Doctor en farmacología / En la depresión mayor, la remisión de los síntomas depresivos mediante el uso de fármacos antidepresivos (FADs) requiere de la administración prolongada de éstos. El retardo necesario para observar el efecto terapéutico sugiere que necesariamente deben inducirse procesos neuroadaptativos de curso temporal lento. Diversos antecedentes muestran que en pacientes deprimidos y en modelos animales de esta enfermedad, que se basan en la exposición repetitiva a estrés, se alteran las neuronas y sinapsis glutamatérgicas. Estos cambios deberían ser revertidos por FADs como fluoxetina (flx), un inhibidor específico de la recaptación de serotonina, o reboxetina (rbx), un inhibidor específico de la recaptación de noradrenalina. Por ello, la hipótesis de esta tesis fue que “La administración prolongada de FADs en ratas sometidas a estrés repetido revierte los síntomas depresivos e induce cambios morfológicos y moleculares en neuronas y sinapsis glutamatérgicas del telencéfalo”. Para evaluar esta hipótesis, se indujo estrés por reducción de movimiento empleando dos protocolos semejantes, la restricción en pequeñas cajas o la inmovilización en bolsas durante dos horas diarias por 10 días. En ambos casos, se observaron conductas tipo depresivas. Luego, se administró durante 4 semanas dos diferentes dosis de flx o rbx, continuando el protocolo de estrés durante este período. Las conductas depresivas evaluadas fueron ansiedad y desesperanza aprendida. A pesar de que ambos protocolos de estrés indujeron un aumento de los síntomas, éstos fueron revertidos diferencialmente: flx revierte preferencialmente los síntomas depresivos inducidos por restricción, mientras rbx revierte los síntomas depresivos inducidos por inmovilización. Interesantemente, este efecto se observó sólo a las concentraciones menores utilizadas de ambos fármacos. Adicionalmente, se observó que la administración de flx a ratas naïve indujo una disminución de la desesperanza. Para estudiar los cambios plásticos inducidos por flx que podrían dar cuenta de este efecto antidepresivo, estudiamos las sinapsis glutamatérgicas en ratas naïve tratadas con flx 0,7 mg/kg por 4 semanas. Se evaluó mediante tinción de Golgi la morfología de las dendritas, la densidad y la forma de las espinas dendríticas, y mediante inmunohistoquímica el número de células positivas para las subunidades de receptores glutamatérgicos: GluA1 y GluA2 del R-­‐AMPA y GluN1, GluN2A y GluN2B del R-­‐NMDA en las siguientes áreas telencefálicas: la corteza retroesplenial (RSGb), corteza Prelímbica (PrL) y la corteza motora secundaria (M2) y el hipocampo. Flx indujo retracción del árbol dendrítico y aumento de la densidad y del porcentaje de espinas más grandes. Una de las áreas más afectadas por flx fue la corteza retroesplenial, un área cortical implicada en memoria espacial. A través de las mediciones de permeabilidad al calcio a través del R-­‐AMPA en el hipocampo observamos que flx aumentó la presencia de R-­‐AMPA impermeables al catión, constituidos por la subunidad GluA2. Estos hallazgos reflejan que flx favorece la presencia de contactos sinápticos más maduros que deberían limitar la plasticidad de los circuitos corticales afectados. Para evaluar las consecuencias funcionales de los cambios plásticos en las sinapsis gluatamatérgicas inducidos por flx, realizamos pruebas de memoria dependiente del hipocampos (Prueba del Laberinto de Morris) y parcialmente dependiente de esta estructura (Prueba de Reconocimiento de Objetos). En ambas pruebas, flx indujo un deterioro significativo en la consolidación de la memoria, no así en la adquisición. Sin embargo, no se encontró alteración en memorias que dependen de otras estructuras, como la amígdala. Los resultados mostrados en esta tesis nos permiten concluir que los mecanismos neurobiológicos que se inducen por diferentes modelos de estrés repetido son particulares y por lo tanto, son diferencialmente sensibles a FADs que pertenecen a diferentes familias de fármacos. Esto sugiere que pacientes con sub-­‐tipos de depresión podrían responder diferencialmente a FADs serotoninérgicos o noradrenérgicos. Por otra parte, en ratas naϊve tratadas con flx, los circuitos glutamatérgicos presentan signos de mayor madurez y menor plasticidad frente a un estímulo posterior. Esta menor plasticidad se acompaña por un deterioro en la consolidación o almacenamiento de la memoria. Esta tesis significa un avance importante para el conocimiento de sub-­‐tipos de depresión, los efectos de la administración prolongada de flx sobre sinapsis glutamatérgicas y sus posibles efectos negativos sobre la memoria en sujetos sanos. Estos estudios permitirán plantear, en el futuro, el uso de biomarcadores para el diagnóstico objetivo de subtipos de depresión e intervenciones terapéuticas para su tratamiento. / The remission of depressive symptoms in major depression needs long-­‐term antidepressant drugs (ADDs) administration. The delay required to obtain the therapeutic effect suggests that neuroadaptive processes, occuring with a slow time course, are necessary. Several reports show that in depressed patients and animal models of the disease, based on repeated exposure to stress, glutamatergic neurons and synapses are modified. These changes should be reverted by ADDs such as fluoxetine (flx), a specific serotonin re-­‐uptake inhibitor, or reboxetine (rbx), a specific noradrenaline re-­‐uptake inhibitor. Therefore, the hypothesis of the present thesis work is: Long-­‐term administration of ADDs (flx or rbx) to rats subjected to repetitive stress revert depressive symptoms and morphological and molecular changes in glutamatergic neurons of forebrain areas. To test this hypothesis, stress was induced by restraint stress in wire mesh cages or by immobilization in plastic bags for 10 days to observe depressive symptoms. Then, flx or rbx were administered at two different doses daily for 28 days during which the stress protocol was continued. Depressive-­‐like symptoms such as learned helplessness and anxiety were assessed by behavioral tests. Both stress models induced depressive symptoms such as increased anxiety and learned helplessness, which were differentially reversed: flx preferentially reversed depressive symptoms induced by restriction, while rbx reversed depressive symptoms induced by immobilization. To study plastic changes induced at glutamatergic synapses, naϊve rats were treated with 0.7 mg/kg of flx for 28 days. The dendritic length, spine density and morphology were studied by the Golgi silver staining method whereas levels of AMPA-­‐R subunits (GluA1 and GluA2) and NMDA-­‐R subunits (GluN1, GluN2A and GluN2B) were assessed by immunohistochemistry in the following forebrain areas: Prelimbic cortex (PrL), Retrosplenial cortex (RSGb) and Secondary Motor cortex (M2) and in the hippocampus. Flx induced dendritic retraction and increases in dendritic spine density and in large spines. The most affected area was RSGb, a cortical area involved in spatial memory. Through the measurements of calcium permeability through AMPA-­‐Rs in hippocampal slices, we observed that flx increased the levels of GluA2-­‐lacking AMPA-­‐R. These findings indicate that flx induced a maturation or potentiation of synaptic contacts that should limit the plasticity of the affected cortical circuits. To evaluate plasticity, we performed tests of hippocampal memory (Morris Water Maze) as well as of partially hippocampus-­‐dependent memory (novel object recognition test). In both, flx induced a significant impairment in memory consolidation, but not in acquisition. Our findings show that the neurobiological mechanisms that are induced by repeated stress models are unique to the used stress protocol and interestingly, they are differentially sensitive to ADDs belonging to different drug families. This suggests that sub-­‐ types of depression in human subjects should respond preferentially to serotoninergic or noradrenergic ADDs. Moreover, naϊve glutamatergic synapses are characterized by more mature and less plastic synaptic contacts. Their putative lower plasticity is associated with impairment in memory consolidation or storage. This thesis represents a significant advance in understanding of sub-­‐types of depression and the deleterious effects of long-­‐ term flx treatment in healthy subjects. Moreover, the molecular adaptations at glutamatergic synapses described in this work allow the proposal of new therapeutic strategies for the treatment of depression. / Conicyt

Unidad de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / En este trabajo se trató de demostrar que el medicamento Fluoxetina 20 mg comprimidos de Laboratorio Chile es equivalente terapéutico con el medicamento Livertox 20 mg de Laboratorios Bagó a través de la bioexención de los estudios de bioequivalencia in vivo, esto por medio de lo planteado en el Sistema de Clasificación Biofarmacéutico. Primeramente, se realizó la búsqueda bibliográfica de antecedentes que permitiesen el contextualizar el estudio y tener el sustento técnico y conceptual para llevarlo a cabo, con el fin de argumentar la equivalencia de ambos productos (GMP, validación de proceso de fabricación, permeabilidad del API, etc.). Habiendo hecho esto, se establecieron tanto el objetivo general como los específicos. Luego, se procedió a elaborar los protocolos de validación para las metodologías analíticas para cada uno de los medios consignados en la guía G-BIOF 02 del Instituto de Salud Pública de Chile para realizar un estudio de bioexención; siguiendo todo lo estipulado en ésta sobre los parámetros analíticos a medir y sus criterios de aceptación. Se procedió a validar las 3 metodologías analíticas lo cual fue llevado a cabo satisfactoriamente, para luego evaluar la similitud de las cinéticas de disolución entre 12 comprimidos de cada producto. Al ser ambos de disolución muy rápida (Q>%85 a los 15) no fue necesario el uso de f2 para evaluar la similitud, sólo que ambos cumpliesen Q, lo cual ocurrió tanto para Fluoxetina de LCh como para Livertox de Bagó. En el intertanto se obtuvo la solubilidad experimental a través de una titulación potenciométrica de la materia prima de Fluoxetina 20 mg LCh. Finalmente se procedió a valorar y determinar la uniformidad de contenido del producto de referencia, obteniendo resultados satisfactorios para valoración y AV. Con esto, se puede afirmar que Fluoxetina 20 mg LCh es equivalente terapéutico con Livertox 20 mg de Bagó

A S100B é uma proteína ligante de cálcio expressa e secretada por astrócitos, e possui efeito parácrino sobre os neurônios, atuando como fator neurotrófico. Estudos clínicos sugerem que níveis plasmáticos elevados de S100B estão correlacionados positivamente com a resposta à terapia antidepressiva, particularmente quando se utilizam inibidores seletivos da recaptação de serotonina, mas este mecanismo ainda é desconhecido. Neste trabalho foi avaliada a secreção de S100B em culturas primárias de astrócitos e fatias hipocampais de ratos expostos à fluoxetina e serotonina. Foi observado um significativo aumento da secreção de S100B frente à fluoxetina, e este efeito foi aparentemente dependente de PKA. Estes dados reforçam a importância da fluoxetina, independentemente da serotonina e receptores serotoninérgicos, no tratamento antidepressivo, bem como o papel da S100B nos distúrbio depressivos. / S100B is a calcium-binding protein, produced and secreted by astrocytes, which has a putative paracrine neurotrophic activity. Clinical studies have suggested that peripheral elevation of this protein is positively correlated with therapeutic antidepressant response, particularly selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs); however, the mechanism remains unclear. Here, we measured S100B secretion directly in hippocampal astrocyte cultures and hippocampal slices exposed to fluoxetine and observed a significant increment of S100B release in the presence of this SSRI, apparently dependent on PKA. Moreover, we found that serotonin (possibly 5HT1A receptor) reduces S100B secretion and antagonizes the effect of fluoxetine on S100B secretion. These data reinforce the effect of fluoxetine, independently of serotonin and serotonin receptors, suggesting a putative role for S100B in depressive disorders and that other molecular targets may be relevant for antidepressant activity.

SILVA, R. A. C. Atividade anti-Candida in vitro dos inibidores seletivos da recaptação da serotonina frente às cepas resistentes ao fluconazol e sua atividade em isolados formadores de biofilme. 2016. 65 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Carolinda Oliveira (ppgmm@ufc.br) on 2017-06-22T15:00:57Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Rose Anny Costa Silva.pdf: 1272023 bytes, checksum: 6dd7a8c84dfdf985159d2f2d3458ef59 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-06-22T15:43:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Rose Anny Costa Silva.pdf: 1272023 bytes, checksum: 6dd7a8c84dfdf985159d2f2d3458ef59 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-22T15:43:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Rose Anny Costa Silva.pdf: 1272023 bytes, checksum: 6dd7a8c84dfdf985159d2f2d3458ef59 (MD5) Previous issue date: 2016-01-14 / It is known that candidiasis has been the most documented disease in different groups of patients with immunodeficiency, among all the opportunistic fungal infections diseases. Oftentimes, these infections are related to a biofilm formation, that can be originated from implanted biomaterials or reveal on the host surface. However, antifungal drugs available on the market are restricted and limited to a low number compared to antibacterial drugs. Adding this fact to the increase resistance of the genre Candida regarding the main treatment today, fluconazole, the need for a research on new therapeutic strategies is evident, from the learning of other molecules to non-classic use of already available medicine. Recent researches have revealed a wide antifungal activity of selective serotonin reuptake inhibitor (SSRIs), classic antidepressants. Aware of this context, the main goal is to evaluate antifungal potential of fluoxetine, sertraline, and paroxetine facing Candida spp. planktonic cells resistant to fluconazole, as well as its action mechanism and the viability of biofilms treated with fluoxetine. The evaluation of the antifungal effect on the SSRIs on 13 strains of Candida spp. was determined using broth microdilution technique (M27-A3). A sensibility evaluation of Candida spp. fungal biofilm within 24h of fluoxetine was made the colorimetric assay with the tetrazolium salt (MTT) assay in 96-well plates, defining then, the viability of sessile cells after treatment. By means of flow cytometry and comet assay analysis, damages on membrane, mitochondria and DNA, that contributed to the elucidation of the probable action mechanism of SSRIs on C. albicans representative strains were studied. All strains of Candida spp. resistant to fluconazole showed, after 24h, Minimum Inhibitory Concentration (MIC), which varied between 20 – 160 μg/mL for fluoxetine, 10 – 20 μg/mL for sertraline, and 10 – 100,8 μg/mL for paroxetine, concluding then, that all of them present antifungal activity within the tested range. According the data found, the SSRIs cause fungal death after plasmatic membrane and mitochondrial damages, which activate apoptotic-signalling pathways, resulting loss of cellular viability on dose-dependent form in each one of the tested drugs. Regarding the isolated biofilm formers, Candida parapsilosis presented MIC of approximately 40 μg/mL, C. albicans with 80 μg/mL, C. tropicalis and C. glabrata with 160 μg/mL when exposed to fluoxetine, this reduction was considered statistically significant at the cellular activity of the biofilm (P < 0.05). Therefore, it is concluded that SSRIs are capable of inhibit the growth in vitro of Candida spp.., both in planktonic form, as biofilm, inducing cellular death by apoptosis, this set of data acknowledge the great importance of antidepressant options for patients that compose risk groups for fungal infections. / Dentre as infecções fúngicas oportunistas, a candidíase tem sido aquela mais documentada nos diferentes grupos de pacientes portadores de imunodeficiências. Muitas vezes essas infecções estão associadas à formação de biofilme, tanto em biomateriais implantados no paciente, como na própria superfície do hospedeiro. No entanto, as drogas antifúngicas disponíveis no mercado são restritas a um pequeno número quando comparadas às antibacterianas. Este fato unido ao aumento da frequência de resistência do gênero Candida ao principal tratamento da atualidade, fluconazol, desmonstram a necessidade da busca por novas estratégias terapêuticas, que vão desde a descoberta de novas moléculas, até o uso não clássico de medicamentos já disponíveis no mercado. Trabalhos recentes têm demonstrado uma ampla atividade antifúngica dos inibidores seletivos da recaptação da serotonina (ISRSs), antidepressivos clássicos. Dentro desse contexto, o objetivo foi avaliar o potencial antifúngico da fluoxetina, sertralina e paroxetina frente às células planctônicas de Candida spp. resistentes ao fluconazol, bem como seu o mecanismo de ação, e ainda a viabilidade de biofilmes tratados com fluoxetina. A avaliação do efeito antifúngico dos ISRSs em 13 cepas de Candida spp. foi determinada pelo método de microdiluição em caldo (M27-A3). Para a avaliação da sensibilidade do biofilme fúngico de Candida spp. 24h a fluoxetina, utilizou-se o ensaio colorimétrico com o sal de tetrazólio (MTT) em placas de 96 poços, determinando a viabilidade das células sésseis após o tratamento. Por meio de análises de citometria de fluxo e teste do cometa, foram avaliados danos na membrana, mitocôndria e DNA, que contribuíram para elucidação do provável mecanismo de ação dos ISRSs em cepa representativa de C. albicans. As cepas de Candida spp. resistentes ao fluconazol após 24h apresentaram a Concentração Inibitória Mínima (CIM) que variou de 20 – 160 μg/mL para fluoxetina, 10 – 20 μg/mL para sertralina e 10 – 100.8 μg/mL para paroxetina, demonstrando assim, possuírem atividade antifúngica dentro da faixa testada. De acordo com os dados encontrados, os ISRSs causam morte fúngica após danos na membrana plasmática e mitocondrial, que ativam vias de sinalização apoptótica, causando a perda de viabilidade celular de forma dose-dependente em cada uma das drogas testadas. Em relação aos isolados formadores de biofilme, Candida parapsilosis apresentou CIM de aproximadamente 40 μg/mL, C. albicans de 80 μg/mL, C. tropicalis e C. glabrata de 160 μg/mL ao serem expostos a fluoxetina, sendo a redução considerada estatisticamente significativa na atividade celular do biofilme (P < 0,05). Diante desses resultados, conclui-se que os ISRSs são capazes de inibir o crescimento in vitro de Candida spp., tanto na forma planctônica, quanto de biofilme, causando morte celular por apoptose, sendo dados de grande importância na escolha clínica de antidepressivos para pacientes que se enquadram nos grupos de risco para infecções fúngicas.

A S100B é uma proteína ligante de cálcio expressa e secretada por astrócitos, e possui efeito parácrino sobre os neurônios, atuando como fator neurotrófico. Estudos clínicos sugerem que níveis plasmáticos elevados de S100B estão correlacionados positivamente com a resposta à terapia antidepressiva, particularmente quando se utilizam inibidores seletivos da recaptação de serotonina, mas este mecanismo ainda é desconhecido. Neste trabalho foi avaliada a secreção de S100B em culturas primárias de astrócitos e fatias hipocampais de ratos expostos à fluoxetina e serotonina. Foi observado um significativo aumento da secreção de S100B frente à fluoxetina, e este efeito foi aparentemente dependente de PKA. Estes dados reforçam a importância da fluoxetina, independentemente da serotonina e receptores serotoninérgicos, no tratamento antidepressivo, bem como o papel da S100B nos distúrbio depressivos. / S100B is a calcium-binding protein, produced and secreted by astrocytes, which has a putative paracrine neurotrophic activity. Clinical studies have suggested that peripheral elevation of this protein is positively correlated with therapeutic antidepressant response, particularly selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs); however, the mechanism remains unclear. Here, we measured S100B secretion directly in hippocampal astrocyte cultures and hippocampal slices exposed to fluoxetine and observed a significant increment of S100B release in the presence of this SSRI, apparently dependent on PKA. Moreover, we found that serotonin (possibly 5HT1A receptor) reduces S100B secretion and antagonizes the effect of fluoxetine on S100B secretion. These data reinforce the effect of fluoxetine, independently of serotonin and serotonin receptors, suggesting a putative role for S100B in depressive disorders and that other molecular targets may be relevant for antidepressant activity.

Orientador : Prof. Dr. Paulo Roberto Dalsenter / Co-orientador : Prof. Dr. Anderson Joel Martino-Andrade / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 15/06/2012 / Bibliografia: fls. 138-152 / Resumo: O tratamento antidepressivo durante a gestação e lactação é desejável ou necessário quando os riscos da depressão não tratada para a mãe e o bebê são maiores do que aqueles associados com o uso de antidepressivos. Nas últimas décadas houve um aumento considerável no uso de antidepressivos durante a gestação e lactação, e a fluoxetina foi reportada como a droga mais utilizada durante estes períodos. A fluoxetina atravessa facilmente a barreira placentária, alcançando níveis séricos fetais semelhantes aos maternos, e é excretada no leite materno no momento da amamentação. Assim, um grande número de crianças em desenvolvimento é exposta a este antidepressivo in utero e durante a lactação. Estudos clínicos e pré-clínicos mostraram alterações reprodutivas em diferentes espécies após a exposição à fluoxetina. A partir desses estudos nossa primeira hipótese foi que a fluoxetina poderia estar mediando tais efeitos através de uma possível atividade estrogênica e/ou anti-androgênica. Esta hipótese foi testada pela investigação de possível atividade da fluoxetina (0,4, 1,7 e 17 mg/kg/dia) sobre receptores estrogênicos e/ou androgênicos pelos testes de Hershberger, uterotrófico e do gene repórter. Os resultados indicaram ação estrogênica da fluoxetina tanto in vivo (1,7 e 17 mg/kg) como in vitro (17 ?M). Substâncias que atuam no sistema endócrino são passíveis de interferir com a regulação hormonal através de diferentes mecanismos e dessa maneira causar vários efeitos adversos na reprodução. Assim, a segunda parte deste estudo teve por objetivo testar a hipótese de que se a fluoxetina é capaz de interferir com a ação de hormônios gonadais, tais como o estradiol, a exposição à fluoxetina durante períodos críticos de desenvolvimento poderia produzir efeitos reprodutivos a curto e a longo-prazo. Esta hipótese foi testada através da avaliação dos parâmetros gestacionais e do desenvolvimento sexual dos descendentes no teste de exposição in utero e lactação em ratos Wistar. Os resultados da exposição in utero e lactação revelaram que a fluoxetina causou redução no ganho de massa corporal durante a prenhez, redução na massa corporal no 21° dia de prenhez (corrigido pela soma do peso dos filhotes no 1° dia pós-natal), menor peso ao nascimento, redução no índice de viabilidade e desmame, além de alterações hormonais e no peso de órgãos nas progenitoras tratadas com 17 mg/kg de fluoxetina durante a gestação e a lactação. Não foram observadas alterações no desenvolvimento sexual dos filhotes expostos à fluoxetina in utero e lactação. Outro aspecto a ser considerado é sobre os possíveis efeitos da exposição à fluoxetina em períodos de neurodesenvolvimento, já que a serotonina desempenha um papel importante na neuroplasticidade durante críticos estágios embrionários. Com isso, a terceira parte deste estudo teve por objetivo investigar se a exposição à fluoxetina in utero e lactação a ratos Wistar poderia causar alterações comportamentais e neuroquímicas a longo prazo através de dosagens de neurotransmissores e da avaliação nos testes de campo aberto, labirinto em cruz elevado, natação forçada modificado e preferência à sacarose. Os resultados do terceiro estudo mostraram que a exposição à fluoxetina produziu redução nos níveis de noradrenalina, do ácido 5-hidroxindolacético e do ácido 3,4-dihidroxifenilacético no córtex pré-frontal e hipocampo dos animais na vida adulta. Porém, não foram observadas alterações relevantes em comportamentos que expressam ansiedade e depressão nestes animais. As consequências funcionais e implicações clínicas destas alterações neuroquímicas nas estruturas cerebrais permanecem a ser elucidadas. Concluímos que a fluoxetina demonstrou atividade estrogênica, causou toxicidade fetal e materna, além de induzir alterações hormonais em progenitoras tratadas com esta droga durante a gestação e lactação. A maioria destas alterações reprodutivas foi observada apenas com a maior dose de fluoxetina investigada (17 mg/kg). Além disso, a exposição à fluoxetina in utero e lactação produziu alterações a longo prazo nos níveis de neurotransmissores dos descendentes, e estas alterações variaram de acordo com o sexo e as doses de fluoxetina. / Abstract: The use of antidepressant medications is currently acceptable for pregnant and lactating women in situations where the risks to the mother and child of not treating the disease are greater than the risks associated with exposure to the antidepressant drug. In recent decades has seen a large increase in the use of antidepressants during pregnancy and lactation, and fluoxetine was reported as the most widely used antidepressant during these periods. Fluoxetine readily cross the placenta reaching similar levels in maternal and fetal serum, and is also secreted into breast milk during lactation. Thus, a large number of developing children is exposed to fluoxetine in utero and during lactation. Clinical and preclinical studies showed reproductive changes in different species after exposure to fluoxetine. From these studies we hypothesized that fluoxetine could be mediating these effects through a possible estrogenic and/or anti-androgenic activity. This hypothesis was tested by investigating possible activities of fluoxetine (0.4, 1.7 and 17 mg/kg) on estrogenic and/or androgenic receptors in the Hershberger, uterotrophic, and reporter gene assays. The results indicated estrogenic activity of fluoxetine in both, in vivo (1.7 and 17 mg/kg) and in vitro (17 ?M), assays. Substances that act on the endocrine system are likely to interfere with the hormonal regulation through different mechanisms and to produce several adverse effects on reproduction. Thus, the second part of this study was to test the hypothesis that if fluoxetine is able to interfere with the gonadal hormones action, such as estradiol, fluoxetine exposure during critical periods of development could produce reproductive effects in the short and long-term. This hypothesis was tested by evaluating pregnancy outcomes and sexual development of offspring in the in utero and lactation assay using Wistar rats. The results revealed that fluoxetine caused a reduction in body weight gain during pregnancy, body weight reduction on gestational day 21(corrected by subtracting the sum of the weights of the pups on postnatal day 1), low birth weight, reduction in viability and weaning indices, as well as hormonal and organ weights changes in dams treated with 17 mg/kg of fluoxetine during pregnancy and lactation. There were no changes in sexual development of offspring exposed to fluoxetine in utero and lactation. Another aspect to be considered is the possible effects of fluoxetine exposure in neurodevelopment periods. It is known that serotonin plays an important role in neuroplasticity in critical embryonic stages. Thus, the third part of this study was to investigate whether exposure to fluoxetine in utero and lactation could cause long-term neurochemical and behavioral changes in rats by measurement of neurotransmitters and assessment in the open field, elevated plus maze, forced swimming and sucrose preference tests. The results of the third study showed that exposure to fluoxetine produced a reduction in the levels of noradrenaline, 5-hydroxyindoleacetic acid and 3,4-dihydroxyphenylacetic acid in the prefrontal cortex and hippocampus in adulthood. However, there were no significant changes in behaviors that express anxiety and depression in these animals. The functional consequences and clinical implications of these neurochemical changes in brain structures remain to be elucidated. We concluded that fluoxetine showed estrogenic activity, caused maternal and fetal toxicity, and induced hormonal changes in dams treated with this drug during pregnancy and lactation. Most of these reproductive changes was observed only with the highest dose of fluoxetine (17 mg/kg). Furthermore, exposure to fluoxetine in utero and lactation produced long-term changes in neurotransmitter levels of the offspring, and these changes varied according to the sex and the doses of fluoxetine.

A S100B é uma proteína ligante de cálcio expressa e secretada por astrócitos, e possui efeito parácrino sobre os neurônios, atuando como fator neurotrófico. Estudos clínicos sugerem que níveis plasmáticos elevados de S100B estão correlacionados positivamente com a resposta à terapia antidepressiva, particularmente quando se utilizam inibidores seletivos da recaptação de serotonina, mas este mecanismo ainda é desconhecido. Neste trabalho foi avaliada a secreção de S100B em culturas primárias de astrócitos e fatias hipocampais de ratos expostos à fluoxetina e serotonina. Foi observado um significativo aumento da secreção de S100B frente à fluoxetina, e este efeito foi aparentemente dependente de PKA. Estes dados reforçam a importância da fluoxetina, independentemente da serotonina e receptores serotoninérgicos, no tratamento antidepressivo, bem como o papel da S100B nos distúrbio depressivos. / S100B is a calcium-binding protein, produced and secreted by astrocytes, which has a putative paracrine neurotrophic activity. Clinical studies have suggested that peripheral elevation of this protein is positively correlated with therapeutic antidepressant response, particularly selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs); however, the mechanism remains unclear. Here, we measured S100B secretion directly in hippocampal astrocyte cultures and hippocampal slices exposed to fluoxetine and observed a significant increment of S100B release in the presence of this SSRI, apparently dependent on PKA. Moreover, we found that serotonin (possibly 5HT1A receptor) reduces S100B secretion and antagonizes the effect of fluoxetine on S100B secretion. These data reinforce the effect of fluoxetine, independently of serotonin and serotonin receptors, suggesting a putative role for S100B in depressive disorders and that other molecular targets may be relevant for antidepressant activity.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-03-15T04:00:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337677.pdf: 1455386 bytes, checksum: a3b35c64fe2b99f36f9a80818ea8408b (MD5) Previous issue date: 2015 / Diferenças sexuais são descritas na resposta a antidepressivos no teste do nado forçado, em ratos. O teste do nado forçado repetido (TNF-r) avalia os efeitos agudos e crônicos do tratamento com antidepressivos no mesmo grupo de animais. O TNF-r consiste de uma sessão de nado de 15minutos (pré-teste) seguida de sessões de 5minutos no primeiro (teste), sétimo (reteste 1) e décimo quarto (reteste 2) dias após o pré-teste. Em ratos machos, a repetição induz um aumento do tempo de imobilidade. Este efeito é contraposto pelo tratamento com antidepressivos. O objetivo deste estudo foi comparar os efeitos do tratamento com fluoxetina (FLX) em ratos machos e fêmeas expostos ao TNF-r. Para tal, ratos machos e fêmeas foram treinados a ingerir uma solução de sacarose 10% por 7dias. Após este período, os grupos foram designados. Os machos receberam sacarose 10% (vei) ou FLX 2,5mg/Kg. As fêmeas receberam vei, FLX 1mg/Kg, FLX 2,5mg/Kg ou FLX 5mg/Kg. O tratamento teve duração de 14 dias. A repetição do teste falhou em aumentar significativamente o tempo de imobilidade nos machos, e também, em fêmeas. Estes efeitos podem ser atribuídos as propriedades apetitivas da sacarose. O tempo de imobilidade nas fêmeas também não foi afetado pela repe. O tratamento crônico com FLX reduziu o tempo de imobilidade nos machos, mas não nas fêmeas. Considerando estes resultados, sugerimos que poderia existir um dimorfismo sexual no sistema serotoninérgico destes animais. Para investigar essa hipótese, os animais foram decapitados sob anestesia e regiões do encéfalo foram dissecadas. Estas regiões foram incubadas in vitro com veículo ou serotonina (5-HT) e analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detecção eletroquímica. Encontramos que, no hipocampo, as concentrações de 5-HT e 5-HIAA são semelhantes em ambos os sexos. No entanto, no córtex, as fêmeas apresentam uma concentração de 5-HT muito menor do que os machos. Porém, a concentração de 5-HIAA foi semelhante. Como o tratamento com FLX reduziu os níveis intracelular de 5-HT no hipocampo, tanto de machos quanto de fêmeas, podemos sugerir que a FLX inibiu o transportador de 5-HT (SERT). Já que a incubação in vitro com 5-HT dos tecidos dos animais tratados com FLX aumentou as concentrações de 5-HT igualmente para machos e fêmeas, concluímos que o sistema cortical serotoninérgico das fêmeas funciona do mesmo modo que o dos machos, porém, com quantidades reduzidas de 5-HT.<br> / Abstract : Sex differences are reported in the response to antidepressants in the forced swimming test. The repeated forced swimming test is planned to evaluate the acute and chronic effect of antidepressant treatment in the same group of rats. Repeated FST consists of 15 min of swimming (pretest) followed by 5 min of swimming in the first (test), seventh (retest 1) and fourteenth (retest 2) day after pretest. In male rats, the repetition induces an increase in the immobility time. This effect is counteracted by antidepressant treatment. The aim of this study was to compare the effects of fluoxetine (FLX) in male and female rats exposed to the repeated FST. For that, male and female rats were trained to ingest a 10% sucrose solution for 7days. After that, different groups were assigned. Males received either sucrose 10% (Veh) or FLX 2,5mg/Kg. Females received Veh, FLX 1mg/Kg, FLX 2,5mg/Kg or FLX 5mg/Kg. Surprisingly, the repetition of the test failed to significantly increase de immobility time in males, however, this effect can be due to the sucrose, since it is palatable to rodents. The immobility time in females was also not affected. The chronic treatment with FLX reduced the immobility time in males, but not in females. Considering this data, we hypothesized that could exist a sexual dimorphism in the serotonergic system of this animals. To investigate that, the animals were decapitated under anaesthesia and brain regions were dissected. These regions were either incubated in vitro with vehicle or serotonin (5-HT) and further analyzed by HPLC with electrochemical detection. We found that, in the hippocampus, 5-HT and 5-HIAA concentrations were similar in both sexes. However, in the cortex, females had a much lower 5-HT levels than the males. However, 5-HIAA concentration was similar. Since the treatment with FLX reduced 5-HT levels in the hippocampus of both male and female, we can assume that FLX was inhibiting the 5-HT transporter (SERT). Since in vitro incubation with 5-HT in the tissues of the animals treated with FLX increased the 5-HT concentrations equally in both male and female brain tissues, we can assume that the females cortical system works the same as males, but with a decreased concentration of 5-HT.

Submitted by Leonardo Freitas (leonardo.hfreitas@ufpe.br) on 2015-04-14T14:27:14Z No. of bitstreams: 2 dissertação priscylla versão final.pdf: 1495926 bytes, checksum: 5c12ae154ce7fa1cdd4026b6b49068fe (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-14T14:27:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertação priscylla versão final.pdf: 1495926 bytes, checksum: 5c12ae154ce7fa1cdd4026b6b49068fe (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / Os Inibidores Seletivos da Recaptação da Serotonina (ISRS) podem interferir na formação de estruturas craniofaciais por bloquear a ação da serotonina nos sítios de captação. Estudos sobre ação da fluoxetina no osso têm sido desenvolvidos, mas, pouco se sabe da repercussão deste fármaco no desenvolvimento mandibular. METODOLOGIA: Foram utilizados 24 filhotes de ratas Wistar tratadas durante a gestação e durante a gestação e lactação, divididos em 4 grupos: CG - Controle da gestação; CL - Controle da gestação e lactação, ambos com solução de Cloreto de Sódio 0,9% na dose 10μl/g de peso animal (v.o); FG - Tratado com fluoxetina durante a gestação e FL - Tratado durante a gestação e lactação, ambos com fluoxetina na dose de 20mg/kg de peso animal (v.o). Aos 25 dias de vida após anestesia com xilazina a 20mg/Kg de peso animal (i.m.) e quetamina a 50mg/Kg de peso animal (i.m.), os animais foram perfundidos por via intracardíaca. As hemi-mandíbulas direitas foram removidas e fixadas no mesmo fixador por 24 horas a temperatura ambiente. Os espécimes foram submetidos à radiografia digital, processados convencionalmente para parafina e corados pela Hematoxilina e Eosina, Tricrômico de Masson e Picrosirius Red. Análises radiopacidade radiográfica, histológica, histométrica e microscopia de polarização foram realizadas. Os dados obtidos foram submetidos ao teste de Mann-Whitney com índice de significância de 5%. RESULTADOS: Houve diferença significativa comparando o CL com o FL tanto na histometria quanto na radiopacidade radiográfica, revelando respectivamente uma redução na espessura da cortical óssea inferior, redução no número de osteócitos, redução na radiopacidade óssea, com consequente redução na densidade óssea. Ocorreu também redução no número de osteoblastos do FG. CONCLUSÃO: A fluoxetina diminui a produção de osteócitos e diminui a radiopacidade óssea, com consequente diminuição da densidade óssea nos animais tratados com o fármaco a longo prazo. Mostrando que o uso prolongado da fluoxetina por ratas prenhes e lactantes altera a massa óssea mandibular.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:04:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8839_1.pdf: 783504 bytes, checksum: fe0596b9ec97757dce3ff4445c1f5999 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / Os inibidores seletivos da recaptação da serotonina atuam aumentando a disponibilidade deste neurotransmissor na fenda sináptica. Estudos recentes demonstraram a presença de receptores da serotonina em células ósseas, sugerindo a participação desta substância no metabolismo ósseo. O objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da fluoxetina, um potente inibidor da recaptação seletiva da serotonina, sobre o crescimento de ratos neonatos e avaliar as possíveis alterações morfológicas e morfométricas no disco epifisário do fêmur desses animais. Foram utilizados 9 ratos albinos machos da linhagem Wistar com 1 dia de idade, divididos em 2 grupos: controle (n=3) e experimental (n=6). O grupo experimental recebeu diariamente injeção subcutânea com fluoxetina (10mg/Kg em 10 &#956;l/g) e o grupo controle solução salina a 0,9% de NaCl, no volume de10 &#956;l/g. A massa corpórea dos animais foi verificada diariamente. No 22º dia os animais foram sacrificados, os fêmures direitos coletados, pesados, processados histologicamente pela técnica histológica convencional e analisados pela microscopia ótica. Foi realizada análise morfométrica do disco epifisário distal para avaliação da área por secção, espessura total, espessuras das camadas de repouso, seriada, e hipertrófica; e verificação da morfologia do tecido ósseo. Os resultados demonstraram que o grupo experimental apresentou crescimento ponderal, peso corporal e femoral inferior ao grupo controle (p<0,05), bem como na área por secção. Não houve diferença significante na espessura total, nem nas camadas de repouso, seriada e hipertrófica. Com base nesses resultados, conclui-se que o uso de fluoxetina em ratos em desenvolvimento provoca diminuição do peso corporal e femoral, diminuição do crescimento ponderal e diminuição na área por secção do disco epifisário. Os aspectos morfológicos sugerem que a serotonina provoca uma interferência no metabolismo dos condrócitos, com conseqüentes repercussões no processo de ossificação