Orientadora: ProfS DrS Iara José de Messias-Reason / Co-orientadora: ProfS DrS Lilian Pereira-Ferrari / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias da Saúde, Programa de Pós-Graduaçao em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 2008 / Inclui bibliografia

Orientador : Prof. Dr. Aleksander R Zampronio / Coorientadora : Diego Correia / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 29/06/2016 / Inclui referências : f. 56-59 / Área de concentração / Resumo: A exposição ao etanol, durante diferentes fases da vida pode aumentar o risco de infecções e promover alterações no sistema nervoso central. No presente estudo, investigou-se o efeito da exposição ao etanol (binge) em ratos adolescentes na resposta febril induzida por lipopolissacarídeo (LPS) e interleucina-1?(IL-1?). A exposição dos animais durante a adolescência ao etanol não alterou a temperatura corporal dos animais. Observou-se uma redução significativa na resposta febril induzida por LPS (5 ou 50 ?g/kg, por via intraperitoneal) no dia 51 pós-natal (13 dias depois da última exposição ao etanol). No entanto, não foram observadas alterações na resposta febril em animais expostos ao etanol no dia 63 pós-natal (25 dias depois da última exposição ao etanol). A resposta febril induzida pela administração intracerebroventricular de IL-1? (3 ?g) foi também reduzida em animais expostos ao etanol (binge) durante a adolescência (dia 51 pós-natal). O tratamento oral agudo com etanol 24 h antes da administração de LPS não alterou a resposta febril induzida por este pirogênio. A exposição ao etanol durante a adolescência não alterou os parâmetros hematológicos ou o número e viabilidade dos macrófagos peritoneais. A administração de LPS aumentou os níveis plasmáticos de IL-1? de maneira similar em animais que receberam salina ou expostos ao etanol na adolescência. No entanto, os animais expostos ao etanol apresentaram níveis significativamente menores de IL-1? no fluido cerebroespinhal após a administração de LPS quando comparados com animais que receberam salina. Estes resultados sugerem que a exposição ao etanol (binge) durante a adolescência produz alterações no sistema nervoso central que podem prejudicar a resposta febril e que podem ser observadas mais tarde, após a suspensão da exposição, mas que são reversíveis. Estas alterações parecem envolver as mudanças na sinalização LPS/IL-1?. / Abstract: Ethanol exposure during different phases of life may increase the risk of infections and promote alterations in the central nervous system. In the present study, investigated the effect of binge-like exposure to ethanol of adolescent rats in the febrile response induced by lipopolysaccharide (LPS) and interleukin-1? (IL-1?). The exposure of the animals during adolescence to ethanol did not change the body temperature of the animals. A significant reduction in the febrile response induced by LPS (5 or 50 ?g/kg, intraperitoneally) was observed on postnatal day 51 (13 days after the last exposure to ethanol). However, no changes in the febrile response in ethanol-exposed animals were observed on postnatal day 63 (25 days after last exposure to ethanol). The febrile response induced by intracerebroventricular IL-1? (3 ng) was also significantly abrogated in binge-like ethanol exposed animals during adolescence (postnatal day 51). The acute oral treatment with ethanol 24 h prior LPS administration did not change the febrile response induced by LPS (50 ?g/kg). The binge-like exposure to ethanol during adolescence did not change the hematological parameters or the number and viability of peritoneal macrophages. LPS administration increase the plasma levels of IL-1? in both animals that received saline and exposed to ethanol during adolescence. However, the animals that were exposed to ethanol showed significantly lower levels of IL-1? in the cerebrospinal fluid after the administration of LPS when compared to animals that received saline. These results suggest that binge-like exposure to ethanol during adolescence produce changes in the central nervous system that can impair the febrile response and that can be observed later after the suspension of the treatment but that are reversible. These changes may involve changes in LPS/IL-1? signaling.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Saúde Coletiva, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-11-28T18:02:28Z No. of bitstreams: 1 2014_KarinaRibeiroLeiteJardimCavalcante.pdf: 407439 bytes, checksum: 185c2ba08542ed5e847a086b51787c40 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-12-01T11:43:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_KarinaRibeiroLeiteJardimCavalcante.pdf: 407439 bytes, checksum: 185c2ba08542ed5e847a086b51787c40 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-01T11:43:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_KarinaRibeiroLeiteJardimCavalcante.pdf: 407439 bytes, checksum: 185c2ba08542ed5e847a086b51787c40 (MD5) / Introdução: A febre amarela é uma doença infecciosa aguda, febril, não contagiosa, de curta duração e de gravidade variável, transmitida ao homem por meio da picada de mosquito infectado. São reconhecidos dois ciclos básicos de circulação do vírus da febre amarela: um urbano e outro silvestre. Objetivo: o estudo visa analisar as características epidemiológicas da febre amarela no Brasil no período de 2000 a 2012. Métodos: estudo epidemiológico, ecológico, descritivo do tipo série temporal, utilizando informações dos bancos de dados do Ministério da Saúde. Resultados: Foram confirmados 326 casos de febre amarela no país, neste período, com um total de 156 óbitos e uma taxa de letalidade de 47,8%. Foi observado que o grupo de adultos masculinos jovens foi o mais acometido. A doença incidiu principalmente nos meses de dezembro a abril. Nas epizootias, foi identificado um total de 2.856 primatas notificados com suspeita de febre amarela, sendo que 31,1% foram positivos. Conclusão: No período estudado, foi identificado um grande número de casos de febre amarela silvestre em regiões densamente povoadas, como a região Sudeste e Centro Oeste, fato que preocupa as autoridades de saúde pública por se tratar de áreas povoadas e com alta densidade do vetor doméstico, o Aedes aegypti. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: Yellow fever is a febrile, non-contagious acute infectious disease of short duration and varying severity is transmitted to humans through the bite of an infected mosquito. One urban and one wild: two basic cycles of movement of the yellow fever virus are recognized. Objective: This study aims to analyze the epidemiological characteristics of yellow fever in Brazil in the period 2000-2012. Methods: epidemiological, descriptive study of the time series type, using information from the databases of the Ministry of Health Results: There were 326 cases of yellow fever reported in the country during this period, 156 deaths and a case fatality rate of 47.8%. The group of young male adults was the most affected. The incidence of cases were mainly in the months of December to April. In epidemics, a total of 2,856 primates reported with suspected yellow fever has been identified, 31.1% of which were positive. Conclusion: During the study period, a large number of cases of yellow fever in densely populated regions such as the Southeast and Midwest region, a fact that worries public health officials because they are populated areas where high density of the urban vector Aedes aegypti was identified.

Dissertação (mestrado)—Universidade Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2012. / Submitted by Gabriela Botelho (gabrielabotelho@bce.unb.br) on 2012-07-11T16:44:56Z No. of bitstreams: 1 2012_SilvanaGomesLeal.pdf: 1188381 bytes, checksum: 03784212fbdb0ccd6638d0b2bc9fc12a (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-07-13T11:59:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_SilvanaGomesLeal.pdf: 1188381 bytes, checksum: 03784212fbdb0ccd6638d0b2bc9fc12a (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-13T11:59:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_SilvanaGomesLeal.pdf: 1188381 bytes, checksum: 03784212fbdb0ccd6638d0b2bc9fc12a (MD5) / Os Primatas Não Humanos (PNH) atuam como importantes hospedeiros do vírus da Febre Amarela (FA) e suas mortes sugerem a possível circulação do vírus amarílico. Foi realizado um estudo descritivo, retrospectivo, no qual foram utilizadas informações de casos de FA em PNH com registros na vigilância eco-epidemiológica do Ministério da Saúde (MS), provenientes de epizootias ocorridas nos anos de 2002, 2007, 2008 e 2009. Dos 403 primatas positivos do gênero Alouatta foram selecionados 25% (n= 99), os quais possuíam descrições dos achados anatomopatológicos dos seus órgãos e tecidos e diagnóstico confirmado pela técnica de imuno-histoquímica de fragmentos hepáticos. Dos órgãos analisados, fígado, rim, baço, coração, pulmão e cérebro, os principais achados histopatológicos foram encontrados no fígado, afetando gravemente os hepatócitos. As principais lesões observadas neste órgão foram apoptose de hepatócitos, esteatose, necrose focal e hemorragia. A análise de correlação demonstrou que a apoptose foi frequentemente associada à esteatose em 45%, necrose focal em 40% e hemorragia em 37% dos casos. O coração, pulmão e o cérebro não apresentaram alterações histopatológicas relevantes. O rim e o baço mostraram certas alterações significativas. Os resultados indicam que o fígado é o órgão mais importante para o diagnóstico da FA em PNH. No Brasil o gênero Alouatta compreendeu o maior número de notificações positivas para FA. A doença nos primatas apresenta ainda aspectos pouco conhecidos, porém relevantes para a prevenção da enfermidade. _________________________________________________________________________ ABSTRACT / Non-human primates (NHP) act as important hosts of FMD virus and their deaths suggest the possible circulation of yellow fever virus. We conducted a descriptive study in which they used information from cases of AF in PNH with records in the eco-epidemiological surveillance of the Ministry of Health (MOH), from epizootic occurred in 2002, 2007, 2008 and 2009. 403 primates of the genus Alouatta were selected 25% (n = 99), which had descriptions of the pathological findings of its organs and tissues, and diagnosed confirmed by the technique of immunohistochemistry of liver fragments. Of the organs examined, liver, kidney, spleen, heart, lungs and brain, the main histopathological findings were found in liver, seriously affecting the hepatocytes. The main lesions observed in this organ were apoptosis of hepatocytes, steatosis, focal necrosis and hemorrhage. In the correlation analysis showed that apoptosis was often associated with steatosis in 45%, 40% focal necrosis and hemorrhage in 37% of cases. The heart and lungs showed no significant pathological changes. The results indicate that the liver is the most important organ for the diagnosis of AF in PNH. In Brazil, the genus Alouatta comprised the largest number of positive notifications for FA. The disease in primates also presents little-known aspects, but relevant to the prevention of disease.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-10-03T13:43:17Z No. of bitstreams: 1 2012_VanessaLucenaWolff.pdf: 110742309 bytes, checksum: c31552254a962dac1a736a1b6d5f810c (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-10-03T15:19:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_VanessaLucenaWolff.pdf: 110742309 bytes, checksum: c31552254a962dac1a736a1b6d5f810c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-03T15:19:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_VanessaLucenaWolff.pdf: 110742309 bytes, checksum: c31552254a962dac1a736a1b6d5f810c (MD5) / Endêmica em regiões tropicais da África e das Américas e potencialmente epidêmica, a febre amarela (FA) é uma doença infecciosa aguda, produzida por um arbovírus. É uma zoonose de importante morbidade e letalidade nos locais de ocorrência. Não há tratamento específico e a medida preventiva mais eficaz é a vacinação. Mas a cobertura vacinal, por mais expressiva que seja, não tem impedido o aparecimento de novos surtos. Os objetivos desse trabalho foram avaliar o nível atual de proteção imunológica contra a FA de uma população exposta na área rural do município de Luziânia - GO, por meio de inquérito sorológico, comparar os resultados obtidos com aqueles de um inquérito realizado em 1972/73, e avaliar o impacto das variáveis de dados pessoais, de residência, ocupação, antecedentes epidemiológicos e patológicos, na imunidade contra o vírus da FA (VFA). A pesquisa de campo em 1972/73 abrangeu 19 municípios aglomerados em torno do Distrito Federal. Foram estudadas 812 pessoas em cuja família acontecera algum caso suspeito ou confirmado da doença. Todos os participantes do estudo responderam um questionário e amostras de sangue foram coletadas dos indivíduos não vacinados para a realização de provas sorológicas. O estudo em 2010 foi realizado na área rural do município de Luziânia (Goiás), e foram entrevistados 383 moradores de localidades rurais. Os voluntários responderam um questionário e uma amostra de sangue foi coletada para exame de detecção de anticorpos antiamarílicos por meio de Teste de Neutralização por Redução em Placas (PRNT) e consequente avaliação da proteção imunológica. O estudo de 1972/73 permitiu concluir que grande parte da população encontrava-se sem defesa imune contra a arbovirose e exposta ao risco de infecção. Da população estudada em 2010, 97,7% dos indivíduos estudados apresentaram anticorpos neutralizantes contra FA em níveis considerados protetores. Comparando com os resultados obtidos com aqueles do inquérito realizado na epidemia de 1972/73, verifica-se que houve grande progresso na cobertura vacinal contra FA. Foi observada uma associação entre a idade dos entrevistados e a imunidade contra o VFA, quanto maior a idade do indivíduo maior foi a titulação de anticorpos neutralizantes contra FA encontrada, provavelmente decorrente de múltiplas exposições e/ou vacinações. Não se encontrou uma associação entre a titulação de anticorpos e variáveis relativas a outros dados pessoais, residência, ocupação, antecedentes epidemiológicos e clínicos. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Endemic in tropical regions of Africa and the Americas and potentially epidemic, yellow fever (YF) is an acute infectious disease produced by an arbovirus. It is a zoonotic disease of significant morbidity and mortality in places of occurrence. There is no specific treatment, and the most effective preventive measure is vaccination. But the coverage, however expressive it may be, has not prevented the emergence of new outbreaks. The objectives of this study were to evaluate the current level of immune protection against YF in a population exposed in the rural municipality of Luziânia - GO through serological screening, compare the results with those of a survey conducted in 1972/73, and assess the impact of personal variables, residence, occupation, history of epidemiological and pathological, on the immunity against the YF virus (YFV). The field survey covered 19 municipalities in 1972/73 clustered around the Federal District, were studied 812 individuals in whose family happened any suspected or confirmed case of the disease. All study participants answered a questionnaire and blood samples were collected from non-vaccinated individuals to perform serologic tests. The 2010 study was conducted in the rural municipality of Luziânia (Goiás), and interviewed 383 residents of rural areas. The volunteers answered a questionnaire and a blood sample was collected to test for the detection of anti-yellow fever antibodies by plaque reduction neutralization test (PRNT) and subsequent evaluation of immune protection. The 1972/73 study concluded that great part of the population was without immune defense against the arbovirus disease and exposed to the risk of infection. Of the population studied in 2010, 97.7% of the subjects had neutralizing antibodies against YF in levels considered protective. Comparing the results obtained with those of the survey conducted in 1972/73 epidemic, it appears that there was great progress in vaccination coverage against YF. An association was observed between age of surveyed and immunity against the YFV, the older the individual the greater was the titration of neutralizing antibodies against YF found, probably due to multiple exposures and / or vaccinations. We did not find an association between antibody titer and those related to other personal data, residence, occupation, clinical and epidemiological history.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2011. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-10-28T20:13:03Z No. of bitstreams: 1 2011_PriscilaFernandaCremerFrancisco.pdf: 886835 bytes, checksum: 4647699cae064b8d3cc7c115bcfe27a0 (MD5) / Approved for entry into archive by Camila Mendes(camila@bce.unb.br) on 2011-10-31T19:40:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_PriscilaFernandaCremerFrancisco.pdf: 886835 bytes, checksum: 4647699cae064b8d3cc7c115bcfe27a0 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-31T19:40:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_PriscilaFernandaCremerFrancisco.pdf: 886835 bytes, checksum: 4647699cae064b8d3cc7c115bcfe27a0 (MD5) / O Mato Grosso do Sul é reconhecido como estado livre da febre aftosa com vacinação. A manutenção e credibilidade desta condição sanitária dependem da existência de um sistema de vigilância eficiente, no qual se inclui a notificação regular de suspeitas de enfermidades vesiculares. No entanto, o número de notificações é muito baixo no Estado tornando difícil a avaliação da sensibilidade do sistema de vigilância. O presente trabalho teve como objetivo identificar fatores que determinam a qualidade e quantidade de notificações de doenças vesiculares no Mato Grosso do Sul, sobretudo aqueles relacionados à percepção dos atores sociais participantes do processo. Inicialmente, realizaram-se 19 entrevistas exploratórias, com perguntas abertas, dirigidas a funcionários de frigoríficos e do IAGRO, a funcionários de lojas veterinárias, a propriedades rurais, a assentamentos e a veterinários particulares, as quais foram submetidas à análise lexical pelo software Alceste. Os resultados obtidos fundamentaram a elaboração de um questionário que serviu de base a um inquérito por amostragem envolvendo os municípios de Rio Verde de Mato Grosso, Três Lagoas, Dourados, Eldorado e Ponta Porã. A análise lexical revelou que os entrevistados conhecem os sinais clínicos da doença, mas tendem a procurar terceiros antes de notificar algum evento suspeito. A maioria compreende também a rápida difusão e impacto econômico da febre aftosa. Os pecuaristas reconhecem competência ao serviço veterinário oficial, mas julgam que faltam meios de ação à defesa sanitária do Estado. Os resultados do inquérito comprovam que o conhecimento sobre a doença está associado ao grau de escolaridade. A falta de conhecimento sobre diagnósticos diferenciais contribui para que a frequência de notificação de suspeita seja baixa. Ficou evidente o papel chave que o veterinário particular pode ter em uma notificação de suspeita, já que os pecuaristas e seus funcionários tendem a procurá-los antes de chamar o serviço veterinário oficial. Os produtores rurais entendem que a vigilância de febre aftosa é papel das autoridades públicas, não reconhecendo a sua própria importância como sensor do sistema. Em conclusão, o Sistema de Vigilância da Febre Aftosa deve aumentar a frequência de notificações de suspeitas de doenças vesiculares, melhorando a conscientização e participação de produtores, trabalhadores rurais e veterinários quanto à importância de manter níveis altos de alerta, aprimorando a compreensão do processo de notificação e os registros das ações tomadas. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Mato Grosso do Sul state is recognized as free of foot-and-mouth disease (FMD) with vaccination. The maintenance of the health status and credibility depends upon the existence of an efficient surveillance system, which includes the regular reporting of suspected cases of vesicular diseases. However, the number of notifications in the state is very low making it difficult to assess the sensitivity of the surveillance system. This study aimed at identifying factors that influence the quality and quantity of reports of vesicular diseases in Mato Grosso do Sul, especially those related to the perception of social actors participating in the process. Initially, there were 19 interviews with open questions, targeted at employees of slaughterhouses, veterinary administration (IAGRO), staff of veterinary retail shops, farmers, settlements and private veterinarians. The interviews were transcribed and processed through lexical analysis, using the software Alceste. These results guided the development of a questionnaire that was the basis of a sample survey involving the counties of Rio Verde de Mato Grosso, Três Lagoas, Dourados, Ponta Porã and Eldorado. The lexical analysis revealed that the respondents know the clinical signs of the disease, but tend to look for third parties before notifying any suspicious event to the veterinary administration. Most of them understand the rapid spread and economic impact of FMD. Farmers recognize the competence of the veterinary service, but they believe that the veterinary administration has insufficient means of action. The survey results showed that knowledge about the disease increases with education level. The lack of knowledge about differential diagnosis contributes to the low frequency of reporting. These results confirm the key role that the private veterinarian can have in a reporting a suspect case, because the farmers and their employees tend to look for the professionals before notifying the veterinary service. Farmers do not fully recognize their important role as sensors of the surveillance system, as they tend to perceive it has a public task. In conclusion, the surveillance system of FMD should increase the frequency of reports of suspected vesicular diseases by improving the awareness of farmers, farm workers and veterinarians as to the importance of maintaining high levels of alert, improving the understanding of the process of reporting and the recording of actions undertaken.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2011. / Submitted by Patrícia Nunes da Silva (patricia@bce.unb.br) on 2012-01-24T20:24:06Z No. of bitstreams: 2 Anexo da tese - Artigo da Virology Journal Barros el al, 2011.pdf: 1279405 bytes, checksum: d00ff36751df03f3d0c452000e11b750 (MD5) 2011_MariaCreuzaEspiritoSantoBarros.pdf: 3206836 bytes, checksum: a8c09c95ebfad294fd2fd72131d1338f (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2012-01-24T20:24:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Anexo da tese - Artigo da Virology Journal Barros el al, 2011.pdf: 1279405 bytes, checksum: d00ff36751df03f3d0c452000e11b750 (MD5) 2011_MariaCreuzaEspiritoSantoBarros.pdf: 3206836 bytes, checksum: a8c09c95ebfad294fd2fd72131d1338f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-01-24T20:24:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Anexo da tese - Artigo da Virology Journal Barros el al, 2011.pdf: 1279405 bytes, checksum: d00ff36751df03f3d0c452000e11b750 (MD5) 2011_MariaCreuzaEspiritoSantoBarros.pdf: 3206836 bytes, checksum: a8c09c95ebfad294fd2fd72131d1338f (MD5) / Baculovírus são vírus de DNA originalmente utilizados apenas como controle biológico por serem capazes de eliminar insetos-praga associados à agricultura. Nas décadas de 70 e 80, seu potencial como ferramenta para expressão de proteínas heterólogas começou a ser explorado e hoje baculovírus podem ser aplicados para expressar antígenos de uso vacinal ou diagnóstico e até mesmo podem ser utilizados como vetores de terapia gênica e vacinas de DNA. Sua biossegurança é garantida pelo fato de não serem capazes de se replicar em células de mamífero, entretanto estudos comprovam que são capazes de entrar nessas células e produzir algumas proteínas virais. Apresentam ainda capacidades imunoestimulatórias e o estudo da interação baculovírus-saúde humana se torna cada vez mais importante com o aumento das várias aplicações biomédicas do uso desse vírus. Esta tese teve como objetivos, avaliar os efeitos imunológicos e a segurança dos baculovírus para vertebrados e o seu uso como vetores de expressão para produção de insumos biotecnológicos pela expressão das proteínas dos envelopes dos vírus da Febre Amarela e Vírus da Raiva. Para avaliar os efeitos imunológicos em vertebrados, foi realizada a inoculação intranasal de camundongos BALB/c com os dois fenótipos (ODVs contidos nos corpos de inclusão poliédrica, OB ou PIB e vírus extracelular, BV) dos baculovírus AcMNPV e AgMNPV. Foi demonstrado que os baculovirus são capazes de modular a resposta imune de mamíferos in vivo e in vitro. BVs ou PIBs de AgMNPV podem aumentar uma resposta de células Th1 e podem ser considerados mais úteis como vetores de vacinação ou adjuvantes imunológicos do que AcMNPV. AgMNPV na forma selvagem ou recombinante, pode ser também utilizado para alterar o tipo de resposta adaptativa desenvolvida. Com relação à expressão de proteínas heterólogas em células de inseto, os genes da proteína do envelope (E) do vírus da Febre Amarela (YFV) e da glicoproteína 16 G (RVGP) do vírus da Raiva foram introduzidos no genoma de um baculovírus e expressas em células de inseto. Tanto a proteína recombinante E (derivadas de YFV) como a proteína RVGP (derivada do vírus da Raiva) fusionada à proteína poliedrina de baculovírus foram antigenicamente similares às proteínas dos vírus selvagens, mostrando potencial para uso diagnóstico ou vacinal. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Baculoviruses are DNA viruses originally used only as a biological control because they are able to eliminate insect pests associated with agriculture. In the 70's and 80's, its potential as a tool for expression of heterologous proteins began to be explored and today it can be applied to express vaccine or diagnosis antigens and can even be used as vectors for gene therapy and DNA vaccines. Its biosafety is guaranteed by the fact of not being able to replicate in mammalian cells but studies show that they are able to enter this cells and produce some viral proteins. They also present immunostimulating capabilities and the study of human health-baculovirus interaction becomes increasingly important with the increasing number of biomedical applications of using this virus.. This thesis had as objectives, to evaluate the immunological effects and safety of baculoviruses for vertebrates and to use baculoviruses as expression vectors for the production of biotechnological products by the expression of envelope proteins from yellow fever virus and Rabies Virus., In order to evaluate the effects of baculovirus in the immune system of vertebrates, intranasal inoculation of BALB / c mice with both phenotypes (ODVs in polyhedral inclusion bodies, OB and extracellular virus, BV) of AgMNPV and AcMNPV baculovirus was performed. It was shown that baculovirus was able to modulate the immune response in mammals in vivo and in vitro. BVs or PIBs of AgMNPV can increase a Th1 response and may be more useful as vectors for vaccination or immune adjuvants than AcMNPV. Wild or recombinant AgMNPV can also be used to change the type of adaptive response developed. Regarding the heterologous expression of proteins in insect cells, the the envelope protein gene of Yellow Fever virus and the glycoprotein G gene of Rabies virus were introduced into the genome of a baculovirus e expressed in insect cells. Both the recombinant proteins (E derived from YFV and RVGP derived from Rabies virus and fusioned with 18 polyhedrin of baculovirus) were shown to be antigenically similar to the wild type proteins, showing potential to be used for vaccine development or diagnosis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-10-15T11:14:04Z No. of bitstreams: 1 2013_MarinaFirminodaSilva.pdf: 1446801 bytes, checksum: c661becf28c2d1ce39c45b876e5cdb3e (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-10-15T12:13:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MarinaFirminodaSilva.pdf: 1446801 bytes, checksum: c661becf28c2d1ce39c45b876e5cdb3e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-15T12:13:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MarinaFirminodaSilva.pdf: 1446801 bytes, checksum: c661becf28c2d1ce39c45b876e5cdb3e (MD5) / A febre é definida como o aumento da temperatura corporal que ocorre como parte da resposta de fase aguda desencadeada após a invasão de um organismo por agentes estranhos. O LPS (lipopolissacarídeo) é um potente indutor de febre, frequentemente utilizado em estudos sobre respostas inflamatórias e febris. Alguns trabalhos têm sugerido o envolvimento de vias de sinalização dependentes de proteína quinase A (PKA) e proteína quinase C (PKC) no desenvolvimento da febre. Neste estudo, investigamos o efeito de inibidores de PKA (H-89) e PKC (celeritrina) sobre a resposta febril induzida por LPS. Analisamos ainda alterações da expressão e atividade destas quinases em resposta aos diferentes tratamentos, 3 e 6 h após a injeção do estímulo pirogênico. Os resultados demonstraram que celeritrina (3 μg/rato) e H-89 (10 μg/rato) reduziram a resposta febril induzida pela injeção iv de LPS (5 μg/Kg) em 36 % e 33,1 %, respectivamente. A administração conjunta de celeritrina e H-89 também reduziu a resposta febril induzida por LPS; entretanto, o efeito inibitório verificado (31,2 %) não foi maior do que o observado após a administração isolada de cada droga. Após os experimentos farmacológicos, os animais foram eutanasiados e tiveram seus hipotálamos dissecados para as análises de expressão e atividade. A análise por western blotting não foi capaz de detectar alterações da expressão de PKCε 3 h após a injeção do LPS, tampouco de PKA nos dois tempos analisados. A expressão de PKCε 6 h após a injeção do estímulo pirogênico apresentou-se aumentada nos animais tratados com H-89, sugerindo que, na ausência da ativação de PKA, vias dependentes de PKCε sejam ativadas como mecanismo compensatório. A análise da atividade foi realizada por meio de kits comerciais de ELISA para medir a fosforilação de um substrato realizada por quinases. Não foram encontradas mudanças significativas nos padrões de atividade para nenhuma das proteínas testadas, o que pode ser devido à baixa especificidade do método, visto que o substrato utilizado no ensaio pode ser fosforilado por todas as isoformas de PKA e PKC. Os dados desse trabalho sugerem que vias de sinalização dependentes de PKA e PKC estejam envolvidas na resposta febril induzida por LPS, porém, métodos mais específicos para análise destas enzimas são necessários para elucidar os mecanismos moleculares envolvidos. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Fever is defined as the increase in body temperature that occurs as a component of the acute phase response triggered after invasion of pathogens in the body. Lipopolysaccharide (LPS) is a potent inducer of fever, often used in studies assessing the inflammatory and febrile responses. Some studies have suggested the involvement of protein kinase A (PKA) and protein kinase C (PKC)-dependent signaling pathways in the development of fever. We investigated the effect of PKA and PKC inhibitors, H-89 and celeritrin respectively, on the febrile response induced by LPS. We also analyzed changes in the expression and activity of these kinases in response to different treatments, 3 and 6 h after the pyrogenic stimulus injection. The results showed that celeritrin (3 mg/rat) and H-89 (10 mg/rat) reduced the febrile response induced by LPS (5 mg/kg, iv) in 36% and 33.1%, respectively. Co-administration of celeritrin and H-89 also reduced the LPS-induced febrile response; however, the inhibitory effect observed (31.2%) was not more effective than that observed after administration of each drug separately. After pharmacological experiments, animals were euthanized, and their hypothalami were dissected for kinases expression and activity analyses. Western blot analyses did not exhibit changes in neither PKCε expression 3 h after LPS injection nor PKA levels in both periods investigated. The expression of PKCε 6 h after injection of pyrogenic stimulus was increased in H-89 treated animals, suggesting that PKCε-dependent pathways are activated as a compensatory mechanism in the absence of PKA activation. The enzymatic activity analysis was performed using commercial ELISA kits specific for measuring substrate phosphorylation mediated by kinases. There were no significant changes in the patterns of activity for any tested enzymes, which may be due to low specificity of the method since the substrates employed in the assays can be phosphorylated by all PKC or PKA isoforms. Data from the present study suggest that PKA and PKC-dependent signaling pathways may be involved in the febrile response induced by LPS, although more specific methods are needed to analyze such enzimes in order to elucidate their involvement in fever molecular mechanisms.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-25T22:49:34Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Ana Paula Sant'Anna da Silva.pdf: 3948858 bytes, checksum: f95c03ddd789db1dd5754ebf65291abb (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-27T22:53:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Ana Paula Sant'Anna da Silva.pdf: 3948858 bytes, checksum: f95c03ddd789db1dd5754ebf65291abb (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-27T22:53:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Ana Paula Sant'Anna da Silva.pdf: 3948858 bytes, checksum: f95c03ddd789db1dd5754ebf65291abb (MD5) Previous issue date: 2016-06-30 / FACEPE / As plantas utilizadas na medicina tradicional são promissores recursos no tratamento de diversas doenças, cabe a pesquisa científica confirmar estas propriedades terapêuticas. Devido ao uso de Cleome spinosa Jacq. na medicina popular contra processos inflamatórios, febre e infecções microbiológicas, este estudo tem como objetivo avaliar a atividade antinociceptiva, antipirética, anti-inflamatória, antimicrobiana e antioxidante de extrato e substâncias isoladas de C. spinosa Jacq. A partir de folhas (L) e raízes (R) de C. spinosa diferentes extratos foram obtidos (ciclo-hexano: ChL e ChR; clorofórmio: CL e CR; acetato de etila: EAL e EAR, metanol: ML e MR). A atividade antibacteriana foi avaliada pelo método de microdiluição em caldo de forma a obter as concentrações inibitória mínima (MIC) e microbicida (MMC). A atividade anti-inflamatória foi avaliada através do teste de peritonite em camundongos. Atividade antioxidante através dos métodos de 2,2-Azino-Bis-(3-etilbenzotiazolina)-6-sulfónico (ABTS), ensaio de sequestro radical 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) e a capacidade antioxidante total por fosfomolibdênio. A atividade antipirética dos flavonoides isolados de C. spinosa Jacq foi investigada pela pirexia induzida por levedura em camundongos albinos e atividade analgésica em camundongos utilizando a contorção induzida por ácido acético. O exame de toxicidade aguda realizado com os extratos de plantas não revelou qualquer sinal de toxicidade. Na atividade antimicrobiana, os extratos CHL e CL foram os mais ativos, com MIC inferior a 1 mg/mL contra Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis e Micrococcus luteus e. É importante notar que estas concentrações são muito mais baixas do que a sua concentração de 50% de hemólise (HC50). Foram encontradas fortes correlações entre o teor de compostos fenólico (ρ = -0,89) e teor de flavonoides (ρ = -0,87), reforçando o possível papel destas classes de metabólitos sobre a atividade antimicrobiana de C. spinosa derivado extratos. Além disso, CL e CR mostrou a melhor atividade inibitória contra isolados clínicos de S. aureus, eles também mostraram ação sinérgica com oxacilina contra todas as cepas. Na atividade anti-inflamatórias dos extratos ML e MR, todas as concentrações testadaas causaram uma redução significativa no número de leucócitos em camundongos com peritonite. Os extratos ML e MR mostrou atividade antioxidante Pará nos três métodos testados, ABTS, DPPH e fosfomolibdênio. Os compostos quercetina 3-glicose, rhramnose e 5-Hidróxi-7,4 '-dimethoxyflavone isolado em doses de 10 e 20 mg / kg, mostraram uma redução significativa da febre e apresentaram atividade analgésica. O estudo mostrou-se promissor para o desenvolvimento com C. spinosa. / The plants used in folk medicine are promising resources in the treatment of several pathologies, combined with research confirming these therapeutic properties. Due to the use of Cleome spinosa Jacq. in folk medicine against inflammatory processes, fever and microbiological infections, this study aims to evaluate the antinociceptive activity, antipyretic, anti-inflammatory, antimicrobial and antioxidant extract and isolated substances of Cleome spinosa jacq. From leaves (L) and roots (R) of C. spinosa different extracts were obtained (cyclohexane: ChL and ChR; chloroform: CL and CR; ethyl acetate: EAL and EAR, methanol: ML and MR). Antibacterial activity was evaluated by the broth microdilution method to obtain the minimum inhibitory (MIC) and microbicidal (MMC). Anti-inflammatory activity was evaluated through peritonitis test in mice. Antioxidant Activity through the methods of 2,2-Azino-Bis-(3 Ethylbenzothiazoline)-6-Sulfonic Acid (ABTS), 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) Radical Scavenging Assay and Capacity Total Antioxidant by Phosphomolybdenum Assay. The antipyretic activity of flavonoids isolated from Cleome spinosa Jaqc. was investigated for its, on normal body temperature and yeast-induced pyrexia in albino rats and analgesic activity in mice using the acetic acid induced writhing. According The acute toxicity performed the plant extracts did not reveal any toxic signs. In the antimicrobial activity the ChL and CL extracts were the most actives, with MIC less than 1 mg/mL against S. aureus, Bacillus subtilis and Micrococcus luteus. It is important to note that these concentrations are much lower than their 50% hemolysis concentration (HC50) values. Strong correlations were found between the average MIC against S. aureus and their phenolic (ρ = -0.89) and flavonoid content (ρ = -0.87), reinforcing the possible role of these metabolite classes on the antimicrobial activity of C. spinosa derived extracts. Moreover, CL and CR showed the best inhibitory activity against S. aureus clinical isolates, they also showed synergistic action with oxacilin against all strains (at least at one combined proportion). In the activity antiinflamatory methanolic extracts of leaf and root at all concentrations tested caused a significant reduction in the number of leukocytes in mice with peritonitis. The ML and MR extracts showed antioxidant activity para the three methods tested, ABTS, DPPH and Fosfomolibidenium. The compounds Quercetin 3-glucose, rhramnose and 5-hidroxi-7,4 '-dimethoxyflavone isolated at doses of 10 and 20mg/kg, showed significant reduction in normal body temperature no dose-dependent manner and showed analgesic activity. The study showed promising. The study of the C. spinosa showed promising.

Orientador: Aricio Xavier Linhares / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:55:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soto_DoraAmparoEstrada_M.pdf: 3751679 bytes, checksum: df062ec568b3c51e5ce3b311e018e31e (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Hoje em dia são reconhecidas muitas espécies de riquétsias pertencentes ao Grupo da Febre Maculosa (GFM) e ao Grupo do Tifo (GT), mas os métodos atualmente disponíveis para a identificação de suas espécies têm limitações técnicas. Para detecção preliminar de riquétsias, a prova da hemolinfa é o método mais amplamente usado. A Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) tem sido usada para detectar a presença de riquétsias diretamente de amostras teciduais ou sangüíneas de indivíduos e de artrópodes infectados. No presente trabalho foi utilizada a análise pela PCR para detectar infecção riquétsial do GFM em carrapatos coletados em dois parques urbanos do Município de Campinas, SP e comparada com a prova da hemolinfa. Foram coletados adultos deAmblyomma cooperi em capivaras Hydrochaeris hydrochaeris no Lago do Café, analisados para possível infecção riquetsial pela prova da hemolinfa e posteriormente submetidos à análise pela PCR No Parque Hermógenes Leitão Filho e no Lago do Café foram coletadas, sobre vegetação, ninfas do gênero Amblyomma e adultos de A. cajennenese e A. cooperi, analisados pela PCR com quatro pares de iniciadores. Os resultados indicam a superioridade da PCR sob a prova da hemolinfa para detectar carrapatos infectados com riquétsias com maior sensibilidade, especificidade e facil execução, enquanto que a prova da hemolinfa produz falsos positivos e falsos negativos. Nenhuma amostra foi positiva para o GFM, o que poderia indicar problemas nos iniciadores utilizados e portanto a ocorrência de carrapatos infectados com riquétsias do GFM com PCR negativa para a região de 190 kDa. É necessário desenhar iniciadores a partir de carrapatos brasileiros naturalmente infectados e seqüenciar as amostras positivas, para um melhor entendimento da epidemiologia da Febre Maculosa no Município de Campinas. Palavras-chave: Amblyomma, Rickettsia, Febre Maculosa, PCR,Campinas / Abstract: Presently, several species of Spotted Fever Group (SFG) and Typhus Group rickettsiae are recognized, but the available methods to obtain a more specific identification present technical limitations. The hemolymph test is the method most widely used in preliminary detection of rickettsiae. The Polymerase Chain Reaction (PCR) procedure has been employed to detect rickettsiae direct1y from clinical specimens and infected arthropods. In the present work we apply the PCR method to detect SFG rickettsiae in ticks collected in two locations of the urban area in Campinas City, SP and we compare the results with those obtained via the hemolymph test. Adults of Amblyomma cooperi were collected from capybaras (Hydrochaeris hydrochaens) at "Lago do Café", and analyzed for possible infection with rickettsia using the hemolymph test. After that the collected ticks were processed and submitted to PCR analysis. Nymphs of Amblyomma sp. and adults of A. cajennenese and A. cooperi were collected from vegetation at "Lago do Café" and "Parque Hermógenes Leitão Filho". These nymphs and adults were analyzed using the PCR procedure with 4 primer pairs. The results indicated a higher sensitivity and specificity of the PCR method when compared to the hemolymph test to detect rickettsiae-infected ticks as well as being easier to perform. Moreover, the hemolymph test produces false-positives and false-negatives. Due to the fact that no positive sample was found or the Spotted Fever specific region, it is possible that ticks infected with SFG rickettsiae produced PCR negative for the region of 190 kDa. Therefore, it is necessary to develop primers from naturally infected Brazilian ticks and to sequence the DNA of the rickettsiae found in the positive samples. This is a pre-requisite for a better understanding of the epidemiology of the Brazilian Spotted Fever in Campinas. Key words: Amblyomma, Rickettsia, Spotted Fever, PCR, Campinas / Mestrado / Mestre em Parasitologia