Resumo não disponível

A fibrose cística (FC) é a doença autossômica recessiva mais comum em eurodescendentes, com uma incidência estimada em 1 caso em cada 2500 nascimentos. A fisiopatologia da FC reflete mutações no gene regulador da condutância transmembrânica da FC, denominado CFTR. A patologia dessa doença envolve o trato respiratório, o trato gastro-intestinal, o trato gênito-urinário e as glândulas sudoríparas. A morbidade e mortalidade ocorrem devido às infecções persistentes e recorrentes das vias aéreas. O diagnóstico é baseado na presença de características clínicas e evidência de disfunção no gene CFTR. Mais de 1500 mutações nesse gene já foram identificadas, o que torna o diagnóstico molecular bastante difícil. Porém, a mutação DF508 apresenta alta freqüência entre os eurodescendentes (66%). O objetivo deste trabalho foi implementar uma metodologia semiautomatizada para a detecção das mutações DF508, G542X, G551D, R553X e N1303K no gene CFTR utilizando PCR em tempo real através do sistema TaqMan® e aplicar a metodologia em uma população composta por pacientes que apresentam suspeita clínica de FC. A população foi composta por 190 pacientes e as freqüências alélicas encontradas foram as seguintes: 50,0% para a mutação DF508, 4,1% para a mutação G542X e 3,1% para a mutação N1303K. As mutações G551D e R553X não foram encontradas nessa amostra. Os genótipos encontrados foram: 14 DF508/DF508 (7,40%), 3 DF508/N1303K (1,60%), 2 DF508/G542X (1,05%), 1 G542X/G542X (0,50%), 27 DF508/? (14,20%), 2 N1303K/? (1,05%), enquanto 141 amostras (74,20%) não apresentaram as mutações estudadas. Dividindo a amostra em dois sub-grupos de acordo com a gravidade da suspeita clínica, no grupo com uma forte suspeita clínica, uma mutação foi identificada em 57,20% dos alelos (56/98) e os genótipos foram estabelecidos em 40,80% dos pacientes (20/49). Portanto, considerando os dois sub-grupos e suas respectivas freqüências alélicas, demonstramos claramente que uma forte suspeita clínica é essencial para aumentar a identificação de alelos mutantes. Concluindo, o PCR em tempo real proposto usando sondas de hibridização foi eficaz e simples de ser utilizado na rotina laboratorial para detectar mutações no gene CFTR. Além disso, esse sistema é potencialmente adequado para programas de triagem neonatal e outros programas de larga escala. / Cystic fibrosis (CF) is the most common autosomal recessive disease in euro-descendents, with an estimated incidence in 1 case in each 2,500 births. CF physiopathology reflects mutations in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, named CFTR. Pathology of this disease affects respiratory tract, gastro-intestinal tract, genital tract, and sweat glands. Mortality and morbidity occur due to recurrent and persistent airways infections. Diagnosis is based on presence of clinical symptoms and evidence of dysfunction in the CFTR gene. Up to date, more than 1,500 mutations were already identified in this gene. However, DF508 mutation shows high frequency among euro-descendents (66%). The aim of this work was to introduce a semi-automated methodology to detect DF508, G542X, G551D, R553X, and N1303K mutation in the CFTR gene using real time PCR through TaqMan® system, and to apply this methodology in a population composed by patients with a clinical suspicion of CF. Methodology was applied to 190 patients, and determined allelic frequencies were: 50.0% for DF508 mutation, 4.1% for G542X mutation, and 3.1% for N1303K mutation. G551D and R553X mutation were not detected in this sample population. Genotypes defined were: 14 DF508/DF508 (7.40%), 3 DF508/N1303K (1.60%), 2 DF508/G542X (1.05%), 1 G542X/G542X (0.50%), 27 DF508/? (14.20%), 2 N1303K/? (1.05%), while 141 samples (74.20%) did not present mutations studied. Dividing this population into two subsets according to the strength of clinical suspicion, within group with a strong clinical suspicion a mutation was identified in 57.20% of alleles (56/98), and genotypes were defined in 40.80% of patients (20/49). Therefore, considering both subsets and their allelic frequencies, we clearly demonstrate that a strong clinical suspicion is essential to increase the identification of mutant alleles. In summary, the proposed real time PCR using hybridization probes was efficient and simple to be applied in the laboratorial routine to detect mutations in the CFTR gene. In addition, this system is potentially adequate to neonatal screening and other large scale programs.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-08-13T18:45:22Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Jamille Souza Fernandes.pdf: 2233589 bytes, checksum: 8522e9d8827c7983ffa7b9a2501992f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-13T18:45:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Jamille Souza Fernandes.pdf: 2233589 bytes, checksum: 8522e9d8827c7983ffa7b9a2501992f0 (MD5) / Cerca de 5 a 10% dos indivíduos infectados pelo Schistosoma mansoni evoluem para a forma grave da doença, caracterizada por fibrose periportal. A patogênese da esquistossomose é predominantemente causada pela resposta imune do hospedeiro aos antígenos do ovo e estudos têm enfatizado o papel de monócitos na progressão da fibrose em modelos experimentais. O objetivo deste estudo foi caracterizar as subpopulações de monócitos e o seu grau de ativação em indivíduos com diferentes graus de fibrose periportal secundária à esquistossomose. Participaram do estudo quarenta indivíduos da área endêmica em esquistossomose Água Preta, Bahia, Brasil. Monócitos foram obtidos através de células mononucleares do sangue periférico e avaliados ex vivo ou na presença do antígeno solúvel do ovo (SEA). Os monócitos foram classificados em: clássicos, intermediários e não-clássicos. A expressão de moléculas co-estimulatórias, citocinas e receptores de citocinas foram avaliadas usando a técnica de citometria de fluxo. De um modo geral, a frequência dos monócitos clássicos foi maior em relação às demais subpopulações. A expressão de HLA-DR foi maior nos monócitos de indivíduos com fibrose moderada a grave comparando com os indivíduos sem fibrose ou com fibrose incipiente. Quanto a expressão do receptor α de IL-4 (IL-4Rα) e de IL-10 (IL-10R) foi maior nos monócitos de indivíduos sem fibrose e com fibrose moderada a grave. A expressão de IL-6, TNF-α e TGF-β foi maior nos monócitos de indivíduos com fibrose moderada a grave, enquanto que a expressão de IL-12 foi menor nos monócitos desses indivíduos. Este estudo mostrou que os monócitos dos indivíduos com fibrose periportal, independente da subpopulação, participam na imunopatogênese da doença, uma vez que expressam altos níveis de citocinas pró-inflamatórias e pró-fibróticas e baixos níveis de citocinas anti-fibróticas. / Salvador

Base teórica: A ascite é a complicação mais comum da cirrose, e seu surgimento representa sinal de mal prognóstico no curso da doença, sendo que 50% dos adultos cirróticos evoluem para o óbito em um período médio de 3,5 anos após seu primeiro episódio. Há poucos estudos envolvendo desfechos clínicos em crianças com cirrose por atresia biliar e ascite. Objetivos: Avaliar a sobrevida com o fígado nativo após o surgimento de ascite graus 2 e 3 em crianças com cirrose por atresia biliar e identificar possíveis fatores preditores associados a este desfecho. Métodos: De um total de 114 crianças diagnosticadas com atresia biliar na Unidade de Gastroenterologia Pediátrica do Hospital de Clínicas de Porto Alegre no período entre março de 2000 a novembro de 2013, 44 foram incluídas em uma coorte histórica após o surgimento de ascite graus 2 ou 3. O desfecho principal foi a perda do fígado nativo e o período de seguimento, 12 meses. As variáveis estudadas como possíveis fatores preditores foram: idade (0-1 ano e ≥1 ano), estado nutricional (sendo desnutrição definida pelo escore z de estatura para idade inferior a -2 DP), escore PELD (≤18 e >18), INR (<1.7 e ≥1.7), bilirrubinas totais (≤10 e >10mg/dL), albumina sérica (<2.8 e ≥2.8 g/dL) e sódio sérico (<130 e ≥ 130mEq/L). Resultados: A probabilidade cumulativa de sobrevida com o fígado nativo em 1 ano foi 15,8%. As variáveis associadas a risco aumentado de perda do fígado nativo em 1 ano foram: escore PELD, INR, bilirrubinas totais e sódio sérico. Após análise multivariada, estiveram independentemente associadas a este desfecho: INR (p=0,02; OR=2,8; 95%IC=1,2-6,8) e bilirrubinas totais (p=0,01; OR=2,8; 95%IC=1;2-6;6). Conclusões: A sobrevida com o fígado nativo em crianças com atresia biliar e ascite moderada ou grave foi extremamente baixa. Em nossa amostra, os fatores preditores independentes associados ao risco de perda do fígado nativo foram INR e bilirrubinas totais.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-10-17T03:25:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 347965.pdf: 4874952 bytes, checksum: ded3a194ffe1180d3ebc6c5d77349c99 (MD5) Previous issue date: 2017 / A Fibrose Cística (FC) é considerada a doença hereditária letal mais comum em populações de origem caucasiana. A doença se manifesta clinicamente com várias formas de gravidade, moduladas por diferentes genótipos e o meio ambiente. Aproximadamente 2.000 mutações já foram descritas, sendo que a frequência destas variam de população para população em função de diferenças étnicas e geográficas. Dentre as inúmeras mutações do gene CFTR, a F508del é tida como a mais frequente na população mundial (66%). Entretanto, no Brasil a frequência desta mutação é reduzida, aproximadamente 47%, e no Estado de Santa Catarina ainda é desconhecida. Neste sentido, a determinação da frequência e distribuição das mutações do gene CFTR no Estado de Santa Catarina é fundamental para poder implementar ou adaptar estratégias diagnósticas, de manejo e tratamento, das crianças e jovens catarinenses afetados pela doença. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi determinar o perfil mutacional do gene CFTR da população catarinense. Além disso, amostras de pacientes com diagnóstico clínico de FC foram utilizadas para padronizar e validar protocolos de reação em cadeia da polimerase (PCR) do tipo Allele Specific Oligonucleotide (ASO). Adicionalmente, seis pacientes que previamente realizaram rastreio molecular com painel de 36 mutações foram submetidos ao sequenciamento. Foram identificadas 14 mutações, responsáveis por 69% dos alelos de FC em Santa Catarina: F508del (51,33%), G542X (4,87%), R334W (2,21%), R1162X (2,21%), N1303K (2,21%), 3120+1G>A (2,21%), CFTR dele2,3 (21 kb) (0,88%), R553X (0,44%), 1717-1G>A (0,44%), 2183AA>G (0,44%), I507del (0,44%), R1066C (0,44%), W1282X (0,44%), Y1092X (0,44%). Seis mutações (F508del, G542X, R334W, R1162X, N1303K, 3120+1G>A) apresentaram frequência alélica superior a 1%, totalizando em conjunto 65,04% dos alelos caracterizados. Estas 6 mutações foram selecionadas para o rastreio molecular em 21 pacientes e representaram um excelente painel para o rastreio da FC em Santa Catarina, com um poder de detecção de 66,67%, aproximando-se ao poder de detecção de outras metodologias mais completas como painéis de mutações importados e sequenciamento gênico. A análise por painel de sequenciamento de 6 amostras de pacientes do presente estudo contribuiu para o diagnóstico definitivo da doença em 3 casos e possibilitou a identificação de um alelo mutado em um paciente. Portanto, além de ser uma técnica laboriosa e com elevado custo por análise, é inapropriada para detectar mutações raras, pois as mutações de FC não são igualmente distribuídas entre as diferentes populações. Desta forma, os resultados obtidos com a presente pesquisa, além de possibilitarem a determinação do perfil mutacional do gene CFTR na população catarinense, também foram de extrema importância para a implementação de uma nova estratégia de rastreio molecular da FC em Santa Catarina, com eficiência diagnóstica e rapidez. Tal abordagem permitirá uma contribuição diagnóstica ao teste do suor e possibilitará a criação de uma diretriz que auxilie no manejo ambulatorial e tratamento dos acometidos pela doença.<br> / Abstract : The Cystic fibrosis (CF) is considered the most common inherited lethal disease at the Caucasian population. There are various forms of severity of CF modulated by different genotypes and the environment. Approximately 2,000 mutations have already been described, the frequency of which varies from population to population due to ethnic and geographical differences. Among the many mutations of the CFTR gene, F508del is considered the most frequent in the world population (66%). However, in Brazil the frequency of this mutation is reduced, approximately 47%, and in the State of Santa Catarina it is still unknown. In this context, the determination of the frequency and distribution of CFTR gene mutations in the State of Santa Catarina is fundamental to be able to implement or adapt diagnostic, management and treatment strategies of Santa Catarina children and young people affected by the disease. Thus, the objective of the present study was to determine the mutational profile of the CFTR gene of the population of Santa Catarina. In addition, samples of patients with clinical diagnosis of CF were used to standardize and validate Allele Specific Oligonucleotide (ASO) polymerase chain reaction (PCR) protocols. In addition, 6 patients who previously performed molecular screening with a panel of 36 mutations were submitted to sequencing. Fourteen mutations, responsible for 69% of CF alleles in Santa Catarina, were identified: F508del (51.33%), G542X (4.87%), R334W (2.21%), R1162X (2.21%), N1303K (2.21%), 3120 + 1G> A (2.21%), CFTR dele2.3 (21 kb) (0.88%), R553X (0.44%), 1717-1G> 44%), 2183AA> G (0.44%), I507del (0.44%), R1066C (0.44%), W1282X (0.44%), Y1092X (0.44%). Six mutations (F508del, G542X, R334W, R1162X, N1303K, 3120 + 1G> A) presented allele frequencies higher than 1%, totaling 65.04% of the alleles. These 6 mutations were selected for molecular screening in 21 patients and represented an excellent panel for the screening of CF in Santa Catarina, with a detection power of 66.67%, approaching the power of detection of other more complete methodologies such as Panels of imported mutations and gene sequencing. Sequencing panel analysis of 6 patient samples from the present study contributed to the definitive diagnosis of the disease in 3 cases and allowed the identification of a mutated allele in a patient. Therefore, in addition to being a laborious technique and with a high cost per analysis, it is inappropriate to detect rare mutations, since the mutations of CF are not equally distributed among the different populations. In this way, the results obtained with the present project, besides making possible the determination of the mutational profile of the CFTR gene in the population of Santa Catarina, were also extremely important for the implementation of a new strategy for the molecular tracing of CF in Santa Catarina, with diagnostic efficiency and speed. Such an approach will allow a diagnostic contribution to the sweat test and will enable the creation of a guideline that assists in the outpatient management and treatment of those affected by the disease.

A fibrose cística (FC) é a doença autossômica recessiva mais comum em eurodescendentes, com uma incidência estimada em 1 caso em cada 2500 nascimentos. A fisiopatologia da FC reflete mutações no gene regulador da condutância transmembrânica da FC, denominado CFTR. A patologia dessa doença envolve o trato respiratório, o trato gastro-intestinal, o trato gênito-urinário e as glândulas sudoríparas. A morbidade e mortalidade ocorrem devido às infecções persistentes e recorrentes das vias aéreas. O diagnóstico é baseado na presença de características clínicas e evidência de disfunção no gene CFTR. Mais de 1500 mutações nesse gene já foram identificadas, o que torna o diagnóstico molecular bastante difícil. Porém, a mutação DF508 apresenta alta freqüência entre os eurodescendentes (66%). O objetivo deste trabalho foi implementar uma metodologia semiautomatizada para a detecção das mutações DF508, G542X, G551D, R553X e N1303K no gene CFTR utilizando PCR em tempo real através do sistema TaqMan® e aplicar a metodologia em uma população composta por pacientes que apresentam suspeita clínica de FC. A população foi composta por 190 pacientes e as freqüências alélicas encontradas foram as seguintes: 50,0% para a mutação DF508, 4,1% para a mutação G542X e 3,1% para a mutação N1303K. As mutações G551D e R553X não foram encontradas nessa amostra. Os genótipos encontrados foram: 14 DF508/DF508 (7,40%), 3 DF508/N1303K (1,60%), 2 DF508/G542X (1,05%), 1 G542X/G542X (0,50%), 27 DF508/? (14,20%), 2 N1303K/? (1,05%), enquanto 141 amostras (74,20%) não apresentaram as mutações estudadas. Dividindo a amostra em dois sub-grupos de acordo com a gravidade da suspeita clínica, no grupo com uma forte suspeita clínica, uma mutação foi identificada em 57,20% dos alelos (56/98) e os genótipos foram estabelecidos em 40,80% dos pacientes (20/49). Portanto, considerando os dois sub-grupos e suas respectivas freqüências alélicas, demonstramos claramente que uma forte suspeita clínica é essencial para aumentar a identificação de alelos mutantes. Concluindo, o PCR em tempo real proposto usando sondas de hibridização foi eficaz e simples de ser utilizado na rotina laboratorial para detectar mutações no gene CFTR. Além disso, esse sistema é potencialmente adequado para programas de triagem neonatal e outros programas de larga escala. / Cystic fibrosis (CF) is the most common autosomal recessive disease in euro-descendents, with an estimated incidence in 1 case in each 2,500 births. CF physiopathology reflects mutations in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, named CFTR. Pathology of this disease affects respiratory tract, gastro-intestinal tract, genital tract, and sweat glands. Mortality and morbidity occur due to recurrent and persistent airways infections. Diagnosis is based on presence of clinical symptoms and evidence of dysfunction in the CFTR gene. Up to date, more than 1,500 mutations were already identified in this gene. However, DF508 mutation shows high frequency among euro-descendents (66%). The aim of this work was to introduce a semi-automated methodology to detect DF508, G542X, G551D, R553X, and N1303K mutation in the CFTR gene using real time PCR through TaqMan® system, and to apply this methodology in a population composed by patients with a clinical suspicion of CF. Methodology was applied to 190 patients, and determined allelic frequencies were: 50.0% for DF508 mutation, 4.1% for G542X mutation, and 3.1% for N1303K mutation. G551D and R553X mutation were not detected in this sample population. Genotypes defined were: 14 DF508/DF508 (7.40%), 3 DF508/N1303K (1.60%), 2 DF508/G542X (1.05%), 1 G542X/G542X (0.50%), 27 DF508/? (14.20%), 2 N1303K/? (1.05%), while 141 samples (74.20%) did not present mutations studied. Dividing this population into two subsets according to the strength of clinical suspicion, within group with a strong clinical suspicion a mutation was identified in 57.20% of alleles (56/98), and genotypes were defined in 40.80% of patients (20/49). Therefore, considering both subsets and their allelic frequencies, we clearly demonstrate that a strong clinical suspicion is essential to increase the identification of mutant alleles. In summary, the proposed real time PCR using hybridization probes was efficient and simple to be applied in the laboratorial routine to detect mutations in the CFTR gene. In addition, this system is potentially adequate to neonatal screening and other large scale programs.

Objetivos: Avaliar a associação do estado nutricional com volume expiratório forçado no primeiro segundo (VEF1) em pacientes com Fibrose Cística. Avaliar níveis séricos de albumina, condição sócio-econômica e colonização bacteriana com o VEF1. Métodos: Estudo transversal prospectivo, realizado com 85 pacientes com Fibrose Cística de seis a dezoito anos. Os fatores em estudo foram estado nutricional, níveis séricos de albumina, condições sócio-econômicas e colonização bacteriana. O desfecho clínico avaliado foi VEF1. Resultados: O VEF1 foi associado significativamente com percentual Peso/Estatura, percentil de Índice de massa corpórea (IMC), albumina, colonização por Staphylococcus aureus meticilina resistente (MRSA), insuficiência pancreática e anos de escolaridade da mãe. A análise de regressão demonstrou que, controlado os demais fatores, apresentar o IMC menor que Percentil 10 está associado a uma queda do VEF1 de 25,58% e ter uma albumina menor ou igual a 4,1mg/dL equivale a uma diminuição de 18,6% no VEF1. Ser colonizado por MRSA equivale a uma redução de 14,4 % no VEF1. Colonização por Psedomonas aeruginosa, sexo e anos de estudo da mãe não foram estatisticamente significativos. Albumina de 4,25 mg/dL foi associada como preditora de VEF1 60% com uma sensibilidade de 76,9% e a especificidade de 72,2% e com uma acurácia de 85,7%. Conclusões: Os resultados desse estudo permitem concluir que IMC abaixo do percentil 10 é fator preditivo de redução de VEF1. Contudo, a relação causal entre estado nutricional e função pulmonar não está completamente elucidada.

Base teórica: A ascite é a complicação mais comum da cirrose, e seu surgimento representa sinal de mal prognóstico no curso da doença, sendo que 50% dos adultos cirróticos evoluem para o óbito em um período médio de 3,5 anos após seu primeiro episódio. Há poucos estudos envolvendo desfechos clínicos em crianças com cirrose por atresia biliar e ascite. Objetivos: Avaliar a sobrevida com o fígado nativo após o surgimento de ascite graus 2 e 3 em crianças com cirrose por atresia biliar e identificar possíveis fatores preditores associados a este desfecho. Métodos: De um total de 114 crianças diagnosticadas com atresia biliar na Unidade de Gastroenterologia Pediátrica do Hospital de Clínicas de Porto Alegre no período entre março de 2000 a novembro de 2013, 44 foram incluídas em uma coorte histórica após o surgimento de ascite graus 2 ou 3. O desfecho principal foi a perda do fígado nativo e o período de seguimento, 12 meses. As variáveis estudadas como possíveis fatores preditores foram: idade (0-1 ano e ≥1 ano), estado nutricional (sendo desnutrição definida pelo escore z de estatura para idade inferior a -2 DP), escore PELD (≤18 e >18), INR (<1.7 e ≥1.7), bilirrubinas totais (≤10 e >10mg/dL), albumina sérica (<2.8 e ≥2.8 g/dL) e sódio sérico (<130 e ≥ 130mEq/L). Resultados: A probabilidade cumulativa de sobrevida com o fígado nativo em 1 ano foi 15,8%. As variáveis associadas a risco aumentado de perda do fígado nativo em 1 ano foram: escore PELD, INR, bilirrubinas totais e sódio sérico. Após análise multivariada, estiveram independentemente associadas a este desfecho: INR (p=0,02; OR=2,8; 95%IC=1,2-6,8) e bilirrubinas totais (p=0,01; OR=2,8; 95%IC=1;2-6;6). Conclusões: A sobrevida com o fígado nativo em crianças com atresia biliar e ascite moderada ou grave foi extremamente baixa. Em nossa amostra, os fatores preditores independentes associados ao risco de perda do fígado nativo foram INR e bilirrubinas totais.

Resumo não disponível

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