Orientadores : Fernando Cendes, Iscia Lopes-Cendes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T00:09:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kobayashi_Eliane_D.pdf: 30285141 bytes, checksum: fd773afad78e35900a7d3566093e79cb (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: As epilepsias familiares têm sido estudadas de forma abrangente nas últimas décadas e recentemente as formas familiares de epilepsia de lobo temporal (ELT) foram incluídas na nova classificação de síndromes epilépticas. Podemos dividir as ELT familiares conforme a semiologia das crises em mesial (ELTMfamiliar) e laterallneocortical(ELTLfamiliar). Na ELTMfamiliar os pacientes podem apresentar diferentes graus de severidade da epilepsia, desde remissão espontânea até crises refratárias. Atrofia hipocampal (AR) à ressonância magnética (RM) é freqüente e até o momento não foi esclarecida a base molecular envolvida na ELTMfamiliar....Observação: O resumo, na integra, podera ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Two forms of familial temporallobe epilepsy (FTLE) are recognized according to seizure semiology: mesial (Familial MTLE) and lateraVneocortical(Familial LTLE). Although originally described as benign and non-Iesional, Familial MTLE has later been well characterized by the presence of both refractory patients and hippocampal atrophy (HA) on magnetic resonance images (MRI). To date, no genes have been identified. Familial LTLE is a OOnignepilepsy syndrome linked to chromosome 10q, with auditory auras, and no MRl abnormalities....Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Ciências Médicas

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Submitted by ROBERTO PAULO CORREIA DE ARAÚJO (ppgorgsistem@ufba.br) on 2016-10-18T15:36:56Z No. of bitstreams: 1 Rita Maria Alves.pdf: 3826606 bytes, checksum: d5fef179f5e40e342bb650992418ddf6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-18T15:36:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rita Maria Alves.pdf: 3826606 bytes, checksum: d5fef179f5e40e342bb650992418ddf6 (MD5) / A epilepsia é um distúrbio milenar do cérebro causado por persistente predisposição a crises epilépticas, capazes de provocar consequências neurobiológicas, cognitivas e psicossociais. Cerca de 50 milhões de pessoas no mundo têm epilepsia, entretanto, quando tratadas adequadamente, 70% delas conseguem controlar as crises. A Medicina da era pós-genômica tem permitido a compreensão de como os fatores genéticos influenciam, determinam ou causam suscetibilidade para o surgimento das epilepsias através de metodologias que permitem avaliação do inteiro genoma pelas técnicas de sequenciamento de ultima geração como painéis de genes e CGH-Array. Verificar alterações genéticas em indivíduos com diferentes formas de epilepsia através das ferramentas de última geração, além de verificar recorrência destas alterações no âmbito familiar, discutindo os diferentes impactos causados a nível psicológico, social e econômico nas famílias estudadas constituíram objetivos deste estudo. Foram determinados três grupos de pacientes: 1º composto por pacientes com história de recorrência familiar do fenótipo epiléptico; 2º pacientes com encefalopatias epilépticas; 3º por indivíduos com forma atípica de Epilepsia Rolândica. Resultados das análises por CGH-Array de 51 pacientes geraram 66 CNV’s avaliáveis: 26 >400kb; 16>100 e <400kb; 24 entre 60 e 100Kb. Painel NGS de 16 pacientes com encefalopatias epilépticas gerou 124 variantes gênicas, sendo 25% dos indivíduos validados para 4 diferentes mutações raras. No grupo 3 não foram encontrada mutações no único gene sequenciado (GRIN2A), sendo revelado polimorfismo não sinônimos em dois dos 11 indivíduos avaliados. A avaliação familiar revelou alto índice de recorrência familiar de epilepsia, tendo uma das famílias segregado 3 tipos de CNV’s com fenótipos clínicos associados por 4 gerações. Conclusão: A evolução do conhecimento, tratamento e, em alguns casos, cura da epilepsia seguiu a evolução do conhecimento médico, científico e tecnológico, existindo um real benefício para a população acometida por essa enfermidade em face à rapidez no diagnóstico, o início da terapêutica com consequente melhora no prognóstico, sendo a genética um aspecto importante a ser considerado. Estudar a história familiar de indivíduos com epilepsia possibilita a geração de indicadores que servem para tomadas de políticas públicas em beneficio destes pacientes.

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Resumo: Introdução: MERRF é uma doença mitocondrial caracterizada por mioclonia, epilepsia e fibras vermelhas rasgadas (RRF) na biópsia muscular. Objetivo: Conhecer as características de pacientes com MERRF, acompanhados no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná, para: (1) caracterizar suas manifestações clínicas, laboratoriais, eletrofisiológicas e morfológicas; e (2) determinar mutações do gene do RNA transportador de lisina (tRNALys) do DNA mitocondrial (DNAmt). Material e Métodos: Os 6 pacientes com MERRF foram analisados com base nas manifestações clínicas, laboratoriais, neurorradiológicas, eletrocardiográficas, eletroneuromiográficas e eletroencefalográficas. A biópsia muscular foi avaliada principalmente pelas colorações do tricromio de Gomori modificado (MGT), desidrogenase succicínica (SDH) e citocromo c oxidase (COX). O DNAmt foi extraído de material proveniente de biópsia muscular sendo o gene tRNALys analisado por reação em cadeia de polimerase com polimorfismo do comprimento dos fragmentos de restrição (PCR/RLFP) e sequenciamento direito. Resultados: O tempo de progressão da doença variou de 2 até 15 anos. Mioclonia e epilepsia estavam presentes em todos os pacientes e os outros sintomas relatados foram ataxia cerebelar, fraqueza muscular, neuropatia periférica, lipomas múltiplos, cefaléia, vômitos, demência, ptose palpebral, oftalmoparesia e intolerância ao exercício. As crises epilépticas foram controladas em todos os pacientes com o uso de medicação antiepiléptica. O nível de ácido lático sérico foi aumentado em 5 pacientes. O eletroencefalograma mostra atividade epileptiforme generalizada em 5 pacientes e resposta foto sensitiva generalizada durante a fotoestimulação intermitente em 2 pacientes. O estudo das imagens do crânio revelou atrofia cortical de cérebro e cerebelo em 4 pacientes. As RRF ocorreram em todos os pacientes na coloração pelo MGT e reação pela SDH; sendo a frequência acima de 2% de RRF encontrada em 66,6% dos pacientes tanto na coloração pelo MGT quanto pela SDH. A análise pela reação da COX mostrou atividade deficiente em 5 pacientes. Vasos com forte reação para SDH (SDH+) não foram encontrados. O estudo molecular do gene tRNALys por PCR/RLFP e sequenciamento direto mostrou a mutação A8344G no DNAmt em 5 pacientes. Conclusões: Os pacientes com MERRF têm variação na apresentação de suas manifestações clínicas, sendo que alterações típicas de MERRF, como mioclonia, epilepsia generalizada, ataxia cerebelar, fraqueza muscular e acidose lática podem ser encontradas na maioria dos pacientes. A deficiência de COX ocorre na maioria dos pacientes com MERRF. A reação histoquímica para SDH é semelhante à coloração pelo TGM na identificação de RRF. A falta de vasos SDH+ na biópsia muscular não exclui o diagnóstico da doença. A mutação de ponto A8344G do DNAmt é a mais frequente relacionada com MERRF.

Orientador: Iscia Teresinha Lopes-Cendes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T12:37:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Murai_MarceloJun_D.pdf: 2432622 bytes, checksum: 77473c64f1b333e9164100a3c525b735 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Os genes LGI1 e EFHC1 não codificam canais iônicos; entretanto, afetam indiretamente a corrente nesses canais em síndromes epilépticas determinadas geneticamente. O gene LGI1 (do inglês Leucine-rich, glioma inactivated gene 1) está relacionado à epilepsia parcial autossômica dominante com sintomas auditivos. Recentemente, observou-se a interação de LGI1 com ADAM22 em um complexo que possivelmente regula a transmissão sináptica. A forma mutante da LGI1 é incapaz de se ligar à ADAM22, o que fortalece a hipótese de um mecanismo relacionado à perda de função nesta síndrome epiléptica. O gene EFHC1 (do inglês EF-hand domain C-terminal containing 1) foi encontrado mutado em algumas famílias com epilepsia mioclônica juvenil. Células transfectadas com EFHC1 apresentam maior taxa de apoptose, o que indica uma possível participação em morte celular programada. Clonamos e expressamos as proteínas humanas LGI1 em sua forma inteira (AA 1-557) e a porção C-terminal (AA 224-557; LGI1C), também chamada de domínio epitempina; as formas N-terminal (AA 78-364; EFHC1N), que compreende dois domínios DM10, e C-terminal (AA 403-640; EFHC1C) de EFHC1, formada por um domínio DM10 e um EF-hand putativo. Diversas fusões foram testadas com a proteína LGI1, seja inteira (GST, Trx, SUMO), seja a porção C-terminal (GST, Trx, NusA, MBP e SUMO), em diferentes cepas de Escherichia coli. Obteve-se proteína solúvel com NusALGI1C e MBP-LGI1C; entretanto, só foi possível a captura por cromatografia de afinidade à amilose com a fusão à MBP, na presença ou não da chaperonina GroEL. Apesar do protocolo de purificação de MBP-LGI1C ter sido estabelecido, a clivagem da cauda não foi eficiente, além de apresentar baixo rendimento. Espalhamento de luz dinâmico e SAXS mostraram que a proteína fusionada apresentava-se em um estado de forte agregação. As porções N- e C-terminal de EFHC1 foram clonadas com a fusão SUMO, apresentando alta solubilidade em bactéria. Essas construções foram capturadas em cromatografia de afinidade a níquel e submetidas à clivagem da cauda: obteve-se rendimento próximo de 100% com EFHC1C, enquanto que com a EFHC1N não houve reação. EFHC1C clivada foi separada da cauda e passou por mais um passo de purificação, para polimento. Espectroscopia de dicroísmo circular mostrou que esta porção é composta principalmente por a-hélices e a temperatura de transição foi determinada em 54,5ºC, na presença ou ausência de agente redutor DTT, indicando alta estabilidade. Espalhamento de luz dinâmico e SAXS mostraram que a proteína está monodispersa e modelagem computacional econstituindo o envelope da EFHC1C por SAXS indica uma forma prolata. Em relação à EFHC1N, observou-se a presença de duas populações distintas de proteínas por SAXS e por filtração em gel / Abstract: Non-ion channel genes, as LGI1 and EFHC1, have been shown to indirectly affect ion channel currents in genetically determined epilepsy syndromes. LGI1 (Leucine-rich, glioma inactivated gene 1) is linked to a rare form of partial epilepsy (autosomal dominant partial epilepsy with auditory features, ADPEAF). Recently, LGI1 protein was associated with ADAM22 in a complex that regulates synaptic transmission. The mutated form of LGI1 is incapable of binding to ADAM22, leading to a loss of function mechanism causing ADPEAF. EFHC1 is mutated in some families with juvenile myoclonic epilepsy (JME). It has been observed that EFHC1 transfected cells have a higher rate of apoptosis; therefore, it seems that EFHC1 protein could be involved in programmed cell death. We have successfully cloned and expressed the full form (AA 1-557) and C-terminal epitempin domain of human LGI1 (AA 224-557); and the N-terminus (AA 78-364; named EFHC1N), comprasing two DM10 domains in tandem, and the C-terminus portion of human EFHC1 (AA 403-640; named EFHC1C), comprising one DM10 domain and the EF-hand motif. Several fusion constructs were tested with full LGI1 (GST, Trx and SUMO) and C-terminal half (GST, Trx, NusA, MBP and SUMO) in different Escherichia coli strains. Soluble protein was obtained with NusA-LGI1C and MBP-LGI1C, but only MBP-LGI1C was captured by affinity amilose in the presence or absence of chaperonine GroEL. Despite the fact that we suceffuly established a purification protocol for MBP-LGI1C, tag cleavage presented low yield. Dinamic light scattering and SAXS showed that LGI1C fused to MBP was strongly aggregated. Furthermore, the N- and C-terminal of EFHC1 were cloned with SUMO fusion and showed high solubility in bacteria. These constructions were captured by nickel affinity chromatography and submitted to cleavage reaction. Near complete cleavage was achieved with EFHC1C, but no cleavage was obtained with EFHC1N. SUMO tag was separeted from EFHC1Cand a final purification step was performed. Circular dichroism spectroscopy showed that EFHC1C is composed mainly by a-helices and transition temperature in the presence or absence of reducing agent DTT was 54.5ºC, indicating high stability. Dynamic light scattering and SAXS showed that EFHC1C is in a monodisperse state and presents a prolate shape. EFHC1N presents two different populations of proteins, as determined by SAXS and size exclusion chromatography / Doutorado / Genetica Animal e Evolução / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

A fosfoetanolamina é um dos principais constituintes de membranas neuronais de mamíferos e sua deficiência orgânica está intensamente relacionada com epilepsias e distúrbios do sistema nervoso central. Devido a estas evidências, é de suma importância o conhecimento da influência das propriedades físico-químicas, na forma sólida e líquida e suas inter-relações com possível efeito anticonvulsivo. Buscando elucidar algumas destas questões o presente trabalho teve por objetivos avaliar biologicamente os possíveis efeitos anticonvulsivantes e antiepiléticos da fosfoetanolamina sintética FS e FSI, frente a convulsões induzidas por PTZ e nos estados epiléticos, detectados em EEG, de ratos Wistar epiléticos. Foram utilizadas metodologias específicas para ambas as etapas do estudo, incorporando modelos pré-clínicos de avaliações neurológicas de medicamentos pró-anticonvulsivos. Os resultados apontaram efeito na diminuição da intensidade das crises e de óbitos frente ao modelo de indução de crises por PTZ, e efeito anticonvulsivo da forma líquida e sólida frente ao modelo de ratos geneticamente epiléticos, indicando provável ação neurológica da fosfoetanolamina aos eventos biológicos observados. / Phosphoethanolamine is one of mains the mammals membranes constituent and your organic deficiency is intensely related with nervous system central disturbances and epilepsies. Due to this evidences, it belongs to vanish importance knowledge the influence physicist-chemical properties, in the solid form and liquid form and your interrelations with possible effect anticonvulsive. The present work had for goals to evaluate biologically the possible effects anti convulsive and anti epilepticals of synthetical phosphoethanolamine SF and LF, front the convulsions induced for PTZ and in the epileptic state, detected in EEG, of epileptic Wistar mices. They were going used specific methodologies for both the study stages, incorporating models pre-clinical of anticonvulsivements medications neurological evaluations. The results pointed effect in the crises intensity decrease and of deaths front to the crises induction for PTZ, and effect anti convulsive of the liquid and solid form front the model of epileptic genetically mice, indicating phosphoethanolamine probable has neurological action to the observed biological events.

A fosfoetanolamina é um dos principais constituintes de membranas neuronais de mamíferos e sua deficiência orgânica está intensamente relacionada com epilepsias e distúrbios do sistema nervoso central. Devido a estas evidências, é de suma importância o conhecimento da influência das propriedades físico-químicas, na forma sólida e líquida e suas inter-relações com possível efeito anticonvulsivo. Buscando elucidar algumas destas questões o presente trabalho teve por objetivos avaliar biologicamente os possíveis efeitos anticonvulsivantes e antiepiléticos da fosfoetanolamina sintética FS e FSI, frente a convulsões induzidas por PTZ e nos estados epiléticos, detectados em EEG, de ratos Wistar epiléticos. Foram utilizadas metodologias específicas para ambas as etapas do estudo, incorporando modelos pré-clínicos de avaliações neurológicas de medicamentos pró-anticonvulsivos. Os resultados apontaram efeito na diminuição da intensidade das crises e de óbitos frente ao modelo de indução de crises por PTZ, e efeito anticonvulsivo da forma líquida e sólida frente ao modelo de ratos geneticamente epiléticos, indicando provável ação neurológica da fosfoetanolamina aos eventos biológicos observados. / Phosphoethanolamine is one of mains the mammals membranes constituent and your organic deficiency is intensely related with nervous system central disturbances and epilepsies. Due to this evidences, it belongs to vanish importance knowledge the influence physicist-chemical properties, in the solid form and liquid form and your interrelations with possible effect anticonvulsive. The present work had for goals to evaluate biologically the possible effects anti convulsive and anti epilepticals of synthetical phosphoethanolamine SF and LF, front the convulsions induced for PTZ and in the epileptic state, detected in EEG, of epileptic Wistar mices. They were going used specific methodologies for both the study stages, incorporating models pre-clinical of anticonvulsivements medications neurological evaluations. The results pointed effect in the crises intensity decrease and of deaths front to the crises induction for PTZ, and effect anti convulsive of the liquid and solid form front the model of epileptic genetically mice, indicating phosphoethanolamine probable has neurological action to the observed biological events.

Orientadores: Evandro Pinto da Luz de Oliveira, Gabriela Castellano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T10:45:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Baldissin_MauricioMartins_M.pdf: 5835466 bytes, checksum: 04b04142d756e7073a038bb534379770 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: As epilepsias refratárias compreendem síndromes para as quais as terapias que empregam duas ou mais drogas antiepilépticas (DAEs), isoladamente ou em associação, não resultam no controle da frequência das crises. Portadores podem apresentar displasias corticais focais (DCFs) ou difusas e/ou alterações atróficas hipocampaise,em alguns casos, não são detectáveis por uma simples análise visual nas imagens de ressonância magnética (RM). Nesse contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar a textura de imagens de RM em regiões de interesse (ROIs) localizadas nos hipocampos, córtex de associação límbico e córtex pré-frontal de 20 pacientes com epilepsia refratária e compará-las às mesmas áreas de um grupo de 20 sujeitos sadios. As imagens de RM desses pacientes não apresentavam alterações visualmente detectáveis. A abordagem utilizada para a estimativa de parâmetros de textura foi a matriz de coocorrência de níveis de cinza (MCO). Dos 11 parâmetros de textura calculados, sete indicaram a existência de diferenças estatisticamente significantes entre pacientes e controles. Tais achados sugerem que a técnica de análise de textura pode contribuir para os estudos das epilepsias refratárias, e possui potencial para servir de auxílio no diagnóstico destas síndromes / Abstract: Refractory epilepsies are syndromes for which the therapies that use two or more antiepileptic drugs (AEDs), in a single way or together, do not result in the control of the frequency of the crises. The patients can present diffuse or focal cortical dysplasia (FCDs) and/or hippocampus atrophic changes that, in some cases, are not detectable by a simple visual analysis of the magnetic resonace (MR) images. In this context, the objective of this study was to assess the MR images texture in regions of interest (ROIs) placed in the hippocampi, limbic association cortex and prefrontal cortex of 20 patients with refractory epilepsy, and compare them with the same areas of a group of 20 healthy individuals. The MR images of these patients did not present visually detectable changes. The approach used for estimating the texture parameters was the gray level coocurrence matrix. Out of the 11 texture parameters calculated, seven indicated the existence of statistically significant differences among patients and controls. These findings suggest that the technique of texture analysis can contribute for the study of refractory epilepsies, and has potential to serve as an aid in the diagnosis of these syndromes / Mestrado / Neurologia / Mestre em Ciências Médicas