Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Departamento de Biologia Celular / Made available in DSpace on 2012-10-16T00:08:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2013-07-16T17:07:59Z : No. of bitstreams: 1 265633.pdf: 9786267 bytes, checksum: 4f519cd26a4418fccd3d924723583d48 (MD5)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-28Bitstream added on 2014-06-13T18:46:30Z : No. of bitstreams: 1 carreira_jt_dr_jabo.pdf: 630709 bytes, checksum: f21215f6ef9c8182c2586466e4629742 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / Os objetivos deste projeto de pesquisa foram testar se a qualidade espermática, e a integridade da cromatina são diferentes em um grupo de touros Nelore jovens, adultos e senis. Três ejaculados, de 40 touros Nelore foram subdivididos em três faixas etárias: de 1,8 a 2 anos – Grupo Jovens, de 3,5 a 7 anos – Grupo Adultos e de 8 a 14,3 anos – Grupo Senis. As amostras foram avaliadas quanto à motilidade, o vigor, teste de termoresistência lento (TTL), análise computadorizada do movimento espermático (CASA), avaliação simultânea da integridade da membrana plasmática e do acrossoma, potencial mitocondrial, protaminação espermática, danos de DNA causados por radicais livres, suscetibilidade a denaturação da cromatina, pelos testes “Sperm Cromatin Structure Assay” (SCSA) e laranja de acridina (AOT), e danos na cromatina com a técnica TUNEL. Os animais jovens apresentaram valores superiores de motilidade e vigor antes e após o TTL, e maior porcentagem de células com alterações morfológicas, assim como maior porcentagem de espermatozóides com membrana e acrossoma íntegros e com alto potencial mitocondrial, estes parâmetros tiveram os menores índices nos animais senis (P<0,05). Nas avaliações da integridade do DNA, os touros jovens apresentaram maior porcentagem de deficiência de protaminação, enquanto os senis danos por oxidação. No teste SCSA os touros mais jovens e mais idosos apresentaram maiores índices de danos na cromatina, diferindo dos demais (P<0,05). O teste de TUNEL não apresentou resultados satisfatórios. Estes resultados permitem concluir que touros jovens apresentam qualidade espermática superior, seguidos pelo grupo de animais adultos, e finalmente um declínio na qualidade nos diversos parâmetros estudados para o grupo de animais senis. Quanto à integridade... (Complete abstract click electronic access below) / The aims of this study were to test if sperm quality and chromatin integrity are different in young, adult and senile Nelore Bull cryopreserved semen samples. Three ejaculates from 40 Nelore bulls were divided by age in three groups: 1,8 to 2 years – Young Bulls, from 3,5 to 7 years – Adult Bulls and from 8 to 14,3 years – Senile Bulls. Samples were evaluated for: motility, vigor, slow termoresistance test (TTL), computadorized sperm movment analyses (CASA), simultaneous evaluation of plasmatic membrane and acrosome integrity, mitochondrial potential, sperm protamination, DNA oxidation damages, Sperm Cromatin Structure Assay (SCSA) and acridine orange test (AOT), and TUNEL. Young animals presented better values for motility and vigor before and after TTR , intact membrane and acrosome and high mitochondrial potential, but higher values for sperm defects, (P<0.05). On DNA integrity evaluations, Young Bulls presented more protamination problems while senile bulls guanine oxidation defects, both groups were more susceptible to DNA denaturation on SCSA (P<0.05). TUNEL results were not satisfatory. The results indicates that Young bulls may have a high quality sperm sample after freezing, followed by the adults and finally there is a decrease in quality on senile bulls group, nevertheless the results would probably not compromised the samples approval for commercial use. Regarding DNA integrity, Young and senile bulls are more susceptible to DNA damage, nevertheless the etiology of the damage seems to be different, by protamine deficiency in Young bulls and by oxidation in senile animals

Orientador: José Gonçalves Franco Jr. / Coorientador: Mario Cavagna / Banca: João Batista Alcantara Oliveira / Banca: Claudia Guilhermino Petersen / Resumo: Poucos estudos avaliando o efeito da idade paterna nos resultados de RA tem sido descritos na literatura. A idade avançada do homem parece influenciar na função reprodutiva masculina em menor grau quando comparada com a idade da mulher, pelo simples fato da ocorrência de nascimentos de crianças de pais com idade entre 70 e 94 anos. O efeito da idade paterna na qualidade do sêmen tem sido discutido na literatura porém os resultados são contraditórios. Frente a tais contradições, este artigo de revisão tem como objetivo descrever e discutir os dados da literatura no que diz respeito a influência da idade paterna nos parâmetros seminais (volume, concentração, motilidade e morfologia) , nos danos do DNA espermático , nos resultados de rerpodução assistida (fertilização, desenvolvimento embrionário, implantação, gravidez, aborto e nascimentos) e em doenças genéticas / Abstract: Few studies evaluating the effect of paternal age on the results of ART has been described in the literature. Advanced paternal age seems to influence the male reproductive function to a lesser degree than the female's, as evidenced by the fact that babies have been fathered by aged 70 to 94 years. The effect of paternal age on semen quality has been discussed in the literature but the results are not consistent. Front these contradictions this review article aims to describe and discuss the literature data on the influence of paternal age on the semen parameters (volume, concentration, motility and morphology), sperm DNA damage, outcomes of ART (fertilization, embryo development, implantation, pregnancy, abortion and birth) and genetic disease / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-29Bitstream added on 2014-06-13T20:20:21Z : No. of bitstreams: 1 silva_lfi_me_botfm.pdf: 366320 bytes, checksum: b20723bbb3bc87f0ad3fe980c63f1375 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Poucos estudos avaliando o efeito da idade paterna nos resultados de RA tem sido descritos na literatura. A idade avançada do homem parece influenciar na função reprodutiva masculina em menor grau quando comparada com a idade da mulher, pelo simples fato da ocorrência de nascimentos de crianças de pais com idade entre 70 e 94 anos. O efeito da idade paterna na qualidade do sêmen tem sido discutido na literatura porém os resultados são contraditórios. Frente a tais contradições, este artigo de revisão tem como objetivo descrever e discutir os dados da literatura no que diz respeito a influência da idade paterna nos parâmetros seminais (volume, concentração, motilidade e morfologia) , nos danos do DNA espermático , nos resultados de rerpodução assistida (fertilização, desenvolvimento embrionário, implantação, gravidez, aborto e nascimentos) e em doenças genéticas / Few studies evaluating the effect of paternal age on the results of ART has been described in the literature. Advanced paternal age seems to influence the male reproductive function to a lesser degree than the female’s, as evidenced by the fact that babies have been fathered by aged 70 to 94 years. The effect of paternal age on semen quality has been discussed in the literature but the results are not consistent. Front these contradictions this review article aims to describe and discuss the literature data on the influence of paternal age on the semen parameters (volume, concentration, motility and morphology), sperm DNA damage, outcomes of ART (fertilization, embryo development, implantation, pregnancy, abortion and birth) and genetic disease

Actualmente se han desarrollado trabajos sobre la criopreservación de espermatozoides epididimarios de alpaca, demostrando disminución en los parámetros de viabilidad, motilidad e integridad de la membrana plasmática luego del proceso de descongelación, debido principalmente a especies de oxígeno reactivas producidas durante el proceso de congelamiento. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la criopreservación sobre las proteínas antioxidantes GPX1 y GPX4 de espermatozoides del epidídimo de alpaca, usamos muestras (n: 30) de espermatozoides provenientes de la cola del epidídimo, se usó un método de congelamiento lento usando dimetilacetamida (0,375 M) como agente crioprotector, analizamos los parámetros de la motilidad, viabilidad e integridad de la membrana plasmática antes y después del proceso de congelamiento; así mismo evaluamos los extractos de proteínas de espermatozoides antes y después del congelamiento para evaluar el estado de estas proteínas mediante Western blott, la evaluación de la localización intracelular de estas proteínas se realizó mediante la técnica de inmunofluorescencia. Se usó la técnica de RT-PCR-RT para evaluar el nivel de expresión del gen GPX4 en biopsias de tejido testicular. Los resultados mostraron una disminución en los porcentajes de los parámetros de viabilidad, motilidad e integridad de la membrana plasmática luego del proceso de congelamiento, la localización intracelular de las proteínas GPx1 (cabeza del espermatozoide) y GPx4 (flagelo del espermatozoide) muestran los principales lugares de acción de estas proteínas, por Western blot obtuvimos bandas de peso molecular variado para GPx1 (formas inactivas de la proteína) y bandas de peso molecular de 27kDa para GPx4 (forma activa); obtuvimos una relación significativa positiva y débil entre el nivel de expresión molecular del gen GPx4 y la motilidad pre y post congelamiento. La ubicación de las proteínas GPx1 y GPx4 demuestra sus funciones de protección del espermatozoide de alpaca, la cual no se vio afectada por el proceso de criopreservación, pero el estado (forma activa) de la proteína GPx1 si se vio afectada. Existe una relación positiva significativa (p<0.01) entre el nivel de expresión relativa del gen GPx4 respecto a la movilidad espermática. Palabras clave: Alpaca, criopreservación, espermatozoides, glutatión peroxidasa / --- Currently works about cryopreservation of epididymal alpaca sperm have been developed, showing decrease of the parameters of viability, motility and plasma membrane integrity after thawing process, mainly due to reactive oxygen species produced during cooling process. The aim of this study was to evaluate the effect of cryopreservation over the antioxidant proteins GPx1 and GPx4 from epididymal alpaca sperm. We used samples (n:30) of sperm obtained from the cauda of epididymis, and a slow freezing process with dimethylacetamide (0.375M) as a cryoprotectant agent. It was analyzed the parameters of motility, viability and integrity of plasma membrane before and after cooling process; the protein extracts from sperm was evaluated before and after cooling to examine the state of this protein by western blott technique; the intracellular localization of this proteins was done by immunofluorescence technique, the expression level of gene Gpx4 in testicular tissue biopsies was quantified by RT-PCR-RT. The results showed a decrease in the percentage of viability, motility and plasma membrane integrity after thawing process; the intracellular localization of GPx1 and GPx4 were identified in regions such as the head (GPx1) and flagellum (GPx4) of sperm, by western blot we got bands of GPx1 inactive forms of the protein and the active form of GPx4 (27 kDa); It was obtained a significant positive relationship between the level of molecular gene expression of GPx4 and motility before and after cooling process The location of proteins GPx1 and GPx4 demonstrate its functions of protection of alpaca sperm, which was not altered by the cryopreservation process, but the state (active form) of protein GPx1 was affected. There is a positive weak correlation between the level of GPx4 gene relative expression with sperm motility. Key words: Alpaca, cryopreservation, spermatozoa, glutation peroxidase. / Tesis

La acuicultura de peces planos se ha incrementado notablemente en los últimos años, sin embargo existen disfunciones reproductivas que no permiten una reproducción exitosa en cautiverio, por lo tanto, conocer el estado reproductivo de los ejemplares así como la calidad de sus gametos es de vital importancia. La evaluación de la calidad espermática permite incrementar no solo los índices de supervivencia larval sino la aplicación de técnicas como la fecundación in vitro, el monitoreo de las condiciones de cultivo y la criopreservación con el fin de asegurar la reproducción en cautiverio. Los resultados obtenidos en relación a los parámetros de calidad espermática del lenguado Paralichthys adspersus acondicionado al cautiverio fueron el volumen espermático con 758 ± 310 µL, la concentración espermática fue de 2.49 ± 0.26 x 1010 espermatozoides/mL, la clase de motilidad fue 4.00 ± 0.26 con un porcentaje el 50 y 90 % y la viabilidad espermática se evaluó mediante dos técnicas de tinción, se obtuvo 98.31 ± 0.26 % con Eosina-Nigrosina y 87.67 ± 8.28 % con el Kit LIVE/DEAD®. Además, se realizaron ensayos preliminares en criopreservación de espermatozoides, donde se evaluó la motilidad espermática post-incubación en soluciones crioprotectoras, obteniéndose los mejores resultados con DMSO a una concentración de 1.5 M cuya clasede motilidad fue 3.04 ± 0.23 con un 51.79 ± 5.83 %. Por otro lado, la motilidad espermática luego de la criopreservación fue 12.09 ± 2.27 %, con una tasa de congelamiento de – 15 °C/min y de descongelamiento de 50 °C/min. La presente tesis se presenta como el primer reporte de la calidad espermática de Paralichthys adspersus en cautiverio, así como los primeros ensayos para la criopreservación de espermatozoides en esta especie. -- PALABRAS CLAVE: Paralichthys adspersus, espermatozoides, calidad espermática y criopreservación. / -- Flatfish aquaculture has increased markedly in recent years; however there are reproductive dysfunctions that prevent successful reproduction in captivity, therefore, to know the reproductive status of individuals and the quality of their gametes is of great importance. The evaluation of sperm quality can increase not only the larval survival rates but the application of techniques such as artificial insemination, monitoring culture conditions and cryopreservation in order to ensure the reproduction in captivity. The results obtained in relation to semen quality parameters of flounder Paralichthys adspersus conditioned to captivity were sperm volume with 758 ± 310 µl, sperm concentration was 2.49 ± 0.26 x 1010 cells/mL, the class of motility was 4.00 ± 0.26 indicating a range 50 to 90 % and spermatozoa viability was determined using two different staining techniques, with Eosin - Nigrosine techniquewasobtained98.31±0.26 % and with the kit LIVE/DEAD ®was obtained 87.67 ± 8.28 %. In addition, preliminary assays on cryopreservation of spermatozoa were carried out, sperm motility was assessed postincubation in cryoprotectant solutions, obtaining the best results with DMSO at a concentration of 1.5 M, the class of motility was 3.04 ± 0.23 and the percentage of sperm motility was 51.79 ± 5.83 %. On the other hand, sperm motility after thawing was 12.09 ± 2.27%, with a cooling rate -15 ° C/min and thawing rate 50 ° C/min. This thesis is presented as the first study of sperm quality for P. adspersus in captivity, and the first assays for the cryopreservation of sperm in this species. -- KEY WORDS: Paralichthys adspersus, spermatozoa, sperm quality and criopreservation.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / El documento digital no refiere asesor / Evalúa los indicadores fisiológicos más importantes de la capacitación espermática, los cuales son: el aumento de la movilidad espermática, la reacción acrosomal y la capacidad de unión a la zona pelúcida. Se realizaron tres etapas experimentales con el objetivo de evaluar el efecto del fluido folicular sobre la capacitación de espermatozoides epididimarios de alpaca. En la primera etapa, el fluido folicular fue inactivado por calentamiento y el medio fue suplementado con suero bovino fetal, para determinar el efecto sobre la movilidad espermática. Los resultados obtenidos luego de la primera hora fueron los siguentes: fluido folicular inactivado sin FBS, 58,75%; fluido folicular inactivado con FBS, 58,75%; fluido folicular fresco sin FBS, 62,33%; con fluido folicular fresco con FBS, 64,83%; control sin FBS, 37,00% y control con FBS, 39,58%. Luego de la segunda hora de incubación, la movilidad fue la siguiente: fluido folicular inactivado sin FBS, 47,75%; fluido folicular inactivado con FBS, 53,75%; fluido folicular fresco sin FBS, 54,25%; fluido folicular fresco con FBS, 50,58%; control sin FBS, 32,25%; control con FBS, 36,92%. En la segunda etapa experimental, se evaluó el efecto del fluido folicular, en relación al tamaño folicular del cual provenían; para ello se clasificó el fluido folicular de acuerdo al tamaño del folículo proveniente, como sigue: De folículos menores de 3 mm, de folículos de entre 3 y 6 mm, y de folículos mayores de 6 mm. En esta etapa experimental se evaluó el efecto del fluido sobre la movilidad y sobre la reacción acrosomal. Los resultados de la movilidad luego de la primera hora fueron los siguientes: fluido de folículos pequeños, 48,00%; fluido de folículos medianos, 43,33%; fluido de folículos grandes, 34,53%; control sin FBS, 26,00%; control con FBS, 29,20%. Luego de la segunda hora, los resultados fueron como sigue: fluido de folículos pequeños, 46,53%; fluido de folículos medianos, 40,00%; fluido de folículos grandes, 35,60%; control sin FBS, 28,13%; control con FBS, 26,80%. En el análisis de la reacción acrosomal se obtuvieron los siguientes resultados: fluido folicular de folículos pequeños, 66,3%; fluido folicular de folículos medianos, 58,86%; fluido de folículos grandes, 67,63%; control sin FBS, 30,06%; el control con FBS, 44,04%. En la tercera etapa, se evaluó la capacidad de los espermatozoides incubados con fluido folicular para unirse a la zona pelúcida de ovocitos homólogos. En este experimento, se enfrentaron los espermatozoides con zonas pelúcidas en el medio HAM F10 suplementado con fluido folicular y se determinó el número de espermatozoides unidos. Los resultados fueron los siguientes: fluido folicular, 7,90; control sin FBS, 1,68, control con FBS, 2,70. Los resultados permitieron reconocer que el fluido folicular de alpaca no es tóxico para los espermatozoides de alpaca, promueve la movilidad espermática sí solo (α=0,05). Por otro lado, el fluido folicular favorece la movilidad espermática, independientemente del tamaño del folículo (α=0,05); aunque el fluido de folículos medianos y pequeños ejercían un efecto ligeramente mayor. Asimismo, se pudo observar que el fluido folicular promovía la reacción acrosomal de los espermatozoides (α=0,05). Adicionalmente, el fluido folicular favorecía la capacidad de los espermatozoides de alpaca para unirse a la zona pelúcida del ovocito (α=0,05). Ante las evidencias, se concluye que el fluido folicular de alpaca es un inductor de la capacitación espermática para esta especie. / Tesis

El potencial de membrana mitocondrial (PMM) es uno de los parámetros espermáticos más importantes debido a que las mitocondrias son la principal fuente de ATP necesaria para la movilidad espermática en el tracto reproductivo de la hembra para lograr la fecundación. La criopreservación de espermatozoides es una técnica que permite y facilita el uso de material genético de alto valor. El objetivo es demostrar mediante la citometría de flujo que el porcentaje de espermatozoides de alpaca con alto PMM se reduce significativamente luego del proceso de criopreservación. Se trabajaron con 41 testículos de alpaca obtenidos del Camal Municipal de Ninacaca. Provincia de Pasco. Se recuperaron los espermatozoides de la cola del epidídimo con 1 mL de dilutor en base a leche descremada y se congelaron. Sólo fueron congeladas las muestras con mínimo 30% de motilidad y concentración de 50x106 espermatozoides/mL. La evaluación de PMM se realizó antes y después del proceso de criopreservación. Cada muestra se incubó durante 10 minutos a 38 °C con MitoTracker Deep Red (100 nM) para determinar el porcentaje de alto PMM, mediante citometría de flujo con imágenes. El efecto de la criopreservación en el porcentaje de espermatozoides con alto PMM fue evaluado mediante la prueba de T-student pareada. Asimismo, se correlacionaron los porcentajes de motilidad y espermatozoides con alto PMM. Se obtuvo un 49.82 ± 12.41% de alto PMM en muestras antes del proceso de criopreservación, el cual fue significativamente (p<0.05) mayor al porcentaje de alto PMM de las muestras descongeladas (34.97 ± 9.96%). También se encontró una correlación positiva (r: 0.62; p<0.0001) entre motilidad y PMM. Se concluye que el PMM se reduce significativamente luego del proceso de criopreservación, parámetro relacionado a la motilidad espermática. / Tesis

Determina el efecto de la criopreservación sobre la integridad acrosomal de los espermatozoides viables de alpaca recuperados del epidídimo, determinado mediante citometría de flujo. Se procesaron muestras de 46 testículos de alpaca obtenidos de Camal Municipal de Ninacaca, Pasco, que presentaron una motilidad ≥ 30% y concentración espermática ≥ 50x106 espermatozoides/mL, en promedio 46.6% y 61x106 espermatozoides/mL, respectivamente del total de las muestras obtenidas. Los espermatozoides se recuperaron de la cola del epidídimo con 1mL de dilutor a base de leche descremada, yema de huevo, fructuosa y DMA; separándose luego en 2 alícuotas de 500 μL. La primera alícuota se utilizó para la evaluación de la viabilidad e integridad acrosomal inicial y la segunda alícuota se congeló en pajillas mediante un sistema automático de criopreservación, para luego almacenarse en nitrógeno líquido hasta el día de su evaluación. Todas las muestras, frescas y descongeladas fueron lavadas 2 veces por centrifugación con solución PBS para retirar el dilutor. Para la evaluación de viabilidad e integridad acrosomal, 100μL de cada muestra fue incubada con 2.5μL de FITC-PSA (100 μg/mL) y 0.5μL de Ioduro de Propidio (PI, 2.4 nM) por 10 minutos a 38°C, obteniendo finalmente una concentración de 2.5 μg/mL y 12 μM, respectivamente. Inmediatamente después las muestras se evaluaron por citometría de flujo con analizador de imágenes, adquiriéndose diez mil eventos compatibles con espermatozoides por muestra. FITC-PSA y PI fueron excitados con el láser de 488 nm, mientras que la emisión de fluorescencia fue detectada utilizando los canales Ch02 (505-560 nm) para FITC-PSA y Ch05 (642-740nm) para PI. Se seleccionó la población de espermatozoides viables (PI negativos), que en promedio fue el 75% del semen fresco y un 42% del semen descongelado, para de ellos determinar el porcentaje de integridad acrosomal (FITC-PSA negativos) y de reacción acrosomal (FITC-PSA positivos). Se realizó un análisis de T-student pareado para determinar como la criopreservación afecta la integridad acrosomal en los espermatozoides viables. Se encontró que la integridad acrosomal de los espermatozoides viables inicial (98.25 ± 5.40%) fue similar (p>0.05) a la integridad acrosomal de los espermatozoides viables post descongelamiento (98.75 ± 2.17%). Se concluye que si bien la criopreservación disminuye la cantidad de espermatozoides viables, la estructura acrosomal no se altera en los espermatozoides de alpaca que sobreviven a este proceso. / Trabajo de suficiencia profesional

Este estudio, se espera contribuya al conocimiento de la biología celular en los gametos de ovinos de la raza Junín por los pocos estudios en poblaciones espermáticas de estos ovinos, se han descrito las principales características de la membrana espermática como son su estructura y función, las cuales son importantes para establecer el grado de potencial fértil en las poblaciones de espermatozoides, el cual fue alto al correlacionar los efectos de la eosina y la prueba hipoosmótica con los valores de morfología y motilidad; valores éstos que indicarían que se usaron poblaciones de espermatozoides que permitan lograr resultados positivos en programas de mejora genética usando inseminación artificial y fecundación in vitro, además de conservar una fuente de recursos genéticos. Los objetivos del presente trabajo fueron evaluar la estabilidad de la cromatina en espermatozoides de ovino (5 machos) y asociarla con la integridad de membrana estructural y fisiológica, además de su relación con la tasa de preñez (75 borregas). El diseño experimental usado para evaluar los grados de compactación de la cromatina de espermatozoides de ovinos Junín fue el de Parcelas Divididas (Split Plot), que han interactuado con el tiempo de muestreo y las técnicas empleadas (BB, SDS y EDTA) que tuvieron una alta significancia entre los grados de compactación, así como entre los meses y el grado de compactación, sin importar cual es el animal evaluado. Los resultados muestran que las diferencias entre las técnicas no son significativas, pero si entre los grados de compactación (P menro 0.0001). La interrelación entre las técnicas y los grados de compactación es muy significativa (P menor 0.0001). La correlación entre la integridad de membrana estructural (eosina) y fisiológica (hiposmótico) con morfología y motilidad tienen un P menror 0.002. Con relación a la tasa de preñez, se tiene un P mayor 0.05, luego del empadre con los cinco ovinos machos se han obtenido altos porcentajes de parición (mayor 75%) lo que nos dice del potencial fértil en los machos cuyas muestras de semen se estudiaron. Se concluye, que en general, la técnica para ver los grados de compactación de la cromatina tiene una alta probabilidad en poder dar un diagnóstico inicial del futuro potencial fértil de poblaciones de espermatozoides en la especie ovina. / This study should contribute to knowledge of gametes cell biology in Junin rams, because few researchs on the sperm population of Junin ram. It has been described the main characteristic of the plasmatic membrane like its structure and physiology, both of them are important in order to state if there was activity of predicting fertility in sperm populations, that is was very high relationship between effects of eosin and hypoosmotic swelling test with values of morphology and motility, these values are common in test to evidence that we were working with sperm populations in order to achieve positives outcomes in genetic improvement programs using artificial insemination and in vitro fertilization, besides to conserve a source of genetics resources. The objective of this research was to evaluate nuclear chromatin stability in ram sperm (5 rams) and the association with structural and functional integrity of ram membrane beside its relation with pregnancy rate (75 sheeps). The experimental design was Split Plot to evaluate nuclear condensation of sperm chromatin in Junin rams, they are interacted with each month and used techniques (BB, SDS, and EDTA), they had high significance between nuclear condensation values, no matter which animal was evaluated. Besides differences between treatments are no significant but so between nuclear condensations values (P less 0.0001). The relationship between structural and functional integrity of membrane with morphology and motility was (P less 0.002). With regard to pregnancy rate (more 75%), it was said about fertility potencial of rams sperms populations that were studied. It was concluded in general that techniques to evaluate nuclear condensation values does have a high likelihood to give diagnosis about future potential of sperm populations in Junin ram.