Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-04-25T12:38:47Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4136291 bytes, checksum: f66711234c1f446cfe714838bcc10b9f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-25T12:38:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4136291 bytes, checksum: f66711234c1f446cfe714838bcc10b9f (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / As folhas e raízes de Pfaffia glomerata são usadas como afrodisíacos, tranquilizantes e antirreumáticos. Devido à ausência de dados científicos experimentais faz-se necessário estudos que identifiquem suas propriedades medicinais. Baseado nisso objetivou-se avaliar o efeito de extrato hidroalcoólico da raiz de P. glomerata (BGE) sobre o parênquima testicular, espermáticos e fertilidade. Camundongos adultos (n=60) foram divididos em controle (água), Citrato de sildenafila (7mg/kg) e 3 grupos recebendo doses diárias (100, 200 e 400 BGE mg/Kg) e uma dose intermitente (200 BGE mg/Kg a cada três dias) por 42 dias. Após a ingestão do extrato, houve redução na proporção de túbulo e epitélio seminíferos, aumento do volume de túnica própria e redução do número de células de Sertoli, sem prejuízo a produção espermática. Entretanto, o BGE promoveu morte celular e alteração na frequência de estádio dos túbulos, além do aumento de óxido nítrico. Verificou-se também aumento do percentual e volume de vasos sanguíneos e espaço linfático, redução da testosterona, aumento do estradiol e morte de células de Leydig. Observou-se aumento de corpos cavernosos, aumento de colágeno, redução do músculo liso e aumento do óxido nítrico peniano. O tratamento causou ainda redução no número e viabilidade de espermatozoides, estes apresentavam altos índices de patologias, como espaços vacuolares, degeneração e descamação. Baixo percentual de espermatozoides com membrana íntegra e alterações na motilidade, leva ainda a perdas embrionárias. O princípio de ação do extrato baseia-se na produção de NO, atuando sobre os vasos sanguíneos aumentando os corpos cavernosos. O tratamento leva ainda redução do músculo liso peniano, danos nas células de Leydig, acumulo de gotículas de lipídios no seu citoplasma levando, inclusive, à morte da célula de Leydig e o aumento do NO. O extrato atua também aumentando ROS, culminando com danos de DNA, que leva a perdas embrionárias. Porém embora o quadro leve a aparente redução da atividade sexual, o aumento de estradiol e colágeno é uma forma de compensação e assim da manutenção da atividade sexual. Assim, o ginseng brasileiro tem ação afrodisíaca, porém com efeitos colaterais na produção de testosterona e na viabilidade das células germinativas. / The leaves and roots of Pfaffia glomerata are used as aphrodisiacs, tranquillizers and antirheumatics. Due to the lack of experimental scientific data, studies are necessary to identify its medicinal properties. Based on this the objective was to evaluate the effect of hydroalcoholic extract of the P. glomerata root (BGE) on the testicular parenchyma, spermatozoa and fertility. Adult mice (n = 60) were divided into control (water), sildenafil Citrate (7mg / kg) and 3 groups receiving daily doses (100, 200 and 400 BGE mg / kg) and an intermittent dose (200 BGE mg / kg every three days) for 42 days. After ingestion of the extract, there was a reduction in the proportion of seminiferous tubule and epithelium, increase of the own tunica volume and reduction of the number of Sertoli cells, without prejudice to sperm production. However, BGE promoted cell death and a change in tubule stage frequency, in addition to an increase in nitric oxide. There was also an increase in the percentage and volume of blood vessels and lymphatic space, reduction of testosterone, increase of estradiol and death of Leydig cells. There was an increase of cavernous bodies, increase of collagen, reduction of smooth muscle and increase of penile nitric oxide. The treatment also caused a reduction in the number and viability of spermatozoa, which presented high rates of pathologies, such as vacuolar spaces, degeneration and desquamation. Low percentage of spermatozoa with whole membrane and alterations in the motility, still leads to embryonic losses. The principle of action of the extract is based on the production of NO, acting on the blood vessels increasing the cavernous bodies. The treatment also leads to reduction of the penis smooth muscle, Leydig cell damage, accumulation of lipid droplets in its cytoplasm leading to Leydig cell death and increased NO. The extract also works by increasing ROS, culminating with DNA damage, leading to embryonic losses. However, although the picture leads to the apparent reduction of sexual activity, the increase of estradiol and collagen is a form of compensation and thus the maintenance of sexual activity. Thus, Brazilian ginseng has an aphrodisiac effect, but with side effects on testosterone production and germ cell viability.

Este estudio, se espera contribuya al conocimiento de la biología celular en los gametos de ovinos de la raza Junín por los pocos estudios en poblaciones espermáticas de estos ovinos, se han descrito las principales características de la membrana espermática como son su estructura y función, las cuales son importantes para establecer el grado de potencial fértil en las poblaciones de espermatozoides, el cual fue alto al correlacionar los efectos de la eosina y la prueba hipoosmótica con los valores de morfología y motilidad; valores éstos que indicarían que se usaron poblaciones de espermatozoides que permitan lograr resultados positivos en programas de mejora genética usando inseminación artificial y fecundación in vitro, además de conservar una fuente de recursos genéticos. Los objetivos del presente trabajo fueron evaluar la estabilidad de la cromatina en espermatozoides de ovino (5 machos) y asociarla con la integridad de membrana estructural y fisiológica, además de su relación con la tasa de preñez (75 borregas). El diseño experimental usado para evaluar los grados de compactación de la cromatina de espermatozoides de ovinos Junín fue el de Parcelas Divididas (Split Plot), que han interactuado con el tiempo de muestreo y las técnicas empleadas (BB, SDS y EDTA) que tuvieron una alta significancia entre los grados de compactación, así como entre los meses y el grado de compactación, sin importar cual es el animal evaluado. Los resultados muestran que las diferencias entre las técnicas no son significativas, pero si entre los grados de compactación (P menro 0.0001). La interrelación entre las técnicas y los grados de compactación es muy significativa (P menor 0.0001). La correlación entre la integridad de membrana estructural (eosina) y fisiológica (hiposmótico) con morfología y motilidad tienen un P menror 0.002. Con relación a la tasa de preñez, se tiene un P mayor 0.05, luego del empadre con los cinco ovinos machos se han obtenido altos porcentajes de parición (mayor 75%) lo que nos dice del potencial fértil en los machos cuyas muestras de semen se estudiaron. Se concluye, que en general, la técnica para ver los grados de compactación de la cromatina tiene una alta probabilidad en poder dar un diagnóstico inicial del futuro potencial fértil de poblaciones de espermatozoides en la especie ovina. / This study should contribute to knowledge of gametes cell biology in Junin rams, because few researchs on the sperm population of Junin ram. It has been described the main characteristic of the plasmatic membrane like its structure and physiology, both of them are important in order to state if there was activity of predicting fertility in sperm populations, that is was very high relationship between effects of eosin and hypoosmotic swelling test with values of morphology and motility, these values are common in test to evidence that we were working with sperm populations in order to achieve positives outcomes in genetic improvement programs using artificial insemination and in vitro fertilization, besides to conserve a source of genetics resources. The objective of this research was to evaluate nuclear chromatin stability in ram sperm (5 rams) and the association with structural and functional integrity of ram membrane beside its relation with pregnancy rate (75 sheeps). The experimental design was Split Plot to evaluate nuclear condensation of sperm chromatin in Junin rams, they are interacted with each month and used techniques (BB, SDS, and EDTA), they had high significance between nuclear condensation values, no matter which animal was evaluated. Besides differences between treatments are no significant but so between nuclear condensations values (P less 0.0001). The relationship between structural and functional integrity of membrane with morphology and motility was (P less 0.002). With regard to pregnancy rate (more 75%), it was said about fertility potencial of rams sperms populations that were studied. It was concluded in general that techniques to evaluate nuclear condensation values does have a high likelihood to give diagnosis about future potential of sperm populations in Junin ram.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-08-23T16:12:27Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3646112 bytes, checksum: f1a6c721888bd52e1c4afd8a86ddb623 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-23T16:12:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3646112 bytes, checksum: f1a6c721888bd52e1c4afd8a86ddb623 (MD5) Previous issue date: 2017-07-07 / A caracterização morfológica do sistema reprodutor e dos espermatozoides tem sido reconhecida como uma fonte de caracteres para análises taxonômicas e filogenéticas. Tal caracterização tem se mostrado uma importante ferramenta na elucidação de questões da biologia reprodutiva e sistemática de diversos grupos de insetos. Nesse contexto, descrevemos, usando as microscopias de luz e eletrônica de transmissão, a morfologia do sistema reprodutor e dos espermatozoides de Martarega bentoi (Notonectidae) e Ornithocoris pallidus (Cimicidae), contribuindo com dados relevantes para a sistemática e biologia reprodutiva destas famílias, bem como para Heteroptera em geral. Os testículos de M. bentoi, possuem dois folículos espiralados e forma de caracol. A disposição lado a lado de cistos com células germinativas nas diferentes fases da espermatogênese pode ser uma característica do gênero Martarega. Cada feixe contém 64 espermatozoides, medindo aproximadamente 2.800 μm. Os espermatozoides exibem características observadas, até o momento, apenas nesta espécie: (1) acrossomo extremamente longo, com duas regiões; (2) base do núcleo terminando abruptamente com duas cavidades onde estão inseridas os derivados mitocondriais. Os espermatozoides de M. bentoi possui derivados mitocondriais bastante assimétricos e exibem duas inclusões paracristalinas e pontes ligando-os ao axonema. Entre as espécies de Notonectidae observadas até o momento, algumas características parecem ser exclusivas de M. bentoi, por exemplo, o número de espermatozoides por cisto, o tamanho do espermatozoide, a assimetria em tamanho e forma dos derivados mitocondriais e a inserção destes na base do núcleo. No segundo capítulo descrevemos o sistema reprodutor e espermatozoides de O. pallidus. Cada um dos dois testículos tem sete folículos, os quais se esvaziam de espermatozoides após a maturação sexual, quando as vesículas seminais se tornam totalmente cheias de espermatozoides. Os espermatozoides de O. pallidus exibem ultraestrutura bastante semelhante àquela de outras espécies proximamente relacionadas à Cimicidae, nos levando a supor que, aparentemente, a inseminação traumática não exerceu qualquer pressão seletiva sobre a morfologia dessas células. Contudo a sua produção em grande quantidade e restrita à fase de maturação sexual dos machos nos parece ter relação à condição hematofágica do cimicídeos. Ainda, a uniformidade morfométrica observada nos espermatozoides dessa espécie pode ser decorrente do alto risco de competição espermática somada às condições inóspitas da cavidade hemocélica da fêmea. Com base em todos os dados apresentados, podemos concluir que o sistema reprodutivo masculino e os espermatozoides dessas duas espécies estudadas, mostraram características comuns aos demais Heteroptera, outras comuns às espécies mais próximas e, ainda, algumas que, até então, são exclusivas à cada uma dessas espécies. Essas informações podem contribuir para esclarecer questões da biologia reprodutiva e sistemática desses grupos de insetos. / The morphological characterization of the reproductive system and the spermatozoa has been recognized as a source to taxonomic and phylogenetic analysis. This characterization corresponds an important tool in the elucidation of questions of the reproductive biology and systematic of several groups of insects. In this context, using light and transmission electron microscopy we described the morphology of the male reproductive system and the spermatozoa of Martarega bentoi (Notonectidae) and Ornithocoris pallidus (Cimicidae), contribution in the systematic of these two families and in general to Heteroptera. The testes of M. bentoi have two spiral format follicles and are snail shape. The side-by-side arrangement of the germinative cells in different phases of the spermatogenesis may be a characteristic of the Martarega genus. Each bundle contains 64 sperm, measuring approximately 2,800 μm. The spermatozoa exhibit characteristics observed so far only in this species: 1) extremely long acrosome with two regions; 2) base of the nucleus ending abruptly with two cavities where the mitochondrial derivatives are inserted. The spermatozoa of M. bentoi have rather asymmetric mitochondrial derivatives and exhibit two paracrystalline inclusions and bridges linking them to the axoneme. Among the species Notonectidae observed to date, some characteristics appear to be unique to M. bentoi, for example, the number of spermatozoa per cyst size of the sperm, the asymmetry in size and shape of mitochondrial derivatives and their insertion in the base of the nucleus. In the second chapter we describe the reproductive system and spermatozoa of O. pallidus. Each testicle has seven follicles which become empty of reproductive cells after sexual maturation of the male, and then the vesicles have full of sperm cells. The spermatozoa of O. pallidus show ultrastructure similar with other related species with Cimicidae, which leading us to suppose that apparently the traumatic insemination does not selective pressure in the morphology of these cells. However, the production in big quantity of spermatozoa and its restriction at the sexual maturation phase seem be related with the hematophagic condition of the cimicids. Moreover, the morphometric uniformity of the spermatozoa observed in this species may bedue to the high risk of the sperm competition, and in addition to the inhospitable condition into the female hemocellic cavity. In base at the data presented, we can conclude that the male reproductive system and the spermatozoa of the four species studied exhibited common characters with the other Heteroptera, some ones common to the nearest species, and others ones that until then are unique to each species. This information can contribute to clarify issues of reproductive biology ans systematics of these groups of insects.

EVANGELISTA, Danielle Rosa. Análise do líquido pré-ejaculatório e sua relação com a eficácia do coito interrompido. 2012. 88 f. Tese (Doutorado em Enfermagem) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-20T13:15:11Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_drevangelista.pdf: 2317305 bytes, checksum: dd42e479ec27f2919751d6fb5a4d0b5d (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-20T13:15:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_drevangelista.pdf: 2317305 bytes, checksum: dd42e479ec27f2919751d6fb5a4d0b5d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-20T13:15:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_drevangelista.pdf: 2317305 bytes, checksum: dd42e479ec27f2919751d6fb5a4d0b5d (MD5) Previous issue date: 2012 / O coito interrompido é um método de anticoncepção usado desde a antiguidade, por homens de todas as idades, credos e raças, perpetuando-se aos dias atuais. Apesar disto, dúvida quanto à presença de espermatozoides no líquido pré-ejaculatório, em quantidade e qualidade viáveis à fecundação, permanece como lacuna do conhecimento. Neste contexto, estabeleceu-se a tese: ausência de espermatozoides no líquido pré-ejaculatório de homens com espermograma normal contribui para eficácia do coito interrompido. Para sua defesa, realizou-se pesquisa transversal, laboratorial, com objetivo de analisar o método anticoncepcional coito interrompido nas perspectivas de prevalência do uso, percepções masculinas e prova laboratorial do líquido pré-ejaculatório. Foi realizado no Hospital Geral de Fortaleza (Hospital do Exército), Ceará, Brasil, com 43 homens, quantitativo máximo atingido no período delimitado para coleta de dados, junho a novembro de 2012. Os critérios de inclusão foram: idade mínima de 18 anos e laudo do espermograma normal. Realizou-se entrevista seguindo formulário pré-estabelecido. Após responderem à entrevista, os participantes eram exaustivamente orientados e preparados pela autora para coleta do líquido pré-ejaculatório e do sêmen. Os dados foram processados pelo Statistical Package for the Social Sciences versão 18.0 e analisados por meio de estatística descritiva e para comparação de médias foram utilizados os testes t de Student e de Mann-Whitney. As proporções entre a presença ou não de espermatozoides foram comparadas por meio do teste z para proporções. Para todas as análises, fixou-se como estatisticamente significante p<0,05. Falas de participantes foram tomadas para ilustrar pontos relevantes da discussão. A idade dos homens foi em média de 33,2±8,6; média de anos de estudo foi de 10,6±1,74 anos; 39 (90,7%) relataram companheira fixa; a renda mensal teve média de R$ 1789,50±1300,00; 31(72,1%) homens não tinham filhos; 37 (86,0%) não utilizavam métodos anticoncepcionais e 2 (4,7%) homens afirmaram uso do CI como método; 29 (67,4%) haviam praticado CI alguma vez; interromper o coito para ejacular fora da vagina foi o principal obstáculo apresentado pelos homens; predominou a crença da baixa eficácia do CI. Dos 43 (100%) participantes, 37 (86,0%) conseguiram coletar o sêmen e destes, todos tiveram o laudo do espermograma normal; 33 (89,1%) conseguiram coletar o líquido pré-ejaculatório e destes, apenas dois (6,0%) apresentaram raros espermatozoides no líquido pré-ejaculatório, sendo o tempo médio entre a última ejaculação e a coleta de espécimes de 4,24±3,07 dias. Aplicando-se o teste z de proporção e comparando a proporção dos que não apresentaram espermatozoides no líquido pré-ejaculatório (0,94) com os que apresentaram (0,06), pode-se afirmar que a presença de espermatozoides no líquido pré-ejaculatório, na amostra estudada, foi devido ao acaso (p<0,0001). Homens com espermograma normal não apresentam espermatozoides no líquido pré-ejaculatório. Mediante o exposto, confirma-se a tese de que a ausência de espermatozoides no líquido pré-ejaculatório de homens com espermograma normal contribui para eficácia do coito interrompido.

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-19. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:47Z : No. of bitstreams: 1 000830769.pdf: 1005277 bytes, checksum: e3ffa947a5be2ea93e697193dae38e25 (MD5) / Por muito tempo Mazama nemorivaga foi considerado sinonímia de Mazama gouazoubira. Atualmente são consideradas espécies distintas conhecidas como Mazama cinzas brasileiros. Apesar de serem morfologicamente identificados como Mazama, há indícios genéticos que estas duas espécies devam ser separadas em dois novos gêneros. Uma forma de contribuir para resolução desta complexidade taxonômica é caracterizar e descrever detalhadamente cada uma das espécies no intuito de auxiliar os estudos filogenéticos, fundamentais para discutir esse problema. Assim, utilizamos dados sobre as características espermáticas para fazer comparações entre as espécies. Através de análises multivariadas discriminantes, de dados de morfometria espermática, identificamos as principais diferenças entre os espermatozoides das duas espécies. Utilizando as técnicas de eletroforese SDS-PAGE bidimensional e espectrometria de massa ESI-Q Tof, comparamos a constituição de proteínas do plasma seminal. Neste trabalho observamos que existem diferenças importantes na dimensão e no formato da cabeça dos espermatozoides das duas espécies, sendo a área e a largura as principais variáveis que as diferenciam. Através das análises discriminantes conseguinos separá-los adequadamente entre os dois grupos de espécies, M. gouazoubira e M. nemorivaga. Ao compararmos o perfil de proteínas totais do plasma seminal, observamos diferenças na distribuição dos spots no gel de poliacrilamida. Além disso, grupos distintos de proteínas foram identificadas no plasma seminal de cada uma das espécies. Esses resultados demonstraram que M. gouazoubira e M. nemorivaga possuem diferenças significativas nas características seminais, o que reforça a hipótese de que dois novos gêneros devem ser criados para cada uma das espécies estudadas / Brazilian gray deers are represent by two species: Gray brocket deer (Mazama gouazoubira) and Amazonian brocket deer (Mazama nemorivaga). They belong to genus Mazama, but there are genetic evidence to separate them into two different genera. To contribute to this discution about Mazama taxonomic complexity, we decide to characterize and describe the seminal plasma, of these species, in detail. We performed multivariate analisis to compare sperm morphometry data and identify the main differences between two species. We also used two-dimensional electrophoresis SDS-PAGE techniques and mass spectrometry ESI-Q TOF to compare the constitution of seminal plasma. As result, we found important differences on dimension and shape of the head sperm, being area and width the main variables that differentiate them. Using discriminant analysis, we properly separate them into two groups of species, M. gouazoubira and M. nemorivaga. Comparing the protein profile of the seminal plasma, we observed differences in the distribution of spots, and were identified different groups of proteins in seminal plasma of the distinct species. These results demonstrated that M. gouazoubira and M. nemorivaga have significant differences in the semen characteristics that reinforce the hypothesis that these two species may be separated into two new genera

Orientador: Marion Burkhardt de Koivisto / Banca: Lúcia Helena Rodrigues / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: César Roberto Esper / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: Os objetivos deste projeto de pesquisa foram testar se a qualidade espermática, e a integridade da cromatina são diferentes em um grupo de touros Nelore jovens, adultos e senis. Três ejaculados, de 40 touros Nelore foram subdivididos em três faixas etárias: de 1,8 a 2 anos - Grupo Jovens, de 3,5 a 7 anos - Grupo Adultos e de 8 a 14,3 anos - Grupo Senis. As amostras foram avaliadas quanto à motilidade, o vigor, teste de termoresistência lento (TTL), análise computadorizada do movimento espermático (CASA), avaliação simultânea da integridade da membrana plasmática e do acrossoma, potencial mitocondrial, protaminação espermática, danos de DNA causados por radicais livres, suscetibilidade a denaturação da cromatina, pelos testes "Sperm Cromatin Structure Assay" (SCSA) e laranja de acridina (AOT), e danos na cromatina com a técnica TUNEL. Os animais jovens apresentaram valores superiores de motilidade e vigor antes e após o TTL, e maior porcentagem de células com alterações morfológicas, assim como maior porcentagem de espermatozóides com membrana e acrossoma íntegros e com alto potencial mitocondrial, estes parâmetros tiveram os menores índices nos animais senis (P<0,05). Nas avaliações da integridade do DNA, os touros jovens apresentaram maior porcentagem de deficiência de protaminação, enquanto os senis danos por oxidação. No teste SCSA os touros mais jovens e mais idosos apresentaram maiores índices de danos na cromatina, diferindo dos demais (P<0,05). O teste de TUNEL não apresentou resultados satisfatórios. Estes resultados permitem concluir que touros jovens apresentam qualidade espermática superior, seguidos pelo grupo de animais adultos, e finalmente um declínio na qualidade nos diversos parâmetros estudados para o grupo de animais senis. Quanto à integridade... (Complete abstract click electronic access below) / Abstract: The aims of this study were to test if sperm quality and chromatin integrity are different in young, adult and senile Nelore Bull cryopreserved semen samples. Three ejaculates from 40 Nelore bulls were divided by age in three groups: 1,8 to 2 years - Young Bulls, from 3,5 to 7 years - Adult Bulls and from 8 to 14,3 years - Senile Bulls. Samples were evaluated for: motility, vigor, slow termoresistance test (TTL), computadorized sperm movment analyses (CASA), simultaneous evaluation of plasmatic membrane and acrosome integrity, mitochondrial potential, sperm protamination, DNA oxidation damages, Sperm Cromatin Structure Assay (SCSA) and acridine orange test (AOT), and TUNEL. Young animals presented better values for motility and vigor before and after TTR , intact membrane and acrosome and high mitochondrial potential, but higher values for sperm defects, (P<0.05). On DNA integrity evaluations, Young Bulls presented more protamination problems while senile bulls guanine oxidation defects, both groups were more susceptible to DNA denaturation on SCSA (P<0.05). TUNEL results were not satisfatory. The results indicates that Young bulls may have a high quality sperm sample after freezing, followed by the adults and finally there is a decrease in quality on senile bulls group, nevertheless the results would probably not compromised the samples approval for commercial use. Regarding DNA integrity, Young and senile bulls are more susceptible to DNA damage, nevertheless the etiology of the damage seems to be different, by protamine deficiency in Young bulls and by oxidation in senile animals / Doutor

Orientadores : Sonia Nair Bao, Guarino Rinaldi Colli / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T13:41:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garda_AdrianAntonio_M.pdf: 12614035 bytes, checksum: 2561da6718e2fd4cd9afdce4700d276e (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: As relações filogenéticas entre anuros permanecem mal resolvidas, qualquer que seja o nível taxonômico em questão. Reconstruções baseadas em dados. Morfológicos tradicionais não foram capazes de fornecer soluções consistentes para uma compreensão da história evolutiva do grupo. Recentemente, a ultra-estrutura do espermatozóide tem sido utilizada para avaliar as relações entre as famílias de muitos grupos de vertebrados, inclusive anfíbios. Todavia, a ausência de dados para muitas famílias impede uma reconstrução filo genética com base nesses novos caracteres. A presente tese descreve pela primeira vez a ultra-estrutura de anuros de três famílias neotropicais (Dendrobatidae, Microhylidae e Pseudidae) e as implicações evolutivas derivadas dessas observações. Ainda que o número de famílias descritas não possibilite a utilização desse rol de dados para uma análise de parcimônia das famílias de anuros, um grupo de 22 caracteres pôde ser proposto para a classe com base nos presentes dados e na literatura / Abstract: Phylogenetic relationships among anurans remain poor1y resolved, regardless of the taxonomic level under study. Reconstructions based on traditional morphological data did not result in well corroborated solutions. Recent1y, sperm ultrastructure has been used to evaluate relationships among several vertebrate families, including anurans. Nevertheless, the lack of descriptions for several families hinders the possibility of using such data in phylogenetic reconstruction. This thesis describes, for the first time, the ultrastructure of three neotropical anuran families (Dendrobatidae, Microhylidae, and Pseudidae) and evaluates the evolutionary implications for these families. Even though the number of families described is still small for a good phylogenetic analysis, we present 22 characters that can be used in phylogenetic reconstruction / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

El objetivo de esta tesis fue el de reunir información sobre la bioquímica de los lípidos con ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) de larga y muy larga cadena (VLCPUFA) que abundan en células del tracto reproductor masculino. Utilizando ratas adultas como modelo, se investigaron tres sistemas: el tejido testicular in vivo, influido por agentes que afectan la espermatogénesis, células germinales en dos etapas distintas de su diferenciación, aisladas a partir del epitelio seminífero, y espermatozoides maduros, aislados de la región caudal del epidídimo. La primera parte se centró en buscar evidencia que permitiera relacionar los lípidos en estudio con los tipos celulares presentes en los túbulos seminíferos, células germinales y de Sertoli. Se estudiaron los efectos in vivo de dos agentes que se sabe inducen la muerte de células germinales: la ciclofosfamida y la exposición a los rayos X. Algunos de los efectos tempranos de la muerte celular sobre los lípidos en estudio pudieron observarse luego de la administración de una dosis única de ciclofosfamida, mientras que las consecuencias a largo plazo de tal muerte pudieron verse claramente varias semanas después de la exposición del testículo a los rayos X. La pérdida de la línea germinal se correlacionó con una masiva pérdida del peso testicular (húmedo y seco), del fósforo lipídico y del colesterol libre, que tomó unas 6 semanas. Esto se debió a una conjunción de efectos sobre las células: 1) la muerte por apoptosis de células indiferenciadas, que fueron muy radiosensibles porque estaban en activa división al momento de irradiar (desapareciendo en un día o dos y contribuyendo, más tarde, a la despoblación del testículo); 2) aquéllas que no se estaban dividiendo en ese momento pero cuyo genoma fue dañado por los rayos X de forma tal que murieron más tarde (1-4 semanas); 3) aquéllas más diferenciadas que ya no se estaban dividiendo y no se afectaron (radiorresistentes), por lo que continuaron su diferenciación al ritmo normal de la espermatogénesis hasta que estuvieron listas para salir del testículo en forma de espermatozoides (6 semanas). Después de la 6 en adelante, y hasta la semana 30, las células de Sertoli eran las únicas pobladoras de los túbulos seminíferos. La pérdida selectiva y gradual de células de la línea germinal fue concomitante con la disminución del contenido de los glicerofosfolípidos (GPL) ricos en 22:5n-6, incluyendo en ello a los plasmalógenos, y de las esfingomielinas (SM) ricas en VLCPUFA. Estas últimas estuvieron constituidas por especies conteniendo VLCPUFA normales o no hidroxilados (como el 28:4n-6, 30:5n-6 y 32:5n-6) y VLCPUFA 2-hidroxilados (como el 2-OH 28:4n-6, 2-OH 30:5n-6 y 2-OH 32:5n-6). Después de la irradiación, las especies de SM (y de ceramida, Cer) que contienen VLCPUFA desaparecieron 2 semanas antes que las que tienen 2-OH VLCPUFA. En la ausencia de células germinales, los GPL testiculares tenían 20:4n-6 como su PUFA principal, y las SM contenían principalmente AG saturados como el 16:0, revelando la composición de los GPL y las SM de las células somáticas que sobrevivieron a la irradiación, incluyendo en este grupo a las células de Sertoli. A diferencia de los GPL, los triacilgliceroles (TAG) ricos en 22:5n-6 se mantuvieron prácticamente sin cambio durante las primeras 4 semanas, para caer drásticamente en el estrecho período entre las semanas 4 y 6 post-irradiación. Una tinción específica para gotas de lípidos neutros (Nile Red) en cortes de tejido, tanto en controles no irradiados como a la semana 4 (pero ya no más a partir de la semana 6) post-irradiación, mostró la presencia de microgotas lipídicas en las espermátidas tardías, así como en los cuerpos residuales (CR) que se desprenden de ellas. Esto sugirió que estas gotitas debían contener los TAG mencionados, cuya cantidad disminuyó abruptamente al diferenciarse las últimas espermátidas y abandonar el testículo en forma de espermatozoides. Esto fue confirmado más tarde cuando los CR mostraron ser particularmente ricos en este tipo de TAG. Los minoritarios triglicéridos con una unión éter (TUE), ricos en 22:5n-6 y VLCPUFA de 24-32 carbonos, se distinguieron de los TAG en que en las primeras semanas acumularon VLCPUFA y luego 22:5n-6. Eventualmente, ambos tipos de PUFA desaparecieron de los TUE testiculares. Más tarde se confirmó que estos lípidos no son componentes de las células germinales. Los ésteres de colesterol (EC) se asemejaron a los TUE en que inicialmente incrementaron sus VLCPUFA (28:5n-6, 30:5n-6) pero luego empezaron a acumular otros ácidos grasos, especialmente 22:5n-6. A la semana 6 post-irradiación los EC eran los únicos lípidos cuya cantidad había alcanzado valores varias veces mayor a la de los controles no irradiados. Dado que ya no había células germinales, era claro que esos EC se acumulaban en las células de Sertoli. A la semana 6, el Nile Red reveló la presencia de abundantes gotas lipídicas grandes en la zona adluminal de los túbulos seminíferos, sugiriendo que esas gotas eran los sitios celulares en que se acumulaban los EC. Teniendo en cuenta que las células germinales que mueren por apoptosis son fagocitadas por las células de Sertoli, éstas deben procesar los GPL ricos en 22:5n-6 y el colesterol provenientes de aquéllas, lo que sugiere que los EC se forman en ellas esterificando el colesterol libre con ácidos grasos liberados desde los GPL. En la segunda parte de esta tesis los lípidos de células germinales puras aisladas, espermatocitos en paquiteno (EP) de la meiosis y espermátidas redondas (ER), dos estadios bien definidos de la diferenciación, más una fracción conteniendo los cuerpos residuales (CR) que se desprenden de formas más maduras, elongadas, de las espermátidas, proveyeron varias respuestas y abrieron algunas nuevas preguntas sobre sus especiales lípidos. Por una parte, estos resultados confirmaron las conclusiones a que habíamos arribado por inferencia a partir de los estudios in vivo sobre la distribución celular de los varios lípidos en estudio. Por otra, proveyeron nuevos datos que pusieron en evidencia que, así como lo hacen los GPL, las Cer y las SM con VLCPUFA sufren cambios relevantes con la diferenciación de las células germinales. Los TAG fueron los únicos lípidos neutros en cantidades apreciables en ambos tipos celulares, así como en los cuerpos residuales, donde fueron especialmente abundantes, mientras que los TUE y los EC con PUFA y VLCPUFA fueron casi indetectables en cualquiera de las tres fracciones, reforzando la conclusión de que estos lípidos pertenecen a las células de Sertoli. Conforme avanzó la diferenciación de EP a ER, los GPL incluyendo a los plasmalógenos se volvieron progresivamente más pobres en 20:4n-6 y más ricos en 22:5n-6. Los dos tipos celulares estudiados, EP y ER, contuvieron SM y Cer con proporciones asombrosamente altas de VLCPUFA. Los VLCPUFA normales (no hidroxilados) predominaron ampliamente en la SM y Cer de los EP, mientras los 2-HO VLCPUFA lo hicieron en la SM y Cer de las ER. Esto evidenció que la formación de estas últimas especies moleculares es una característica estrechamente asociada a la diferenciación de las células germinales. Esta convicción se reforzó cuando los espermatozoides epididimales mostraron que sus SM y Cer contenían una proporción de 2-OH VLCPUFA aún mayor que las de las ER. Durante la progresión EP �� �� ER �� �� espermatozoides, el 28:4n-6 disminuyó menos que el 30:5n-6, mientras que por el contrario el 2-HO 30:5n-6 aumentó más que el 2-HO 28:4n-6 en ambos lípidos. La SM espermática tuvo al 28:4n-6 como principal y casi único VLCPUFA, y al al 2-OH 30:5n-6 como principal 2-OH VLCPUFA. Llamativamente, los CR casi no tenían Cer, y su SM sólo contuvo 2-HO VLCPUFA. En los espermatozoides de rata aislados de la región caudal del epidídimo se estudiaron las principales clases de los GPL (incluyendo plasmalógenos) y sus PUFA, así como la SM y Cer y sus VLCPUFA, para determinar su distribución entre la cabeza y la cola de las gametas. Más del 80% de los GPL se localizó en la gran cola, mientras que toda la SM con VLCPUFA y 2-HO VLCPUFA se concentró en la pequeña cabeza. La reacción SM �� Cer resultó ser altamente sensible y activa en los espermatozoides. Mediante el agregado de EDTA a los medios de aislamiento esta conversión fue inhibida, determinando así que es estrictamente dependiente de iones bivalentes, principalmente calcio. Cuando se incubaron los espermatozoides en un medio que por contener C2+bicarbonato y albúmina promueve la capacitación y, en parte, la reacción acrosomal, un porcentaje importante de los GPL y casi toda la SM fueron perdidas por las gametas. La SM con 28:4n-6, así como las SM con 2-OH VLCPUFA, propias de la cabeza espermática, se hidrolizaron para generar cantidades casi equivalentes de las correspondientes Cer. Un hallazgo sorprendente fue que mientras la cola del espermatozoide carecía completamente de SM con VLCPUFA (no hidroxilados o hidroxilados), era en cambio rica en Cer con 2-OH VLCPUFA (2-HO 28:4n-6, 2-OH 30:5n-6 y 2-OH 32:5n-6). Estos eran, en similares proporciones, los mismos VLCPUFA que aparecían en las abundantes Cer de las espermátidas redondas. Mientras los principales GPL (en especial los de colina) se remodelan en el espermatozoide a medida que progresa su maduración en el epidídimo, cambiando sus principales subclases y sus PUFA, tanto la SM con 2-OH VLCPUFA (destinada a la cabeza), como la Cer con 2-OH VLCPUFA (destinada a la cola espermática), se generan ambas en el testículo, acompañando al espermatozoide casi sin cambios desde sus primeros esbozos en el epitelio seminífero (espermátida redonda) hasta su madurez casi total después de su pasaje a través del epitelio epididimal. Las posibles funciones que cumplen estas inusuales Cer en la cola espermática serán el objeto de futuros estudios. / The aim of this work was to gather information on the biochemistry of lipids with long-chain and very-long-chain (VLC) polyunsaturated fatty acids (PUFA) that abound in cells of the mammalian reproductive tract. Using the adult rat as a model, three systems were investigated: the testicular tissue in vivo, as influenced by agents that affect spermatogenesis, germ cells in two separate stages of their differentiation, isolated from the seminiferous epithelium, and mature spermatozoa, isolated from the caudal region of the epididymis. The first part focused on finding evidence that would allow to relate the lipids under study with the cell types present in seminiferous tubules, germ cells and Sertoli cells. The in vivo effects were studied of two agents that are known to induce the death of germ cells: cyclophosphamide and exposure to X-rays. Some of the early effects of germ cell death on the lipids under study could be observed after the administration of a single dose of cyclophosphamide, whereas the long-term consequences of such death could be clearly seen several weeks after exposure of the testis to a single dose of X rays. The loss of the germ cell lineage correlated with a massive drop of the testicular weight (wet and dry), lipid phosphorus, and free cholesterol, taking about 6 weeks. This could be ascribed to a concurrence of effects on germ cells: 1) the death by apoptosis of undifferentiated germ cells that were highly radio-sensitive because they were actively dividing at irradiation time (disappearing in a day or two and contributing, later on, to the de-population of the testis); 2) those that were not dividing at that moment but that were genome-damaged by X rays in such way that they died later on (1-4 weeks); 3) those more differentiated cells that were no longer dividing, unaffected by X rays (radio-resistant), that continued their differentiation at the normal rhythm of spermatogenesis until they were ready to exit from the testis in the form of spermatozoa (6 weeks). After week 6 and onwards, up to week 30, only Sertoli cells populated the seminiferous tubules. The gradual and selective loss of cells of the germinal lineage was concomitant with the decrease of 22:5n-6-rich glycerophospholipids (GPL), including plasmalogens, and of VLCPUFA-rich sphingomyelins (SM). The latter were made up by species containing normal or non-hydroxylated VLCPUFA (such as 28:4n-6, 30:5n-6 and 32:5n-6) and 2-hydroxylated VLCPUFA (such as 2-OH 28:4n-6, 2-OH 30:5n-6 and 2-OH 32:5n-6). After irradiation, the species of SM (and ceramide, Cer) that contain VLCPUFA disappeared 2 weeks before those that contain 2-OH VLCPUFA. In the absence of germ cells, testicular GPL had 20:4n-6 as their main PUFA, and SM contained mainly saturated fatty acids like 16:0, revealing the composition of the GPL and SM of the somatic cells that survived irradiation, including Sertoli cells in this group. In disparity with GPL, the 22:5n-6-rich triacylglycerols (TAG) were maintained virtually unchanged during the first 4 weeks, to drop drastically in the short period going between weeks 4 and 6 post-irradiation. A specific staining to reveal neutral lipid droplets (Nile Red) in tissue sections from both non-irradiated controls and at week 4 (but no longer at week 6 and later) post-irradiation, showed the presence of micro-droplets both in late spermatids and in the residual bodies (RB) emitted from the latter. This suggested that these small droplets probably contained the 22:n-6-rich TAG whose amount fell down abruptly in the last 2 weeks when the last spermatids ended their differentiation and exited from the testis in the form of spermatozoa. This was confirmed later on when the RB showed to be particularly rich in this kind of TAG. The minor triglycerides with an ether bond (TEB), rich in 22:5n-6 and VLCPUFA with 24-32 carbons, differed from the TAG in that they initially accumulated VLCPUFA and then 22:5n-6. Eventually, both kinds of PUFA disappeared from the testicular TEB. These lipids were confirmed later on not to be components of germ cells. The cholesterol esters (CE) were similar to TEB in that they initially increased their VLCPUFA (28:5n-6, 30:5n-6) but then started to accumulate other fatty acids, especially 22:5n-6. At week 6 post-irradiation, EC were the only lipids whose amounts had reached values several fold higher than those of the non-irradiated controls. Since no germ cells remained in seminiferous tubules, it was clear that those EC accumulated in Sertoli cells. At week 6, Nile Red revealed the presence of abundant large lipid droplets in the adluminal zone of seminiferous tubules, suggesting that such droplets were the cellular sites of EC accumulation. Taking into account that the germ cells that die by apoptosis are phagocytized by Sertoli cells, the latter must process the 22:5n-6-rich GPL and (free) cholesterol coming from the former, suggesting that the EC are formed in Sertoli cells by esterifying free cholesterol and fatty acids released from GPL. In the second part of this thesis the lipids of pure isolated germ cells, pachytene spermatocytes (PS) of meiosis and round spermatids (RS), two well-defined stages of germ cell differentiation, plus a fraction containing the residual bodies (RB) that are released from more mature, elongating forms of spermatids, provided several answers and opened some new exciting questions on their special lipids. On the one hand, these results confirmed the conclusions arrived at by inference from the in vivo studies on the cell distribution of the various lipids under study. On the other, provided new data that put into evidence that, as the GPL do, the Cer and SM containing VLCPUFA undergo relevant changes related with germ cell differentiation. The TAG were the only neutral lipids in appreciable amounts in both cell types, as well as in the residual bodies, where they were especially abundant, whereas the PUFA- and VLCPUFA-rich TUE and EC were almost undetectable in any of the three fractions, reinforcing the conclusion that these lipids belong to Sertoli cells. significant amounts As differentiation from RS to RS proceeded, the GPL including plasmalogens became progressively poorer in 20:4n-6 and richer in 22:5n-6. Both germ cell types, PS and RS, contained SM and Cer wiith astonishingly high proportions of VLCPUFA. The normal (non-hydroxy) VLCPUFA predominated massively in the SM and Cer of the PS, whereas the 2-OH VLCPUFA prevailed in the RS. This evidenced that the formation of these latter species is a feature tightly linked to germ cell differentiation in the rat. This conviction was reinforced when spermatozoa from the epididymis showed that their SM and Cer contained a proportion of 2-OH VLCPUFA even higher than those of RS. During the progression PS �� �� RS �� �� spermatozoa, 28:4n-6 decreased less than did 30:5n-6, whereas, on the contrary, 2-OH 30:5n-6 increased more than did 2-OH 28:4n-6 in both lipids. Spermatozoal SM had 28:4n-6 as the main and almost only VLCPUFA, and 2-OH 30:5n-6 as the main VLCPUFA. Remarkably, the RB had virtually no Cer and their SM only contained 2-OH VLCPUFA. In rat spermatozoa isolated from the caudal region of the epididymis, the main classes of GPL (including plasmalogens) and their PUFA, as well as SM and Cer and their VLCPUFA were studied to determine their distribution between the head and the tail of the gametes. More than 80% of the GPL was localized in the large tail, whereas all of the SM with VLCPUFA and 2-OH VLCPUFA was concentrated in the small head. The SM → Cer reaction was highly sensitive and active in the spermatozoa. By means of adding EDTA to the isolation media this conversion was inhibited, thus determining that it is strictly dependent on bivalent ions, mostly calcium. When sperm were incubated in a medium that, because it contained Ca2+, bicarbonate and albumin promoted sperm capacitation, and, in part, the acrosome reaction, an important percentage of the total GPL and most of the SM were lost from the gametes. The 28:4n-6-containing SM as well as the 2-OH-VLCPUFA containing SM, typical of the sperm head, were hydrolyzed to generate almost equivalent amounts of the corresponding Cer. A surprising finding was that, whereas the tail of spermatozoa lacked SM with VLCPUFA altogether, it was instead rich in Cer with 2-OH VLCPUFA (2-HO 28:4n-6, 2-OH 30:5n-6 y 2-OH 32:5n-6). These were, in similar proportions, the same VLCPUFA that appeared in the abundant Cer of round spermatids. In contrast to the main sperm GPL (especially those of choline) that change their subclasses and their PUFA types while they mature in the epididymis, both the SM with normal and 2-hydroxy VLCPUFA (destined o the sperm head) and the Cer with 2-OH VLCPUFA (destined to the sperm tail) are generated in the testis and accompany the gamete almost without changes from their first appearance in the seminiferous epithelium (round spermatids) to their almost complete maturity after their passage through the epididymal epithelium. The possible functions these unusual Cer play in the sperm tail will be the aim of future studies.

A nivel mundial se está dando un fenómeno que cada vez es más común, la infertilidad. En la actualidad la edad es considerada un factor determinante en la calidad seminal, existe una relación directa entre la edad y el aumento del daño en el ADN espermático. El objetivo de este estudio fue evaluar las características seminales en jóvenes universitarios mediante espermatogramas utilizando el sistema computarizado de análisis seminal C.A.S.A (Computer Assisted Sperm Analyzer, ISAS v1.2) para la evaluación morfológica. Se calcularon los estadísticos descriptivos, frecuencias y coeficientes de variación para todos los parámetros seminales procedentes de 30 jóvenes universitarios voluntarios de 18 a 30 años de edad. Con el fin de determinar si los hábitos de los jóvenes consideradas en la investigación tuvieron efecto en alguno de los parámetros seminales se realizó la prueba exacta de Fisher, en el caso de variables nominales, y una prueba de T de student o de U de Mann Whitney, previa verificación de la normalidad con la prueba de Shapiro-Wilk, en el caso de las variables cuantitativas. Todos los análisis se realizaron con un nivel de confianza de 95% en el software SPSS v.21. En conclusión no se encontraron asociaciones significativamente estadísticas entre los hábitos y los distintos parámetros seminales y se determinó que solo los criterios de pH, volumen, vitalidad, motilidad, concentración y recuento total, cumplen con los valores establecido por la Organización Mundial de Salud y la Sociedad Europea de Reproducción Humana y Embriología (ESHRE), a diferencia del 76.7% las muestras seminales que no cumple con los criterios de morfología. Se observó que existían alteraciones morfológicas en la cabeza y la pieza intermedia de los espermatozoides, comparándolo con los valores considerados normales por la OMS se obtuvo que las principales áreas afectadas fueron la longitud, el ancho, el área, la elipticidad y la elongación de la cabeza al igual que el ancho de la pieza intermedia, y al compararlo con los valores de la ESHRE se obtuvo que las principales áreas afectadas fueron el ancho, el área y la elipticidad de la cabeza. Worldwide is taking a phenomenon that is becoming more common, infertility. Today's age is considered a important factor in semen quality, there is a direct relationship between age and the increased damagein DNA sperm. The aim of this study wasto evaluate the seminal characteristics in young students by Spermograms and use a computerized semen analysis C.A.S.A (Computer Assisted Sperm Analyzer, ISAS v1.2) for morphological evaluation Descriptive statistics and frequencies for all semen parameters considered in this study were calculated. The coefficient of variation was calculated by dividing the standard deviation to the average and expressed in percentage. In order to determine whether the habits of young people considered in the investigation had any effec on semen parameters Fisher's exact test was performed, in the case of nominal variables, and student T test or Mann Whitney, after verification of normality with the Shapiro-Wilk test, in the case of quantitative variables. All analyzes were performed with 95% confidence in the SPSS v.21 software In conclusion not significantly statistical associations between the habits and different sperm parameters were found and determined that only the criteria of pH, volume, vitality, motility, concentration and total count, meet values set by the World Health Organization and the European Society of Human Reproduction and Embryology, unlike 76.7% of young people who do not meet the requirements criteria of morphology. It was found that there were obvious morphological changes in the anatomical parts of the head and the intermediate piece, comparing the valuesconsidered normal by WHO, was obtained that the main affected areas were the length, width, area, ellipticity and elongation of the head as the width of the intermediate piece, and when compared with the valuesthat were obtained ESHRE relevant affected areas were the wide area and the ellipticity of the head.

Asocia los factores de riesgo ocupacional con el daño en el ADN espermático medido con el ensayo Cometa en base a un modelo descriptivo. Un total de 137 pacientes participaron en el estudio, entre marzo del 2016 y marzo del 2017, a los cuales se les realizó una encuesta. Se realizó el espermatograma y la electroforesis en gel de agarosa de células individuales o ensayo Cometa, encontrando que los pacientes con ocupaciones de alto riesgo (agricultores; cocineros; taxistas; soldadores; electricistas; electrónicos y operarios químicos) tienen mayor daño a nivel de ADN espermático que los pacientes de bajo riesgo (personal de oficina; comerciantes; inspectores; estibadores y docentes), el porcentaje de intensidad fue 44.72±16.07 y 15.55 ± 16.51 respectivamente (p=0.0001). En el caso de los pacientes con ocupaciones de bajo riesgo el porcentaje de intensidad fue 12.04±15.33 para normozoospérmicos y 20.48±17.12 para varones con algún parámetro seminal alterado, encontrándose diferencia significativa (p=0.0175). Además, los pacientes expuestos a más factores de riesgo ocupacional presentan un espdaño mayor a nivel de ADN espermático a diferencia de los no expuestos (momento de la cola: p=0.0167; porcentaje de intensidad: p=0.0334; longitud de la cola: p=0.0167). Se evidenció que, la edad y a más años trabajando en actividades de alto riesgo (p < 0.05), mayor era el daño a nivel de ADN espermático. En la presente investigación no se observaron diferencias significativas a nivel de parámetros seminales y ocupación (p ≥ 0.05). Se concluye que, la suma de los factores de riesgo ocupacional está asociada al daño en el ADN espermático y las ocupaciones de alto riesgo presentan mayor daño, por ello es importante que los varones en edad fértil tengan acceso a la información sobre los riesgos laborales potenciales y a la prevención para evitar la exposición y preservar su salud reproductiva. / Tesis