Orientador: Silvia Regina Rogatto / Coorientador: Sandra Aparecida Drigo Linde / Banca: Luciane Regina Cavalli / Banca: Maria Aparecida Custódio Domingues / Resumo: O câncer de mama (CM) é uma doença heterogênea em relação às alterações moleculares, composição celular e evolução clínica. Pacientes com características clínicas e histopatológicas semelhantes podem apresentar prognósticos distintos. Análises de alterações genômicas em larga escala têm contribuído para identificar regiões e genes associados com os vários estágios da tumorigênese mamária. O presente estudo teve como objetivo avaliar o perfil de alterações no número de cópias genômicas por Hibridação Genômica Comparativa baseada em arrays (aCGH), utilizando a plataforma 4x180K (Agilent Technologies) em 53 carcinomas ductais invasivos (CDI) primários. Os CDI apresentaram 3.849 alterações genômicas, com semelhante proporção de perdas e ganhos genômicos (1.622 e 1.731, respectivamente), 444 ganhos em alto nível (12%) e 52 perdas homozigotas (1%). Foram identificadas 19 alterações genômicas significativamente recorrentes presentes em mais de 20% dos tumores. Foram detectadas perdas em 1p36.32, 8p23.3, 8p23.1, 8p11.23, 11q25, 14q11.1-q11.2, 16q23.3, 16q24.1 e 18q23; e ganhos em 1q21.1, 1q21.2, 1q22, 1q32.1, 1q42.3, 1q44, 8q24.21 e 15q11.2. As alterações mais prevalentes foram ganhos em 8q24.21 (36%) e 1q44 (32%), e a perda em 8p11.23 (28,3%). Ganhos em 1q21.1-1q21.2 foram associados com tumores negativos para o receptor de estrógeno (ER-) (P=0,016). Perda em 8p23.1 foi associada com um maior tempo de sobrevida livre de doença (P=0,027) e perda em 8p23.3 com tumores HER2+ (P= 0,033) e Ki67 alto (P= 0,036). Ganho em 8q24.21 foi associado com menor risco de acometimento de linfonodos (P=0,0199). A perda em 14q11.1-q11.2 associou-se com características de maior agressividade tumoral, como grau III (P=0,0147), Ki67 alto (P=0,0096) e pior evolução clínica, desenvolvimento de metástase (P=0,0375). Perda em 18q23 foi associada com tumores negativos para o receptor de progesterona (PR-) (P=0,0065). A ... / Abstract: Breast cancer (BC) is a heterogeneous both at molecular and clinical level. Patients with similar clinical and histopathological findings can present different prognosis. Analysis of large scale genomic changes have helped to identify regions and genes associated with the various stages of mammary tumorigenesis. The present study aimed to evaluate the genomic profile by Comparative Genomic Hybridization array-based (aCGH), using the platform 4x180K (Agilent Technologies) in 53 primary invasive ductal carcinomas (IDC). The IDC showed 3849 genomic alterations, with similar proportion of genomic gains and losses (1,622 and 1,731, respectively), 444 alterations were found with high copy number gains (12%) and 52 homozygous losses (1%). We were identified 19 significantly recurrent genomic alterations in more than 20% of tumors. Losses were detected at 1p36.32, 8p23.3, 8p23.1, 8p11.23, 11q25, 14q11.1-q11.2, 16q23.3, 16q24.1 and 18q23, and gains at 1q21.1, 1q21.2, 1q22, 1q32.1, 1q42.3, 1q44, 8q24.21 and 15q11.2. The most frequent alterations were gains at 8q24.21 (36%) and 1q44 (32%), and losses at 8p11.23 (28.3%). Gains in 1q21.1-1q21.2 were associated with negative estrogen receptor (ER-) (P = 0.016) tumors. Loss on 8p23.1 was associated with longer disease-free survival (P = 0.027). Losses on 8p23.3 were associated with HER2 + tumors (P = 0.033) and high level of Ki67 (P = 0.036). Gain at 8q24.21 was associated with lower risk of lymph node involvement (P = 0.0199). Loss at 14q11.1-q11.2 was associated with more aggressive tumor characteristics such as grade III (P = 0.0147), high level of Ki67 (P = 0.0096) and worse clinical outcome, with metastasis development (P = 0.0375). Loss at 18q23 was associated with progesterone receptor negative (PR-) (P = 0.0065) tumors. The comparison of the genomic alterations according to receptor status ER, PR and HER2, lymph node involvement (LN) and development of distant metastases (DM) revealed ... / Mestre

Resumo: O subtipo Anemia Refrataria com Excesso de Blastos (AREB) representa cerca de 30% dos casos de Síndromes Mielodisplásicas (SMD). Os pacientes apresentam uma sobrevida media de poucos meses e risco alto de progressão para Leucemia Mielóide Aguda. As bases moleculares da doença não estão elucidadas. O objetivo do presente trabalho foi investigar a expressão gênica das células da medula óssea (MO) de pacientes com AREB. Foi gerada a primeira biblioteca SAGE de AREB, ao diagnostico, a partir de amostras de MO de seis pacientes. A comparação entre as bibliotecas AREB e normal evidenciou genes diferencialmente expressos. Cinco genes hipo-expressos, TXNIP, SGPL1, NUMB, FOXO e MSH2, e outros cinco hiper-expressos, MIF, RHOG, ICAM3, CHI3L1 e NOTCH1 foram selecionados para validação nas amostras coletadas ao diagnostico e dos mesmos pacientes após seis meses do diagnóstico, por PCR em tempo real. O padrão de expressão dos cinco genes hipo-expressos e dois hiper-expressos, MIF e RHOG foi confirmado, ao diagnostico, em 60% dos pacientes. Os genes NUMB e RHOG mostraram o mesmo padrão de expressão após seis meses de evoluçlão da doença, enquanto o gene. NOTCH1 apresentou hiper-expressão em duas amostras. Os dados aqui obtidos mostram que a criação da biblioteca SAGE de AREB permite o estudo de genes possivelemente envolvidos na origem e evolução da doença. As células da MO de pacientes com AREB apresentam um perfil de expressão gênica diferente das celulas de MO normal. Os genes TXNIP, SGPL1, NUM e, FOXO3, e MSH2, MIF e RHOG, estão hipo e hiper-expressos, respectivamente, ao diagnóstico. NUMB e RHOG mantêm seu padrão de expressão após seis meses, mas NOTCH1 parece aumentar sua expressão após este período.,Estes resultados devem ser confirmados em um número maior de amostras, no entanto, demonstram que a expressão alterada dos genes FOXO3, NUMB, SGPL1, TXNIP, MSH2... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The refractory anemia with excess blast (RAEB) subtype represents approximately 30% of Myelodysplastic Syndrome (MDS) cases. Patients with RABE have survival rates of a few months and a high risk for progression to acute myeloid leukemia. The molecular basis of the disease is not elucidated yet. This study aimed at analyzing the gene expression profile of bone marrow (BM) cells in patients with RAEB. We created the first SAGE library of RAEB at diagnosis using the BM cells of six patients. A comparison between RAEB and normal SAGE libraries show differentially expressed genes. Five under-expressed genes, TXNIP, SGPL1, NUMB, FOXO3 and MSH2 and five over-expressed genes, MIF, RHOG, ICAM3, CHI3L1 and NOTCH1, were selected for validation using real time PCR with samples collected at diagnosis and samples from the same patients collected six months after diagnosis. The pattern of expression of the five under-expressed genes and two overexpressed genes (MIF and RHOG) was validated at diagnosis in 60% of the patients. The NUMB and RHOG genes show the same expression pattern six months after diagnosis. NOTCH1 continued over-expressed in two samples six months after diagnosis. Our results show that the creation of the RAEB SAGE library allowed an analysis of genes passively involved in the genesis and progression of disease. BM cells from patients with REAB show a different gene expression profile to normal BM. The TXNIP, SGPL1, NUMB, FOXO3, and MSH2 genes are under-expressed and MIF and RHOG are over-expressed at diagnosis. NUMB and RHOG conserved their expression pattern six months after diagnosis and NOTHC1 gene increase its expression in this period. However, the results should be confirmed in studies with a larger number of cases with abnormal expressions for the FOXO3, NUMB, SGPL1, TXNIP, MSH2, MIF, RHOG and NOTCH1 genes. As these genes may play a role in the pathogenesis and progression... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Agnes Cristina Fett Conte / Coorientador: Wilson Araújo da Silva Júnior / Banca: Octávio Ricci Júnior / Banca: Andréia Machado Leopoldino / Banca: Andréa Regina Baptista Rossit / Banca: Luis Carlos de Mattos / Doutor

Orientador: Lúcia Regina Ribeiro / Coorientador: Mário Sérgio Mantovani / Banca: Maria Inês Pardini / Banca: Daniele Sartori / Resumo: Estudos sobre o desenvolvimento dos adipócitos têm se tornado importante, devido ao fato da diferenciação deste tipo celular estar associado a diversas doenças crônicas e/ou degenerativas, tais como hipertensão, diabetes, doenças cardiovasculares e câncer, as quais possuem vínculo com a obesidade, devido, em parte, à expansão do tecido adiposo. A vitamina D tem demonstrado relação com a obesidade e, portanto, estudar suas bases moleculares, vias metabólicas e interação com tecidos, como o tecido adiposo, é necessário para auxiliar futuramente as ações práticas e clínicas do controle das doenças que acometem grande parte da população. Assim, o presente estudo objetiva estudar essas interações in vitro utilizando pré adipócitos humanos SGBS para a avaliação da expressão dos genes VDR, GR e PPARγ. Para este estudo foram feitas três repetições biológicas independentes e separado por tempo de tratamento (4 horas, 12 horas, 24 horas, 4 dias, 8 dias e 12 dias) e pré-adipócitos as células do tempo 0 hora. Em todos os tempos avaliados as células foram divididas em dois grupos: controle (etanol) e tratado (1,25(OH)2D3). Realizou-se extração de RNA total com posterior análise de expressão gênica via RT-qPCR. Ao se comparar a expressão relativa dos genes alvo com o pré-adipócito não tratado (0h), para ambos os grupos e tempos, o gene GR apresentou diferença estatisticamente significativa (p<0,001) para o grupo tratado com vitamina D nos tempos 12 e 24h, 4, 8 e 12 dias, e para o grupo controle os tempos 12 e 24h, 4 e 8 dias. Encontrou-se diferença significativa para o gene PPARɣ no grupo tratado para os tempos 8 e 12 dias, resultado semelhante ao grupo controle, quando comparados com o préadipócito (0h). A expressão basal do gene VDR não apresentou diferença estatisticamente significativa quando comparado com o pré-adipócito. No entanto, no que tangue o fold change, o gene VDR foi o único a... / Abstract: Studies on the development of adipocytes have become important due to the fact that differentiation of this cell type is associated with several chronic and or degenerative diseases such as hypertension, diabetes, cardiovascular disease and cancer, which have link with obesity due in part to the expansion of adipose tissue. Vitamin D has shown relationship with obesity and their molecular bases, pathways and interaction with tissues, such as adipose tissue, therewise studies are necessary to support future clinical practices and actions to control of diseases that affecs large populations. This research aims to study these interactions in vitro using SGBS human adipocytes to assess the expression of VDR, GR and PPARɣ genes. For this study, three independent biological replicates were made separate at treatment times (4 hours, 12 hours, 24 hours, 4 days , 8 days and 12 days) and pre- adipocyte cells from time 0 hour. At all times the cells were evaluated divided into two groups: control (ethanol) and treated (1,25(OH)2D3). Total RNA extraction with subsequent analysis of gene expression by RT-qPCR were performed. When comparing the relative expression of target genes with untreated pre-adipocyte (0h) for both groups and times, the GR gene showed a statistically significant difference ( p < 0.001 ) for the group treated with vitamin D in 12 hours, 24 hours, and, 4, 8 and 12 days for the control group and the times 12 and 24 hours, 4 and 8 days. There was significant difference for PPARɣ gene in the group treated at times 8 and 12 days, similar to the control group results, when compared with the pre-adipocyte (0h). The basal expression of the VDR gene showed no statistically significant difference when compared with the preadipocyte. However, for the fold change, the VDR gene was the only to show expression statistically different at time 0h having a negative expression of 2.87 (p <0.05) at time 4 days. The values of fold change found in... / Mestre

Orientadora: Cristiane Duque / Banca: Rodrigo Alex Arthur / Banca: Rogério de Castilho Jacinto / Resumo: Os objetivos do estudo foram avaliar os efeitos citotóxico e antimicrobiano de análogos de peptídeos catiônicos e sua influência na expressão de marcadores fenotípicos e genotípicos de mineralização dentinária. Fibroblastos da linhagem L929 foram expostas a diluições seriadas dos peptídeos LL-37 e análogos hBD-3-1CV e KR-12-a5 e a viabilidade das células foi avaliada por ensaios de metil tiazol tetrazólio (MTT). Concentração inibitória mínima (CIM) e concentração letal mínima (CLM) para os peptídeos e controles (clorexidina - CHX) foram determinadas contra Streptococcus mutans, Actinomyces israelii, Enterococcus faecalis, Candida albicans, Fusobacterium nucleatum e Porphyromonas gingivalis, pelo método de microdiluição, após 4 e 24 horas. Biofilmes de E. faecalis e F. nucleatum foram formados sobre blocos de dentina radicular bovina e expostos a 5X e 10X MLC do peptídeo com melhor atividade antimicrobiana e CHX e analisadas por contagem de unidades formadoras de colônias/ml (UFC/ml) e por Microscopia de Varredura Confocal à Laser (CLSM). Células semelhantes à odontoblastos da linhagem MDPC-23 foram expostas a diluições seriadas de LL-37, hBD-3-1CV, KR-12- A5 por 24 horas, seguidas de trocas de meio osteogênico por 7 dias e avaliada a viabilidade celular, produção de proteína total (TP), atividade da fosfatase alcalina (ALP) e deposição de nódulos mineralizados. A expressão de genes de marcadores de mineralização (sialofosfoproteína dentinária - DSPP e fosfoproteína de matriz dentinária - DMP-1) foi realizada por PCR quantitativo, após 24 h de exposição aos peptídeos e de incubação durante 14 dias em meio osteogênico. LL-37/hBD-3-1CV e KR-12-a5 afetaram o metabolismo dos fibroblastos em concentrações acima de 500 e 250 μg/ml, respectivamente. KR-12-a5 teve os melhores valores... / Abstract: The objectives of the study were to evaluate the cytotoxic and antimicrobial effects of analogues of cationic peptides and their influence in the expression of phenotypic and genotypic markers of dentin mineralization. L929 fibroblast cells were exposed to serial dilutions of peptides LL-37, hBD-3-1CV and KR-12-a5 and cell metabolism was evaluated by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assays. Minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal lethal concentration (MLC) of peptides and controls (chlorhexidine - CHX) were determined for Streptococcus mutans, Actinomyces israelii, Enterococcus faecalis, Candida albicans, Fusobacterium nucleatum and Porphyromonas gingivalis, by microdilution method, after 4 and 24h. E. faecalis and F. nucleatum biofilms were formed in blocks of bovine root dentin and exposed to 5X and 10X MLC of the peptide with the best antimicrobial activity and CHX and analyzed by colonies forming units/ml (CFU/ml) counts and by Confocal Laser Scanning Microscopy (CLSM). MDPC-23 odontoblast-like cells were exposed to serial dilutions of peptides LL-37, hBD-3-1CV and KR-12-a5 for 24 hours, followed by changes of osteogenic medium for 7 days and evaluated cell viability, total protein (TP) production, alkaline phosphatase (ALP) activity and mineralized nodule deposition. The gene expression of mineralization markers (Dentin Sialophosphoprotein - DSPP and Dentin matrix phosphoprotein 1 - DMP-1) was performed by quantitative PCR, after 24h of peptide exposure and incubation for 14 days in osteogenic medium. LL-37 and hBD-3-1CV affected cell metabolism at concentrations above 500μg/ml and KR-12-a5 above 250μg/ml. KR-12-a5 had the best MIC/MLC values against all microorganisms and both times of exposure. E. faecalis and C. albicans growth was affected only for KR-12-a5 and CHX. hBD-3-1CV and... / Mestre

Orientador: Cesar Martins / Resumo: Cromossomos B são elementos supranumerários presentes em diversos grupos taxonômicos. Sua composição heterocromática está ligada a grande quantidade de sequências repetitivas que possuem. Sua origem está relacionada ao conjunto cromossômico A, sendo um mosaico de sequências deste. O primeiro relato de cromossomos B em ciclídeos africanos foi na espécie Astatotilapia latifasciata, que pode carregar 0, 1 ou 2 cromossomos B. Estudos citogenéticos clássicos encontraram alta carga de elementos repetitivos no cromossomo B da espécie. Portanto, o estudo dos elementos repetitivos presentes no cromossomo B de A. latifasciata pode elucidar sua origem e manutenção no genoma. Os resultados utilizando dados de sequenciamento de nova geração, mapeamento por hibridização fluorescente in situ (FISH) e PCR em tempo real mostraram vários elementos com maior número de cópias no cromossomo B de A. latifasciata. Transposons de DNA, como Tc1-Mariner, e retrotransposons, como os membros da família Bel/Pao e Gypsy, foram encontrados expandidos no cromossomo B. Com o sequenciamento em larga escala de RNA (RNA-seq), foi avaliada a transcrição diferencial entre indivíduos sem cromossomos B (B-) e com esses (B+). Mesmo alguns elementos apresentando expressão diferencial entre os grupos, elementos expandidos no B permanecem com expressão constante. A presença de sequências repetitivas expandidas no cromossomo B e seu perfil transcricional traz informações sobre sua composição e dinâmica. / Mestre

Orientador: Marcos Antonio Machado / Resumo: Phytophthora nicotianae Breda de Haan (Phytophthora parasitica Dastur) e Phytophthora citrophthora (Smith & Smith), agentes causadores da gomose e podridão radicular, têm trazido graves danos em viveiros e pomares de citros no mundo inteiro. O Centro de Citricultura Sylvio Moreira/IAC vem realizando um amplo programa de melhoramento genético de citros via cruzamentos dirigidos com relação ao patossistema Phytophthora-citros, em que já foram verificadas diferenças no nível de resistência na progênie do cruzamento entre tangerina Sunki (Citrus sunki) e trifoliata Rubidoux (Poncirus trifoliata), a partir da detecção de genes diferencialmente expressos utilizando microarranjos, identificando transcritos envolvidos na resistência à Phytophthora, e do mapeamento genético. Este trabalho teve como objetivo principal mapear nos grupos de ligação dos mapas de P. trifoliata e C. sunki as regiões genômicas associadas à resistência à Phytophthora parasitica por meio de análise fenotípica (QTLs) e de expressão (eQTLs). Uma população de 110 híbridos, seus genitores e dois porta-enxertos de referência para a citricultura (limão Cravo e citrumelo Swingle), foi enxertada em limão Cravo e estabelecida em casa de vegetação. Cada híbrido foi conduzido com uma única haste e a inoculação foi realizada pelo método do disco a partir do meio de cultura contendo o micélio de P. parasitica, a 10 cm e 15 cm acima da região da enxertia, totalizando duas inoculações por genótipo. As plantas foram mantidas ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Orientador: Marcos Antônio Machado / Coorientador: Carolina Munari Rodrigues / Banca: Chirlei Glienke / Banca: Paulo Martins Ribolla / Resumo: A Mancha Preta dos Citros (MPC), causada pelo fungo Phyllosticta citricarpa, é uma das mais importantes doenças da citricultura brasileira. No entanto, muito pouco se sabe sobre os mecanismos de patogenicidade deste patógeno na interação com seus hospedeiros. Além disso, P. citricarpa é morfologicamente muito semelhante a P. capitalensis, espécie endofítica também em citros, o que dificulta a diferenciação entre elas, gerando evidentes barreiras fitossanitárias à exportação de frutos in natura. Do mesmo modo, pouco ainda é conhecido sobre seus genomas, ainda não completamente sequenciados, assim como seus transcriptomas em diferentes condições. Assim, o objetivo geral desse trabalho foi avaliar e comparar os genomas e transcriptomas de P. citricarpa e P. capitalensis. O sequenciamento genômico com tecnologia Illumina gerou 179.880.616 reads para P. citricarpa que foram montados em 19.143 contigs, e 148.831.020 reads de P. capitalensis contidos em 11.080 contigs. Foram preditas 16.267 ORFs para a espécie patogênica e 14.813 para a espécie endofítica. Ambos os genomas são similares, com quantidades semelhantes de genes na maioria das categorias analisadas. Os transcriptomas por sua vez geraram em média 74 bilhões de reads por repetição biológica para ambas as espécies, com 3.074 transcritos diferencialmente expressos, sendo 2.637 mais expressos em P. citricarpa e 1.097 em P. capitalensis, com expressiva diferença qualitativa em ambas. P. citricarpa apresentou maior quantidade de genes expressos que P. capitalensis em quase todas as vias analisadas. A espécie endofítica apresentou maior número de genes expressos nas vias de sinalização e adesão. Além disso, os genes envolvidos na interação planta-patógeno foram também mais expressos na espécie endofítica. Os resultados obtidos dos genomas e transcriptomas de P. citricarpa e de P. capitalensis contribuem para maior compreensão da biologia dessas espécies / Abstract: Citrus black spot (CBP), caused by Phyllosticta citricarpa, is one of the most important citrus disease in the Brazilian citrus industry. However, the mechanisms of pathogenicity of this pathogen during the interactions with their hosts are poorly understood. P. citricarpa is frequently associated with P. capitalensis, which is morphologically similar to the endophytic specie. This feature difficults the differentiation of both species resulting in phytossanitary barriers for in natura fruit exportation. Moreover, their genomes were not fully sequenced yet and there is a lack of knowledge of their transcriptomes in different conditions. Thus, the overall objectives of this work were to evaluate and compare the genome and transcriptome of both species. The total genome sequence was 179,880,616 reads for P. citricarpa and 148,831,020 reads for P. capitalensis assembled in 19,143 and 11,080 contigs, respectively. There were predicted 16,267 ORFs for the pathogenic specie and 14,813 for the endophytic specie. P. citricarpa and P. capitalensis presented very similar amounts of genes. The transcriptomic sequence generated on average 74 billion of reads per biological repeat for each species. There were obtained 3,074 differential expressed transcripts, 2,637 were more expressed in P. citricarpa and 1,097 in P. capitalensis. Transcriptional differences between these species were observed. P. citricarpa showed more expressed genes than P. capitalensis in most analyzed categories. The endophytic specie presented more expressed genes on signaling pathway and adhesion than the pathogenic specie. Additionally, plant-pathogen interaction genes were expressed on P. capitalensis. Thus, the results of genomic and transcriptomic analyses of the P. citricarpa and P. capitalensis contribute to the biology comprehension of these species / Mestre

Orientador: Eduardo Kokubun / Banca: Eliete Luciano / Banca: Rosario Dominguez Crespo Hirata / Banca: Angelina Zanesco / Banca: Mario Hiroyuki Hirata / Resumo: Estudos experimentais revelam que uma baixa aptidão cardiorrespiratória (VO2máx) está associada a distúrbios moleculares e bioquímicas que influenciam a sensibilidade e a secreção de insulina. Contudo, não está bem definido se esta associação é confundida por fatores genéticos. Utilizando o modelo de controle de casos (gêmeos monozigóticos (MZ) discordantes) este estudo, de caráter transversal, avaliou 38 pares de gêmeos MZ com idade entre 11 a 18 anos, dos quais nove pares demonstraram diferença média intra-par para o VO2máx de 13,5±3,7 ml.kg-1.min-1 (30,6±9,5%). O objetivo foi investigar o impacto da discordância no VO2máx nas concentrações bioquímicas de glicose, insulina, lipídios, leptina, interleucina 6 e na expressão do mRNA dos genes SUR1, KIR6.2, IL6, LEPTINA e PPARg, independente de efeitos genéticos. Foram obtidas as medidas antropométricas de massa corporal, estatura, circunferência da cintura (CC) e espessuras de dobras cutâneas (EDC). Um teste de esforço máximo em esteira rolante com análise direta dos gases foi utilizado para a determinação do VO2máx e uma colheita de sangue em jejum e pós-carga de glicose (TOTG) para a realização de exames laboratoriais, extração dos genes e estimativa do índice HOMA-RI e HOMA-β. A expressão do mRNA dos genes foi quantificada e avaliada por RT-PCR enquanto as variáveis laboratoriais foram determinadas por kits específicos. Os resultados revelaram maior adiposidade corporal (soma de 6 EDC), índice HOMA (RI e β), concentração sanguínea de leptina, insulina em jejum e pós-carga (2 h) favorecendo as meninas, enquanto os meninos demonstraram maior VO2máx. Correlação negativa foi observada entre o VO2máx e os indicadores de obesidade (IMC, CC e adiposidade), índice HOMA (RI e β) e concentração sanguínea de leptina, insulina em jejum e pós-carga (2 h)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Experimental studies have shown that low cardiorespiratory fitness (VO2max) is associated with molecular and biochemical disturbances that influence insulin sensitivity and secretion. However, it is not defined whether this association is confounded by genetic factors. Using the monozygotic co-twin case-control, this cross-sectional study evaluated 38 MZ twins pairs from 11 to 18 years of age, of which nine pairs presented a mean intrapair difference in VO2max of 13.5 ± 3.7 ml.kg-1.min-1 (30.6 ± 9.5%). The objective was to investigate the impact of the discordances of VO2max on biochemical concentrations of glucose, insulin, lipids, leptin, and interleukin 6, as well as in genes SUR1, Kir6.2, IL6, leptin and PPARgamma mRNA expression, independent of genetic effects. We obtained the anthropometric measures of body weight, height, waist circumference (WC) and skinfold thickness (ST). The maximal treadmill test with direct analysis of inhaled and exhaled gases was used for determination of VO2max, as well as fasting and oral glucose tolerance tests (OGTT) blood sample collections for laboratory analysis, gene extraction and estimation of HOMA-IR and HOMA-β indexes. mRNA genes expression was quantified and evaluated by RT-PCR, while laboratory variables were determined using specific kits. The results showed greater body adiposity (sum of 6 STs), HOMA (IR and β) indexes, blood leptin concentration and fasting and post load (2 h) insulin levels in girls, while boys showed greater VO2max. Negative correlation was found between VO2max and indicators of obesity (BMI, WC and fatness), HOMA (IR and β) indexes and blood leptin concentration and fasting and post load (2 h) insulin levels and positive correlation with PPARgamma gene expression. Regarding the discordant pairs, we observed that the co-twins with the highest VO2max values (45.9 ± 10.0 ml.kg-1.min-1) had significanty... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Mirela Tinucci Costa / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Marcos Rogério André / Banca: Noeme Sousa Rocha / Banca: Felipe Augusto Ruiz Sueiro / Resumo: O tumor venéreo transmissível canino (CTVT) é um câncer transmissível que propaga-se, naturalmente, entre os cães pela transferência alogênica de células tumorais, principalmente, durante o coito. Trata-se da mais antiga linhagem tumoral conhecida na natureza e uma de suas características marcantes é a habilidade de se desenvolver e se evadir da rejeição imunológica, como enxerto alogênico, apesar da estrita e contínua vigilância do sistema imunológico. Há a hipótese de que as células do CTVT não expressam MHC-II, como um mecanismo de escape à detecção imune, e que a positividade detectada em muitas amostras tumorais possa ser atribuída à infiltração de células do hospedeiro no sítio do tumor. Objetivou-se avaliar a expressão gênica e proteica e a caracterização genotípica do loco DLADQA-1 (MHC-II) em tumores venéreos transmissíveis de ocorrência espontânea em cães. Adicionalmente, detectar a interação entre anticorpos séricos e antígenos tumorais específicos do CTVT. Para tanto, foram incluídos neste estudo 20 cães provenientes de São José do Rio Preto, São Paulo, Brasil, com CTVT de ocorrência natural. As amostras tumorais foram coletadas antes do tratamento quimioterápico (M1) e três semanas após o início da quimioterapia (M2). A análise de expressão gênica foi realizada pelo método de qPCR e de expressão proteica de CD3, CD79, MAC387, Ki67 e MHC-II, pelo método de imuno-histoquímica. Foi realizado sequenciamento por capilaridade para caracterização genotípica e estudo dos antígenos tumorais pela técnica de Western Blotting. Amostras de CTVT e de seus hospedeiros provenientes de outros países foram empregados para estudos comparativos. Foi observada diferença significativa de células imunomarcadas para MHC-II e CD3 entre M1 e M2 detectando-se maior expressão em M2. Não houve expressão gênica de DLADQA-1 em nenhuma amostra de CTVT em M1 e M2. O elevado grau de... / Abstract: The canine transmissible venereal tumor (CTVT) is a transmissible cancer that is spread between dogs by the allogeneic transfer of living cancer cells during coitus. It is the oldest cancer lineage known in nature and one of the most remarkable features of CTVT is its ability to develop and evade the immune rejection, as an allogeneic graft, despite the strict and continuous surveillance of the immune system. It has been hypothesized that CTVT cells do not express MHC-II as an escape mechanism to immune detection, and MHC-II positivity detected in tumor samples can be attributed to infiltrating host cell at the tumor site. The aims of this study were: evaluate gene and protein expression and genotypic characterization of DLADQA-1 locus (MHC-II) in spontaneous transmissible venereal tumours in dogs. Additionally, to detect the interaction between serum antibodies and specific tumor antigens of CTVT. For this, 20 dogs from São José do Rio Preto, São Paulo, Brazil with naturally occurring CTVT were included and samples were collected before chemotherapy (M1) and three weeks after starting chemotherapy (M2). The gene expression analysis was performed by qPCR method and protein expression of CD3, CD79, MAC387, Ki67 and MHC-II by immunohistochemistry method. Sequencing was performed by capillary method and the study of tumor antigens by the Western Blotting technique. CTVT samples and their hosts from other countries have been used for comparative studies. Significant differences were observed in MHC-II and CD3 immunostained cells between M1 and M2 with higher expression in M2. There was no gene expression of DLADQA-1 in any sample of CTVT in M1 and M2. The genotypic similarity between tumor samples, which differ from their respective hosts, is consistent with a clonal origin of this tumour. There was no significant difference between the genotypes of hosts and control dogs. The detection of two protein bands in different CTVT from Brazil ... / Doutor

Resumo: A hepcidina é uma proteína que faz parte do sistema imune inato e desempenha um papel fundamental na regulação da homeostase do ferro. Este peptídeo foi previamente caracterizado em várias espécies, entretanto, até agora, não em ovinos. O objetivo deste estudo foi de determinar a sequência do RNAm codificante da hepcidina, bem como caracterizar e realizar a análise da expressão gênica deste peptídeo em diferentes tecidos de ovinos saudáveis. A região codificante da hepcidina consiste em 249 pares de base, as quais codificam um peptídeo contendo 82 aminoácidos. Este precursor, da forma bioativa da hepcidina, apresenta maior homologia com as sequências de Bos taurus e Bubalus bubalis. A hepcidina foi expressa predominantemente no fígado dos ovinos, contudo foram observados altos níveis de expressão no abomaso e baixos níveis nos outros tecidos. Estes resultados ampliam o conhecimento comparativo deste peptídeo, mostrando a relação da hepcidina ovina com a de outras espécies de mamíferos e será útil para estudos futuros sobre o metabolismo de ferro e do processo inflamatório nos ovinos. / Abstract: Hepcidin is part of the innate immune system, and plays a central role in the regulation of iron homeostasis. This peptide has been previously characterized in several species but not in sheep until now. The aim of this study was to sequence, characterize and perform hepcidin gene expression analysis in different tissues of healthy sheep. The resulting ORF consisted of 249 bp predicted to encode an 82 amino acids peptide. The deduced precursor was mostly homologous to Bos taurus and Bubalus bubalis. Hepcidin was predominantly expressed in liver, although high expression was present in abomasum and lower level expression occurred in other tissues. These findings extend our comparative knowledge of this peptide, showing the relationship between sheep hepcidin and other mammalian hepcidins and might be helpful for additional studies on iron metabolism and inflammatory process in sheep. / Orientador: Alexandre Secorun Borges / Coorientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: João Pessoa Araújo Júnior / Banca: Juliana Regina Peiró / Mestre