Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-12Bitstream added on 2014-06-13T19:01:46Z : No. of bitstreams: 1 graciani_apb_dr_botfm.pdf: 427562 bytes, checksum: b481f2e6f558c5bae2f08ca356c1ed60 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Paracoccidioides brasiliensis (Pb), agente etiológico da paracoccidioidomicose, é um fungo dimórfico que sobrevive no interior de monócitos/macrófagos humanos não ativados. Estudos anteriores em nosso laboratório têm demonstrado que os monócitos humanos não ativados são incapazes de realizar atividade fungicida, e esse processo está associado com a capacidade do fungo induzir a produção de prostaglandinas (PGs), uma vez que, essas células são capazes de realizar atividade fungicida significativa após o tratamento com indometacina (INDO), um inibidor da produção de ciclooxigenase. No entanto, o processo de pré-ativação com IFN-γ, resulta em um parcial efeito compensatório sobre os efeitos inibidores das PGs, principalmente quando essas células são desafiadas com a cepa de baixa virulência do fungo. Assim, a proposta deste presente estudo foi avaliar se a ativação de monócitos humanos com outras citocinas como TNF-α e GM-CSF resulta em um efeito similar ao observado com IFN-γ. Uma outra questão a ser respondida é se esse processo poderia estar associado com alterações nos níveis de H2O2 e NO, que são moléculas efetoras envolvidas na atividade fungicida contra o P. brasiliensis, bem como nos níveis das citocinas TNF-α, IL-10 e IL-6. Culturas de monócitos do sangue periférico, obtidos de 20 indivíduos normais foram tratadas somente com INDO ou ativados com IFN-γ, TNF-α ou GM-CSF na presença ou ausência de INDO por 18h, e posteriormente desafiados com cepas de alta (Pb18) ou baixa (Pb265) virulência do P. brasiliensis por 4h. Após esse período, as culturas foram avaliadas quanto à atividade fungicida, produção de H2O2 e NO e expressão de mRNA para enzima óxido nítrico sintase (iNOS) por RT-PCR em tempo real. As concentrações de TNF-α, IL-6 e IL-10 nos sobrenadantes das coculturas foram avaliadas por ELISA. Nossos resultados... / Paracoccidioides brasiliensis (Pb), the etiological agent of paracoccidioidomycosis, is a dimorphic fungus that survives within nonactivated human monocytes/macrophages. Previous studies have demonstrated that the lack of fungicidal activity by nonactivated human monocytes is associated to fungus capacity to inducing prostaglandins release, since a significative fungicidal activity was detected after monocytes treatment with indomethacin (INDO), a cyclooxigenase inhibitor. However, cells activation with IFN-γ seems to partially compensating this inhibitory effect, mainly when cells were challenged with low virulent strain of the fungus. Here, we extended our studies, addressing whether monocytes activation with other cytokines such as TNF-α and GM-CSF results in a similar effect to that observed with IFN-γ. Moreover, we asked if this process could be associated with alterations on H2O2 and NO levels, the molecules involved in Pb killing, as well as in the levels of the cytokines TNF-α, IL-10 and IL-6. Peripheral blood monocytes obtained from 18 healthy donors were treated only with INDO or activated with IFN-γ, TNF-α or GM-CSF in presence or absence of INDO for 18h, and further challenged with high (Pb18) or low (Pb265) virulent strain of Pb for 4h. After, cultures were evaluated for fungicidal activity, H2O2 and NO release and expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) mRNA by real-time RT-PCR. The concentrations of TNF-α, IL-6 and IL-10 on supernatants of cocultures were evaluated by ELISA. Our results provided evidence that human monocytes challenged with both strains of P. brasiliensis release prostaglandins that via induction of IL-10 and IL-6 inhibits TNF-α production. This process results in defective cell activation with consequent release of low H2O2 levels and lack of fungicidal activity by cells. However the inhibitory effect of PGs may be... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo: Paracoccidioides brasiliensis (Pb), agente etiológico da paracoccidioidomicose, é um fungo dimórfico que sobrevive no interior de monócitos/macrófagos humanos não ativados. Estudos anteriores em nosso laboratório têm demonstrado que os monócitos humanos não ativados são incapazes de realizar atividade fungicida, e esse processo está associado com a capacidade do fungo induzir a produção de prostaglandinas (PGs), uma vez que, essas células são capazes de realizar atividade fungicida significativa após o tratamento com indometacina (INDO), um inibidor da produção de ciclooxigenase. No entanto, o processo de pré-ativação com IFN-γ, resulta em um parcial efeito compensatório sobre os efeitos inibidores das PGs, principalmente quando essas células são desafiadas com a cepa de baixa virulência do fungo. Assim, a proposta deste presente estudo foi avaliar se a ativação de monócitos humanos com outras citocinas como TNF-α e GM-CSF resulta em um efeito similar ao observado com IFN-γ. Uma outra questão a ser respondida é se esse processo poderia estar associado com alterações nos níveis de H2O2 e NO, que são moléculas efetoras envolvidas na atividade fungicida contra o P. brasiliensis, bem como nos níveis das citocinas TNF-α, IL-10 e IL-6. Culturas de monócitos do sangue periférico, obtidos de 20 indivíduos normais foram tratadas somente com INDO ou ativados com IFN-γ, TNF-α ou GM-CSF na presença ou ausência de INDO por 18h, e posteriormente desafiados com cepas de alta (Pb18) ou baixa (Pb265) virulência do P. brasiliensis por 4h. Após esse período, as culturas foram avaliadas quanto à atividade fungicida, produção de H2O2 e NO e expressão de mRNA para enzima óxido nítrico sintase (iNOS) por RT-PCR em tempo real. As concentrações de TNF-α, IL-6 e IL-10 nos sobrenadantes das coculturas foram avaliadas por ELISA. Nossos resultados... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioides brasiliensis (Pb), the etiological agent of paracoccidioidomycosis, is a dimorphic fungus that survives within nonactivated human monocytes/macrophages. Previous studies have demonstrated that the lack of fungicidal activity by nonactivated human monocytes is associated to fungus capacity to inducing prostaglandins release, since a significative fungicidal activity was detected after monocytes treatment with indomethacin (INDO), a cyclooxigenase inhibitor. However, cells activation with IFN-γ seems to partially compensating this inhibitory effect, mainly when cells were challenged with low virulent strain of the fungus. Here, we extended our studies, addressing whether monocytes activation with other cytokines such as TNF-α and GM-CSF results in a similar effect to that observed with IFN-γ. Moreover, we asked if this process could be associated with alterations on H2O2 and NO levels, the molecules involved in Pb killing, as well as in the levels of the cytokines TNF-α, IL-10 and IL-6. Peripheral blood monocytes obtained from 18 healthy donors were treated only with INDO or activated with IFN-γ, TNF-α or GM-CSF in presence or absence of INDO for 18h, and further challenged with high (Pb18) or low (Pb265) virulent strain of Pb for 4h. After, cultures were evaluated for fungicidal activity, H2O2 and NO release and expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) mRNA by real-time RT-PCR. The concentrations of TNF-α, IL-6 and IL-10 on supernatants of cocultures were evaluated by ELISA. Our results provided evidence that human monocytes challenged with both strains of P. brasiliensis release prostaglandins that via induction of IL-10 and IL-6 inhibits TNF-α production. This process results in defective cell activation with consequent release of low H2O2 levels and lack of fungicidal activity by cells. However the inhibitory effect of PGs may be... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Coorientador: Luciene Alarcão Dias Melicio / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Banca: João pessoa Araújo Junior / Banca: Heloisa Blotta / Banca: Gil Bernard / Doutor

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Sementes de Platypodium elegans Vogel, pertencente à FamÃlia Fabaceae, subfamÃlia Papilionoideae, Tribo Dalbergiae possui uma lectina Manose/Glicose ligante. Na purificaÃÃo da lectina em estudo, o extrato total de sementes de P. elegans preparado em NaCl 0,15M teve sua fraÃÃo hemaglutinante isolada por cromatografia de afinidade em quitina, trocas iÃnica em DEAE-Sephacel e em HiTrap SP, essa Ãltima acoplada a HPLC. As fraÃÃes ativas para atividade hemaglutinante obtidas sequencialmente nesses procedimentos foram avaliados quanto à sua atividade especÃfica e homogeneidade em SDS-PAGE. A lectina em seu Ãltimo passo de purificaÃÃo apresentou massa molecular aparente de 55 kDa. A fraÃÃo prÃ-purificada ativa obtida em DEAE-Sephacel foi caracterizada quanto ao seu potencial termiticida e fungicida. A atividade termiticida contra operÃrios e soldados de Nasutitermes corniger, induzindo 100% de mortalidade em ambas as classes, foram melhor visualizadas com as concentraÃÃes 1,0 e 0,8mg/mL, entre 8 e 9 dias para operÃrios e 7 e 8 dias para soldados, onde ainda nÃo se havia registrado menos que 50% de mortalidade no controle negativo. A fraÃÃo testada nÃo apresentou efeito repelente. Em relaÃÃo à atividade fungicida, 20 ug da fraÃÃo chegou a inibir consideravelmente Fusarium lateritium (33%), F. oxysporum (19,4%) e F. solani (14,3%). F. decemcellulare teve uma inibiÃÃo de 4,8% e F. moniliforme, 3,3%. Essas duas atividades reforÃam a participaÃÃo dessa lectina na defesa vegetal, fazendo-a uma potente ferramenta biotecnolÃgica a ser mais profundamente investigada e estudada em relaÃÃo a seu papel na defesa vegetal e na potencial utilizaÃÃo na resistÃncia de madeiras susceptÃveis a cupins. / Seeds of Platypodium elegans Vogel, belonging to the Fabaceae family, Papilionoideae sub-family, Dalbergiae Tribe, posses a specific mannose/glucose lectin. In the purification of the lectin in study, the total extract of seeds of P. elegans prepared in NaCl 0,15M had its active fraction isolated for affinity chromatography in chitin and exchange ionic chromatography in DEAE-Sephacel and HiTrap SP, this last one connected to the HPLC.The active fractions for hemmagutinant activity gotten in these procedures had been sequentially about its specific activity and homogeneity in SDS-PAGE. The lectin in the last step of purification presented apparent molecular mass of 55 kDa. The active fraction from DEAE-Sephacel was characterized about its termiticidal and fungicidal potential. The termiticidal activity against laborers and soldiers of Nasutitermes corniger, inducing 100% of mortality in both the classrooms, was better visualized with the concentrations of 1,0 and 0,8mg/mL, between 8 and 9 days for laborers and 7 and 8 days for soldiers, where it had not been registered mortality less than 50% in the negative control. The tested fraction did not present repellent effect. In relation to the fungicidal activity, 20 ug of the fraction arrived to inhibit considerably Fusarium lateritium (33%), F. oxysporum (19.4%) and F. solani (14.3%). F. decemcellulare had a inhibition of 4,8% and F. moniliforme, 3.3%. These two activities strengthen the participation of this lectin in the vegetal defense, making it a powerful biotechnological tool to be more deeply investigated and studied about its paper in the vegetal defense and the potential use in the resistance of susceptible wood to termites.

Made available in DSpace on 2016-12-23T14:37:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tatiane Paulino da Cruz.pdf: 1055660 bytes, checksum: 58a56273fc2f252688911c2700a070e5 (MD5) Previous issue date: 2013-02-20 / The decline of guava has been responsible for the eradication of many orchards nationwide, resulting in high economic loss to producers. Due to increasing pressure from society for healthier products, free from chemicals and to increase the importance of essential oils in the management of plant diseases, the aim of this study was to determine the chemical composition and fungitoxic evaluate the effects of essential oils of Eucalyptus citriodora (eucalyptus), E. grandis (eucalyptus), Cymbopogon citratus (lemon grass), Cymbopogon winterianus (lemongrass), Cinnamomum zeylanicum (Cinnamon), Eucalyptus commercial Rosmarinos officinalis (rosemary), Ocimum gratissimum (basil-clove) and Syzygium aromaticum (clove india ) on three isolates of Fusarium solani and M. enterolobii. The essential oil was obtained by hydrodistillation using a Clevenger type apparatus, and its yield was determined relative to the dry weight of the plant. The analysis by gas chromatography and gas chromatography with mass detector of essential oils led to the identification of compounds. To evaluate the effect of essential oils on mycelial growth, sporulation and germination of spores of the fungus were used aliquots of 5, 10, 15, 20, 25 and 30 μl of essential oils that were distributed on the surface of PDA culture medium contained in Petri dishes before subculturing the fungus. To evaluate the effect of oil on hatching and mortality of second stage juveniles (J2) of the nematode were used aqueous suspensions containing 200 eggs or 200 J2 which were added in the same rates of essential oils from botanicals mencinadas the previously. The experimental design was completely randomized with a 9 x 6 + 1, (nine oils, six aliquots and an additional control) with 5 repetitions. The lowest rate of essential oils of clove, cinnamon and clove basil-inhibited by more than 90% spore germination, mycelial growth and sporulation of the fungus isolates as well as the emergence of J2, as for oils eucalyptus, lemongrass, citronella inhibition was greater than 90% from the rate of 15 μl, rosemary oil showed the worst result in 50% inhibiting the development of the fungus isolates / O declínio da goiabeira tem sido responsável pela erradicação de muitos pomares em âmbito nacional, o que resulta em elevada perda econômica aos produtores. Devido a crescente pressão da sociedade por produtos mais saudáveis, livres de produtos químicos e com aumento da importância dos óleos essenciais no manejo de doenças de plantas, objetivou-se com este trabalho determinar a composição química e avaliar os efeitos fungitóxicos dos óleos essenciais de Eucalyptus citriodora (eucalipto), E. grandis (eucalipto), Cymbopogon citratus (capim-limão), Cymbopogon winterianus (citronela), Cinnamomum zeylanicum (Canela), Eucalipto comercial, Rosmarinos officinalis (alecrim), Ocimum gratissimum (alfavaca-cravo) e Syzygium aromaticum (cravo-da-india) sobre três isolados de Fusarium solani e M. enterolobii. O óleo essencial foi obtido por hidrodestilação, utilizando um aparelho tipo Clevenger, e o seu rendimento foi determinado em relação à massa seca da planta. As análises de cromatografia gasosa e cromatografia gasosa com detector de massas de óleos essenciais levaram à identificação dos compostos. Para avaliar o efeito dos óleos essenciais no crescimento micelial, esporulação e germinação de esporos do fungo, foram utilizadas alíquotas de 5; 10; 15; 20; 25 e 30 μL dos óleos essenciais que foram distribuídas na superfície do meio de cultura BDA contido em placas de Petri antes da repicagem do fungo. Para a avaliação do efeito dos óleos sobre a eclosão e mortalidade de juvenis de segundo estádio (J2) do nematóide foram utilizadas suspensões aquosas contendo 200 ovos ou 200 J2 nas quais foram adicionadas as mesmas alíquotas dos óleos essenciais das espécies botânicas mencinadas anteirormente. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado num esquema fatorial 9 x 6 + 1, (nove óleos, seis aliquotas e uma testemunha adicional) com 5 repetições. A menor alíquota dos óleos essenciais de cravo-da-índia, canela e alfavaca-cravo inibiram em mais de 90% a germinação de esporos, o crescimento micelial e a esporulação dos isolados do fungo assim como a eclosão de J2, já para os óleos de eucalipto, capim limão, citronela a inibição foi superior a 90% a partir da alíquota de 15 μl, o óleo de alecrim foi o que apresentou o pior resultado inibindo em 50% o desenvolvimento dos isolados do fungo

BENEVIDES, Raquel Guimarães. Avaliação do potencial fungicida e termiticida de uma fração protéica lectínica de sementes de Platypodium elegans Vogel e obtenção da lectina purificada. 2008. 113 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2008. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-04T12:43:49Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_rgbenevides.pdf: 5092516 bytes, checksum: 86289fcb11e2cb709d80b92c6f7cd851 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T20:15:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_rgbenevides.pdf: 5092516 bytes, checksum: 86289fcb11e2cb709d80b92c6f7cd851 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T20:15:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_rgbenevides.pdf: 5092516 bytes, checksum: 86289fcb11e2cb709d80b92c6f7cd851 (MD5) Previous issue date: 2008 / Seeds of Platypodium elegans Vogel, belonging to the Fabaceae family, Papilionoideae sub-family, Dalbergiae Tribe, posses a specific mannose/glucose lectin. In the purification of the lectin in study, the total extract of seeds of P. elegans prepared in NaCl 0,15M had its active fraction isolated for affinity chromatography in chitin and exchange ionic chromatography in DEAE-Sephacel and HiTrap SP, this last one connected to the HPLC.The active fractions for hemmagutinant activity gotten in these procedures had been sequentially about its specific activity and homogeneity in SDS-PAGE. The lectin in the last step of purification presented apparent molecular mass of 55 kDa. The active fraction from DEAE-Sephacel was characterized about its termiticidal and fungicidal potential. The termiticidal activity against laborers and soldiers of Nasutitermes corniger, inducing 100% of mortality in both the classrooms, was better visualized with the concentrations of 1,0 and 0,8mg/mL, between 8 and 9 days for laborers and 7 and 8 days for soldiers, where it had not been registered mortality less than 50% in the negative control. The tested fraction did not present repellent effect. In relation to the fungicidal activity, 20 ug of the fraction arrived to inhibit considerably Fusarium lateritium (33%), F. oxysporum (19.4%) and F. solani (14.3%). F. decemcellulare had a inhibition of 4,8% and F. moniliforme, 3.3%. These two activities strengthen the participation of this lectin in the vegetal defense, making it a powerful biotechnological tool to be more deeply investigated and studied about its paper in the vegetal defense and the potential use in the resistance of susceptible wood to termites. / Sementes de Platypodium elegans Vogel, pertencente à Família Fabaceae, subfamília Papilionoideae, Tribo Dalbergiae possui uma lectina Manose/Glicose ligante. Na purificação da lectina em estudo, o extrato total de sementes de P. elegans preparado em NaCl 0,15M teve sua fração hemaglutinante isolada por cromatografia de afinidade em quitina, trocas iônica em DEAE-Sephacel e em HiTrap SP, essa última acoplada a HPLC. As frações ativas para atividade hemaglutinante obtidas sequencialmente nesses procedimentos foram avaliados quanto à sua atividade específica e homogeneidade em SDS-PAGE. A lectina em seu último passo de purificação apresentou massa molecular aparente de 55 kDa. A fração pré-purificada ativa obtida em DEAE-Sephacel foi caracterizada quanto ao seu potencial termiticida e fungicida. A atividade termiticida contra operários e soldados de Nasutitermes corniger, induzindo 100% de mortalidade em ambas as classes, foram melhor visualizadas com as concentrações 1,0 e 0,8mg/mL, entre 8 e 9 dias para operários e 7 e 8 dias para soldados, onde ainda não se havia registrado menos que 50% de mortalidade no controle negativo. A fração testada não apresentou efeito repelente. Em relação à atividade fungicida, 20 ug da fração chegou a inibir consideravelmente Fusarium lateritium (33%), F. oxysporum (19,4%) e F. solani (14,3%). F. decemcellulare teve uma inibição de 4,8% e F. moniliforme, 3,3%. Essas duas atividades reforçam a participação dessa lectina na defesa vegetal, fazendo-a uma potente ferramenta biotecnológica a ser mais profundamente investigada e estudada em relação a seu papel na defesa vegetal e na potencial utilização na resistência de madeiras susceptíveis a cupins.