Este trabalho tem por objetivo realizar estudos sobre as potenciais aplicações do compósito a base de grafite e borracha de silicone como material eletródico. O compósito foi aplicado na determinação de propranolol, uma droga antihipertensiva largamente utilizada no Brasil e rutina, um flavonóide com propriedades vasodilatadoras e antioxidantes. Os eletrodos foram preparados misturando-se proporções adequadas de pó de grafite e borracha de silicone, de maneira a obter um compósito com 70% de grafite (m/m). Dados de voltametria cíclica (CV) foram usados para estimar a região útil de trabalho para o eletrodo em diferentes eletrólitoes suporte e pH. Estudos usando CV foram utilizados para avaliar a resposta e o comportamento voltamétrico dos analitos propostos em relação a vários parâmetros. Para a quantificação foi utilizada voltametria de pulso diferencial (DPV), na qual foram obtidas curvas analíticas para definição de intervalos lineares de resposta e limites de detecção. Curvas analíticas também foram obtidas com eletrodo de carbono vítreo para comparação. Posteriormente, os procedimentos foram aplicados na determinação dos analitos em formulações farmacêuticas. Os resultados obtidos foram comparados com procedimentos padrão descritos na literatura. A rutina foi determinada no medicamento Novarrutiva e os resultados obtidos concordaram com o método de comparação com 95% de confiança. O propranolol foi determinado no medicamento Propranolol Ayerst? e os resultados concordaram com o método comparativo com 95% de confiança. Em todos os casos, com o eletrodo compósito foi obtido menor limite de detecção e maior região linear de resposta para os dois analitos, quando comparado ao eletrodo de carbono vítreo. / Studies regarding the applications of a graphite-silicone rubber composite as an electrode material have been performed and the results described in this work. The composite was used in the voltammetric determination of propranolol, an antihypertensive drug widely used in Brazil and rutin a flavonoid that presents both dilatation of blood vessels capabilities and antioxidative actions. The electrodes were prepared by using a suitable amount of graphite powder and silicone rubber in order to reach a 70% (graphite, w/w) composition. Cyclic voltammetric (CV) data were used in order to characterize the electrode material regarding useful potential window in different supporting electrolyte and pH. CV data were also used in order to evaluate the response of the composite electrode to the analytes. The quantitative measurements were performed with differential pulse voltammetry (DPV) with which analytical curves were obtained and used to estimate the detection limits and linear dynamic range. These data guided us towards the determination of the analytes in pharmaceutical formulations. The results were compared with those from standard methods with agreement in the 95% confidence level, according to the Student?s t-Test, in both cases. Lower limits of detection and larger linear dynamic ranges were observed for the composite when compared with those from the glassy carbon electrode under the same experimental conditions.

A confecção e avaliação do desempenho voltamétrico de eletrodos compósitos à base de resina epóxi comercial Araldite ® utilizada como fase aglutinante e pó de grafite como fase condutora, na confecção dos eletrodos compósitos foi realizada. A resina foi preparada seguindo instruções do fabricante e adicionada a uma quantidade de pó de grafite para obter eletrodos contendo 50, 60 e 70% de grafite (m/m). Tais compósitos foram caracterizados fisicamente quanto à reprodutibilidade da resposta voltamétrica, resistência ôhmica e área efetiva em função da composição grafite/Araldite ®, sendo 70% (grafite, m/m) a que ofereceu melhores resultados, em termos de repetibilidade de resposta e corrente de pico. O teor real de grafite foi determinado por termogravimetria. Os intervalos úteis de potenciais para uso dos eletrodos compósitos também foram avaliados em diferentes eletrólitos. Finalmente, os eletrodos compósitos foram avaliados na determinação de atenolol, uma droga antihipertensiva, e dopamina, um neurotransmissor central do grupo das catecolaminas. Em todos os casos, o eletrodo compósito foi mais sensível na determinação dos dois analitos, quando comparado ao eletrodo de carbono vítreo. A dopamina foi determinada por voltametria de pulso diferencial (DPV). O limite de detecção foi de 0,61 µmol L-1e a resposta linear foi observada no intervalo de 4,0 a 95 µmol L-1. Os resultados obtidos na determinação da dopamina em formulação farmacêutica concordaram com os resultados obtidos com o método comparativo cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), com 95% de confiança. O atenolol também foi determinado por DPV, com limite de detecção da ordem de 2,23 µmol L-1, com resposta linear entre 4,45 e 84,7 µmol L-1. A determinação de atenolol, em formulações farmacêuticas, apresentou resultados que concordam com o método comparativo HPLC, com 95% de confiança. O atenolol também foi determinado em amostras de águas naturais, com recuperações entre 92 e 115%. / The development and evaluation of the voltammetric behavior of composite electrodes prepared with graphite as a conducting phase and commercial epoxy resin Araldite ® as an insulating phase was performed. The resin was prepared according to instructions of the manufacturer and mixed with a suitable amount of graphite in order to prepare composites with 50, 60 and 70% of graphite (w/w). The composites were characterized in relation to their reproducibility of the cyclic voltammetric response, ohmic resistance, and repeatability of the effective area as a function of the Araldite ®/graphite ratio. The best repeatability of area as well as the higher peak currents was obtained with the 70% (graphite, w/w) composition using K3[Fe(CN)6] in KCl medium. The useful potential windows were also evaluated in different supporting electrolytes and pH ranges. Finally the composite electrodes were applied in the determination of the anti-hypertensive atenolol and the cathecolamine neurotransmitter dopamine. The composite electrodes were more sensitive to both analytes when compared to the glassy carbon. Dopamine was determined using differential pulse voltammetry (DPV) with linear dynamic range between 4.0 and 95 µmol L-1 and limit of detection 0.61 µmol L-1. The results agreed with those from high performance liquid chromatography (HPLC) within a 95% confidence interval. Atenolol was also determined by DPV with a 4.45 - 84.7 µmol L-1 linear range and 2.23 µmol L-1. The determination of atenolol in pharmaceutical formulations agreed with the HPLC method in a 95 % confidence interval. When applied to natural water samples spiked with the analyte, recoveries of 92 to 115% were found.

Os corticosteróides são substância largamente empregadas em dertatologia devido ao seu potente efeito anti-inflamatório na pela. Entretanto, associado a este efeito benéfico tem-se o risco da ocorrência de efeitos colaterais, decorrentes principalmente da absorção sistêmica dos corticosteróides pela via cutânea. A penetração transcutânea e retenção cutânea dos corticosteróides é influenciada pelo veículo no qual estes princípios ativos são incorporados. Assim sendo, os objetivos desta pesquisa foram investigar, in vitro, formulações que proporcionassem uma alta retenção cutânea dos corticosteróides na pele e também mínima penetração transcutânea. O estudo foi realizado com géis de Poloxamer 407 contendo diferentes concentrações dos promotores de absorção cutânea, uréia ou lecitina. Os parâmetros liberação, penetração transcutânea e retençâo cutânea dos acetatos de hidrocortisona e dexametasona, desonida e triamcinolona acetonida foram avaliados por metodologia in vitro, utilizando-se de célula de difusão e membranas. A quantificação dos corticosteróides nas diferentes fases do experimento foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência. Os esultados obtidos mostraram a influência do veículo nos parâAmetros avaliados. As formulações obedeceram cinética de 1ª. ordem para a liberação e penetração transcutânea. As preparações contendo lecitina promoveram uma maior retenção cutânea dos corticosteróides, sugerindo, assim, que géis de Poloxamer 407, associados com lecitina, formam veículos adequados para a incorporação de corticosteróides. / Corticoids are drugs often used in dermatology due to its anti-inflamatory effect in the skin. Meanwhile, together with this beneficial effect it can have side effects, due to the systemic absorption of the corticoids by cutaneous way. Transcutaneous penetration and cutaneous retention of the corticoids is influenciated by the vehicle in which this drogs are incorporated. In this way, the objetive of this research was to investigate, in vitro, formulations that would provide both, high cutaneous retention of the corticoids in the Skin and minimmn transcutaneous penetration. For this work was used Poloxamer 407 gels containing different concentrations of the absorptions enhancers, urea and lecithin. The release transcutaneous penetration and cutaneous retention of hydrocortisone and dexamethasone acetate, desonide and triamcinolone acetonide was evaluated by in vitro methodology using difiusion cells and membranes. The corticoids was analysed by HPLC. The results obtained showed the influence of the vehicle in the evaluated parameters. The corticoid relesse and transcutaneous penetration appeared to fit first order kinetic. The formulations containing lecithin promoved higher cutaneous retetion of the corticoids than the containing urea, sugesting, in this way, that Poloxamer 407 gels in the presence of lecithin are adequated preparations to the corticoids.

A exposição à radiação ultravioleta (RUV) pode levar a um desequilíbrio no balanço oxidante/antioxidante da pele causando prejuízos à sua integridade e levando a diversas alterações, entre as quais o envelhecimento precoce e o câncer de pele. Na tentativa de diminuir os efeitos biológicos mediados pelos radicais livres gerados pela RUV na pele, tem sido proposto a fotoquimioproteção com a utilização de antioxidantes tópicos. Dentre a gama de compostos disponíveis para serem empregados na fotoquimioproteção, a própolis, por sua pronunciada atividade antioxidante, entre suas inúmeras atividades biológicas, é uma matéria-prima com promissora ação tópica. Desta forma, extratos de própolis alcoólico e glicólico (EPA e EPG) foram caracterizados quanto à sua composição polifenólica e quanto à sua capacidade antioxidante frente a diversos radicais livres. Formulações adicionadas destes extratos foram desenvolvidas e submetidas a estudos de estabilidade física e funcional, estudos de liberação, permeação e retenção cutânea in vitro, bem como estudos preliminares de eficácia in vivo. Os resultados demonstraram que os extratos de própolis são capazes de seqüestrar eficientemente diversos radicais livres, principalmente radicais superóxido. Quando estes extratos foram adicionados em formulações de produtos para uso tópico, a atividade antioxidante foi mantida. Nos estudos prévios de estabilidade física foi observado que as formulações mais estáveis foram desenvolvidas com Hostacerin® SAF (menor conteúdo graxo) e Polawax® (maior conteúdo graxo). No entanto, somente a formulação desenvolvida com Polawax® apresentou estabilidade satisfatória por 1 ano quando armazenada à temperatura ambiente e a 40º.C 2º.C/70%UR 5%. Nos estudos de liberação, permeação e retenção cutânea foi observado a influência do conteúdo graxo na performance das formulações. A cinética de liberação das formulações tanto do ácido p-cumárico (utilizado como marcador), como dos compostos equivalentes ao extrato de própolis (EEP) demonstraram seguir o modelo de Higuchi. A formulação desenvolvida com Polawax® apresentou a melhor retenção cutânea, com retenção de 0,013 e 0,030 µL de EEP.cm-2 para as peles de camundongo e de porco, respectivamente. Em adição, esta formulação apresentou baixos níveis de permeação cutânea, sendo adequada para aplicação tópica fotoquimioprotetora. Nos estudos in vivo, esta formulação adicionada de EPA, foi capaz de diminuir o eritema, inibir o edema e aumentar a cicatrização de camundongos sem pêlo expostos à radiação UVB. Além disso, também foi observado a proteção da depleção da glutationa endógena (GSH). Os resultados preliminares de eficácia in vivo sugerem que formulações contendo o extrato de própolis apresentam boas perspectivas para serem utilizadas para prevenir e tratar os danos causados na pele pela radiação UV. / The ultraviolet radiation (UVR) exposition may lead to the skin oxidant/antioxidant imbalance injuring its integrity and leading to several disorders, such as ageing and skin cancer. In order to improve the biological effects caused by free radicals generated by UVR in skin, it has been suggested the photochemoprotection by using topical antioxidants. Among the available compounds to be employed in hotochemoprotection, propolis, due to its important antioxidant activity, among its innumerous biological activities, is a promising topical raw-material. Next, ethanolic and glycolic propolis extracts (EPE, GPE) were characterized in relation to their polyphenolic composition, and in relation to their antioxidant activity against several free-radicals. Formulations added with these extracts were developed and undergone to physical and functional stability studies, in vitro release and skin permeation and retention studies, as well as in vivo preliminary efficacy studies. The results showed that the propolis extracts are able to scavenge several free radicals efficiently, mainly superoxide radicals. When these extracts were added to formulations of topical products, their antioxidant activity were maintained. In the physical stability studies, it was observed that the most stable formulations were developed with Hostacerin® SAF (lower fat content) and Polawax® (higher fat content). However, only the formulation developed with Polawax® showed satisfactory stability for 1 year stored at room temperature and at 40º.C 2º.C/70%UR 5%UR. In the release, permeation and retention studies, it was observed the fat content influence in the formulation performance. The release profile of p-coumaric acid (used as marker compound) and the compounds equivalent to propolis extract (EPE) followed the Higuchi model. The formulation developed with Polawax® showed the best skin retention, retaining 0,013 and 0,030 L EPE.cm-2 in hairless mouse skin and in pig skin, respectively. In addition, this formulation presented low permeation, which is desired for photochemoprotective topical employment. In the in vivo studies, this formulation added with EPE was able to diminish erithema, inhibit oedema and increase cicatrisation in hairless mice exposed to UVB radiation. In addition, it was also observed the protection of the endogenous glutathione (GSH) depletion. The in vivo preliminary efficacy results suggest that formulations added with propolis extract present good perspectives to be employed to prevent and treat the injuries caused in skin by UV radiation.

A exposição à radiação ultravioleta (RUV) pode levar a um desequilíbrio no balanço oxidante/antioxidante da pele causando prejuízos à sua integridade e levando a diversas alterações, entre as quais o envelhecimento precoce e o câncer de pele. Na tentativa de diminuir os efeitos biológicos mediados pelos radicais livres gerados pela RUV na pele, tem sido proposto a fotoquimioproteção com a utilização de antioxidantes tópicos. Dentre a gama de compostos disponíveis para serem empregados na fotoquimioproteção, a própolis, por sua pronunciada atividade antioxidante, entre suas inúmeras atividades biológicas, é uma matéria-prima com promissora ação tópica. Desta forma, extratos de própolis alcoólico e glicólico (EPA e EPG) foram caracterizados quanto à sua composição polifenólica e quanto à sua capacidade antioxidante frente a diversos radicais livres. Formulações adicionadas destes extratos foram desenvolvidas e submetidas a estudos de estabilidade física e funcional, estudos de liberação, permeação e retenção cutânea in vitro, bem como estudos preliminares de eficácia in vivo. Os resultados demonstraram que os extratos de própolis são capazes de seqüestrar eficientemente diversos radicais livres, principalmente radicais superóxido. Quando estes extratos foram adicionados em formulações de produtos para uso tópico, a atividade antioxidante foi mantida. Nos estudos prévios de estabilidade física foi observado que as formulações mais estáveis foram desenvolvidas com Hostacerin® SAF (menor conteúdo graxo) e Polawax® (maior conteúdo graxo). No entanto, somente a formulação desenvolvida com Polawax® apresentou estabilidade satisfatória por 1 ano quando armazenada à temperatura ambiente e a 40º.C 2º.C/70%UR 5%. Nos estudos de liberação, permeação e retenção cutânea foi observado a influência do conteúdo graxo na performance das formulações. A cinética de liberação das formulações tanto do ácido p-cumárico (utilizado como marcador), como dos compostos equivalentes ao extrato de própolis (EEP) demonstraram seguir o modelo de Higuchi. A formulação desenvolvida com Polawax® apresentou a melhor retenção cutânea, com retenção de 0,013 e 0,030 µL de EEP.cm-2 para as peles de camundongo e de porco, respectivamente. Em adição, esta formulação apresentou baixos níveis de permeação cutânea, sendo adequada para aplicação tópica fotoquimioprotetora. Nos estudos in vivo, esta formulação adicionada de EPA, foi capaz de diminuir o eritema, inibir o edema e aumentar a cicatrização de camundongos sem pêlo expostos à radiação UVB. Além disso, também foi observado a proteção da depleção da glutationa endógena (GSH). Os resultados preliminares de eficácia in vivo sugerem que formulações contendo o extrato de própolis apresentam boas perspectivas para serem utilizadas para prevenir e tratar os danos causados na pele pela radiação UV. / The ultraviolet radiation (UVR) exposition may lead to the skin oxidant/antioxidant imbalance injuring its integrity and leading to several disorders, such as ageing and skin cancer. In order to improve the biological effects caused by free radicals generated by UVR in skin, it has been suggested the photochemoprotection by using topical antioxidants. Among the available compounds to be employed in hotochemoprotection, propolis, due to its important antioxidant activity, among its innumerous biological activities, is a promising topical raw-material. Next, ethanolic and glycolic propolis extracts (EPE, GPE) were characterized in relation to their polyphenolic composition, and in relation to their antioxidant activity against several free-radicals. Formulations added with these extracts were developed and undergone to physical and functional stability studies, in vitro release and skin permeation and retention studies, as well as in vivo preliminary efficacy studies. The results showed that the propolis extracts are able to scavenge several free radicals efficiently, mainly superoxide radicals. When these extracts were added to formulations of topical products, their antioxidant activity were maintained. In the physical stability studies, it was observed that the most stable formulations were developed with Hostacerin® SAF (lower fat content) and Polawax® (higher fat content). However, only the formulation developed with Polawax® showed satisfactory stability for 1 year stored at room temperature and at 40º.C 2º.C/70%UR 5%UR. In the release, permeation and retention studies, it was observed the fat content influence in the formulation performance. The release profile of p-coumaric acid (used as marker compound) and the compounds equivalent to propolis extract (EPE) followed the Higuchi model. The formulation developed with Polawax® showed the best skin retention, retaining 0,013 and 0,030 L EPE.cm-2 in hairless mouse skin and in pig skin, respectively. In addition, this formulation presented low permeation, which is desired for photochemoprotective topical employment. In the in vivo studies, this formulation added with EPE was able to diminish erithema, inhibit oedema and increase cicatrisation in hairless mice exposed to UVB radiation. In addition, it was also observed the protection of the endogenous glutathione (GSH) depletion. The in vivo preliminary efficacy results suggest that formulations added with propolis extract present good perspectives to be employed to prevent and treat the injuries caused in skin by UV radiation.

Os corticosteróides são substância largamente empregadas em dertatologia devido ao seu potente efeito anti-inflamatório na pela. Entretanto, associado a este efeito benéfico tem-se o risco da ocorrência de efeitos colaterais, decorrentes principalmente da absorção sistêmica dos corticosteróides pela via cutânea. A penetração transcutânea e retenção cutânea dos corticosteróides é influenciada pelo veículo no qual estes princípios ativos são incorporados. Assim sendo, os objetivos desta pesquisa foram investigar, in vitro, formulações que proporcionassem uma alta retenção cutânea dos corticosteróides na pele e também mínima penetração transcutânea. O estudo foi realizado com géis de Poloxamer 407 contendo diferentes concentrações dos promotores de absorção cutânea, uréia ou lecitina. Os parâmetros liberação, penetração transcutânea e retençâo cutânea dos acetatos de hidrocortisona e dexametasona, desonida e triamcinolona acetonida foram avaliados por metodologia in vitro, utilizando-se de célula de difusão e membranas. A quantificação dos corticosteróides nas diferentes fases do experimento foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência. Os esultados obtidos mostraram a influência do veículo nos parâAmetros avaliados. As formulações obedeceram cinética de 1ª. ordem para a liberação e penetração transcutânea. As preparações contendo lecitina promoveram uma maior retenção cutânea dos corticosteróides, sugerindo, assim, que géis de Poloxamer 407, associados com lecitina, formam veículos adequados para a incorporação de corticosteróides. / Corticoids are drugs often used in dermatology due to its anti-inflamatory effect in the skin. Meanwhile, together with this beneficial effect it can have side effects, due to the systemic absorption of the corticoids by cutaneous way. Transcutaneous penetration and cutaneous retention of the corticoids is influenciated by the vehicle in which this drogs are incorporated. In this way, the objetive of this research was to investigate, in vitro, formulations that would provide both, high cutaneous retention of the corticoids in the Skin and minimmn transcutaneous penetration. For this work was used Poloxamer 407 gels containing different concentrations of the absorptions enhancers, urea and lecithin. The release transcutaneous penetration and cutaneous retention of hydrocortisone and dexamethasone acetate, desonide and triamcinolone acetonide was evaluated by in vitro methodology using difiusion cells and membranes. The corticoids was analysed by HPLC. The results obtained showed the influence of the vehicle in the evaluated parameters. The corticoid relesse and transcutaneous penetration appeared to fit first order kinetic. The formulations containing lecithin promoved higher cutaneous retetion of the corticoids than the containing urea, sugesting, in this way, that Poloxamer 407 gels in the presence of lecithin are adequated preparations to the corticoids.

Tese de mestr.. Engenharia Mecânica. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 1998

Made available in DSpace on 2016-03-15T14:17:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 2.pdf: 2354876 bytes, checksum: b870b9f5322d8473f9ec787dd8eaf90b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Fármacos/Farmanguinhos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / As espécies do gênero Passiflora são ricas em flavonóides que apresentam atividade ansiolítica, dentre outras. P. incarnata L. é a espécie mais estudada tanto por sua composição química quanto por seus efeitos farmacológicos. Contudo, atividades biológicas semelhantes às de P. incarnata tem sido relatadas para espécies brasileiras deste gênero botânico, constituindo uma fonte alternativa para a formulação de fitoterápicos. Um estudo preliminar comparativo dos aspectos macroscópicos e microscópicos de quatro espécies nativas, P. pedata L., P. nitida Kunth e P. quadriglandulosa Rodschield, associado à morfologia da folha de P. edulis Sims descrita na Farmacopéia Brasileira, foi realizado para a avaliação de possíveis problemas na identificação da espécie de interesse, ou mesmo pela adulteração da droga vegetal proveniente de P. incarnata. Os resultados demonstraram grande diversidade morfológica entre P. pedata, P. nitida e P. quadriglandulosa, entretanto foi observada semelhança entre as folhas de P. edulis e P. incarnata, pois ambas apresentaram limbo trilobado. Não obstante, elas foram diferenciadas pela análise de suas principais características anatômicas. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma formulação fitoterápica contendo como ingrediente ativo extrato de P. incarnata e identificar o marcador da espécie, vitexina, segundo a legislação vigente. Amostras de extratos desta espécie, obtidas de fornecedores comerciais, foram analisadas por espectrofotometria e cromatografia a fim de identificar e quantificar o marcador. Concomitantemente, foram preparadas formulações farmacêuticas isentas de sacarose a partir destes extratos. As amostras de extratos e formulações foram processadas e analisadas por cromatografia em camada delgada. O cromatograma, após a revelação com reagente químico característico, apresentou manchas relacionadas à vitexina e outras bandas características de flavonóides. As análises obtidas por cromatografia líquida de alta e ultra eficiência (CLAE e CLUE) mostraram diferenças significativas no que tange a quantidade de amostra, sensibilidade, rapidez, delineamento dos sinais e dos respectivos espectros UV. Por meio da CLUE foi possível verificar a presença do principal marcador (vitexina, M-1 de 431 daltons) no produto contendo extratos de Passiflora e uma amostra padrão deste flavonóide. / Species of Passiflora are rich in flavonoids which have anxiolytic activity, among other activities. P. incarnata L. is the most studied species by its chemical composition and its pharmacological effects. However, biological activities similar to those described for P. incarnata have been reported to other Brazilian species of the same genus, providing an alternative source for the formulation of herbal medicines. A comparative preliminary study on macroscopic and microscopic aspects about four native species, P. pedata L., P. nitida Kunth and P. quadriglandulosa Rodschield, associated to the leaf morphology of P. edulis Sims described in the Brazilian Pharmacopoeia, was performed to evaluate possible difficulties in the identification of the species of interest, or even adulteration of the vegetal drug P. incarnata. Results showed important morphological differences among P. pedata, P. nitida and P. quadriglandulosa, however there was similarity in the trilobed lamina of P. incarnata and P. edulis leaves. On the other hand, both species can be distinguished by the analysis of its main anatomical characteristics. The aim of this work was to develop an herbal formulation containing extract of P. incarnata as active ingredient, and to identify the marker of the species, vitexin, according to actual law of Brazil. Sample extracts of P. incarnata obtained from commercial suppliers were analyzed in order to identify and quantify the marker. Concomitantly, pharmaceutical formulations free of sucrose were prepared with these extracts. Extracts and formulations were processed and analyzed by thin layer chromatography. The chromatogram, revealed by characteristic chemical reagent, showed bands of vitexin and other flavonoids. The high and ultra performance liquid chromatography (HPLC and ULPC) analysis presented significative differences about the sample amount, sensibility, quickness, peaks delineation and respective UV spectra. Using UPLC, it was possible to verify the presence of the main marker (vitexin, M-1 of 431 daltons) in the product obtained with the extracts of P. incarnata and vitexin standard.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-09-20Bitstream added on 2014-06-13T21:07:15Z : No. of bitstreams: 1 gotardo_ma_dr_araiq.pdf: 948133 bytes, checksum: 414edaf8ae833739041194beb4696ec5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho propõe métodos por espectroscopia de reflectância difusa utilizando spot test para determinação de furosemida, hidroclorotiazida, propranolol e atenolol em formulações farmacêuticas e também um método espectrofotométrico no visível para determinação de metildopa em formulações farmacêuticas. Os métodos reflectométricos foram baseados em reações em papel de filtro, utilizando p-dimetilaminocinamaldeído (PDAC) como reagente cromogênico para furosemida e hidroclorotiazida; 2,6- dicloroquinona-4-cloroimida (DCQ) para propranolol e p-cloranil para atenolol. Estas reações produziram compostos coloridos com máximo de AR (log 1/R) em 585 nm para furosemida e hidroclorotiazida; 500 nm para propranolol e 550 nm para atenolol. Planejamentos experimentais foram empregados no desenvolvimento de todos os métodos e, as condições otimizadas para as respectivas reações de spot test foram: 10 μL de solução de furosemida em acetona, 20 μL de HCl 6,3% (m/v) em metanol e 20 μL de PDAC 0,4% (m/v) em metanol, nesta ordem, com aquecimento a 80ºC por 5 minutos; 20 μL de solução de hidroclorotiazida em acetona, 20 μL de HCl 10% (m/v) em metanol e; 20 μL de PDAC 0,4% (m/v) em metanol, nesta ordem, com aquecimento a 80ºC por 8 minutos; 30 μL de solução de propranolol em etanol 35% (v/v) e 30 μL de solução de DCQ 70 mg/mL em acetona e; 20 μL de solução de atenolol em metanol e 20 μL de p-cloranil 8,00 × 10-2 mol L-1 em dioxano. As curvas analíticas foram lineares nas faixas de concentração de 7,56 × 10-3 – 6,05 × 10-2 mol L-1 (r=0,9987) para furosemida, 3,36 × 10-2 – 1,01 × 10-1 mol L-1 (r=0,9979) para hidroclorotiazida, 1,35 × 10-2 – 8,45 × 10-2 mol L-1 (r=0.9991) para propranolol e 1,13 × 10-2 – 7,88 × 10-2 mol L-1 (r=0,9992) para atenolol. O método espectrofotométrico para a determinação de metildopa em formulações... / This work proposes methods by diffuse reflectance spectroscopy using spot tests for the determination of furosemide, hydrochlorothiazide, propranolol and atenolol in pharmaceutical formulations and also a visible spectrophotometric method for the determination of methyldopa in pharmaceutical formulations. The reflectometric methods were based on spot test reactions on filter paper, using p-dimetylaminocinnamaldehyde (p-DAC) as chromogenic reagent for furosemide and hydrochlorothiazide, 2,6-dichloroquinone -4- chloroimide (DCQ) for propranolol and, p-chloranil for atenolol. These reactions produced colored compounds with maximum AR (log 1/R) at 585 nm for furosemida and hydrochlorothiazide; 500 nm for propranolol and 550 nm for atenolol. Experimental designs were employed in the development of all methods and, the conditions optimized for the respective spot test reactions were: 10 æL of furosemide solution in acetone, 20 æL of HCl 6.3% (w/v) in methanol and 20 æL of PDAC 0.4% (w/v) in methanol, in this order, with heating at 80ºC for 5 minutes; 20 æL of hydrochlorotiazide solution in acetone, 20 æL of HCl 10% (w/v) in methanol and 20 æL of p-DAC 0.4% (w/v) in methanol, in this order, with heating at 80ºC for 8 minutes; 30 æL of propranolol solution in ethanol 35% (v/v) and 30 æL of DCQ solution at 70 mg/mL in acetone and, 20 æL of atenolol solution in methanol and 20 æL of p-cloranil at 8.00 OE 10-2 mol L-1 in dioxane. The analytical curves were linear in the concentration ranges of 7.56 OE 10-3 - 6.05 OE 10-2 mol L-1 (r=0.9987) for furosemide, 3.36 OE 10-2 - 1.01 OE 10-1 mol L-1 (r=0.9979) for hydrochlorothiazide, 1.35 OE 10-2 - 8.45 OE 10-2 mol L-1 (r=0.9991) for propranolol and (r=0.9992) for atenolol. The spectrophotometric method for the determination of methyldopa in pharmaceutical formulations used p-chloranil as chromogenic reagent and H2O2 as accelerator of the reaction.

Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2018-07-31T14:49:12Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Gessyca Gonçalves Costa - 2018.pdf: 2214245 bytes, checksum: 42da8bfcc697c9aa1930ca246fe970c7 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-08-01T13:32:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Gessyca Gonçalves Costa - 2018.pdf: 2214245 bytes, checksum: 42da8bfcc697c9aa1930ca246fe970c7 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-01T13:32:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Gessyca Gonçalves Costa - 2018.pdf: 2214245 bytes, checksum: 42da8bfcc697c9aa1930ca246fe970c7 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-03-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Introduction: The dissemination of transgenic crops resistant to glyphosate led to a considerable increase in the application of formulations based on this herbicide in Brazilian crops. An alternative to control populations of glyphosate tolerant weeds is its application associated with another herbicide, imazethapyr, which belongs to the group of imidazolinones. Considering that less than 0.1% of herbicides applied to crops reach their specific targets, it is known that large quantities of these compounds can be found in different environmental compartments, including water resources. Objective: Thus, the objective of this work was to evaluate the effects induced by the commercial formulations Glifosato Atanor (ATN) and Imazetapir (IMZT) isolated and associated (M1, M2 and M3) on non-target organisms through acute toxicity tests with Cucumis sativus, microcrustacean Artemia salina and the embryo- larval stages of zebrafish, including cytotoxicity analysis. Methods: For this purpose, the test with A. salina (Meyer et al., 1982 and OECD 202, 2004), embryo-larval stage of zebrafish (OECD 236, 2013), cytotoxicity assays (Hoechst 33342, Mitotracker red and acridine orange). Results: For the germination of C. sativus, the ATN and IMZT formulations (EC50> 1000 mg / L) and mixtures of ATN + IMZT were not phytotoxic. For the root growth, the IMZT (EC50 = 0.37 mg / L) was more phytotoxic than the ATN (EC50 = 1.97 mg / L), and the ATN + IMZT mixtures had a growth rate of 37.9; 24.7 and 17.2%, respectively. Only ATN induced significant acute toxicity to A. salina (LC50-48h = 9.62 mg/L) and the mixtures did not induce significant effects on the lethality (<20%) of this microcrustacean. For toxicity testing on zebrafish embryos, ATN and IMZT formulations induced similar lethality, with LC50 of 76.50 mg/L and 71.60 mg/L respectively and ATN still caused malformations such as delayed absorption of the yolk sac, cardiac edema and tail deformities (EC50-72h> 55 mg/L). Both formulations inhibited swim bladder inflation with EC50-120h of 26.94 mg/L (ATN) and 53.87 mg/L (IMZT). Both the individual ATN and IMZT formulations as well as the ATN + IMZT mixtures showed a reduction in the percentage of fluorescence in Hoechst stained cells, suggesting the loss of DNA. ATN and IMZT also reduced the mitochondrial potential of larvae exposed to 5 and 50 mg/L, as well as acridine orange stained cells in head, trunk and tail regions at the lowest concentrations. Mixtures of ATN + IMZT did not induce significant lethal and sublethal effects but altered DNA content and mitochondrial potential in zebrafish cells. Conclusions: Therefore, ATN and IMZT formulations and mixtures of ATN + IMZT (M2 and M3) were phytotoxic for C. sativus root growth. ATN was more toxic than IMZT to A. salina, and only M3 was toxic to this species. Although the ATN and IMZT formulations were embryotoxic to zebrafish, the ATN + IMZT mixtures did not induce acute toxicity. At the cellular level, ATN and IMZT at low concentrations were cytotoxic with effects on the nucleus and mitochondria and still accumulated apoptotic cells in some regions of the body of zebrafish larvae. / Introdução: A disseminação de culturas de transgênicos resistentes ao glifosato levou a um aumento considerável da aplicação de formulações à base desse herbicida em lavouras brasileiras. Uma alternativa para controlar as populações de ervas daninhas tolerantes ao glifosato é a sua aplicação associada a outro herbicida, o imazetapir, que pertencente ao grupo das imidazolinonas. Considerando que, menos de 0,1% dos herbicidas aplicados às culturas atingem os seus alvos específicos, sabe-se que grandes quantidades desses compostos podem ser encontradas em diferentes compartimentos ambientais, incluindo os recursos hídricos. Objetivo: Assim, esse trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos induzidos pelas formulações comerciais Glifosato Atanor (ATN) e Imazetapir (IMZT) isolados e associados (M1, M2 e M3) sobre organismos não-alvo, através de ensaios de toxicidade aguda com semente de Cucumis sativus, microcrustáceo Artemia salina e os estágios embrio-larvais de zebrafish, incluindo a análise da citotoxicidade. Métodos: Para tanto foram realizados teste de fitotoxicidade (USEPA,1996), o ensaio com A. salina (Meyer et al., 1982 e OECD 202, 2004), teste com o estágio embrio-larval de zebrafish (OECD 236, 2013) seguido pelos ensaios de citotoxicidade (Hoechst 33342, Mitotracker red e alaranjado de acridina). Resultados: Para a germinação de C. sativus, as formulações ATN e IMZT (CE50 > 1000 mg/L) e as misturas de ATN + IMZT não foram fitotóxicas. Já para o crescimento da raiz, o IMZT (CE50 = 0,37 mg/L) foi mais fitotóxico do que o ATN (CE50 = 1,97 mg/L), e as misturas de ATN + IMZT apresentaram taxa de crescimento de 37,9; 24,7 e 17,2%, respectivamente. Apenas ATN induziu toxicidade aguda significativa para A. salina (CL50-48h = 9,62 mg/L) e as misturas não induziram efeitos significativos sobre a letalidade (<20%) desse microcrustáceo. Para o teste de toxicidade em embriões de zebrafish, as formulações de ATN e IMZT induziram letalidade similar, com CL50 de 76,50 mg/L e 71,60 mg/L respectivamente e ATN ainda causou malformações como, atraso na absorção do saco vitelínico, edema cardíaco e deformidades da cauda (CE50-72h > 55 mg/L). Ambas as formulações inibiram a inflação da bexiga natatória com CE50-120h de 26,94 mg/L (ATN) e 53,87 mg/L (IMZT). Tanto as formulações individuais ATN e IMZT como as misturas de ATN + IMZT mostraram uma redução na porcentagem de fluorescência em células coradas com Hoechst, sugerindo a perda de DNA. ATN e IMZT também reduziram o potencial mitocondrial das larvas expostas a 5 e 50 mg/L, além de células marcadas com alaranjado de acridina em regiões de cabeça, tronco e cauda nas menores concentrações. As misturas de ATN + IMZT não induziram efeitos letais e subletais significativos, mas alteraram o conteúdo de DNA e o potencial mitocondrial em células de zebrafish. Conclusões: Portanto, as formulações ATN e IMZT e as misturas de ATN + IMZT (M2 e M3) foram fitotóxicas para o crescimento da raiz de C.sativus. ATN foi mais tóxica do que IMZT para A. salina, e apenas a M3 foi tóxica para essa espécie. Apesar das formulações ATN e IMZT serem embriotóxicas para zebrafish, as misturas de ATN+IMZT não induziram toxicidade aguda. A nível celular, ATN e IMZT em baixas concentrações foram citotóxicas com efeitos sobre o núcleo e mitocôndrias e ainda acumularam células apoptóticas em algumas regiões do corpo das larvas de zebrafish.