A monitorização terapêutica permite a individualização do regime de dosagem, assegurando a eficácia clínica e minimizando os efeitos adversos dos fármacos prescritos. Atualmente, as estatinas têm sido monitoradas, pois, embora eficazes e muito utilizadas, apresentam alguns efeitos adversos não desejáveis. Neste trabalho, as técnicas SPME e cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC-MS) foram avaliadas para a análise de estatinas (fluvastatina, simvastatina e atorvastatina) em plasma humano para fins de monitorização terapêutica. As condições de extração e derivatização foram otimizadas empregando planejamento experimental e avaliando a influência dos principais parâmetros envolvidos. Para otimização das condições de extração avaliou-se parâmetros como tempo e temperatura de extração, pH, volume de solução tampão e força iônica; e para otimização das condições de derivatização avaliou-se parâmetros como volume de reagente derivatizante, volume de agente pareador iônico e pH. A extração foi realizada utilizando fibras de PDMS-DVB, e a dessorção feita termicamente no injetor do cromatógrafo a gás. O método desenvolvido foi validado segundo normas da ANVISA, apresentando linearidade na faixa de 20 a 500 ng mL-1, precisão com coeficientes de variação menor que 14% e recuperação relativa de 20 a 40%. Concluída a validação analítica, a metodologia proposta foi aplicada em amostras reais de plasma de pacientes em terapia com simvastatina concedidas pelo Laboratório Médico Dr. Maricondi e pela Casa de Saúde de São Carlos. / Therapeutic drug monitoring allows individualization of dosage regimen, ensuring the clinical efficacy and minimizing the adverse effects of prescribed drugs. Currently, statins have been monitored; despite they are effective, some statins have undesirable adverse effects. In this work, SPME technique and gas chromatography / mass spectrometry (GC-MS) were evaluated for analysis of statins (fluvastatin, simvastatin and atorvastatin) in human plasma for therapeutic drug monitoring. The extraction and derivatization conditions were optimized using experimental design and evaluating the influence of the main parameters involved in the SPME procedure. To optimize the extraction conditions were evaluated parameters such as time and extraction temperature, pH, volume of buffer and ionic strength, and to optimize the derivatization conditions were evaluated parameters as derivatization reagent volume, ionic agent pareador volume and pH. The extraction was performed using PDMS-DVB fibers, and thermal desorption performed in the injector of the gas chromatograph. The method was validated according to ANVISA, showing linearity in the range 20 to 500 ng mL-1, the precision with coefficients of variation less than 14% and relative recovery from 20 to 40%. The proposed methodology was applied to real samples of plasma from patients on therapy with simvastatin provided by the Laboratório Médico Dr. Maricondi and Casa de Saúde of São Carlos.

Contexto: a eficácia dos inibidores da 3-hidróxi-3-metilglutaril-coenzima (HMG-CoA) redutase (estatinas) na prevenção primária e secundária na doença cardiovascular é bem estabelecida na literatura. Contudo os benefícios destes fármacos na prevenção secundária de mortalidade e eventos cardiovasculares no paciente com Síndrome Coronariana Aguda (SCA), ainda não foram completamente esclarecidos. Objetivo: analisar os benefícios do uso das estatinas comparadas a placebo ou cuidados usuais nos pacientes com SCA quanto a redução de mortalidade (por todas as causas), infarto agudo do miocárdio (fatal e não-fatal), intervenção coronária percutânea, revascularização cirúrgica do miocárdio e hospitalização. Base de Dados: trata-se de uma revisão sistemática finalizada em 29 de Janeiro de 2012, cuja seleção dos ensaios clínicos controlados e randomizados (ECCR) foi realizada nas bases de dados eletrônicas PubMed/MEDLINE, EMBASE, Cochrane Central, LILACS e Banco de Teses - CAPES. Coleta de Dados: a extração das informações sobre características basais dos estudos incluídos, avaliação da qualidade metodológica e desfechos não combinados foi realizada por dois investigadores de forma independente. Resultados: foram incluídos na metanálise 18 ECCR, que envolveram 15.370 pacientes com SCA. O uso das estatinas mostrou benefício na redução da mortalidade por todas as causas, diferença de risco (rd) = -0,0066 (IC 95% -0,0121 a -0,001; P=0,8459; I2=0%) e hospitalização rd = -0,0101 (IC 95% -0,0188 a -0,0014; P=2,1496; I2=76%). Quanto aos desfechos mortalidade cardiovascular, infarto agudo do miocárdio fatal e não fatal, intervenção coronária percutânea e revascularização cirúrgica do miocárdio não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos estatinas versus placebo ou cuidados usuais. Conclusões: as evidências disponíveis apontam que as estatinas causam redução na mortalidade por todas as causas e na hospitalização, porém não demonstram diferença quando comparadas ao placebo ou cuidados usuais em outros eventos de importante magnitude clínica e econômica no âmbito dos serviços de saúde e da sociedade. / Context: the effectiveness of inhibitors of 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzyme (HMG-CoA) reductase (statins) in primary and secondary prevention of cardiovascular disease is well established in the literature. However, the benefits of these drugs in secondary prevention of mortality and cardiovascular events in patients with Acute Coronary Syndrome (ACS) have still not been fully clarified. Objective: to analyze the benefits of using statins compared to placebo or usual care in patients with SCA on the reduction of mortality (from all causes), myocardial infarction (fatal and non-fatal), percutaneous coronary intervention, revascularization and hospitalization. Database: this is a systematic review completed on January 29, 2012, whose selection of randomized and controlled clinical trials (ECCR) was held in electronic databases MEDLINE, EMBASE, PubMed/Cochrane Central, LILACS and Theses database-CAPES. Data collection: two researchers performed the extraction of information about Basal characteristics of included studies, evaluation of methodological quality and outcomes not independently combined. Results: were included in the meta-analysis, involving 18 ECCR 15,370 patients with SCA. The use of statins has shown benefit in reducing mortality from all causes, risk difference (rd) = -0.0066 (CI 95% -0.0121 to -0.001; P = 0.8459; I2 = 0%) and hospitalization rd = -0.0101 (CI 95% -0.0188 to -0.0014; P = 2.1496; I2 = 76%). As to cardiovascular, myocardial infarction fatal and non-fatal coronary intervention, and percutaneous revascularization mortality outcomes, there was no statistically significant difference between the groups statins versus placebo or usual care. Conclusions: the available evidence suggests that statins cause a reduction in mortality from all causes and hospitalization, but do not demonstrate difference when compared to placebo or usual care in other important events within cost-effective clinic and economic magnitude of health services and society.

Encefalite auto-imune experimental (EAE) é o modelo animal da doença humana esclerose múltipla. Foi demonstrado que as estatinas podem ter efeitos benéficos na EAE. Diversos mecanismos de ação foram descritos para explicar esses efeitos, entre eles: estímulo a expressão de HO-1, inibição da expressão de Toll-like receptors (TLR) e inibição da produção de citocinas de padrão Th1. Estudamos o efeito de uma estatina, a sinvastatina, na evolução clínica da EAE e seus mecanismos de ação. Também avaliamos o papel do TLR4 na EAE. O tratamento com sinvastatina melhorou a evolução clínica da EAE nas doses de 1 e 5 mg/kg/dia. A análise do infiltrado celular no SNC mostrou mudança do padrão de diferenciação dos linfócitos com menor porcentagem de células produtoras de IL-17 nos grupos tratados em relação aos controles. Os animais TLR-4 -/- apresentaram melhor evolução da doença. Concluímos que o tratamento com sinvastatina melhora a evolução clínica da EAE através da inibição da produção de IL-17 e que animais TLR-4 -/- têm melhor desfecho clínico na EAE que os controles. / Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is considered the experimental model for the human multiple sclerosis disease. It has been demonstrated that statins, used as lipid-lowering agents, can have beneficial effects on EAE. Several actions have been described to explain these effects: enhancement of HO-1 expression, inhibition of Toll-like receptors expression and inhibition of Th1 cytokines. We have investigated the effect of a statin, simvastatin, on EAE clinical development and the mechanisms behind those effects. Simvastatin treatment ameliorated EAE clinical outcome at doses 1 and 5 mg/kg/day. SNC cellular infiltrates analysis showed altered pattern of differentiation with decreased percentage of IL-17-producing T lymphocytes in treated group comparing with controls. TLR4 -/- mice showed better clinical development. We concluded that simvastatin treatment ameliorates EAE clinical outcome through inhibition of IL-17 production. Mice TLR4 -/- have better EAE clinical outcome than WT controls.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-02-06T10:56:50Z No. of bitstreams: 1 paulogiovannidealbuquerquesuassuna.pdf: 2986435 bytes, checksum: 601a570e293e2ce7dbca44808cdfce4a (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-02-06T16:04:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 paulogiovannidealbuquerquesuassuna.pdf: 2986435 bytes, checksum: 601a570e293e2ce7dbca44808cdfce4a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-06T16:04:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 paulogiovannidealbuquerquesuassuna.pdf: 2986435 bytes, checksum: 601a570e293e2ce7dbca44808cdfce4a (MD5) Previous issue date: 2007-07-30 / INTRODUÇÃO: Os fatores de risco cardiovasculares tradicionais e os relacionados à Doença Renal Crônica contribuem para a alta taxa de mortalidade cardiovascular na população em diálise. A coexistência nesta população de desnutrição, inflamação, aterosclerose, anemia e calcificação vascular têm enorme impacto na sobrevida dos pacientes. Como na população geral, as estatinas reduzem a mortalidade geral e cardiovascular na população em diálise através da redução lipídica e seus efeitos pleiotrópicos, destacadamente a capacidade de reduzir a resposta inflamatória crônica destes pacientes, evidenciada pela redução dos níveis de Proteína CReativa ultra-sensível (PCR-us). O grupo de pacientes em hemodiálise com baixo LDL-colesterol (LDL-c), níveis elevados de PCR-us e anemia apresentam alto risco cardiovascular e ainda não existem evidências definitivas de benefício com uso de estatinas. OBJETIVO: Avaliar a eficácia de uma baixa dose de sinvastatina que visa apenas efeitos pleiotrópicos em comparação com uma dose padrão na redução da resposta inflamatória evidenciada pelos níveis de PCR-us, parâmetros hematimétricos, resistência à eritropoetina (IR-EPO), índice de massa corpóreo (IMC) e escore de inflamação-desnutrição (MIS). MÉTODO: Quarenta e dois pacientes estáveis em hemodiálise há mais de seis meses, maiores de 18 anos e sem evidência de processos inflamatórios foram divididos segundo os níveis de LDL-c. Os pacientes com LDL-c<100mg/dl receberam apenas 20mg de sinvastatina após hemodiálise (HD) (grupo-1), enquanto os pacientes com LDL-c>100mg/dl (grupo-2) receberam 20mg/dia durante oito semanas. Antes e após o tratamento foram medidos os níveis de PCR-us, hemoglobina (Hb), hematócrito (Hct) e calculado o IR-EPO, IMC e MIS. Os dados foram analisados com o programa estatístico SPSS. Foi considerado significante p<0.05. RESULTADOS: Houve redução significativa dos níveis de LDL-c e PCR-us em ambos os grupos, sendo a redução do LDL-c significantemente maior no grupo-2 (16,26±17,51% vs 37,73±11,73%, p<0,0001) enquanto a redução da PCR-us foi equivalente em ambos os grupos (35,97±49,23% vs 38,32±32,69%, p=0,86). Houve também queda da IR-EPO e melhora dos parâmetros hematimétricos. Não houve mudança no IMC ou MIS. CONCLUSÃO: A baixa dose de sinvastatina mostrou-se tão eficaz quando a dose usual em reduzir os níveis de PCR-us, a IR-EPO e melhorar os parâmetros hematimétricos, apontando para uma importante redução do risco cardiovascular nestes pacientes. / BACKGROUND: The traditional cardiovascular risk factors and the Chronic Kidney Disease (CKD) related risk factors contribute to the extremely high rate of cardiovascular mortality seems in dialysis population. The coexistence of malnutrition, inflammation, accelerated atherosclerosis, vascular calcification and anemia has an enormous impact in the life span of these patients. As in the general population, statins reduce cardiovascular mortality in dialysis population through lipid lowering and its pleiotropic effects, mainly by the chronic inflammatory process reduction capacity, shown up by the high-sensitive C-reactive protein levels (CRP-hs) reduction. The group of dialysis patients with low LDL-cholesterol (LDL-c), elevated CRP-hs levels and anemia present the highest cardiovascular risk and there are no definite evidences of benefit with statins use. OBJECTIVE: To evaluate the efficacy of a low dose of simvastatin that aims only pleiotropic effects in comparison with a standard dose in CRP-hs levels reduction, hematimetric parameters, erythropoietin resistance (EPO-RI), body mass index (BMI) and inflammation score (MIS). METHODS: Forty-two stable dialysis patients with more than six months on maintenance dialysis program, with more than 18 years old and without inflammation evidence were divided based on LDL-c basal levels. The patients with LDL-c <100mg/dl received only 20mg of simvastatin after hemodialysis session (HD) (group-1), while the patients with LDL-c >100mg/dl (group-2) received 20mg/day during eight weeks follow-up phase. Before and after the statin use, the CRP-hs levels and hematimetric parameters was measured and calculated the EPO-RI, BMI and MIS. The data were analyzed with the SPSS statistic program, through. Was considered significant p<0.05. RESULTS: We found a significant reduction of LDL-c and CRP-hs levels in both groups, but the LDL-c levels reduction was significantly bigger in group-2 (16,26±17,51% vs 37,73±11,73%, p<0,0001) while the PCR-hs levels reduction was equivalent in both groups (35,97±49,23% vs 38,32±32,69%, p=0,86). Lowering of EPO-RI and improvement of hematimetric parameters were also observed. There were no changes in BMI or MIS. CONCLUSION: The pleiotropic dose showed itself as efficient as the usual dose in CRP-hs levels, EPO-RI reduction and improvement of hematimetric parameters, showing an important cardiovascular risk reduction in these patients.

O processo inflamatório tem um papel fundamental na gênese e desenvolvimento da aterosclerose, sendo que a disfunção endotelial é considerada um dos estágios iniciais da aterogênese. Por meio da inibição da enzima hidroxi-metil-glutaril coA redutase (HMGCR), as estatinas reduzem a biossíntese do colesterol e a formação de isoprenóides, produtos intermediários da síntese do colesterol que são importantes na modificação pós-transcricional de GTPases pequenas que estão envolvidas na disfunção endotelial e inflamação vascular. A ezetimiba é um inibidor da absorção do colesterol através da inibição da proteína NPC1L1. Com a finalidade de esclarecer os mecanismos moleculares da inibição da síntese e da absorção do colesterol sobre a modulação de biomarcadores inflamatórios e de adesão celular foram utilizados modelos in vitro com células endoteliais (HUVEC) e monócitos (células THP-1), e in vivo com células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de indivíduos hipercolesterolêmicos (HC). O efeito das estatinas, atorvastatina e sinvastatina, e da ezetimiba na expressão de RNAm e proteínas de moléculas de adesão endoteliais e moduladores do processo inflamatório, como citocinas e óxido nítrico (NO), foi estudado em células HUVEC. O efeito desses fármacos sobre a expressão de moléculas de adesão monocitárias foi estudado em células THP-1. O efeito da terapia hipolipemiante sobre essas moléculas foi também estudada em CMSP de HC tratados com ezetimiba (10 mg/dia/4 semanas), sinvastatina (10 mg/dia/8 semanas) e sinvastatina combinada com ezetimiba (10 mg de cada/dia/4 semanas). A expressão de RNAm foi avaliada por RT-qPCR. A expressão de moléculas de adesão na superfície de células THP-1 e HUVEC foi estudada por citometria de fluxo. A quantificação de citocinas secretadas no sobrenadante de células HUVEC e no plasma dos HC foi analisada pela tecnologia Milliplex. A quantificação do perfil lipífico, Proteína C reativa ultra-sensível (PCRus) e NO foi realizada por métodos laboratoriais convencionais. O papel do NO na modulação dos marcadores inflamatórios pelas estatinas foi também estudada, usando modelo de células HUVEC com NOS3 silenciado por interferência de RNAm e também por meio do uso do inibidor da síntese do óxido nítrico, L-NAME. Também foi avaliado o efeito de hipolipemiantes na expressão dos microRNAs (miRs) 221, miR-222 e miR-1303 em células HUVEC por meio do stem-loop RT-qPCR. O tratamento com atorvastatina e sinvastatina reduziu a expressão de RNAm e proteínas das moléculas de adesão LSelectina, PSGL-1 e VLA-4, em células THP-1 pré-tratadas com TNF&#945; por 12 h. A ezetimiba reduziu a expressão de L-Selectina apenas no nível transcricional. Em células HUVEC, as estatinas diminuíram a expressão de RNAm de IL1B e SELP, entretanto aumentaram a de VCAM1. A ezetimiba reduziu a expressão de RNAm do IL1B. Entretanto as expressões de SELE, MMP9, IL6 e MMP9 não foram afetadas pelos tratamentos. A expressão das proteínas ICAM-1 e P-Selectina, na superfície de células HUVEC, foi diminuída pelo tratamento com as estatinas, mas não pela ezetimiba. Da mesma forma, a secreção das citocinas IL-6 e MCP-1 foram reduzidas pelas estatinas, entretanto a secreção de IL-8 não foi modificada por nenhum dos tratamentos. A expressão de NOS3 e a liberação de NO em células HUVEC foi aumentada pelas estatinas, porém não foi estimulada pela ezetimiba. Entretanto, os efeitos antiinflamatórios exercidos pelas estatinas foram independentes dessa via devido a que estes efeitos foram mantidos em células HUVEC com NOS3 silenciado por interferência de RNAm. Apesar de que o efeito sobre ICAM-1 e MCP-1 foi atenuado quando as células foram simultaneamente tratadas com L-NAME, os efeitos das estatinas parecem ser independentes da liberação de NO. As estatinas e a ezetimiba reduziram a expressão do miR-221, em células HUVEC. A expressão do miR-222 foi reduzida só pelo tratamento com atorvastatina. A expressão do miR-1303 não foi modulada pelos tratamentos hipolipemiantes. Em pacientes HC, a terapia de associação da sinvastatina e ezetimiba demonstrou melhorar o perfil lipídico de forma mais efetiva que ambas monoterapias. Da mesma forma, o tratamento combinado resultou em maior beneficio pela redução da expressão de RNAm em CMSP e da concentração plasmática das proteínas IL-1 &#946;, MCP-1, IL-8 e TNF&#945;. A expressão de ICAM1 foi diminuída apenas no nível transcricional, entretanto a expressão de RNAm mas não da proteína do TNF&#945; foi também reduzida pela sinvastatina em monoterapia. Não houve modulação de RNAm ou proteínas de outros marcadores estudados no modelo in vivo. Por outro lado, os efeitos anti-inflamatórios observados nos indivíduos HC foram independentes da modulação de PCRus e NO que não foram modificados pelos tratamentos hipolipemiantes. Neste estudo, foram confirmados os propostos efeitos pleiotrópicos das estatinas em modelos células de monócito e endotélio vascular in vitro e em pacientes HC. Por outro lado, apesar de ser menos potente que as estatinas foi mostrado que a inibição da absorção do colesterol tem também um efeito anti-inflamatório. A redução adicional do colesterol causado pela combinação das terapias hipolipemiantes outorga um maior beneficio cardiovascular em pacientes hipercolesterolêmicos. / The inflammatory process has a key role in the genesis and development of atherosclerosis and the endothelial disfunction is considered as a first step in atherogenesis. By inhibiting the hydroxyl-methyl-glutaryl coA reductase (HMGCR)m statins reduce the cholesterol synthesis and isoprenoid generation, which are intermediary products of cholesterol synthesis with important role in posttranscriptional modifications of small GTPases that are involved in endothelial disfunction and vascular inflammation. The ezetimibe is an inhibitor of cholesterol absorption by inhibiting the NPC1L1 protein. To clarify the molecular mechanisms of the inhibition of cholesterol synthesis and absorption modulating inflammatory and cell adhesion biomarkers we used in vitro models of endothelial cells (HUVEC) and monocytes (THP-1), and an in vivo model of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from hypercholesterolemic (HC) patients. The effect of the statins, atorvastatin and simvastatin, and the ezetimibe on mRNA and protein expression of endothelial adhesion molecules and modulators of the inflammatory process, as citokynes and nitric oxide (NO), was analyzed in HUVEC. The effect of these drugs on the expression of monocyte adhesion molecules was also studied in THP-1. The influence of hypolipemiant therapy on the adhesion molecules was also analyzed in PBMC from HC treated with ezetimibe (10 mg/day/4-weeks), simvastatin (10 mg/day/8-weeks) and simvastatin combined with ezetimibe (10 mg each/day/4-weeks). The mRNA expression was evaluated by RT-qPCR. The expression of adhesion molecules on the surface of THP-1 and HUVEC cells was analyzed flow cytometry. The citokynes in the supernatants of HUVEC were quantified using the milliplex technology. The Lipid profile, high-sensivity PCR (hsPCR) and NO were determined by conventional laboratory methods. The role of the NO on the statin-modulation of inflammatory markers was also studied using a model with silenced NOS3 by interference of mRNA and by the use of the inhibitor of NO synthesis, L-NAME. The effect of hypolipemiants on the expression of microRNAs (miRs) 221, miR-222 and miR-1303 was also evaluated in HUVEC using the stem-loom RT-qPCR. Atorvastatin and simvastatin reduced the mRNA and protein expression of the adhesion molecules L-Selectin, PSGL-1 and VLA-4 in THP-1 cells pre-treated with TNF&#945; for 12 h. The ezetimibe reduced the L-Selectin expression only at transcriptional level. In HUVEC, statins diminished IL1B and SELP mRNA expression, whereas VCAM1 was increased. The ezetimibe reduced the IL1B mRNA expression. However, SELE, MMP9, IL6 and MMP9 mRNA expressions were not affected by the treatments. The protein expression of ICAM-1 and P-Selectin on the surface of HUVEC was reduced by statins, but not by the ezetimibe. Similarly, IL-6 and MCP-1 secretion were reduced by statins, whereas IL-8 secretion was not modified by the treatments. The NO release and NOS3 expression in HUVEC was increased by the statins, however it was not stimulated by ezetimibe. Moreover, the anti-inflammatory statin effects were independent of this pathway due to statin effects were maintained in HUVEC with silenced NOS3. Although the statin effect on ICAM-1 and MCP-1 were attenuated by L-NAME co treatment, the statin effects seem to be independent of NO release. Statins and ezetimibe reduced miR221 in HUVEC. miR-222 expression was reduced only by atorvastatin. miR-1303 was not affected by the treatments. In HC patients, the improvement of the lipid profile simvastatin combined with ezetimibe was more efficient than both monotherapies. Similarly, the association therapy was better in reducing the mRNA expression in PBMC and plasma concentration of IL-1&#946;, MCP-1, IL-8 and TNF&#945;. ICAM1 expression was reduced only at transcriptional level, whereas mRNA but not protein expression of TNF&#945; was also reduced by the simvastatin monotherapy. There was no modulation mRNA or protein expression of other studied markers in the in vivo model. Additionally, the anti-inflammatory effects observed in the HC were independent of PCRus or NO modulation, which were not altered by the hypolipemiant treatments. In this study, the proposed plitropic effects of statins were confirmed in monocytes and endothelial cells in vitro and in HC patients. Moreover, although it was less potent than statins, an anti-inflammatory effect was also observed for the inhibition of cholesterol absorption. An additional reduction of the cholesterol caused by combined hypolipemiant therapies gives a greater cardiovascular beneffict in hypercholesterolemic patients.

As estatinas são os agentes mais eficazes para a redução de colesterol no tratamento de doenças cardiovasculares, e algumas destas moléculas podem ser produzidas através de processos biológicos como o cultivo semi-sólido de fungos filamentosos. O objetivo deste estudo foi determinar a capacidade de produção de estatinas e compostos antimicrobianos por cinco cepas de fungos isolados de Cana de Açúcar. Para isso, extratos obtidos a partir dos cultivos foram analisados por métodos analíticos como CLAE e RMN para determinar a presença de estatinas; adicionalmente, os extratos foram testados contra diferentes modelos biológicos incluindo bactérias, leveduras, fungos filamentosos, células de ovário de hamster chinês, e parasitas. De acordo com os resultados obtidos, os cinco fungos avaliados não produzem estatinas, e em relação ao biomonitoramento dos extratos foi observado um efeito biológico sobre os parasitas e as células de mamífero, no entanto, é possível que o efeito obtido seja uma resposta dos compostos do substrato dos cultivos (Farelo de trigo). / Statins are the most effective cholesterol lowering agents for the treatment of cardiovascular disease, and some of these molecules can be produced through biological process such as the solid state fermentation. The aim of this study was determinate the capability of production of statins and antimicrobials compounds by five strains of fungi isolated from Brazilian sugar cane. For this purpose, extracts were obtained from the cultures and analyzed through analytical methods as HPLC and NMR in order to determinate the presence of statins; in addition, the extracts were tested against different biological models including bacteria, yeast, filamentous fungi, chinese hamster ovary cells, and parasites. According to the results obtained, the five fungal strains tested did not produce statins, and the extracts produced a biological effect against the parasites and mammalian cells, nevertheless it is possible that this effect observed was a response of the compounds from the culture substrate (wheat bran).

Nosso objetivo foi determinar que tipo de estatina pode atenuar a lesão pulmonar aguda (LPA) induzida por lipopolissacarídeo (LPS) em camundongos da linhagem C57Bl/6. Trinta camundongos machos ( 23 g) foram divididos em 5 grupos (n=6 cada): grupo LPS (10 mg/kg) administrado intraperitonealmente (i.p.), LPS mais atorvastatina (10 mg/kg/dia; grupo LPS+A), LPS mais pravastatina (5 mg/kg/dia; grupo LPS+P) e LPS mais sinvastatina (20 mg/kg/dia; grupo LPS+S). O grupo controle recebeu salina i.p.. Em um grupo separado de camundongos (n=5), a soma das pressões pulmonares resistivas e viscoelásticas (DeltaPtot) e elastância estática (E[st]) foram medidas. Um dia após a administração de LPS os camundongos foram sacrificados (24 h) por deslocamento cervical e logo em seguida foi realizado lavado broncoalveolar (LBA). Os pulmões foram removidos para análise histopatológica e homogeneizados para análises bioquímicas (ELISA, catalase, superóxido dismutase, mieloperoxidase, substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, carbonilação de proteínas e método de Griess). A quantidade de leucócitos foi menor no grupo LPS+P (p<0,01) e LPS+S (p<0,05) em comparação ao grupo LPS. Os níveis de MCP-1 e IL-6 reduziram no grupo LPS+P (p<0,01), enquanto o grupo LPS + S mostrou redução apenas nos níveis de IL-6 (p<0,05) em comparação ao grupo LPS. Marcadores redox (superóxido dismutase e catalase) foram menores no grupo LPS+A (p<0,01) em comparação ao grupo LPS. A peroxidação lipídica (malondialdeído e hidroperóxidos) diminuiu em todos os grupos tratados (p<0,05) quando comparados ao grupo LPS. A mieloperoxidase foi menor no grupo LPS+P (p<0,01) quando comparado ao grupo LPS. DeltaPtot e E(st) foram, significativamente, maiores no grupo LPS do que nos outros grupos. Nossos resultados sugerem que atorvastatina e pravastatina, mas não a sinvastatina, exibiram ações anti-inflamatórias e antioxidantes na LPA induzida por LPS. / To determinate what statins could attenuate acute lung injury (ALI) induced by lipopolysaccharide (LPS) in C57BL/6 mice. Young male mice ( 23 g) were divided into 5 groups (n=6 each): injected with LPS i.p. (10 mg/kg), LPS plus atorvastatin (10 mg/kg/day; LPS+A group) or pravastatin (5 mg/kg/day; LPS+P group) or simvastatin (20 mg/kg/day; LPS+S group). Control group received saline (i.p.). In a separated group of mice (n=5) the sum of pulmonary resistive and viscoelastic pressures (DeltaPtot) and static elastance (E[st]) were measured. One day later (24 h), the animals were sacrificed, BAL performed and lungs were removed for histopathological analysis and homogenized for biochemical analyses (ELISA, catalase, superoxide dismutase, myeloperoxidase, thiobarbituric acid reactive substances, protein carbonyls and griess assay). The amount of leukocytes was lower in LPS+P (p<0.01) and LPS+S (p<0.05). Cytokine levels of MCP-1 was lower in LPS+P (p<0.01) while IL-6 was lower in LPS+P (p<0.01) and LPS+S (p <0.05). Redox markers (superoxide dismutase and catalase) were lower in LPS+A (p<0.01). Lipid peroxidation (malondialdehyde and hydroperoxides) were lower in all treated groups (p<0.05). Myeloperoxidase was lower in LPS+P (p<0.01). DeltaPtot and E(st) were significantly higher in the LPS group than in the other groups. Our results suggest that atorvastatin and pravastatin, but no simvastatin, exhibits anti-inflammatory and antioxidant actions in LPS-induced ALI.

As estatinas são os agentes mais eficazes para a redução de colesterol no tratamento de doenças cardiovasculares, e algumas destas moléculas podem ser produzidas através de processos biológicos como o cultivo semi-sólido de fungos filamentosos. O objetivo deste estudo foi determinar a capacidade de produção de estatinas e compostos antimicrobianos por cinco cepas de fungos isolados de Cana de Açúcar. Para isso, extratos obtidos a partir dos cultivos foram analisados por métodos analíticos como CLAE e RMN para determinar a presença de estatinas; adicionalmente, os extratos foram testados contra diferentes modelos biológicos incluindo bactérias, leveduras, fungos filamentosos, células de ovário de hamster chinês, e parasitas. De acordo com os resultados obtidos, os cinco fungos avaliados não produzem estatinas, e em relação ao biomonitoramento dos extratos foi observado um efeito biológico sobre os parasitas e as células de mamífero, no entanto, é possível que o efeito obtido seja uma resposta dos compostos do substrato dos cultivos (Farelo de trigo). / Statins are the most effective cholesterol lowering agents for the treatment of cardiovascular disease, and some of these molecules can be produced through biological process such as the solid state fermentation. The aim of this study was determinate the capability of production of statins and antimicrobials compounds by five strains of fungi isolated from Brazilian sugar cane. For this purpose, extracts were obtained from the cultures and analyzed through analytical methods as HPLC and NMR in order to determinate the presence of statins; in addition, the extracts were tested against different biological models including bacteria, yeast, filamentous fungi, chinese hamster ovary cells, and parasites. According to the results obtained, the five fungal strains tested did not produce statins, and the extracts produced a biological effect against the parasites and mammalian cells, nevertheless it is possible that this effect observed was a response of the compounds from the culture substrate (wheat bran).

Made available in DSpace on 2016-07-01T11:59:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 2.pdf: 2625869 bytes, checksum: 8cb28dd9acaae218862e11d5bbeec859 (MD5) Previous issue date: 2012 / Made available in DSpace on 2016-07-21T14:39:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 2.pdf: 2625869 bytes, checksum: 8cb28dd9acaae218862e11d5bbeec859 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Fármacos/Farmanguinhos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / As estatinas são substâncias que reduzem os níveis lipídicos no sangue, sendo a hipercolesterolemia o fator causal da aterosclerose, doenças coronarianas dentre outras. Devido ao alto índice do distúrbio na população brasileira, as estatinas são usadas como tratamento de primeira escolha, por serem mais seguras e eficazes. Sendo que duas estatinas (a atorvastatina e a sinvastatina) fazem parte da RENAME e sinvastatina incluída no programa Aqui tem farmácia popular . Devido à ampla utilização da sinvastatina, faz-se necessária a avaliação da qualidade dos medicamentos, sendo relevante o conhecimento de sua estabilidade química e física até o fim de seu prazo de validade. O monitoramento de produtos de degradação faz parte desta avaliação e é necessária a implementação de metodologias analíticas validadas de pesquisa destas impurezas na rotina dos estudos de estabilidade. Além disso, é essencial o desenvolvimento contínuo de formulações melhoradas para garantir a disponibilidade, eficácia e segurança do fármaco. A maioria das técnicas descritas na literatura são usadas para quantificar o teor de sinvastatina e seus metabólitos no sangue. Os compêndios oficiais disponibilizam apenas metodologia para a quantificação de produtos de degradação na matéria-prima. O objetivo deste trabalho foi avaliar a formação de produtos de degradação na formulação de comprimidos durante o prazo de validade. Para isto, foram propostas a adaptação e a validação da metodologia da Farmacopéia Americana da matéria-prima. O método proposto empregou coluna cromatográfica C18 e fase móvel constituída de de solução de ácido fosfórico e acetonitrila misturados por gradiente de eluição com tempo total de corrida de 13 minutos. O fluxo empregado foi de 3 mL/min. e detecção UV/VIS a 238 nm. A metodologia apresentou resultados satisfatórios de especificidade, linearidade, precisão, exatidão e robustez. O estudo de estabilidade foi conduzido numa condição controlada de temperatura e umidade (30ºC, 75% U.R.) ao longo do prazo de validade e demonstrou que não há formação ou aumento dos níveis dos produtos de degradação na formulação de comprimidos. / Statins are substances that reduce blood lipid levels, being hypercholesterolemia the causative factor of atherosclerosis, coronary heart disease among others. Due to the high rate of the disorder in the population, statins are used as first-line treatment because of are their safety and effectiveness. Two statins (atorvastatin and simvastatin) are part of RENAME and simvastatin is included in the program "Here's pharmacy popular".Due to the wide use of simvastatin, it is necessary to evaluate the quality of drugs being relevant knowledge of their chemical and physical stability until the end of its shelf life. The monitoring of degradation products and is part of this assessment an it is necessary to implement validated analytical methodologies in the routine of stability studies. Furthermore, it is essential to continuing development of improved formulations for the availability, effectiveness and safety of the drug.Most techniques described in literature are used to quantify the amount of simvastatin and its metabolites in blood. The official compendia only provide methodology for quantification of degradation products in raw material.The aim of this study was to evaluate the formation of degradation products in tablet formulation during the shelf life. For this, was proposed adaptation and validation of the methodology of the American Pharmacopoeia of the raw material. The proposed method employed C18 chromatographic column and a mobile phase consisting of a phosphoric acid solution and acetonitrile mixed by gradient elution with a total run time of 13 minutes. The flow was 3 ml / min. and detection UV / VIS at 238 nm. The methodology presented satisfactory specificity, linearity, precision, accuracy and robustness. The stability study was conducted in a controlled condition of temperature and humidity (30 ° C, 75% RH) during the shelf life and showed no training or increased levels of degradation products in tablet formulation.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Statins are drugs used in dislipidemias treatment. These agents are reversible inhibitors of the rate-limiting enzyme in cholesterol biosynthesis,the 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase, and preventing de conversion of HMG-CoA to mevalonate. Besides reducing the plasma cholesterol, statins also present effects which seem cholesterol-independent, the so-called pleiotropic effects of statins. Date in literature has been shown that HMG-CoA inhibitors display neuroprotective properties, mainly related to improvement in vascular function due to increase in nitric oxide production, in this context, this class of drugs has proven usefull in treatment and prevention of neurodegenerative disorders such as Alzheimer´s and Parkinson´s. On the other hand, studies based on clinical data have shown that after abrupt discontinuation of statin therapy occurs a period in which the protective properties are lost, and deleterious effects are activated, leading to the appearance of rebound deterioration of vasculature which seems to be associated with alterations in enzymes activities endhotelial nitric oxide synthase and NADPH oxidase. However, little is known about whether these effects of statin withdrawal syndrome in the central nervous system. Therefore, this study aimed to investigate the effect of atorvastatin treatment withdrawal in the rat cerebral cortex. For this purpose, different parameters of oxidative/nitrosative stress were measured, including nitric oxide levels, the immunoreactivity for damage markers 3-nitrotyrosine, 4-hydroxynonenal and carbonyl, the activity of pro-oxidant enzymes NADPH oxidase and xanthine oxidase and the activity of antioxidant enzymes mitochondrial and citoplasmatic superoxide dismutase, catalase and glutathione-S-transferase. The results indicate that atorvastatin withdrawal decreases mitochondrial superoxide dismutase activity and increases NADPH oxidase activity, which may increase superoxide radical levels. Associated with this was seen a decreased in the level of nitric oxide ans increased in 3-nitrotyrosine immunoreactivity, suggesting that superoxide is reacting with nitric oxide leading the formation of peroxinitrite, which leads to proteins nitration. Increasing in the 3-NT/MnSOD ratio, and enzyme expression seen by western blot confirms the assumption that MnSOD is being nitrated, that nitration leads to lower superoxide detoxification. In conclusion, withdrawal of atorvastatin treatment occasioned oxidative/nitrosative damage in the rat cerebral cortex due to alterations in pro-oxidant and antioxidant enzymes activities. / As estatinas são fármacos utilizados no tratamento das dislipidemias. Esses agentes são inibidores reversíveis da enzima limitante da via de biossíntese do colesterol, a 3-hidróxi-3-metilglutaril-coenzima A redutase, e impedem a conversão do HMG-CoA a mevalonato. Além da capacidade de diminuir o colesterol plasmático, as estatinas também possuem efeitos que são independentes da inibição da via de biossíntese do colesterol, são os chamados efeitos pleiotrópicos. Dados da literatura tem demonstrado que os inibidores da HMG-CoA redutase possuem propriedades neuroprotetoras, relacionadas à melhora na função vascular devido ao aumento da produção de óxido nítrico, neste contexto, essa classe de fármacos tem se mostrado útil no tratamento e na prevenção de doenças neurodegenerativas tais como, Alzheimer e Parkinson. Por outro lado, estudos baseados em dados clínicos mostram que a após a interrupção abrupta do tratamento com estatinas ocorre um período em que as propriedades protetoras geradas são perdidas, e efeitos deletérios são ativados, levando ao aparecimento de uma deterioração rebote na vasculatura, o qual parece estar associado a alterações na atividade das enzimas óxido nítrico sintase endotelial e NADPH oxidase. Contudo, até o momento, pouco se sabe sobre esse feito da síndrome da retirada da estatina no sistema nervoso central. Sendo assim, esse estudo teve por objetivo verificar o efeito da retirada do tratamento com atorvastatina no córtex cerebral de ratos. Para isso, diferentes parâmetros do estresse oxidativo/nitrosativo foram medidos, tais como a imunoreatividade para os marcadores de dano 3-nitrotirosina, 4-hidroxinonenal e carbonil, a atividade das enzimas pró-oxidantes NADPH oxidase e xantina oxidase e das enzimas antioxidantes superóxido dismutase mitocondrial e citoplasmática, catalase e glutationa-S-transferase, bem como, o nível de óxido nítrico medido através do nitrito e nitrato. Os resultados obtidos mostram que a retirada do tratamento provoca diminuição na atividade da superóxido dismutase mitocondrial aumento na atividade da NADPH oxidase, o que sugere estar ocorrendo aumento na quantidade de radical superóxido. Associado a isso, foi visto diminuição no nível de óxido nítrico e aumento na imunoreatividade para 3-nitrotirosina, o que sugere que o superóxido está reagindo com o óxido nítrico levando a formação de peroxinitrito. Este último provoca a nitração de proteínas. O aumento da razão 3-NT/MnSOD, e da expressão da enzima visto por western blot, comprova a suposição de que a superóxido dismutase mitocondrial está sendo nitrada, essa nitração leva a uma menor detoxificação do superóxido, de modo que assim, é formado um ciclo. Assim, conclui-se que a retirada do tratamento com atorvastatina provoca dano oxidativo/nitrosativo no córtex cerebral de ratos devido a alterações na atividade das enzimas pró e anti-oxidantes.