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Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biophysics and Physical Chemistry Candidate: Monika Novotná Supervisor of Diploma Thesis: Mgr. Monika Kuchařová, Ph.D. Title of Diploma Thesis: The determination of fatty acid levels in the tissues of healthy, suddenly deceased persons and polymorbid patients The aim of the thesis was to determine the levels of 14 fatty acids in tissues of suddenly deceased, otherwise healthy individuals and in the group of polymorbid, chronic patients. It was a comparison of fatty acid levels in seven tissues of the human body: subendocardial left ventricular tissue, liver parenchyma tissue, kidney cortex, adrenal tissue, skeletal muscle, abdominal subcutaneous adipose tissue, and brain tissue. Each group included 10 deceased patients. The theoretical part incudes fatty acids as the main component of lipids. It deals mainly with the group of polyunsaturated fatty acids and their relation to pathologies in the human body. Gas chromatography, thanks to which we analyzed the fatty acid spectrum, is also described. The experimental part consists of the basic characteristics of the research groups, the description of the workflow and the results. Statistically processed data are divided into categories by individual fatty acids and other monitored...

O presente trabalho avaliou a influência de quatro fatores no processo de extração dos lipídios da biomassa de três microalgas marinhas: Chlorella minutíssima, Dunaliella salina e Nannochloropsis gaditana. Estes fatores foram: a umidade da biomassa, a proporção entre os solventes, o volume total de solventes e o tempo de ultrassom, estabelecidos em três diferentes níveis e verificados simultaneamente em diferentes combinações, em um arranjo ortogonal de Taguchi. O objetivo primeiro deste estudo simultâneo foi encontrar o ajuste fornecedor da maior porcentagem de lipídios. Três diferentes níveis de umidade foram investigados na biomassa: 64%, 72% e 80%. A extração de lipídios da biomassa microalgal com elevado teor de umidade permite grande economia de tempo e energia, que seriam consumidos no processo de secagem, caso o processo de extração exigisse somente biomassa seca. Quanto à proporção entre os solventes e ao volume total de solventes, buscou-se encontrar as quantidades ideais de cada um dos solventes empregados: clorofórmio, metanol e água, que contribuem para a lise celular e o sequestro mais eficiente dos lipídios. A quarta variável, o tempo de ultrassom, foi verificado por ser um catalisador do processo de lise celular. O estudo dessas variáveis visou não somente melhorar a eficácia da extração, mas economizar tempo de processo e energia. O processo compreendeu a hidratação controlada da biomassa, seguido da extração propriamente dita, onde um sistema ternário formou-se com a separação posterior em duas fases distintas, com os lipídios dissolvidos na fase orgânica. Além de determinar a melhor condição de extração, este trabalho verificou o potencial do material lipídico das três espécies à conversão em ésteres de etila, visando a produção de biodiesel e a composição em ácidos graxos, avaliando seu potencial à aplicação nutracêutica, como fonte de ácidos graxos essenciais. A melhor condição de extração resultou de uma biomassa com 64% de umidade, proporção de 5,7 de clorofórmio para 3,0 de metanol e 1,0 de água em um volume total de 33 mL de solventes por grama de biomassa; tempos de ultrassom de 50 ou 70 minutos mostraram-se adequados para obtenção dos maiores teores lipídicos. O material lipídico extraído das três espécies revelou-se promissor como matéria-prima para a produção de biodiesel, com conversões de até 94,5%, via catálise ácida, após um tempo de reação de 5 horas a 80ºC e também rico em ácidos graxos essenciais, principalmente os ácidos linoleico e ?-linolênico. A composição em ácidos graxos das três espécies foi comparada com outras espécies do mesmo gênero, e diferentes meios de cultivo, mostrando a influência do cultivo sem injeção de dióxido de carbono, que favorece a síntese de ácidos graxos poli-insaturados. O método de Taguchi foi o diferencial por permitir a avaliação conjunta de todas as variáveis, contribuindo para encontrar os melhores ajustes em menor tempo, ressaltando o ineditismo deste trabalho de pesquisa. / This work aimed to study four factors that influence in the process of lipids extraction in the biomass from three marine microalgae species: Chlorella minutíssima, Dunaliella salina and Nannochloropsis gaditana. These factors were: biomass\' moisture, solvents\' ratio, solvents\' total volume and ultrasonic time, which were set at three different levels and observed simultaneously in a Taguchi orthogonal arrangement. The first objective of this study was to find the simultaneous adjustment provider of higher percentage of lipids. Three different humidity levels were investigated in biomass: 64%, 72% and 80%. The extraction of lipids of microalgal biomass with high moisture content allows great savings of time and energy that would be consumed in the drying process before the extraction if only dry biomass was demanded. Regarding the proportion between solvents and the total volume of solvents, we looked for to find the optimal amounts of each of the employed solvent: chloroform, methanol and water, which contribute to cell lysis and more efficient lipids sequestration. The fourth variable as a catalyst cellular lysis process, ultrasound time was checked. The method comprised controlled hydration of the biomass followed by extraction, where a ternary system formed with subsequent separation into two phases, with lipids dissolved in the organic phase. Besides determining the best extraction condition, this work had as objective verifying the potential of the lipid material to conversion into ethyl esters, aiming at the production of biodiesel and the composition of fatty acids, evaluating its potential for nutraceutical application as a source of essential fatty acids. The best extraction condition employed 64% humidity biomass, ratio of 5,7/3/1 chloroform/methanol/water, 33 mL solvents/gram, ultrasound times of 50 or 70 minutes were adequate to obtain the highest lipid contents. The lipid material extracted from the three species proved promising as raw material for biodiesel production, with conversions up to 94.5%, via acid catalysis, after a reaction time of 5 hours at 80ºC and also rich in essential fatty acids, especially linoleic and ?-linolenic acids. The fatty acid composition of the three species was compared to other species of the same genus and different culture media, showing the influence of the culture without injection of carbon dioxide, which favors the synthesis of polyunsaturated fatty acids. Taguchi method was the differential for allowing the joint evaluation of all the variables, contributing to find the best adjustments in a shorter time, highlighting the novelty of this research work.

O presente trabalho avaliou a influência de quatro fatores no processo de extração dos lipídios da biomassa de três microalgas marinhas: Chlorella minutíssima, Dunaliella salina e Nannochloropsis gaditana. Estes fatores foram: a umidade da biomassa, a proporção entre os solventes, o volume total de solventes e o tempo de ultrassom, estabelecidos em três diferentes níveis e verificados simultaneamente em diferentes combinações, em um arranjo ortogonal de Taguchi. O objetivo primeiro deste estudo simultâneo foi encontrar o ajuste fornecedor da maior porcentagem de lipídios. Três diferentes níveis de umidade foram investigados na biomassa: 64%, 72% e 80%. A extração de lipídios da biomassa microalgal com elevado teor de umidade permite grande economia de tempo e energia, que seriam consumidos no processo de secagem, caso o processo de extração exigisse somente biomassa seca. Quanto à proporção entre os solventes e ao volume total de solventes, buscou-se encontrar as quantidades ideais de cada um dos solventes empregados: clorofórmio, metanol e água, que contribuem para a lise celular e o sequestro mais eficiente dos lipídios. A quarta variável, o tempo de ultrassom, foi verificado por ser um catalisador do processo de lise celular. O estudo dessas variáveis visou não somente melhorar a eficácia da extração, mas economizar tempo de processo e energia. O processo compreendeu a hidratação controlada da biomassa, seguido da extração propriamente dita, onde um sistema ternário formou-se com a separação posterior em duas fases distintas, com os lipídios dissolvidos na fase orgânica. Além de determinar a melhor condição de extração, este trabalho verificou o potencial do material lipídico das três espécies à conversão em ésteres de etila, visando a produção de biodiesel e a composição em ácidos graxos, avaliando seu potencial à aplicação nutracêutica, como fonte de ácidos graxos essenciais. A melhor condição de extração resultou de uma biomassa com 64% de umidade, proporção de 5,7 de clorofórmio para 3,0 de metanol e 1,0 de água em um volume total de 33 mL de solventes por grama de biomassa; tempos de ultrassom de 50 ou 70 minutos mostraram-se adequados para obtenção dos maiores teores lipídicos. O material lipídico extraído das três espécies revelou-se promissor como matéria-prima para a produção de biodiesel, com conversões de até 94,5%, via catálise ácida, após um tempo de reação de 5 horas a 80ºC e também rico em ácidos graxos essenciais, principalmente os ácidos linoleico e ?-linolênico. A composição em ácidos graxos das três espécies foi comparada com outras espécies do mesmo gênero, e diferentes meios de cultivo, mostrando a influência do cultivo sem injeção de dióxido de carbono, que favorece a síntese de ácidos graxos poli-insaturados. O método de Taguchi foi o diferencial por permitir a avaliação conjunta de todas as variáveis, contribuindo para encontrar os melhores ajustes em menor tempo, ressaltando o ineditismo deste trabalho de pesquisa. / This work aimed to study four factors that influence in the process of lipids extraction in the biomass from three marine microalgae species: Chlorella minutíssima, Dunaliella salina and Nannochloropsis gaditana. These factors were: biomass\' moisture, solvents\' ratio, solvents\' total volume and ultrasonic time, which were set at three different levels and observed simultaneously in a Taguchi orthogonal arrangement. The first objective of this study was to find the simultaneous adjustment provider of higher percentage of lipids. Three different humidity levels were investigated in biomass: 64%, 72% and 80%. The extraction of lipids of microalgal biomass with high moisture content allows great savings of time and energy that would be consumed in the drying process before the extraction if only dry biomass was demanded. Regarding the proportion between solvents and the total volume of solvents, we looked for to find the optimal amounts of each of the employed solvent: chloroform, methanol and water, which contribute to cell lysis and more efficient lipids sequestration. The fourth variable as a catalyst cellular lysis process, ultrasound time was checked. The method comprised controlled hydration of the biomass followed by extraction, where a ternary system formed with subsequent separation into two phases, with lipids dissolved in the organic phase. Besides determining the best extraction condition, this work had as objective verifying the potential of the lipid material to conversion into ethyl esters, aiming at the production of biodiesel and the composition of fatty acids, evaluating its potential for nutraceutical application as a source of essential fatty acids. The best extraction condition employed 64% humidity biomass, ratio of 5,7/3/1 chloroform/methanol/water, 33 mL solvents/gram, ultrasound times of 50 or 70 minutes were adequate to obtain the highest lipid contents. The lipid material extracted from the three species proved promising as raw material for biodiesel production, with conversions up to 94.5%, via acid catalysis, after a reaction time of 5 hours at 80ºC and also rich in essential fatty acids, especially linoleic and ?-linolenic acids. The fatty acid composition of the three species was compared to other species of the same genus and different culture media, showing the influence of the culture without injection of carbon dioxide, which favors the synthesis of polyunsaturated fatty acids. Taguchi method was the differential for allowing the joint evaluation of all the variables, contributing to find the best adjustments in a shorter time, highlighting the novelty of this research work.

During the 21 day incubation period, the fertile egg provides nutrients such as fatty acids for energy and polyunsaturated fatty acids (PUFA) for membrane synthesis to the developing chick. The hypothesis tested in the present study is that the type of PUFA fed to the breeder hen can alter tissue lipid composition and PUFA metabolism in the progeny during growth. The objective of the present study was to test two different sources of PUFA (n-3 or n-6) on: 1) egg production, egg, and chick quality; and 2) changes in tissue PUFA composition and metabolism in progeny during growth. Fertilized eggs (n=240) were collected from Ross breeder hens (n=45) fed one of the three experimental diets containing 3.5% fish (long chain n-3), flax (18:3 n-3), or safflower oil (18:2 n-6). The egg and yolk weight was lowest for eggs from hens fed fish oil (P=0.09, P=0.02). The chick weight on day of hatch was 41.2, 45.3, and 43.3g, for fish, flax, and safflower, respectively (P=0.003). In the second experiment fertilized eggs were collected from Lohman Brown layer hens (n=75) fed a control, high n-3, or low n-3 diet. Chicks were raised up to day 14 on a control diet lacking long-chain n-6 and n-3 fatty acids. Chick tissue samples (gastrointestinal tract, liver, and blood) were collected on day 1, 7, and 14 and were subjected to fatty acid (FA) and interleukin-6 (IL-6) analysis. The long-chain n-6 to long chain n-3 ratio was lowest in the duodenum, jejunum, ileum, and liver from chicks hatched from fish oil fed hens (P<0.001) up to day 14. Interleukin-6 was lowest in liver (P=0.009) and serum on day of hatch, for fish oil chicks. The results from this study show that the diet fed to breeder hens alters progeny tissue PUFA composition and lipid metabolism during early development in avians. The long term effects of maternal diet manipulation on progeny growth and lipid metabolism need to be investigated in detail. / Graduation date: 2013

Resumo: Este ensaio teve como objetivo avaliar a suplementação alimentar com dois óleos vegetais (soja e linhaça) e parede celular de Saccharomyces cerevisiae em tilápias do Nilo sobre o desempenho produtivo, inflamação aguda induzida por Streptococcus agalactiae inativado, inflamação crônica por corpo estranho por meio do implante de lamínulas de vidro no tecido subcutâneo e a taxa de sobrevivência frente ao desafio com S. agalactiae. Foram utilizadas 840 tilápias, invertidas sexualmente, distribuídas em 24 caixas de 500L (n=35). O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado com oito tratamentos e três repetições, no qual foram testadas duas fontes de ácidos graxos essenciais (óleo de soja (OS) e óleo de linhaça (OL)) e dois níveis de parede celular de S. cerevisiae (PC) na dieta (0,0 e 0,3%) constituindo os seguintes tratamentos: OS; OL; OS+OL; OS+PC; OL+PC; OS+OL+PC; PC e controle. Os peixes receberam as rações teste durante três meses, duas vezes ao dia, ad libitum. Um lote de peixes foi avaliado quanto ao acúmulo de células na inflamação induzida por S. agalactiae inativado, na bexiga natatória após 12, 24 e 48 horas. O segundo lote de peixes foi submetido ao implante de lamínulas de vidro no tecido subcutâneo por dois, quatro, seis e oito dias, quando foram colhidas e avaliadas quanto ao acúmulo de macrófagos e formação de gigantócitos. Dentre os parâmetros hematológicos foi realizado eritrograma completo (contagem de células vermelhas, percentual de hematócrito e taxa de hemoglobina). Além disso, foi avaliada a atividade respiratória de leucócitos sanguíneos. No terceiro lote de peixes, foram avaliados os parâmetros de desempenho produtivo e a sobrevivência frente ao desafio bacteriano com S. agalactiae. No estudo da inflamação aguda constatou-se o efeito da suplementação alimentar com os óleos vegetais (soja e/ou linhaça) ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This test was designed to evaluate dietary supplementation with two vegetable oils (soybean and linseed) and cell wall of Saccharomyces cerevisiae in Nile tilapia growth performance, acute inflammation induced by Streptococcus agalactiae inactivated, chronic inflammation of foreign body through implantation of glass coverslips into the subcutaneous tissue and survival upon challenge with S. agalactiae. 840 tilapia, sexually inverted, were distributed into 24 aquarium of 500L (n = 35). The design was completely randomized with eight treatments and three replicates which two sources of essential fatty acids (soybean oil (SO) and linseed oil (LO)) and two levels of the cell wall of S. cerevisiae (PC) in diet (0.0 and 0.3%), and tested to the following treatments: OS, OL, OL + OS, OS + PC, PC + OL; OS + OL + PC, PC and control. The fish were fed with diets for three months, twice daily, ad libitum. In one group of fish the accumulation of cells in the inflammation induced by S. agalactiae inactivated in bladder after 12, 24 and 48 hours were evaluated. The second group of fish was subjected to implantation of glass coverslips into the subcutaneous tissue by two, four, six and eight days when they were harvested and evaluated for macrophage accumulation and formation of giant cell. Among the hematological parameters the complete erythrocyte (red blood cell count, percentage of hematocrit and hemoglobin) was performed. Furthermore, the respiratory activity of blood leukocytes was evaluated. The third group of fish, the productive performance parameters and survival to the bacterial challenge with S. agalactiae was evaluated. In the study of acute inflammation was found the effect of dietary supplementation with vegetable oils (soybean and / or linseed), as well as the yeast cell wall increased accumulation of total cells in the exudate of the swim bladder... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Flávio Ruas de Moraes / Coorientador: Fabiana Pilarski / Banca: Ana Lúcia Salaro / Banca: Áureo Evangelista Santana / Banca: Marco Antônio de Andrade Belo / Banca: Margarida Maria Barros / Doutor

Introduktion: Torra ögon (DES) och Sjögrens syndrom (SjS) är inflammatoriska sjukdomar som drabbar ögonen. DES drabbar tårkörtelns funktionella del vilket ger ögonsmärta och suddig syn. SjS är en kronisk autoimmun sjukdom som ger skada på tår- och salivproducerande körtlar. Det leder till kliniska symtom i form av mun- och ögontorrhet. Essentiella fettsyror bildar proinflammatoriska och antiinflammatoriska cytokiner som kan hjälpa vid behandling av dessa sjukdomar. Metod och syfte: En litteraturstudie genomfördes för att ta reda på om fleromättade fetter kan lindra symtomen vid SjS och DES. Resultat: Resultaten för studierna visade resultat på OSDI, Schirmers test, BUT, IL-17, tårosmolaritet, tårvolym, ostimulerat salivflöde, stimulerat salivflöde, sonderingsdjup, PGE1, van Bijstervelds poäng och flourscein infärgning. Diskussion: Resultatet visar signifikanta skillnader för vissa doser av n-3 och n-6. Det som skiljer resultaten åt är de olika doserna av fettsyror samt vad dess placebokontroller intog. OSDI visade främst skillnader på de patienter med DES men endast på en grupp med SjS som intog n-3 för behandling av torr mun. Schirmers test och BUT visade en ökning hos patienterna med mild och måttlig DES men inte på patienterna med SjS. Patienterna med SjS visade förbättringar på stimulerat salivflöde och OSDI för torr mun samt PGE1 nivåer och flourscein infärgning samtidigt som en del studier inte visade några signifikanta förbättringar på några mätvariabler. Det kan grunda sig i intaget av fettsyror, sjukdomstillstånd eller längden på behandling. Slutsats: En del personer kan få förbättrade symtom av att inta n-3 eller n-6 tillskott men skillnaderna är inte alltid statistiskt signifikanta för studierna. / Introduction: Dry eye syndrome (DES) and Sjögren ́s syndrome (SjS) are inflammatory diseases that affect the eyes. DES affects the lacrimal glands functional unit, causing eye pain and blurred vision. SjS is a chronical autoimmune disease that causes damage to tear and salivary glands. It leads to clinical symptoms in the form of mouth and eye irritation. Essential fatty acids form pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines that can help in the treatment of these diseases. Method and purpose: A literature study was performed to study if essential fatty acids can relieve the symptoms of DES and SjS. Results: The results for the studies showed results on OSDI, Schirmer ́s test, BUT, IL- 17, tear osmolarity, tear volume, unstimulated salivary flow, stimulated salivary flow, depth of probing, van Bijsterveld ́s score and flourscein staining. Discussion: The result shows significant differences for certain doses of n-3 and n-6. What separates the results are the different doses of fatty acids and what their placebo controls took. OSDI showed major differences in patients with DES but only in one group of patients with SjS who took n-3 for treating dry mouth. Schirmer ́s test and BUT showed an increase in patients with mild and moderate DES but not in patients with SjS. Patients with SjS showed improvements in stimulated salivary flow, dry mouth OSDI, PGE1 levels and flourscein staining, while some studies did not show any significant improvements in any measurement variables. It may be due to the intake of fatty acids, disease states or the length of treatment. Conclusion: Some people may get improved symptoms of taking n- 3 or n-6 supplements, but the differences are not always statistically significant for the studies.

Em órgãos potencialmente importantes na resposta imune, como o baço, alternativas como o autoimplante de segmentos esplênicos, quando a esplenectomia total torna-se necessária, e a utilização de nutrientes com funcionalidade imunomoduladora vêm sendo estudadas, objetivando minimizar o efeito pró-inflamatório persistente da sepse abdominal. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do consumo de óleo de peixe na modulação da resposta inflamatória em animais submetidos a esplenectomia total isolada ou combinada com autoimplante esplênico e à indução de sepse abdominal, verificando a possível otimização na resposta pró-inflamatória e a regeneração funcional do autoimplante. Utilizamos 64 ratos machos da linhagem Wistar, com peso variando entre 140-200 g, aleatoriamente distribuídos em oito grupos: quatro grupos-controle (100% óleo de soja) e quatro grupos-intervenção (35% de óleo de peixe), cada um com oito animais. Os dos grupos-controle (animais alimentados com ração purificada, segundo AIN-93, com conteúdo lipídico constituído por 100% óleo de soja) foram: I sem intervenção cirúrgica e, 16 semanas após, submetidos à indução de sepse abdominal; II esplenectomia total isolada e, 16 semanas após, submetidos à indução de sepse abdominal; III esplenectomia total combinada com autoimplante esplênico e, 16 semanas após, submetidos à indução de sepse abdominal; e IV esplenectomia total combinada com autoimplante esplênico e, oito semanas após, submetidos à indução de sepse abdominal. Os dos grupos-intervenção (V a VIII) foram submetidos a procedimentos similares aos executados nos grupos I a IV, respectivamente, sendo a única modificação fundamentada na substituição de 35% do conteúdo lipídico da alimentação dos animais por óleo de peixe. Todos os animais foram submetidos a sepse induzida por ligadura e perfuração cecal (CLP). Coletamos amostras sanguíneas de todos os animais antes da indução da sepse (período 1) e 2 e 4 horas (períodos 2 e 3) após a indução da sepse abdominal. Verificou-se, a cada três dias, massa corporal (MC) e ingestão alimentar (IA). Analisamos as citocinas INF-&#947;, IL-6 e IL-10 por meio da tecnologia Luminex. Utilizamos o teste T de Student para análise estatística, considerando significativo com p&#8804;0,05. Os dos grupos V, VI e VIII apresentaram maior consumo alimentar que seus controles. Os do grupo V apresentaram menores concentrações de IFN-&#947; em todos os períodos e maior IL-10 nos períodos 2 e 3. Os do grupo VI apresentaram menores concentrações de todas as citocinas: IFN-&#947; nos períodos 2 e 3; IL-6 nos períodos 1 e 2; e maior IL-10 nos períodos 1 e 2. Os do grupo VIII apresentaram menor IFN-&#947; no período 3, IL-6 no período 2, e maior IL-10 no período 1. Não observou-se diferenças nos do grupo VII em nenhuma das citocinas estudadas. Este estudo demonstrou que a utilização do óleo de peixe em pequena dose, consumido cronicamente, como parte do teor lipídico total da dieta e não de forma suplementar, é capaz de manter a massa corporal adequada e reduzir a resposta inflamatória à sepse abdominal induzida por CLP, aumentando a IL-10 plasmática em ratos que não sofreram intervenção cirúrgica, e parece favorecer a regeneração funcional precoce do autoimplante esplênico. / In organs potentially important in the immune response, like the spleen, alternatives such as autotransplantation of splenic segments, when the total splenectomy becomes necessary, and the use of nutrients with immunomodulatory function have been studied, trying to minimize the effect of pro-inflammatory persistent abdominal sepsis. The aim of this study was to evaluate the effect of consumption of fish oil in modulating the inflammatory response in animals submitted to total splenectomy alone or combined with spleen autotransplantation and the induction of sepsis, verifying the possible optimization in the proinflammatory response and the functional regeneration of the autotransplant. We used 64 male Wistar rats, weighing between 140-200 g, were randomly distributed into eight groups: four control-groups (100% soybean oil) and four intervention-groups (35% fish oil), each one with ten animals. The rats in control groups (animals fed with purified according to the AIN-93 with lipid content consisting of 100% soybean oil) : I without surgical intervention, and 16 weeks after, submitted to the induction of abdominal sepsis II total spleenectomy alone, and 16 weeks after, submitted to the induction of abdominal sepsis; III total splenectomy combined with spleen autotransplantation, and 16 weeks after, submitted to the induction of abdominal sepsis; and IV total splenectomy combined with spleen autotransplantation, and 8 weeks after, submitted to the induction of abdominal sepsis. The rats in intervention groups (V to VIII) were subjected to similar procedures performed in groups I to IV, respectively, being the only modification based on the substitution of 35% of the lipid content of animal feed for fish oil. All animals were subjected to sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP). We collected blood samples from all animals before the induction of sepsis (period 1) and 2 and 4 hours (periods 2 and 3) after the induction of abdominal sepsis. We checked every 3 days corporal mass (MC) and alimentary ingestion (AI). We analyzed the cytokines IFN-&#947;, IL-6 and IL-10 by Luminex technology. We used the T-test of Student for statistical analysis, considering significant with a p &#8804; 0.05. The animals in groups V, VI, and VIII showed higher food intake than their controls. The animals in group V showed lower IFN-&#947; in all, IL-6 in periods 1 and 2; and higher IL-10 in periods 2 e 3. The animals in group VI showed lower concentration of all cytokines: IFN-&#947; in periods 2 and 3; IL-6 in periods 1 and 2 and higher IL-10 in periods 1 e 2. The animals in group VIII showed lower IFN-&#947; in period 3, IL-6 in period 2, and higher IL-10 in period 1. No differences were observed with the concentration of cytokines in those of group VII. This study demonstrated that the use of fish oil in small doses, chronically consumed as part of total dietary fat and not as a supplement, is able to maintain the adequate corporal mass and to reduce the inflammatory response to abdominal sepsis induced by CLP, increasing IL-10 concentration in health rats and seems to promote early functional regeneration of the spleen autotransplants.

Resumo: Os ácidos graxos poliinsaturados (PUFAs) exercem importantes funções metabólicas no organismo animal, sendo indispensáveis ao crescimento e higidez em peixes. Foram avaliados os efeitos de diferentes relações entre PUFAs ômega-6 e ômega-3 sobre o desempenho, composição químico-bromatológica da carcaça e índices corporais de tilápias do Nilo. Foram utilizados alevinos revertidos (7,5g±0,21), distribuídos em 40 aquários, sendo oito peixes por aquário. Foram confeccionadas oito rações (tratamentos) experimentais: basal (sem adição de óleo); 6% de óleo de girassol (OG); 5% de OG + 1% de óleo de linhaça (OL); 4% de OG + 2% de OL; 3% de OG + 3% de OL; 2% de OG + 4% de OL; 1% de OG + 5% de OL; 6% de OL. O arraçoamento foi feito até aparente saciedade quatro vezes ao dia (8:30, 11:30, 14:30 e 17:30 horas). Ao final de 85 dias, foram determinados o peso final, ganho de peso, consumo alimentar aparente, conversão alimentar aparente, taxa de eficiência protéica, retenção de proteína e retenção de energia.Foram avaliados também a composição químico-bromatológica da carcaça, os índices corporais e a deposição de gordura visceral. Não houve efeito das dietas sobre o desempenho produtivo e composição corporal de tilápias do Nilo. Apenas a gordura visceral foi alterada dentre os índices corporais. Todas as relações entre PUFAs ômega-6 e ômega-3 proporcionaram desempenho zootécnico semelhante em tilápias do Nilo. Recomenda-se escolher a dieta de acordo com o custo de produção. / Abstract: The polyunsaturated fatty acids (PUFAs) have indispensable metabolic function in fish growth and health. This study was set out to determine the effect of eight diets with different omega-6 and omega-3 PUFAs ratios in performance index, body chemical composition and body indexes of Nile tilapia juveniles. Fish (320 male of 7.50±0,21 g mean) were totally randomly distributed, with five replicates, into 40 plastic aquaria (250 L; 8 fish per aquarium). Eight diets were formulated: basal (with no oil supplementation); 6% sunflower oil (SO); 5% SO + 1% linseed oil (LO); 4% SO + 2% LO; 3% SO + 3% LO; 2% SO + 4% LO; 1% SO + 5% LO; and 6% LO. Fish were fed four times per day (8:30; 11:30; 14:30; and 17:30 hours) for 85 days. At the 85th day, performance index, body chemical composition and body indexes were evaluated. There were no significant differences in fish productive performance and body chemical composition. Visceral fat index in fish fed 6% oils diets contend were high. All diets provided equal tilapia growth performance. / Orientador: Antonio Celso Pezzato / Coorientador: Luiz Edivaldo Pezzato / Banca: José Roberto Sartori / Banca: Dirlei Antonio Berto / Banca: Edma Carvalho de Miranda / Banca: João Batista Kochenborguer Fernandes / Doutor

Em órgãos potencialmente importantes na resposta imune, como o baço, alternativas como o autoimplante de segmentos esplênicos, quando a esplenectomia total torna-se necessária, e a utilização de nutrientes com funcionalidade imunomoduladora vêm sendo estudadas, objetivando minimizar o efeito pró-inflamatório persistente da sepse abdominal. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do consumo de óleo de peixe na modulação da resposta inflamatória em animais submetidos a esplenectomia total isolada ou combinada com autoimplante esplênico e à indução de sepse abdominal, verificando a possível otimização na resposta pró-inflamatória e a regeneração funcional do autoimplante. Utilizamos 64 ratos machos da linhagem Wistar, com peso variando entre 140-200 g, aleatoriamente distribuídos em oito grupos: quatro grupos-controle (100% óleo de soja) e quatro grupos-intervenção (35% de óleo de peixe), cada um com oito animais. Os dos grupos-controle (animais alimentados com ração purificada, segundo AIN-93, com conteúdo lipídico constituído por 100% óleo de soja) foram: I sem intervenção cirúrgica e, 16 semanas após, submetidos à indução de sepse abdominal; II esplenectomia total isolada e, 16 semanas após, submetidos à indução de sepse abdominal; III esplenectomia total combinada com autoimplante esplênico e, 16 semanas após, submetidos à indução de sepse abdominal; e IV esplenectomia total combinada com autoimplante esplênico e, oito semanas após, submetidos à indução de sepse abdominal. Os dos grupos-intervenção (V a VIII) foram submetidos a procedimentos similares aos executados nos grupos I a IV, respectivamente, sendo a única modificação fundamentada na substituição de 35% do conteúdo lipídico da alimentação dos animais por óleo de peixe. Todos os animais foram submetidos a sepse induzida por ligadura e perfuração cecal (CLP). Coletamos amostras sanguíneas de todos os animais antes da indução da sepse (período 1) e 2 e 4 horas (períodos 2 e 3) após a indução da sepse abdominal. Verificou-se, a cada três dias, massa corporal (MC) e ingestão alimentar (IA). Analisamos as citocinas INF-&#947;, IL-6 e IL-10 por meio da tecnologia Luminex. Utilizamos o teste T de Student para análise estatística, considerando significativo com p&#8804;0,05. Os dos grupos V, VI e VIII apresentaram maior consumo alimentar que seus controles. Os do grupo V apresentaram menores concentrações de IFN-&#947; em todos os períodos e maior IL-10 nos períodos 2 e 3. Os do grupo VI apresentaram menores concentrações de todas as citocinas: IFN-&#947; nos períodos 2 e 3; IL-6 nos períodos 1 e 2; e maior IL-10 nos períodos 1 e 2. Os do grupo VIII apresentaram menor IFN-&#947; no período 3, IL-6 no período 2, e maior IL-10 no período 1. Não observou-se diferenças nos do grupo VII em nenhuma das citocinas estudadas. Este estudo demonstrou que a utilização do óleo de peixe em pequena dose, consumido cronicamente, como parte do teor lipídico total da dieta e não de forma suplementar, é capaz de manter a massa corporal adequada e reduzir a resposta inflamatória à sepse abdominal induzida por CLP, aumentando a IL-10 plasmática em ratos que não sofreram intervenção cirúrgica, e parece favorecer a regeneração funcional precoce do autoimplante esplênico. / In organs potentially important in the immune response, like the spleen, alternatives such as autotransplantation of splenic segments, when the total splenectomy becomes necessary, and the use of nutrients with immunomodulatory function have been studied, trying to minimize the effect of pro-inflammatory persistent abdominal sepsis. The aim of this study was to evaluate the effect of consumption of fish oil in modulating the inflammatory response in animals submitted to total splenectomy alone or combined with spleen autotransplantation and the induction of sepsis, verifying the possible optimization in the proinflammatory response and the functional regeneration of the autotransplant. We used 64 male Wistar rats, weighing between 140-200 g, were randomly distributed into eight groups: four control-groups (100% soybean oil) and four intervention-groups (35% fish oil), each one with ten animals. The rats in control groups (animals fed with purified according to the AIN-93 with lipid content consisting of 100% soybean oil) : I without surgical intervention, and 16 weeks after, submitted to the induction of abdominal sepsis II total spleenectomy alone, and 16 weeks after, submitted to the induction of abdominal sepsis; III total splenectomy combined with spleen autotransplantation, and 16 weeks after, submitted to the induction of abdominal sepsis; and IV total splenectomy combined with spleen autotransplantation, and 8 weeks after, submitted to the induction of abdominal sepsis. The rats in intervention groups (V to VIII) were subjected to similar procedures performed in groups I to IV, respectively, being the only modification based on the substitution of 35% of the lipid content of animal feed for fish oil. All animals were subjected to sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP). We collected blood samples from all animals before the induction of sepsis (period 1) and 2 and 4 hours (periods 2 and 3) after the induction of abdominal sepsis. We checked every 3 days corporal mass (MC) and alimentary ingestion (AI). We analyzed the cytokines IFN-&#947;, IL-6 and IL-10 by Luminex technology. We used the T-test of Student for statistical analysis, considering significant with a p &#8804; 0.05. The animals in groups V, VI, and VIII showed higher food intake than their controls. The animals in group V showed lower IFN-&#947; in all, IL-6 in periods 1 and 2; and higher IL-10 in periods 2 e 3. The animals in group VI showed lower concentration of all cytokines: IFN-&#947; in periods 2 and 3; IL-6 in periods 1 and 2 and higher IL-10 in periods 1 e 2. The animals in group VIII showed lower IFN-&#947; in period 3, IL-6 in period 2, and higher IL-10 in period 1. No differences were observed with the concentration of cytokines in those of group VII. This study demonstrated that the use of fish oil in small doses, chronically consumed as part of total dietary fat and not as a supplement, is able to maintain the adequate corporal mass and to reduce the inflammatory response to abdominal sepsis induced by CLP, increasing IL-10 concentration in health rats and seems to promote early functional regeneration of the spleen autotransplants.