / descongelamento, pelo tempo de 60 segundos / 45 segundos respectivamente, repetindo-se o procedimento no ?rg?o contralateral. No GC procedeu-se apenas a transfixa??o da cauda do epid?dimo conforme descrito previamente, aguardando-se pelo mesmo intervalo de tempo que no GT, sem a realiza??o da criocirurgia. Os animais foram acompanhados por um per?odo de 33 dias, repetindo-se ao final desta etapa todos os exames realizados antes da interven??o cir?rgica, seguidos de orquiectomia para obten??o das pe?as contendo os test?culos, epid?dimos e t?nicas para avalia??o macrosc?pica e posterior an?lise histopatol?gica das l?minas coradas por Hematoxilina e Eosina em microscopia ?ptica. O espermograma realizado aos 33 dias revelou azoospermia em seis dos nove carneiros do GT, n?o tendo sido observado este quadro em nenhum dos ovinos do GC. As analises estat?sticas n?o evidenciaram altera??es significativas para peso corporal, per?metro escrotal e libido dos animais do GT. As dosagens de testosterona s?rica antes e ap?s a realiza??o da t?cnica proposta no GT situaram-se dentro da curva. O exame ultrassonogr?fico do GT n?o evidenciou altera??es no par?nquima testicular, demonstrando por?m altera??es na forma e aumento das dimens?es da cauda do epid?dimo, com ecotextura heterog?nea e a presen?a de cavidades c?sticas ocupando uma grande ?rea da cauda do epididimo, com conte?do homog?neo hipoec?ico em seu interior. A microscopia revelou altera??es nos test?culos em oito animais do GT com t?bulos semin?feros contra?dos, vacuoliza??o difusa de c?lulas germinativas, aus?ncia de c?lulas da linhagem esperm?tica, redu??o na produ??o de espermatozoides e presen?a de espermatozoides mortos, notou-se na cauda do epid?dimo o extravazamento de s?men para o interst?cio, com a forma??o de granuloma esperm?tico, fibrose adjacente, al?m da presen?a de grandes vac?olos com estase de espermatozoides no seu interior e espessamento das t?nicas em alguns pacientes. Conclu?mos que a t?cnica proposta no GT mostrou-se segura, r?pida, de f?cil execu??o, baixo custo, minimamente invasiva e isenta da ocorr?ncia de complica??es p?s-operat?rias, proporcionando a esteriliza??o de seis dos nove carneiros avaliados no per?odo de 33 dias.

Orientador: Raquel Fantin Domeniconi / Resumo: O estado nutricional materno desempenha papel crucial na saúde e no bem-estar do feto. Alterações testiculares, prostáticas e espermáticas foram observadas em animais adultos, cujas mães sofreram restrição de proteína. No entanto, não há trabalhos com este modelo experimental que enfoquem o desenvolvimento, padrão de vascularização e seus reflexos na expressão de proteínas no epidídimo. O objetivo deste estudo é investigar o padrão das respostas morfológicas, imuno-histoquímicas e expressão de proteínas do epidídimo da prole de ratos Wistar de mães submetidas à restrição proteica no período de gestação e de lactação. Fêmeas prenhes foram alocadas nos grupos experimentais normoproteico (NP) e hipoproteico (HP) que receberam, respectivamente, dietas contendo 17% e 6% de proteínas durante gestação e lactação. Após o desmame, os ratos receberam dieta padrão para roedores até as idades de 21, 44 e 120 dias pós-natais (DPN) quando foram eutanasiados. Os epidídimos foram coletados e processados segundo técnicas histológicas, imuno-histoquímicas e de western blotting. Nos filhotes HP, o tamanho reduzido e baixo peso observados ao nascimento se mantiveram até o DPN 120, acompanhados da redução dos órgãos do sistema genital masculino para todas as idades analisadas. A dieta hipoproteica materna diminuiu os níveis séricos de testosterona nos animais no DPN 44, aumentou os níveis de aldosterona nos animais no DPN 21 e não alterou os níveis de estradiol em nenhuma das idades. Nos animais ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Maternal nutrition status plays a crucial role in the health and well-being of the fetus. Changes of testes and prostate as well as spermatic disorders were observed in adult animals whose mothers were subjected to protein restriction. However, there are no studies with this experimental model that focus the development and the vascular pattern of epididymis, as well as their reflexes in the expression of proteins of the epididymis. The aim of this study is to investigate the pattern of morphometric, immunohistochemical and protein expression of the epididymis of the Wistar rat offspring whose mothers were subjected to a low-protein diet during gestation and lactation. Pregnant females were divided into normoprotein (NP) group and low-protein (LP) group that received, respectively, diets containing 17% and 6% of protein during gestation and lactation. After weaning, the LP and NP male pups received the standard diet for rodents until the ages of 21, 44 and 120 days (PND), when they were euthanized. The epididymides were collected and processed according to histological, immunohistochemical and western blotting techniques. In the LP offspring, the smaller body size and low weight observed at birth remained until the PND 120, as well as the reduction of the male genital system organs weight for all analyzed ages. Maternal low-protein diet decreased testosterone serum levels in animals at PND 44, increased aldosterone serum levels in animals at PND 21 and did not altered estradi... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Cystatin Related Epididymal Spermatogenic protein (CRES) is expressed in both the testis and epididymis and found associated with spermatozoa. It appears as non-glycosylated (14 and 12 kDa) and glycosylated isoforms (19 and 17 kDa). The role of CRES is enigmatic and dependent on localization of its isoforms, which is the objective of this study. The initial approach was to investigate testicular and epididymal origins of these isoforms by immunohistochemistry and immunogold cytochemistry. To further pinpoint CRES localization we then selectively extracted and fractionated epididymal spermatozoa in order to find by immunoblotting which sperm fractions contained CRES isoforms. Immunohistochemical analysis of mouse spermatogenesis showed that CRES was expressed in the tail cytoplasm of elongating spermatids from step 9-16, with a pattern reminiscent of outer dense fibre (ODF) proteins. Ultrastructural immunocytochemistry revealed that the immunogold label was concentrated over growing ODFs and mitochondrial sheath in the testes which persisted in spermatozoa through the epididymis. Sequential extractions of isolated sperm tails with Triton X-100-dithiothreitol (DTT) to remove the mitochondrial sheath, whose extract contained an unrelated 66 kDa immunoreactive band, followed by either sodium dodecyl sulfate (SDS)-DTT or urea-DTT to solubilise accessory fibres of the tail revealed a 14 kDa immunoreactive band associated with the ODF. In addition, Western blots revealed glycosylated and non-glycosylated CRES isoforms in nonyl phenoxylpolyethoxylethanol (NP40) extracts of the caput, but not cauda, sperm. Immunohistochemical analysis of the caput and cauda epithelium showed that CRES is secreted by the Golgi apparatus of the ii initial segment, fills the proximal caput lumen, and disappears by mid caput. Western blots of caput and cauda tissue and luminal fluid revealed 14 and 19 kDa immunoreactive bands in caput tissues and luminal fluid, but not in the cauda. This study concludes that there are two origins of CRES, one arising in the testis and the other in the epididymis. Testicular CRES is ionically and covalently associated with the ODF while epididymal CRES is detergent soluble and is most likely associated temporarily with the surface of caput epididymal sperm. / Thesis (Master, Anatomy & Cell Biology) -- Queen's University, 2010-09-03 14:22:01.913

Thesis submitted in fulfilment of the requirements for the degree Master of Technology: Biomedical Technology in the Faculty of Health and Wellness Sciences at the Cape Peninsula University Of Technology 2014 / Oxidative stress (OS) plays a central role in the progression of diabetes mellitus (DM). Prevention of DM and its complications is a challenging health problem as it impacts on various organ functions, including reproduction. Diabetes mellitus with hyperglycaemic condition generates high production of reactive oxygen species. An imbalance between antioxidant mechanism and reactive oxygen species generates oxidative stress. OS damages the sperm membrane by oxidation of polyunsaturated fats which in turn reduces the sperm motility and ability to fuse with the oocyte and OS directly damage sperm DNA, compromising the paternal genomic contribution to the embryo development. Recent experimental evidence shows that modulation of oxidative stress and natural antioxidants may determine the outcome of male reproductive function. Previous investigations indicate that the supplementation and treatment with phytomedicine might play role in the prevention and management of DM and its subsequent complications on male reproductive function. This study explored the pharmacological potential of kolaviron (KV) on testicular and epididymal tissue in diabetic and non- diabetic Wistar rats. All experiments were conducted for a period of six weeks. Male Wistar rats (240–290 g) were randomly divided into 5 groups (n=12) where all the rats received a standard diet. Non diabetic rats control group and other four groups injected with different treatments. Non diabetic rat (N) received vehicle: Dimethylsulfoxide. Diabetes rats (D) were induced by a single intraperitoneal injection of freshly prepared streptozotocin (STZ) solution, 50mg/kg body weight. The N and D were treated with kolaviron (100 mg/kg body weight) orally, five times a week .The last group, diabetic rats were given subcutaneously injection of the standard anti-diabetic drug, insulin (0.2 u/kg) every second day. After the feeding period, testicular and epididymal tissues were collected and were analysed. All parameters were determined using appropriate methods in homogenized tissues. Data were expressed as mean ± SD. Plasma glucose as well as malondialdehyde (MDA) was significantly higher, while body, testicular and epididymal weights were lower in the D group compared to the N group and N+KV. Both kolaviron and insulin were able to ameliorate these effects. Testicular and epididymal antioxidant enzymes such as superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GPx) in induced diabetic rats were significantly (p<0.05) low compared to diabetic control group. However, KV treated group shown significantly higher SOD, CAT and GPx activities compared D group. In conclusion, our findings demonstrated that KV could improve antioxidant enzymes and modulate STZ induced diabetic related oxidative stress in the male reproductive system. Kolaviron can potentially be used as an anti-diabetic treatment, however further studies are needed. Key words: Oxidative stress, Diabetes mellitus, antioxidants, kolaviron, epididymal tissue, testicular tissue, superoxide dismutase, catalase, glutathione peroxidase, lipid peroxidation, streptozotocin

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / The present study was conducted to evaluate the effects of heat stress on testis and semen criteria, and seminal plasma proteome of rams. Scrotal insulation (SI) was in place for eight days, using six rams. Animals were evaluated before (day 0), during and after SI until semen parameters returned to normal. Scrotal circumference, other testis parameters and sperm motility decreased after SI but returned to pre-insulation values on days 71, 85 and 113, respectively. Rams became azoospermic from day 29 to 71. The number of detectable spots per 2D gel decreased from 256  31 to 104  14 between days 0 and 29 (p < 0.05), returning to pre-insulation values on day 134. Several seminal proteins detected before insulation were absent when animals had low sperm motility or azoospermia, including albumin, arylsulfatase A, plasma glutamate carboxypeptidase, cathepsin F, transferrin, alpha-2-macroglobulin, angiotensin-converting enzyme, alpha fucosidase, beta galactosidase, TCP-1 containing chaperonins, heat shock protein 70 kDa, clusterin, palate, lung and nasal epithelium clone, ram seminal vesicle proteins, bodhesin 2, superoxide dismutase, cystatin B, peroxiredoxin 5, tissue inhibitor of metalloproteinase 2. Expression of other 17 proteins were quantitatively changed in the seminal plasma 2-D maps as the result of SI, such as actin, protein DJ-1, HRPE773-like, C-reactive protein precursor and porcine seminal plasma spermadhesins, among others. In conclusion, the expression of seminal plasma proteins was drastically altered by scrotal insulation, coincidental with changes in testis size and semen criteria. Proteins affected by heat stress are potentially involved in several events, from sperm protection and maturation to fertilization. / O presente estudo foi conduzido para avaliar os efeitos do estresse tÃrmico no testÃculo, parÃmetros seminais e proteoma do plasma seminal de carneiros. Seis carneiros da RaÃa Morada Nova var. branca foram submetidos à insulaÃÃo escrotal (IE) por oito dias. Os animais foram avaliados antes (dia 0), durante e apÃs a insulaÃÃo atà que os parÃmetros seminais tivessem retornado a normalidade. A circunferÃncia escrotal, bem como os demais parÃmetros de biometria testicular e a motilidade espermÃtica diminuÃram apÃs a IE, mas com retorno aos valores de prÃinsulaÃÃo entre os dias 71, 85 e 113, respectivamente. Os carneiros tornaram-se azoospÃrmicos entre os dias 29 e 71. O nÃmero de spots detectÃveis/gel diminuiu de 256  31 para 104  14 entre os dias 0 e 29 (p < 0,05), retornando aos valores prÃinsulaÃÃo no dia 134. Algumas proteÃnas detectadas no plasma seminal antes da insulaÃÃo estavam ausentes quando os animais tiveram menor motilidade espermÃtica ou azoospermia, incluindo albumina, arilsulfatase A, plasma glutamato carboxipeptidase, catepsina F, transferrina, alfa-2-macroglobulina, enzima conversora de angiotensina, alfa fucosidase, beta galactosidase, chaperonina contendo TCP-1, proteÃna de choque tÃrmico 70 kDa, clusterina, âpalate, lung and nasal epithelium cloneâ, âram seminal vesicle proteinsâ, bodesina 2, superÃxido dismutase, cistatina B, peroxiredoxina 5, tecido inibidor de metaloproteinase 2. ExpressÃes de outras 17 proteÃnas foram quantitativamente alteradas nos mapas bidimensionais do plasma seminal como resultado da IE, como a actina, proteÃna DJ-1, HRPE773, proteÃna C-reativa, âporcine seminal plasma espermadhesinsâ, entre outras. Conclui-se, que a expressÃo de proteÃnas no plasma seminal foi drasticamente alterada pela insulaÃÃo escrotal, coincidindo com mudanÃas no tamanho testicular e parÃmetros espermÃticos. As proteÃnas afetadas pelo calor estÃo potencialmente envolvidas em diversos eventos, como proteÃÃo espermÃtica, maturaÃÃo e fertilizaÃÃo.

Foram utilizados dez jacarés - do - Pantanal (Caiman crocodylus yacare), machos de faixa etária juvenil; sete espécimes foram destinados ao estudo macroscópico e os outros três foram utilizados para o estudo microscópico de luz. Após a abertura da cavidade pleuroperitoneal foi observado e identificado que os testículos são em pares e apresentam-se aderidos a parede dorsal da cavidade pleuroperitoneal. O epidídimo é alongado e muito enovelado, encontra-se na extremidade cranial do testículo, seguindo medialmente até sua extremidade caudal, onde inicia-se com o ducto deferente e posterior abertura na cloaca. O falo tem um formato tubular de aspecto cônico, mostrando ser um órgão com breve resistência, porém é flexível e possuem características de tecido cartilaginoso. Na microscopia de luz foi observada que, o testículo é limitado pela túnica albugínea. Os túbulos seminíferos são extremamente contorcidos e em seus espaços estão preenchidos por tecido intersticial e células de Leydig. Encontram-se na rede testicular túbulos revestidos por epitélio cubóide. Os ductos do epidídimo são revestidos pelo epitélio pseudo-estratificado não ciliado que variam entre células cúbicas e prismáticas. Os ductos deferentes caracterizam-se por apresentar uma luz estreita revestida pelo epitélio pseudo-estratificado prismático não ciliado. O falo é revestido pelo epitélio estratificado escamoso não queratinizado e envolto por tecido conjuntivo. / Ten Young-aged male Pantanal alligators (Caiman crocodylus yacare) were used; seven specimes were destinated to macroscopic study and the other three were used in the study of light microscopy. After the opening of the pleuroperitoneal cavity, we observed and identified that testes are in pairs and adhered to the dorsal wall of the pleuroperitoneal cavity. The epididymis is long and very convoluted. It is found in the cranial extremity of the testis, following medially until its caudal extremity, where it is initiated with ductus deferens and posterior opening in the phallus. Phallus has a tubular shape in conic aspect showing to be an organ with little resistence, but it is flexible and has features of cartilaginous tissue. In the light microscopy we observed that the testis is limited by the tunica albuginea. The seminiferous tubules are extremely convoluted and its spaces are filled with intersticial tissue and Leydig cells. Tubule lined with cuboidal epithelium are found in the rete testis. The ductus epididymus are lined with by non-ciliated pseudostratified epithelium to columnar cells. Ductus deferens show a very narrow light lined by the non-ciliated columnar pseudostratified epithelium. Phallus is lined by the non-keratinized stratified squamous epithelium and connective tissue.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-01T16:15:27Z No. of bitstreams: 1 Anny Kaline Gomes Andrade Amorim.pdf: 1952052 bytes, checksum: 10023cd9df1426aca187a1cf4d10b2da (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-01T16:15:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Anny Kaline Gomes Andrade Amorim.pdf: 1952052 bytes, checksum: 10023cd9df1426aca187a1cf4d10b2da (MD5) Previous issue date: 2010-02-25 / Aiming to evaluate the ultrasonographic appearance of testis and epididymis of sheep in pubertal and peripubertal age in order to establish normal parameters for this stage of reproductive development, 38 animals clinically healthy were used, twenty Santa Inês breed and 18 crossbred (Dorper x Santa Inês). In Santa Ines lambs, periodic evaluations of the development of weight, measurements of biometric characteristics of the testes and ultrasound examinations of the testes and epididymis were performed from 84 to 280 days of age, at intervals of 28 days. In crossbreed lambs, the same evaluations were performed from 140 to 280 days. Was used Falco 100 (Pie Medical) ultrasound scanner and linear transducer of 8.0 MHz. Scans were performed in the sagittal, transverse, frontal and oblique planes on the testis and tails of right and left epididymis of each animal, evaluating the echotexture of the testicular parenchyma, mediastinum and epididymis cauda, and measuring the thickness mediastinum and testis width. The testicular parenchyma showed homogeneous echogenicity, ranging from low to moderate, which increased in direct proportion to the age, being higher in pubertal lambs when compared to pre-pubertal. The echogenicity and thickness of the mediastinum increased with age, being classified as diffuse, moderately and highly echogenic. The tail of the epididymis showed hypoechoic appearance in relation to the testicular parenchyma. It was observed mild calcification in the testis parenchyma of five crossbreed lambs as multifocal hyperechoic images. Results of this study showed that ultrasound imaging can be used as an additional resource in the selection and evaluation morphophisiological of breeding sheep in pubertal and peripubertal age , helping to identify and monitoring changes progressive occurring in the testes and epididymis at this stage of reproductive development. / Objetivando-se avaliar o aspecto ultrassonográfico de testículos e epidídimos de ovinos em idade peri-puberal e puberal, visando o estabelecimento de parâmetros de normalidade para esta fase do desenvolvimento reprodutivo, foram utilizados 38 animais clinicamente sadios, dos quais 20 eram da raça Santa Inês e 18 mestiços (Dorper x Santa Inês). Nos cordeiros Santa Inês, avaliações periódicas do desenvolvimento ponderal, mensurações das características biométricas testiculares e exames ultrassonográficos dos testículos e epidídimos foram realizados dos 84 (desmame) aos 280 dias de idade, em intervalos de 28 dias. Nos mestiços, as mesmas avaliações foram realizadas dos 140 aos 280 dias. Foi utilizado aparelho de ultrassom Falco 100 (Pie Medical) e transdutor linear de 8,0 MHz. As varreduras foram realizadas nos planos sagital, transversal, frontal e oblíquo dos testículos e caudas dos epidídimos direito e esquerdo de cada animal, avaliando-se a ecotextura do parênquima testicular, mediastino e cauda do epidídimo, e aferindo-se a espessura do mediastino e a largura testicular. O parênquima testicular apresentou ecogenicidade homogênea, variando de baixa a moderada, que aumentou em proporção direta com a idade, sendo maior nos cordeiros púberes quando comparados aos pré-púberes. A ecogenicidade e espessura do mediastino também aumentaram com a idade, sendo classificado em difuso, moderadamente e altamente ecogênico. A cauda do epidídimo apresentou aspecto hipoecóico em relação ao parênquima testicular. Observaram-se calcificações de grau leve no parênquima testicular de cinco dos cordeiros mestiços avaliados, as quais foram visibilizadas como imagens multifocais hiperecóicas. Concluiu-se que a ultrassonografia por imagem pode ser utilizada como recurso complementar na seleção e avaliação morfofisiológica de reprodutores ovinos em idade puberal e peri-puberal, contribuindo na identificação e monitoramento das mudanças progressivas que ocorrem nos testículos e estruturas relacionadas nesta fase do desenvolvimento reprodutivo.

Orientador: Mary Anne Heidi Dolder, Mary Ann Foglio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T05:43:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Predes_FabriciadeSouza_D.pdf: 13931501 bytes, checksum: 9f0c73633072b7d78c9288cbb9e889be (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Cádmio (Cd) é um metal pesado associado a graves danos em vários órgãos, incluindo órgãos reprodutivos e fígado. Estudos farmacológicos indicam que Arctium lappa possue atividade hepatoprotetora, sequestradora de radicais livres e antiproliferativa. O objetivo deste trabalho foi avaliar: (1) as modificações nos túbulos seminíferos causadas por pequenas doses de Cd, (2) as propriedades antioxidantes de diferentes extratos de A. lappa, (3) a capacidade de A. lappa em atenuar os danos induzidos por cádmio no testículo, epidídimo e fígado. A capacidade sequestradora de radicais livres e quantidade de compostos fenólicos totais foram analisados nos extratos da raiz de A. lappa para determinação da capacidade antioxidante. A propriedade antiproliferativa in vitro de cada extrato foi avaliada em células tumorais. O extrato hidroetanólico apresentou alto rendimento e capacidade sequestradora de radicais livres, e juntamente com os diclorometânicos, maior teor de compostos fenólicos. Somente os extratos diclorometânicos apresentaram atividade antiproliferativa contra células tumorais. espectroscopia de massa revelou a presença dos compostos arctigenina, quercetina, ácido clorogênico e ácido caféico no extrato hidroetanólico. O extrato hidroetanólico liofilizado foi escolhido para os estudos in vivo. Para estudar os efeitos de Cd e A. lappa, ratos Wistar adultos foram distribuídos em quatro grupos: controle (C), extrato de A. lappa (Al), cádmio (Cd) e cádmio e extrato de Al (CdAl). Os animais receberam água ou extrato de Al (300 mg/Kg BW) por gavagem e dose única i.p. de salina ou 1,2 mg/kg de cloreto de cádmio. Os animais foram sacrificados após 7 e 56 dias. O Cd causou redução do peso do testículo, epidídimo e vesícula seminal, na proporção dos túbulos seminíferos (TS), no comprimento total dos TS e no diâmetro dos TS. Células germinativas degeneradas e células gigantes multinucleadas foram observadas nos TS e os danos progressivos resultaram em túbulos preenchidos apenas com células de Sertoli. Nos grupos Cd e CdAl, houve diminuição da proporção tubular e aumento da altura do epitélio no epidídimo após 56 dias. Cd causou aumento no nível plasmático de TGO e TGP após 56 dias, mas o extrato de A. lappa amenizou estes efeitos. Nenhuma alteração relevante foi observada para as transaminases hepáticas. No grupo Cd 7 dias, a proporção de hepatócitos diminuiu, a de sinusóides aumentou e o número de núcleo de hepatócito reduziu, entretanto após 56 apenas o número de núcleos de hepatócitos diminuíram. Após 7 dias, nos grupos Al e CdAl, a proporção nuclear aumentou e a citoplasmática diminuiu, sem alteração dos capilares sinusóides. Após 56 dias, nos grupos Al e CdAl, a proporção nuclear aumentou e a proporção dos capilares sinusóides reduziu. Houve aumento na densidade de núcleos nos grupos Al e CdAl. Conclui-se que doses baixas de Cd causam alterações morfológicas e morfométricas no testículo e que o Cd tem sutil limiar tóxico. Os extratos diclorometânicos apresentaram atividade antiproliferativa contra as linhagens tumorais K562, MCF-7 e 786-0. O extrato hidroetanólico apresentou alto conteúdo fenólico e atividade antioxidante, portanto foi escolhido para os estudos in vivo. O extrato de A. lappa foi ineficaz na proteção do testículo e epidídimo contra danos induzidos pelo Cd, porém protegeu o tecido hepático. / Abstract: Cadmium (Cd) is a heavy metal associated with severe damage in various organs, including male reproductive organs and liver. Arctium lappa is widely used in popular medicine for treating hypertension, gout, hepatitis and other inflammatory disorders. Pharmacological studies indicated that A. lappa roots have hepatoprotective, free radical scavenging and antiproliferative activities. The objectives of this work were evaluate: (1) histomorphometrically the threshold modifications of seminiferous tubules caused by single acute low doses of Cd, (2) antioxidant properties of different A. lappa extracts to choose the best one for "in vivo" study, (3) the ability of A. lappa to attenuate cadmium-induced damage to the testis, epididymis and liver of male rats. Dichloromethanic, ethanolic, aqueous extracts, hydroethanolic and total aqueous extract of A. lappa roots were investigated regarding radical scavenging activity and the total phenolic content. The extracts were tested for their antiproliferative activity in vitro using human cancer cell lines. The higher radical scavenging activity and yield were found in the hydroethanolic extract. Higher phenolic contents were found in the dichloromethanic and hydroethanolic extracts. Only the dichloromethanic extracts exhibited activity against cancer cell lines. Highresolution electrospray ionization mass spectroscopy for the hydroethanolic extract demonstrated the presence of: arctigenin, quercetin, chlorogenic acid and caffeic acid. The hydroalcoholic lyophilized extract was chosen for the experiments in vivo. To study the association of Cd and A. lappa, adult Wistar rats were assigned to four groups: control (C), A.lappa extract (Al), cadmium (Cd) and cadmium plus A. lappa (CdAl). The animals received water or A. lappa hydroethanolic extract (300 mg/Kg BW) by gavage and i.p. injections of saline or 1.2 mg/Kg BW of cadmium chloride. The animals were sacrificed after 7 and 56 days of treatment. The Cd caused reduction in testis, epididymis and seminal vesicle weights, seminiferous tubule (ST) proportion, total length of ST and ST diameter. Degenerated germ cells and multinucleated aggregates were observed in ST and progressive damage resulted in tubules lined only with Sertoli cells. There was a decreased in tubular proportion and increased epithelial height in epididymis after 56 days. Cd caused an increase in plasma GOT and GPT levels after 56 days, but A. lappa extract improved these levels. No relevant alteration was observed in liver transaminase levels. After 7 days, the Cd group showed decrease in hepatocyte proportion and increase sinusoid capillary proportion, also the nuclear density decrease. However, after 56 days, only the hepatocyte nuclear density decreased. In Al and CdAl groups, after 7 days, the hepatocyte nuclear proportion increased and the cytoplasmic decreased, with no alteration in capillary sinusoid proportion. In Al and CdAl groups, after 56 days, hepatocyte nuclear proportion increased and the sinusoid capillary proportion decreased. Also, an increase of hepatocyte nuclear density was observed in Al and CdAl groups. This study revealed that low doses of Cd cause progressive morphological and morphometrical alterations on rat testis and that Cd has a subtle toxic threshold. The dichloromethanic extracts showed antiproliferative activity against K562, MCF-7 and 786-0 human cancer cell lines. The hydroethanolic extract showed higher free radical scavenger activity and higher phenolic content, and was chosen as the best extract for the "in vivo" studies. A. lappa hydroethanolic extract was ineffective in protecting the testis and epididymis against Cd-induced damage, however effectively protected liver tissue. / Doutorado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural