O sistema coletor de luz (LHC) é o principal complexo de proteínas associado a carotenóides e clorofilas, localizado nas membranas dos tilacóides nas plantas e algas superiores. O LHC atua como um sistema antena para o fotossistema I e o fotossistema II e tem um papel chave na captação da energia luminosa para a fotossíntese (Horton et aI, 1996). Os processos de transporte de elétrons, fixação do CO2 e assimilação do nitrato estão relacionados às necessidades de ATP, poder redutor e cofatores proteicos como, ferredoxina ou tiorredoxinina. Existe uma forte correlação entre o metabolismo do carbono e nitrogênio em plantas superiores, pois os esqueletos carbônicos e a energia, produtos da fotossíntese, são necessários à assimilação do nitrato direta ou indiretamente, através da síntese de sacarose (Ferrario-Mery, 1998; Foyer et al., 1998). A regulação deste processo é necessária para prevenir uma competição potencial da disponibilidade de poder redutor e precursores orgânicos, necessários para às vias biossintéticas (Champigny, 1995). A assimilação do nitrato para a biossintese de amino ácidos e outras moléculas necessita de ferredoxina reduzida (Durnford & Falkowski, 1997). Neste trabalho nós investigamos a regulação do metabolismo fotossintético e a assimilação do nitrato, em plantas trangênicas de tabaco que produzem uma proteína da ervilha de 28kDa do sistema principal do complexo LHCII. As análises foram conduzidas em condições de baixa luminosidade. Os resultados demostraram um aumento na assimilação de nitrogenio das plantas transgênicas, evidenciado pelo maior estado de ativação da nitrato redutase, maior atividade da glutarnina sintetase e mudanças no conteúdo de amino ácidos. Glutamato e Glutarnina aumentaram nas folhas das plantas transgênicas, enquanto Treonina teve uma severa diminuição. / not available

Foi produzida a proteína recombinante do domínio extracelular da subunidade 2 do receptor do IFN-alfa em forma de proteína de fusão com a glutatione-S-transferase (GST-IFNAR2cEC) em E. coli, com o objetivo de avaliar seu efeito bloqueador sobre a ação do IFN-alfa. A GST-IFNAR2cEC de forma solúvel, com peso molecular 54 kDa, foi obtida quando a proteína recombinante foi expressa a 25 graus C por indução de IPTG e foi lisada por French Press. A avaliação do efeito bloqueador da GST-IFNAR2cEC foi feita utilizando-se 3 métodos: 1) Ensaio antiproliferativo com células Daudi, 2) ensaio antiviral com células Hep 2/c e vírus encefalomiocarditis, e 3) expressão gênica semi-quantitativa do STAT 1 (transdutor de sinal e ativador de transcrição) e da 2',5'-oligoadenilato sintetase (OAS) pela RT-PCR duplex nas células Daudi e Hep 2/c. A GST-IFNAR2cEC, mesmo a 420 nM, não inibiu as atividades antiproliferativa e antiviral de 24,5 pM e 49 pM de rIFN-alfa2 provavelmente devido à sua ineficiência na competição com o IFNAR da superfície celular durante o longo período de incubação nos ensaios realizados. A expressão gênica do STAT 1 não foi inibida pela GST-IFNAR2cEC nas células Daudi e Hep 2/c, porém inibiu-se a da 2’, 5’-OAS. Estes resultados sugerem que a expressão gênica do STAT 1 é independente da ligação do IFN-alfa com a IFNAR 2c, e que a da 2’, 5’-OAS é dependente dessa ligação nessas células

Orientador: Paulo Arruda / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T13:40:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RosaJunior_VicenteEugeniode_D.pdf: 4416236 bytes, checksum: b2b792d03cc519d4aa503ad7894937e1 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Os jasmonatos (JAs) são compostos derivados de lipídeos que regulam o crescimento, o desenvolvimento e a resposta a estresses em plantas. Sua principal atividade é a indução da expressão gênica, embora pouco seja conhecido sobre os componentes que ativam e os que transmitem sinais que desencadeiam respostas fisiológicas. Através da técnica de macroarranjos de DNA, estudamos a expressão de 1536 ESTs de cana-de-açúcar em resposta à aplicação de metil-jasmonato (MeJA). Mudanças significativas foram observadas em 26 ESTs, cujas seqüências codificam proteínas que atuam na fotossintese, senescência, síntese protéica e resposta a estresses, além de proteínas com funções desconhecidas. Uma dessas enzimas catalisa a produção de sinapoilmalato. um composto de defesa contra UV. Entre as novas proteínas com domínios de sinalização, encontramos uma proteína zinc finge r (SCZF), que foi estudada mais detalhadamente, sendo esta induzida também por ABA e mais expressa em plantas com menor teor de sacarose. Além dos macroarranjos. usamos a técnica de data-mining para estudar o banco de dados do SUCEST, a procura de vias metabólicas relacionadas aos JAs. Inicialmente, foi gerado um banco de dados contendo seqüências das proteínas reguladas por JAs. Tal banco foi usado para o desenvolvimento de uma página da intemet contendo informações sobre a biossíntese e a ação dos JAs na expressão gênica (htto://est.cbmea.unicamp.brliasmonatos). Através da análise deste banco de dados e do "data mining" descobriu-se a presença da via de síntese da durrina, um glicosídeo cianogênico. A análise filogenética das enzimas da via foi realizada, sugerindo a produção da durrina em cana-de-açúcar. Uma análise dos extratos foliares de cana-de-açúcar confirmou a presença do glicosídeo na concentração de aproximadamente 2 ng por grama de peso fresco. Através de experimentos com ferimento foliar observamos que o nível de durrina é relativamente estável, sugerindo uma fina regulação das enzimas de sua síntese e degradação. Para avaliar essa regulação, analisamos a expressão do gene que codifica a enzima a UDP-GLU, que catalisa o último passo metabólico de síntese de durrina, e do gene que codifica a enzima durrinase (DHR) , a qual catalisa sua degradação. em resposta a lagarta (Diatraea sacchara/is) e ao metil-jasmonato (MeJA). Observamos que a concentração dos transcritos das duas enzimas é aumentada após a exposição a esses . estresses. Para obter mais informações sobre a trascrição dos genes que participam da via entre os tecidos/órgãos, utilizamos a técnica de Digital mRNA Expression Profile, sendo que a expressão dos genes UDP-glu e dhr foi confirmada por Northern 810f. Esses resultados permitiram concluir que a durrina ocorre em cana-deaçúcar, possivelmente agindo como uma fitoanticipina (composto pré-formado), associada aos tecidos jovens, e que a via dos JAs pode estar envolvida em sua regulação. Em conjunto, nossos resultados ampliam o conhecimento sobre a atuação dos JAs em plantas / Abstract: Jasmonates (JAs) are lipid-derivative compounds that regulate growth, development and tolerance against stresses in plants. They are powerful inducers of gene expression, although little information is available about the components that activate its biosynthesis and mediate its signal transduction. Through macroarray technique, we studied the expression profile of 1,536 sugarcane ESTs, generated by the SUCEST (Sugarcane EST Project) in response to methyJ jasmonate (MeJA) treatment. Significant changes were observed in 26 ESTs, encoding proteins acting in diverse processes such as photosynthesis, senescence, protein synthesis, stresses responses, as well as those coding proteins with unknown fundions. Among them, we identified one enzyme catalyzing the last step in the production of sinapoylmalate, a compound responsible for UV tolerance. We also identified genes coding novel proteins presenting signaling domain(s), such as a ZINC FINGER protein (SCZF) , that was studied in details and observed to be induced by ABA and more expressed in plants with smaller sucrose levels. We also used data mining approach to anaJyze the SUCEST data base. A search for metabolic pathways regulated by JAs was performed. Initially, we generated a database containing sequences of proteins reported to be modulated by JAs. This bank was used for development ofthe homepage (http://est.cbmea.unicamp.brliasmonatos) related to JAs responsive genes. Data mining analysis detected the presence of dhurrin, a cyanogenic compound originally described in sorghum. Evolutionary studies of the sugarcane enzyme resulted in the possibility that dhurrin was a conserved compound in sugarcane. To test this hypothesis, we analyzed sugarcane leaf extracts by High Performance Uquid Chromatography (HPLC), and confirmed the presence of dhurrin in a concentration of -2 ng for gram of fresh weight. To evaluate dhurrin concentration afier stress stimulation in sugarcane, we performed a leaf wounding experimento This study showed a relative stability in dhurrin contents in sugarcane, suggesting a fine regulation of dhurrin levels by the synthesis and degradation enzymes. To evaluate this regulation we analyzed gene transcription of two genes in response to herbivory attack (Diatraea saccharalis) and MeJA The genes evaluated were UDP-glu, a gene that encodes a glucosyJtransferase An'7Vm... ,.::ri~lv7inn thF! I~st steo in dhurrin biosvnthesis. and dhurrinase (dht), that encodes by exposition to MeJA To investigate the tissue-specificity of genes of dhurrin pathway, we used the Digital mRNA expression profile approach. and observed the induction of UDP-glu and dhr genes, both dhr genes, both confirmed by Northem blot. These results allowed us to hypothesize that dhurrin acts in sugarcane as a phytoanticipin (a preformed defense compound) that is associated to young tissues and regulated by JAs. In conclusion, these results extend our knowledge conceming JAs action in plants, helping to understand the functionality of some sugarcane genes, and open perspectives for identification of new compounds / Doutorado / Genetica Vegetal e Melhoramento / Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Gonçalo Amarante Guimarães Pereira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:59:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Queiroz_DianaAzevedo_M.pdf: 1675319 bytes, checksum: f069b324506d8cba908193d06299c754 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A compreensão das informações geradas pelos diversos Projetos Genoma já totalizados ou em andamento constitui-se em uma ferramenta essencial à pesquisa em biologia molecular. A identificação de genes diferencialmente expressos em estágios distintos de uma dada doença, por exemplo, constituirá um enorme avanço na determinação de sua fisiopatologia, fornecendo marcadores moleculares para seu prognóstico e possíveis alvos para a intervenção do processo. Dentre as moléstias humanas, o câncer constitui-se em um dos principais alvos de pesquisa em biologia molecular e clínica médica, basicamente porque envolve um quadro de reprogramação celular complexo e ainda pouco compreendido. Entre os vários tipos de cânceres, a leucemia linfóide aguda é bastante prevalente no Brasil, classificando-a como 8° lugar em número de casos e óbitos decorrentes. Buscando compreender as bases moleculares do câncer, o Projeto Genoma Humano do Câncer (LICR/ FAPESP) se destacou por ter gerado milhares de seqüências codantes do DNA de tecidos humanos normais e tumorais, possibilitando a descoberta de novos genes relacionados aos processos carcinogênicos. Assim, o presente estudo utilizou fragmentos produzidos durante o Projeto Genoma Humano do Câncer para investigar o perfil de expressão gênica em leucemias linfóides agudas através da técnica de microarranjos de DNA. Foram identificados como diferencialmente expressos os genes IgK VLJ (¿immunoglobulin kappa light chain VLJ region¿) e TPT1 (¿Tumor Protein , translationally-controlled 1¿), cuja expressão foi confirmada por ensaios de Northern blot / Abstract: The comprehension of data generated by many finished or in progress Genome Projects will provide essential informations to molecular biology research. The identification of differentially expressed genes in distinct stages of any given disease, for example, will permit an enormous advance in the determination of its physiopathology, identifying molecular markers for its prognostic and possible targets for the intervention of the process. Among human diseases, cancer consists in one of the main subjects of research in clinical and molecular biology, basically because involves a complex and poorly understood process of cellular reprogramming. Among the cancer subtypes, acute lymphoblastic leukemia is prevalent in Brazil, ranked in 8th position in number of clinical cases and decorrent deaths. Attempting to increase the understanding of cancer molecular bases, Human Cancer Genome Project (LICR/ FAPESP) had detached by generation of thousand of expressed sequences of normal and tumoral human tissues, increasing the possibility of discovery of novel genes related to carcinogenic processes. Thus, the present work employed the Human Cancer Genome Project fragments to investigate the global gene expression profile in acute lymphoblastic leukemia by DNA microarrays technique. It was identified the genes of IgK VLJ (imunoglobulina kappa light chain VLJ region) e TPT1 (Tumor Protein, ananslationally-controlled 1), which differential expression was confirmed by Northern blot assays / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Daniel Guariz Pinheiro / Resumo: O conjunto de microrganismos que vivem junto das plantas é chamado de microbioma ou fitomicrobioma, e exerce diversos papéis conjuntamente com seu hospedeiro inclusive para a manutenção da saúde conjunta, considerando que co-evoluíram juntos, como um holobionte e, portanto, podem ter desenvolvido mecanismos de adaptação mútua. No presente trabalho, exploramos a diversidade do microbioma de cana-de-açúcar pela mineração de dados de RNA-Seq: realizamos atribuição taxonômica às sequências daqueles organismos que foram sequenciados conjuntamente com as plantas, mas que não foram analisados em nenhum ponto. Dados de 15 acessos do SRA contendo 246 bibliotecas foram obtidos, totalizando 841 Gigabases. As leituras dessas bibliotecas foram processadas, montadas em sequências a fim de reconstruir as moléculas de RNA e passaram por processo de atribuição taxonômica com o Kraken2 usando um banco de referência expandido personalizado, gerando uma contagem de organismos por biblioteca, sendo que os \textit{taxa} microbianos foram quantificados a partir da identificação de 09 milhões de leituras correspondentes. Como prova de conceito do método, validamos diversas observações que já existiam sobre a diversidade do microbioma da cana-de-açúcar. Revelamos que em todas as plantas, há uma presença quase ubíqua de bactérias Gammaproteobacteria, especialmente Pseudomonas e Xanthomonas e de fungos Ascomycota. Além disso, que a diversidade é alterada pela natureza do estresse na planta, hídrico ou ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The set of microorganisms that live under the influence of its host is called microbiome or in case of plants, phytomicrobiome, and they play various roles alongside their host including in maintaining the health of the pair, considering that they co-evolved together as a holobiont and thus may developed mechanisms of mutual adaptation. In the present work, we explored the diversity of the sugarcane microbiome by mining RNA-Seq data: we performed taxonomic assignment to RNA sequences of those organisms that were sequenced together with the plants but were not analyzed at any point. As proof-of-concept, we were able to validate several known observations of the sugarcane microbiome. We revealed that in all plants there is an almost ubiquitous presence of Gammaproteobacteria, especially Pseudomonas and Xanthomonas and fungi Ascomycota. In addition, that diversity is altered the stress implied on the sugarcane plant, be it abiotic (drought) or biological (infection), and that the major modulators in the community are mostly the plant compartment and the type of stress involved. We also observed a set of original organisms negatively and positively correlated with smut disease, caused by Sporisorium scitamineum, potentially antagonistic to the disease agent. Additionally, we detected differentially abundant phytomicrobiome activity between treatments, including those in which plant-induced infection was performed. Finally, virus sequences were assembled, and we were able to retri... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Maria Centola Vidal / Banca: Karina Paes Bürger / Banca: Mirele Daiana Poleti / Resumo: Bacillus cereus sensu stricto (s.s.) tem o potencial de produzir toxinas gastrointestinais, resistir a condições adversas, como tratamentos térmicos e pasteurização; produzir enzimas e formar biofilmes, causando diversos surtos ao redor do mundo relacionados com a sua presença em alimentos contaminados. Entretanto, não é bem elucidado o dano que o tratamento térmico causa à esta bactéria e à sua expressão gênica. Assim, o objetivo deste estudo foi verificar se a pasteurização e o armazenamento em refrigeração ao longo da shelf-life seriam capazes de influenciar a expressão dos genes relacionados com a produção de toxinas diarreicas, proteases e à formação de biofilmes em leite experimentalmente contaminado com B. cereus s.s.. Trinta litros de leite cru foram tindalizados e experimentalmente contaminados com aproximadamente 108 UFC.mL-1 de B. cereus s.s. SAMN07414939 (Bio Project PRJNA390851). Uma amostra foi coletada logo após a contaminação (LTC - T0) e então o leite foi pasteurizado e envasado em embalagens de polietileno com 1L de capacidade (LCP - T1, T2 e T3) e mantido em refrigeração até o momento das análises. Posteriormente, a extração de RNA total das amostras foi realizada, seguido pelo cDNA e qPCR utilizando os genes plcr, hblA, hblC, hblD, nheA, nheB, nheC, cytk e npr para avaliação da expressão gênica. A expressão dos genes se manteve ao longo de toda a shelf-life, sem diferença estatística significativa entre os momentos avaliados para os genes plcr, hblA, hblC,... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bacillus cereus sensu stricto (s.s.) has the potential to produce gastrointestinal toxins, resists to adverse conditions, such as heat-treatment and pasteurization; the ability to form biofilms and produce enzymes, causing several outbreaks worldwide related to its presence in contaminated food. However, it is not well elucidated what damage the pasteurization causes to this bacterium and its gene expression. Thus, the aim of this study was to verify if pasteurization and storage during shelf-life in refrigeration were able to influence the expression of genes related to the production of diarrheal toxins, proteases and biofilm formation in milk experimentally contaminated with B. cereus s.s. Thirty liters of raw milk were sterilized by tyndallization and experimentally contaminated with 108 vegetative cells of B. cereus s.s. SAMN07414939 (Bio Project PRJNA390851). A sample was collected right after contamination (LTC - 0h); then the milk was pasteurized and then packed in 1 L capacity polyethylene bags and samples LCP - T1, T2 and T3 were collected. Posteriorly, the total RNA were extracted from the samples and the cDNA and qPCR were performed using the primers plcr, hblA, hblC, hblD, nheA, nheB, nheC, cytk and npr for gene expression quantification. The gene expression was maintained along the shelf-life, without significant statistical difference between the moments evaluates for the plcr, hblA, hblC, hblD, nheA, nheB, nheC, cytk and npr gene expression, which persisted wi... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2016-04-07T13:16:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 537.pdf: 2223769 bytes, checksum: e94bfd488dcebb90412c42109b93bc15 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife. PE. Brasil / Entre diversos aspectos relacionados à doença de Chagas, o mecanismo de evolução clínica de indivíduos portadores da forma indeterminada em direção às formas clínicas sintomáticas ainda não se encontra esclarecido. Sabe-se, que a resposta imunológica do hospedeiro que é direcionada ao parasita, exerce um papel central no desenvolvimento da patologia. Assim, nos propomos a avaliar a relação entre a produção de citocinas após estímulo in vitro com os antígenos recombinantes CRA (Cytoplasmatic Repetitive Antigen) e FRA (Flagellar Repetitive Antigen) de Trypanosoma cruzi e as formas clínicascrônicas da doença de Chagas. Foram selecionados 19 indivíduos portadores da forma cardíaca (FC), sendo 10 portadores da forma cardíaca severa (FCS) e 9 portadores da forma cardíaca leve (FCL); e 17 indivíduos portadores da forma indeterminada (FI), todos provenientes do Ambulatório de Doença de Chagas do Hospital Universitário Oswaldo Cruz da Universidade de Pernambuco. As células mononucleares do sangue periférico destes indivíduosforam submetidas à cultura na presença de CRA ou FRA por 3 dias e a expressão gênica para as citocinas IFN-? e IL-10, por estas células, foi avaliadaatravés da detecção de seu RNA mensageiro por PCR Quantitativa em Tempo Real. Apesar de não ter sido observada diferenças significativas na produção destas citocinas entre as formas clínicas estudadas, observamos que a maioria dos portadores da FI apresentou elevados níveis de expressão gênica para IFN- ?, enquanto que os portadores da FCL apresentaram elevados níveis de expressão gênica para IL-10. Assim, mesmo sem a diferenciação de um perfil de expressão entre as formas clínicas crônicas, a avaliação de outras citocinas em um número maior de pacientes é necessária para se estabelecer o padrão inflamatório ou anti-inflamatório nestes grupos de indivíduos estudados

Orientador: Noeme Souza Rocha / Banca: Julio Lopes Sequeira / Banca: Maurício Sforcin / Banca: André Schenka / Banca: Glenda Nicioli da Silva / Resumo: O tumor venéreo transmissível - TVT é objeto de numerosas investigações, apesar disso, existem lacunas que necessitam estudos. Há TVTs com graus variados de agressividade, portanto, alguns não respondem aos protocolos terapêuticos convencionais. Dando a entender que há modificações progressivas do seu perfil biológico. Técnicas como cultura celular, citometria de fluxo e a biologia molecular oferecem subsídios para se identificar e quantificar essas modificações, inclusive predizer comportamento biológico de tumor. O objetivo foi quantificar a expressão dos genes BAX, BCL2, TP53 e MDR1 em células de TVT primário e in vitro antes e depois da vincristina, a fim de identificar modificações quanto à resistência a agressividade e o tratamento. Foram obtidas 18 amostras de TVT caninos, para se estabelecer 8 culturas primárias. Logo depois se realizou testes de citotoxicidade, sobrevivência, apoptose, curva de crescimento e análise de expressão dos genes BAX, BCL2, TP53 e MDR1. Quando se comparou as células de TVT tratadas com vincristina, com aquelas que não receberam o tratamento, houve diferença estatística em relação às taxas de citotoxicidade, sobrevivência, e fases do ciclo celular, G1, Sub G1 e S. Sobre a expressão do gene MDR-1 a mesma diferença foi observada quando se comparou grupos de células tratadas e não tratadas. Nessa situação, o que se espera encontrar seria a baixa expressão do gene TP53, entretanto, ocorreu o oposto, qual seja alta expressão do gene TP53. Nessa situação acredita-se que tenha ocorrido o mecanismo regulador de apoptose. Quanto aos genes BAX e BCL-2 não foram observadas diferença estatística entre os grupos. Nesse caso, parecer não ter ocorrido a regulação esperada, do BAX pelo TP53. Acredita-se que houve mutação do TP53. Dados pouco relatados em TVT. Apesar de dados iniciais, podem concluir que estão relacionados à malignidade do tumor e resistência a quimioterapia / Abstract: Transmissible venereal tumor - TVT has been subject of numerous investigations, despite this, there are gaps that need studies. There TVTs with varying degrees of aggressiveness, so some do not respond to conventional treatment protocols. Implying that there is progressive alteration of their biological profile. Techniques such as cell culture, flow cytometry and molecular biology offer subsidies to identify and quantify these changes, including predicting the biological behavior of the tumor. The objective was to quantify the gene expression BAX, BCL2, TP53 and MDR1 in primary TVT cells and in vitro before and after vincristine, in order to identify changes regarding the aggressiveness and resistance to therapy. 18 samples of TVT canines were obtained to establish 8 primary cultures. After was performed cytotoxicity tests, survival, apoptosis, growth curve and analysis of expression of genes BAX, BCL2, p53 and MDR1. When comparing the TVT cells treated with vincristine, with those who did not receive treatment, there was statistical difference in relation to cytotoxicity rates, survival, and cell cycle phases, G1, Sub G1 and S. About the MDR-1 gene expression, the same difference was observed when comparing cells treated and untreated groups. In this situation, what would be expected at the low expression of the TP53 gene, however, was the opposite, in other words high expression of TP53 gene. In this situation it is believed that there has been a regulatory mechanism of apoptosis. In BAX and BCL-2 genes were not observed statistical difference between the groups, in this case, appears to have not occurred the regulation expected of BAX by TP53. It is believed that there TP53 mutation. Data low reported on TVT. Although initial, data may conclude that are related to tumor malignancy and chemotherapy resistance / Doutor

Orientador: Maria Aparecida Custódio Domingues / Banca: Flavio de Oliveira Lima / Banca: Gilson Luchese Delgado / Resumo: O Sarcoma Histiocítico (SH) é uma neoplasia maligna caracterizada pela proliferação de células grandes que possuem aspecto morfológico e imunofenotípico semelhantes ao histiócito maduro tecidual. É uma neoplasia rara, perfazendo menos que 1% dos Linfomas Não-Hodgkin. Tal raridade pode ser explicada pela dificuldade de sua caracterização diagnóstica e morfológica, confundindo-se com outras neoplasias malignas pleomórficas. Os objetivos do presente estudo são: avaliar alterações no padrão de ganhos e perdas genômicas pela técnica de Hibridação Genômica Comparativa (CGH-array), avaliação do perfil de MicroRNA (miRNA), apontar os principais critérios morfológicos e marcadores imunoistoquímicos (IMH) que venham a definir esta entidade e identificar quais entidades que erroneamente podem levar a subdiagnostico.Para tanto, foram revisados 7.600 laudos anatomopatológicos e, destes, foram selecionados 47 casos possíveis de SH, com apresentação nodal. Somando-se a estes, quatro casos sabidamente com diagnóstico de SH foram incluídos na análise. Foram avaliados 12 critérios morfológicos e 05 marcadores IMH. Dos 47 casos, foram localizados 07 SH, cujo diagnóstico inicial foi de neoplasia indiferenciada metastática (carcinoma indiferenciado) ou melanoma metastático. Os marcadores IMH que se mostraram mais eficientes para complementação diagnóstica foram CD163 e CD68. A avaliação do perfil de 377 miRNAs demonstrou clusterização de 51 miRNA, quando comparado ao controle, sendo 44 hipoexpresssos e 07 hiperexpressos, sendo os mais relevantes: miR-10b-5p, miR-455-5p e miR-19 (hiperexpressos); miR-486-5p, miR-92a, miR-15b-5p (hiporegulados). Tais miRNA estão envolvidos nas vias da apoptose, crescimento e proliferação celular. Os principais genes envolvidos na patogenia e candidatos a validação com futuros estudos são: ERBB2, TGFB1,TNF(ativados) e TP53 e PD98059 (inibidos).Tais genes podem corresponder a futuros... / Abstract: Histiocytic sarcoma (HS) is a malignant neoplasm characterized by the proliferation of large cells that have morphological and immunophenotypic features similar to mature tissue histiocytes. It is a rare neoplasm, accounting for less than 1% of non-Hodgkin lymphomas. This rarity is partly explained by the difficulties in its diagnostic and morphological characterization, since it is confused with other pleomorphic malignant neoplasms. The objectives of this study were to evaluate changes in genomic gains and losses using the comparative genomic hybridization technique (CGH-array), microRNA profile (miRNA) evaluation, determine the principal morphological criteria and immunohistochemical markers (IMH) that could define this entity, and identify entities that can mistakenly lead to underdiagnosis. To achieve this, 7,600 pathology reports were reviewed and, of these, 47 possible cases of HS with nodal presentation were selected. Four cases with an established diagnosis of HS were also included in the analysis. Twelve morphological criteria and 5 IMH markers were evaluated. Among the 47 cases, 7 cases of HS were identified that had initially been diagnosed as undifferentiated metastatic neoplasm (undifferentiated carcinoma) or metastatic melanoma. The IMH markers that were most efficient for complementary diagnosis were CD163 and CD68. Evaluation of the profiles of 377 miRNAs showed clustering of 51 miRNA compared with the control; 44 were hypoexpressed and 7 were hyperexpressed and the most relevant were: miR-486-5p, miR-92a, miR-15b-5p (hyporegulated); and miR-10b-5p, miR-455-5p and miR-19 (hyperexpressed). These miRNA are involved in apoptosis, cell growth and proliferation pathways. The main genes involved in pathogenesis and candidates for validation in future studies are: ERBB2, TGFB1, TNF (activated); and TP53 and PD98059 (inhibited). These genes may represent future therapeutic targets. The CGH-array proved to be unfeasible in ... / Mestre

Orientador: Ivan de Godoy Maia / Banca: Luiz Filipe Protasio Pereira / Banca: Jorge Mauríco Costa Mondego / Banca: Celso Luis Marino / Banca: Alessandra Ferreira Ribas / Resumo: A disponibilidade de promotores órgão/tecido-específicos responsáveis pela regulação de genes responsivos a estresses bióticos e abióticos constitui uma ferramenta fundamental para os programas de melhoramento genético do café (Coffea arabica) visando o incremento de resistência e tolerância. Relatamos aqui a caracterização de um promotor do gene que codifica uma provável peroxidase III em C. arabica (CaPrx), peroxidases da classe III (Prxs) são enzimas envolvidas numa variedade de processos fisiológicos relacionados com o estresse em plantas. A CaPrx é expressa em estágios iniciais da interação com o nematóide de galha (RKN). CaPrx mostrou expressão aumentada nas raízes de café inoculadas com RKN (Meloidogyne paranaensis) (12 h após a inoculação), mas nenhuma diferença significativa foi observada na expressão entre as plantas suscetíveis e resistentes. Ensaios com plantas de tabaco transgênicas portadoras do promotor CaPrx fusionado com o gene que codifica a β-glucuronidase (GUS), revelou que este promotor foi exclusivamente ativo nas galhas induzidas por RKN (Meloidogyne javanica). Em seções transversais de galhas, o repórter GUS foi detectado predominantemente em células gigantes. Um aumento na expressão do gene GUS em raízes de tabaco transgênicos foi detectado 16 horas pós-inoculação por RKN. Por outro lado, nenhuma alteração na expressão de GUS após tratamento com ácido jasmônico foi detectada. Um segundo estudo foi realizado a fim de desvendar o papel de um fator WRKY de café (CaWRKY1) na regulação do promotor do gene que codifica uma isoflavona redutase em café (CaIRL). Fatores de transcrição do tipo WRKY estão envolvidos na regulação da expressão de diversos genes de defesa em plantas. A região promotora do gene CaIRL possui diversos sítios W-boxes ao longo de sua sequência. Através de análises de deleção e ensaios de transativação ... / Abstract: Not available / Doutor