Orientador: André Rodrigues / Coorientador: Maurício Bacci Junior / Banca: Juliana de Oliveira Augustin / Banca: Fernando Carlos Pagnocca / Resumo: Ninhos de formigas Attini são conhecidos por abrigar uma diversa e complexa microbiota. Esses insetos possuem uma relação de mutualismo com seu fungo simbionte, utilizado como fonte de alimento. Porém, muitos micro-organismos também são encontrados nos ninho dessas formigas. Dentre eles, destacam-se fungos do gênero Escovopsis, considerados parasitas específicos do fungo cultivado por esses insetos. Somente encontrado associado aos ninhos de formigas Attini, Escovopsis coevoluiu com as formigas e seus fungos mutualistas em uma relação tripartida. Apesar dos diversos estudos voltados para entender a variedade genética de Escovopsis realizados na América Central (especialmente Panamá), não há relatos de grandes amostragens do parasita presente na América do Sul. São também escassos trabalhos taxonômicos para esse grupo de fungo; como resultado, após mais de duas décadas da descrição da primeira espécie do gênero, até o presente trabalho, apenas seis espécies foram formalmente descritas. Nesse contexto, estudamos a filogenia e evolução de Escovopsis e separamos nossos resultados em dois capítulos. No primeiro deles, descrevemos uma nova espécie, E. kreiselii, primeira a ser descrita pertencente ao clado das formigas Attini basais. Discutimos também a evolução do fungo, indicando que parece haver correlação entre filogenia e características morfológias, com linhagens menos derivadas apresentando ausência de vesícula (célula que suporta as fiálides, produtoras de conídios). Já no segundo capítulo, exploramos a diversidade filogenética de Escovopsis associados às formigas Attini derivadas, em diferentes países do continente Americano, especialmente o Brasil. Contrariamente ao que foi previamente proposto, nossos resultados sugerem que as formigas Attini derivadas podem compartilhar linhagens de Escovopsis, indicando ausência de co-cladogênese estrita entre formiga-Escovopsis-fungo mutualista. A... / Abstract: Attine ant nests harbor a diverse and complex microbiota. Such insects have a mutualistic relationship with mutualistic fungus, cultured as food source. However, several microorganisms are also present in attine nests. Within this microbiota, fungi in the genus Escovopsis are considered specific parasites of the mutualistic fungus. Escovopsis is only reported associated with attine ant nests. Furthermore, this parasite coevolved with attine ants and their mutualistic fungi in a tripartite relationship (tripartite coevolution model). Although several studies aimed to understand the genetic diversity of Escovopsis in Central America (mostly Panama), no comprehensive reports considering large Escovopsis samples are known from South America. There is also few taxonomic work onr this fungus; as a result, after two decades of the description of the first species, up to the present work, only six Escovopsis species have been formally described. In this study, we investigated the systematics, phylogeny and evolution of Escovopsis and separated our results in two chapters. In the first part, we describe a new species, E. kreiselii, first species belonging to basal attine ants. We also discuss the evolution of Escovopsis, indicating a correlation between phylogeny and morphological characters, where less derived strains shows absence of vesicles (structures supporting spore bearing-cells). In the second chapter, we exploit the phylogenetic diversity of Escovopsis associated with higher-attine ants in different countries of the American continent, especially Brazil. Contrary to previous resports, we show that higher attine ants share Escovopsis infections, indicating no strict co-cladogenesis between ant-cultivar-Escovopsis. The description of a new species and the extensive Escovopsis phylogeny presented here provide a first step towards a better understanding of the evolution and taxonomy of this group of fungi, which has potential for biological ... / Mestre

Orientador: Eleonora Cano Carmona / Banca: João Atilio Jorge / Banca: Rosa dos Prazeres Melo Furriel / Resumo: As lipases (triacilglicerol acil hidrolases, E.C. 3.1.1.3) catalisam a hidrólise das ligações éster de triacigliceróis, operando na interface água/óleo. Estas são enzimas ubíquas, porém as de origem microbiana têm se destacado no cenário industrial atual devido ao seu amplo espectro de aplicação. Dessa maneira, a prospecção de novas fontes de lipases com propriedades distintas é uma linha de pesquisa importante. Dentre os micro-organismos, os fungos vêm sendo explorados para a produção de enzimas por secretarem grandes quantidades de proteínas no meio extracelular que não são nocivas à saúde humana, em sua grande maioria. Este trabalho se insere neste contexto, uma vez que visa purificar e caracterizar as principais propriedades bioquímicas da lipase produzida pelo fungo filamentoso Penicillium sect. Gracilenta CBMAI 1583, isolado de solo de Mata Atlântica e ainda não estudado em relação a essa enzima. O pH e a temperatura ótimos de atividade lipásica foram 4,0 e 70 °C, respectivamente, tanto para a enzima presente no filtrado de cultura quanto para a enzima purificada. As energias de ativação da reação de hidrólise do p-nitrofenil palmitato catalisada pela lipase presente no filtrado de cultura e pela lipase purificada foram 27,01 e 8,77 kJ.mol-1, respectivamente. A enzima do filtrado se mostrou mais estável em relação à temperatura (T(1/2) de 1,5 h, 6,3 e 2,3 min a 50, 60 e 70 °C, respectivamente) e menos estável em relação ao pH (estável apenas entre os pH 5,0 e 7,0) que a enzima purificada. A enzima purificada apresentou T(1/2) de 8,5 min, 33,6 e 15,4 s nas mesmas temperaturas e estabilidade em pH de 2,0 a 8,5. Em relação à estabilidade na presença de surfactantes, os detergentes aniônicos desestabilizaram a estrutura proteica, com consequente perda de atividade, enquanto detergentes não iônicos a 1 % (m/v) ativaram a enzima. A lipase foi purificada em uma única etapa, através de... / Abstract: Lipases (triacylglycerol acyl hydrolases, EC 3.1.1.3) are ubiquitous enzymes. However microbial enzymes stand out on the current industrial scenario, due to their wide spectrum of application. In this sense, prospection of new sources of lipases with distinct characteristics is an important research field. Among microorganisms, fungi are being explored for enzyme production, because they secrete high amounts of proteins to extracellular medium that are generally regarded as safe for human health. This work is inserted in this context once it aims to purify and to characterize the main biochemical properties of lipase produced by the filamentous fungus Penicillium sect Gracilenta CBMAI 1583, isolated from soil under Atlantic Rainforest and yet not studied in respect to this enzyme. Optima pH and temperature of activity were 4.0 and 70 °C, respectively, for both crude and purified lipase. Activation energys of hydrolysis of pNPP catalyzed by crude and purified lipase were 27.01 and 8.77 KJ.mol-1, respectively. Crude lipase was more stable to temperature (T(1/2) of 1.5 h, 6.3 and 2.3 min at 50, 60 and 70 °C, respectively) and less stable to pH (stable only at pH 5.0 to 7.0), while purified lipase showed the opposite behavior (T(1/2) of 8.5 min, 33.6 and 15.4 s at the same temperatures; and stable at pH 2.0 to 8.5). Regarding the stability in presence of surfactants, anionic detergents destabilized the protein structure with consequent loss of activity, while nonionic detergents at 1 % (w/v) activated the enzyme. Lipase was purified to homogeneity by one step, through a hydrophobic interaction chromatography at low ionic strength using the Phenyl Sepharose resin, as revealed by SDS-PAGE. By this strategy it was possible to recover 80.8 % of initial activity and achieve a purification factor of 516.1. Enzyme molecular mass was estimated to be 52.9 kDa by SDS-PAGE and 85.3 kDa by size exclusion chromatography, suggesting the formation of ... / Mestre

Orientador: Lara Durães Sette / Coorientador: Rafaella Bonugli Santos / Banca: Luiz Henrique Souza Guimarães / Banca: Eleonora Cano Carmona / Resumo: As lacases são enzimas que catalisam uma reação que oxida moléculas aromáticas fenólicas. Com grande potencial biotecnológico, as lacases podem ser empregadas em diversos setores industriais. Suas principais aplicações são referentes a indústria de polpa e papel, têxtil, alimentícia, bem como na química sintética e biorremediação. Em estudos prévios, o fungo basidiomiceto Peniophora sp. CBMAI 1063, isolado da esponja marinha Amphimedon viridis, apresentou 1.350 U/L de atividade para lacases em meio submerso salino otimizado. Tendo em vista a importância dos fungos e dessas enzimas para a biotecnologia, o objetivo do trabalho foi estudar a produção de lacases pelo basidiomiceto de origem marinha Peniophora sp. CBMAI 1063 em biorreatores de bancada. Foram conduzidos 11 cultivos em biorreatores de agitação mecânica (STR) e um em biorreator pneumático (air-lift), definindo parâmetros como o tempo em que o inóculo do biorreator deve ser incubado, frequência de agitação, kLa e valor do pH inicial. A atividade máxima para lacases obtida em biorreator de agitação mecânica foi de 2.700 U/L em 120h de cultivo, em 150 rpm de agitação (1,0 vvm: kLa de 17,2 h-1) e pH 4,5 inicial. Nessas condições e com o inóculo cultivado também por 120h, a taxa máxima de formação do produto foi de 60 U/L.h e produtividade máxima de 25,5 U/L.h. O fungo quando cultivado em biorreator air-lift sob 1,0 vvm de aeração apresentou atividade de 4.014 U/L em 96 horas de cultivo, com taxa máxima de formação do produto de 55 U/L.h e produtividade máxima de 40 U/L.h. Análises da macro-morfologia fúngica ao término do bioprocesso indicaram que o biorreator STR causou mais danos ao micélio fúngico do que o cultivo em biorreator air-lift. Experimentos adicionais em frascos agitados demonstraram que o fungo Peniophora sp. CBMAI 1063 apresentou melhores atividades para lacases e maiores índices de biomassa seca na presença de 65%... / Abstract: Laccases are enzymes that catalyzes a reaction that oxidizes phenolic compounds. With a great biotechnological potential, laccases can be applied in many industrial areas. Most of the applications are related to pulp and paper, textile, food and beverage industries, as well as in synthetic chemistry and bioremediation. In earlier studies, the basidiomycete Peniophora sp. CBMAI 1063, isolated from marine sponge Amphimedon viridis, exhibited 1.350 U/L of laccases' activity under submerged culture in optimized saline medium. Taking into consideration the importance of the fungi and these enzymes for biotechnology, the purpose of this work was to study the laccases' production by the marine-derived basidiomycete Peniophora sp. CBMAI 1063 in bench bioreactors. It was performed 11 experiments in stirred tank reactor (STR) and one in pneumatic bioreactor (air-lift), establishing parameters such as inoculum incubation time, frequency of agitation, kLa, and initial pH value. The maximum laccases activity obtained in stirred tank reactor was 2.700 U/L in 120 hours of cultivation under 150 rpm of agitation (1,0 vvm: kLa de 17.2 h-1) and initial pH value of 4.5. In those conditions, with the inoculum cultivated for 120 hours, the maximum product formation rate was 60 U/L.h and the maximum productivity was 25.5 U/L.h. The fungus when cultivated in air-lift bioreactor under 1.0 vvm of aeration showed the activity of 4.014 U/L in 96 hours of growth. The maximum product formation rate obtained in that experiment was 55 U/L.h and the maximum productivity was 40 U/L.h. Analysis of the macro-morphology at the end of the processes indicated that STR bioreactor caused more damage to the fungus' mycelium than the air-lift bioreactor. Additional experiments in agitated flasks showed that the fungi Peniophora sp. CBMAI 1063 had higher laccases' activity and higher yields of dry biomass in the presence of 65% (v/v) of artificial seawater (ASW) and 2mM of ... / Mestre

Orientador: Marcelo Agenor Pavan / Coorientador: Denise Nozaki / Banca: Rumy Goto / Banca: Romulo Fujito Kobori / Resumo: A murcha de fusário, causada pelo fungo de solo Fusarium oxysporum f.sp. lactucae é uma das doenças mais severas que ataca m a cultura da alface em todo o mundo. Em 2011, foram encontrados em uma plantação de alface n os município s de Capão Bonito e Campin as n o estado de São Paulo, sintomas característicos do ataque do patógeno. Plantas sintomáticas foram coletadas para identificação do patógeno. O s exame s em microscóp io óptico revel aram a presença de macroconídios falcados de coloração hialina, microconídi os hialinos unicelulares e testes de patogenicidade revelaram a presença de Fusarium oxysporum f.sp. lactucae . Efetuou - se o re - isolamento do patógeno, completa ndo - se assim o Postulado de Koch . No total, for am encontrados 4 isolados patogê nicos atacando pla ntas de alface. A partir do s isolados identificados , fo ram caracterizada s as variações patogênicas através de diferenciadoras de raça. Para esta finalidade foram utilizadas Patriot ( suscetível às raças 1, 2 e 3 ), Costa Rica ( resistente à raça 1 ; suscetível às raças 2 e 3 ), Summer Green ( suscetível às raças 1 e 3 ; resistente à raça 2 ) e Banchu Red Fire ( suscetível às raças 1 e 3, resistente à raça 2 ) . Os resultados obtidos identificaram a ocorrência da raça 3 de Folac. Este é o primeiro relato de ocorrência desta raça no Brasil . A partir do isolado selecionado como sendo o mais agressivo , e caracterizado como pertencente a raça 3 , r ealizou - se a triagem de genótipos de alface, afim de identificar fontes de resistência para uso em programas de melhoramento . No total de 63 genótipos testados apenas Onondaga, Itha ca, Sudenvil e JP - 11 apresentara m - se como resistente a raça 3 de Fusarium oxysporum f.sp. lactucae / Abstract: The fusarium wilt, caused b y the soil fungus Fusarium oxysporum f.sp. soil lactucae is one of the most severe diseases that attack lettuce crop worldwide. In 2011, were found in a pla nting lettuce in Capão Bonito and Campinas in São Paulo, symptoms characteristic of this pathogen. S ymptomatic plants were collected for pathogen identification. The optical microscope examinations revealed the presence of hyaline staining falcate macroconidia, microconidia unicellular hyaline and pathogenicity tests revealed the presence of Fusarium oxy sporum f.sp. lactucae. We performed the re - isolation of the pathogen, there by supplementing the Koch's postulate. For this purpose were used: Patriot(susceptible to races 1, 2 and 3), Costa Rica (susceptible to races 2 and 3, resistant to race 1); Summer Green (susceptible to races 1 and 3; resistant to race 2) and Banchu Red Fire (susceptible to races 1 and 3, resistant to race 2). The results show the occurrence of race 3 of Folac. This is the first report of the case in Brazil. From the isolated select ed as being the 3 most aggressive, and characterized as belonging to race 3 was held screening of lettuce genotypes in order to identify sources of resistance for use in breeding programs. From of 63 genotypes tested only Onondaga, Ithaca, Sudenvil and JP - 11 were identified as resistant to race 3 of Fusarium oxysporum f.sp. lactucae / Mestre

Resumo: O fungo endofítico Colletotrichum gloeosporioides isolado de Garcinia xanthochymus, foi cultivado em pequena escala nos meios líquidos, (400 mL) MDB, Extrato de Malte, YM, Czapek e em meio sólido (150 g) de milho tipo canjica, a 28ºC, em regime estático. Após triagem por ensaios biológicos, e análise por 1H RMN e HPLC-DAD, os meios de milho e extrato de malte foram selecionados para o estudo químico, sendo cultivados em larga escala. As matrizes brutas foram submetidas a estratégias de separação e de desreplicação utilizando as técnicas hifenadas: cromatografia líquida acoplada a detector de arranjo de diodos e espectrometria de massas de alta resolução, cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas e também a ressonância magnética nuclear, sendo a detecção dos constituintes majoritários realizada in silico, através do uso de bases de dados públicas e pertencentes ao NuBBE. Os experimentos realizados permitiram a detecção de 14 substâncias: 6 por CG-MS (extrato DCM de milho) - dihexadecanoato de glicerila (1); trioctadec-9-enoato de glicerila (2); sn1', 2' octadeca-9,12-dienoato de glicerila (3); sn1',3' octadeca-9,12-dienoato de glicerila (4); ácido 6,11-hexadecanóico (5); geranilinalol (6); e 7 por HPLC-DAD-HRMS: colletodiol (7); fischerina (8); sambutoxina (9); micosporina-glicina (10); ciperina (11); micosporina serina (12); arginomicina (13) e aspergillomarasmina B (14). Os compostos 2, 3 e 4, majoritários na matriz bruta foram isolados. Os metabolitos detectados por HPLC-DAD-HRMS (7-10) foram também detectados por 1H RMN / Abstract: Colletotrichum gloeosporioides, an endophytic fungi isolated from Garcinia xanthochymus, was initially cultivated on the following liquid media (400 mL): MDB, YM, Czapek and static solid medium (150 g) using bleached corn at 28 C. After careful screening using bioassays, 1H NMR and HPLC-DAD, the corn and malt extract were selected for further studies and large-scale growth. The crude matrixes were submitted to several separation strategies using dereplication and hyphenated techniques such as high performance liquid chromatography coupled to a diode array detector (HPLC-DAD), high resolution mass spectrometry (HRMS), gas chromatography coupled to a mass spectrometer (GC-MS) as well as nuclear magnetic resonance (NMR). Most of the detected molecules were achieved using an in silico approach towards the data mining of public and NuBBE's databases. This approach lead us to detect 14 substances; 6 by means of CG-MS (dichloromethane extract from corn's media): glyceril dihexadecanoate (1); glyceril trioctadec-9-enoate (2); sn1', 2' glyceril octadec-9,12-dienoate (3); sn1', 3' gliceryl octadec-9,12-dienoate (4); 6,11-hexadecanóic acid (5); geranyl linalool (6); and 7 by means of HPLC-DAD-HRMS: colletodiol (7); fischerin (8); sambutoxin (9); micosporin glycin (10); cyperin (11); micosporin serin (12); arginomicin (13) e aspergillomarasmin B (14). Compounds 2, 3 and 4, been the most abundant in the matrix, were isolated and individually characterized. Compounds 7-10 were also confirmed using 1H NMR by means of in situ elucidation / Orientador: Ian Castro-Gamboa / Coorientador: Márcia Nasser Lopes / Banca: Luiz Alberto Beraldo de Moraes / Banca: Patrícia Mendonça Pauletti / Mestre

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Fernanda Freitas Anibal / Banca: Luciana Simon Pereira Crott / Banca: Angela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Cleni Mara Marzocchi Machado / Resumo: A esporotricose é uma infecção fúngica causada pelas espécies do complexo Sporothrix, incluindo Sporothrix schenckii sensu stricto. Os receptores de reconhecimento padrão (PRRs), pertencentes às células da resposta imune inata, reconhecem os padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs). Uma classe de PRRs que tem sido associada ao reconhecimento de fungos é a dos receptores Nod-like (NLR). Após o reconhecimento de PAMPs, os receptores NLR family pyrin domain-containing 3 (NLRP3), em conjunto com a molécula adaptadora Apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain (ASC) e com a caspase-1, formam o inflamassoma NLRP3. Quando ativado, este complexo protéico promove a maturação das citocinas pró-inflamatórias IL-1β e IL-18, que influenciam no desenvolvimento das respostas imune Th17 e Th1, respectivamente. O inflamassoma NLRP3 também é responsável pela piroptose, uma morte celular inflamatória regulada por caspase-1. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel do inflamassoma NLRP3 em modelo de infecção sistêmica por S. schenckii, utilizando um camundongo selvagem (WT) e três diferentes camundongos knockout (KO): NLRP3-/-, ASC-/- e Casp-1-/-. Todos os animais KO foram mais suscetíveis que os WT na infecção por S. schenckii. A ativação do inflamassoma NLRP3 foi essencial para a liberação ex vivo de NO, IL-1β, IL-17, IL-18, mas não para IFN-γ. Além disso, S. schenckii desencadeou maior expressão de caspase-1 ativa e maior porc... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sporotrichosis is a mycosis caused by fungi from the Sporothrix schenckii species complex, whose prototypical member is Sporothrix schenckii sensu stricto. Pattern recognition receptors (PRRs) recognize and respond to pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) and shape the following adaptive immune response. A family of PRRs most frequently associated to fungal recognition is the nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor (NLR). After recognition of a PAMP, NLR family pyrin domain-containing 3 (NLRP3) binds to apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain (ASC) and caspase-1 to form the NLRP3 inflammasome. When activated, this complex promotes maturation of the pro-inflammatory cytokines interleukin (IL)-1β and IL-18 that influence the development of the Th17 and Th1 immune responses, respectively. In addition, the NLRP3 inflammassome is responsible for pyroptosis, a highly inflammatory cell death regulated by caspase-1. In this work, we aimed to evaluate the role of the NLRP3 inflammasome to the outcome of the S. schenckii infection using a wild-type mice (WT) and three different knockout mice (KO): NLRP3-/-, ASC-/-, and Casp-1 -/- . All the KO mice were more susceptible to the infection than the WT during the S. schenckii infection. Furthermore, the NLRP3 inflammasome seems to be critical to the ex vivo release of NO, IL-1β, IL-18, and IL-17, but not IFN-γ. The S. schenckii infection led to increased activation of caspase-1 and cell death by pyroptosis in WT mice. Also, a role for the inflammasome in shaping the adaptive immune response was suggested by lower frequencies of type 17 helper T (Th17) and Th1/Th17 cells in S. schenckii-infected KO mice. On the other hand, absence of any of the inflammasome components resulted in increased frequency of cytotoxic T cells in this infection... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Coorientador: Ana Paula Bordon-Graciani / Banca: Silvio Luiz de Oliveira / Banca: Carlos Artério Sorgi / Banca: Sandra de Moraes Gimenes Bosco / Banca: Dulce Helena Jardim Constantino / Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis. O estabelecimento da paracoccidioidomicose-infecção ou paracoccidioidomicose-doença depende das interações parasita-hospedeiro que podem resultar em uma resposta imune mais ou menos eficaz por parte deste último. Embora vários dos mecanismos decorrentes dessa interação já estejam descritos, estudos sobre a participação de outros fatores potenciais podem ampliar sobremaneira o nosso entendimento sobre a imunopatogênese da PCM. Nesse sentido, os eicosanóides como as prostaglandinas (PGs) e leucotrienos (LTs) devem ser avaliados. Em trabalhos anteriores detectamos que o fungo induz a produção de PGs e LTs por monócitos humanos que, de uma forma autócrina, suprimem ou aumentam respectivamente, as atividades antifúngicas dessas células. No entanto, os estudos têm mostrado que além de induzir a produção de eicosanóides, os próprios fungos podem produzir esses mediadores, revelando um mecanismo de virulência que tem potencialmente grandes implicações para o entendimento dos mecanismos das infecções fúngicas. Baseados nesses estudos detectamos que o P. brasiliensis produz tanto PGs como LTs, usando fontes endógenas e exógenas de ácido araquidônico, e que ambos são importantes para a manutenção da viabilidade do fungo. Adicionalmente, os resultados sugeriram que o fungo utiliza as vias metabólicas da ciclooxigenase (COX) para a produção de PGs e da lipoxigenase (5-LO) para LTs. No presente trabalho, aprofundamos esses estudos objetivando avaliar se o fungo produz outras classes de eicosanóides, além da PGE2 e LTB4, se as PGs e LTs liberados pelo P. brasiliensis podem ser considerados como PGE2 e LTB4 autênticos, isto é semelhantes aos detectados para os mamíferos, assim como estabelecer de uma forma definitiva se a COX e a 5-LO são as vias metabólicas utilizadas ... / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. The establishment of paracoccidioidomycosis-infection or the evolution to paracoccidioidomycosis-disease in its more or less severe forms, primarily depends on complex host-parasite interaction, in which immune response mechanisms play an essential role. While many of these mechanisms have been elucidated, studies on the participation of other potential factors can greatly expand our understanding of PCM immunopathogenesis. Accordingly, eicosanoids such as prostaglandins (PGs) and leukotrienes (LTs) should be evaluated. In previous studies we found that the fungus induces the production of prostaglandins and leukotrienes by human monocytes that in an autocrine way suppress and increase, respectively, the antifungal activities of these cells. However, studies have shown that in addition to inducing the production of eicosanoids, fungi themselves can produce these mediators, showing a mechanism for virulence that has potentially important implications for understanding the mechanisms of fungal pathogenicity. Based on these studies, we found that P. brasiliensis produces both PGs and LTs, using exogenous and endogenous sources of arachidonic acid and that both are important for fungus viability. Additionally, the results suggested that the fungus uses cyclooxygenase (COX) and lipoxygenase (5-LO) metabolic pathways for PGs and LTs production, respectively. Here, we profound these studies evaluating whether PGs and LTs released by P. brasiliensis can be considered as authentic LTB4 and PGE2, i.e. similar to those detected for mammals. We also asked whether the fungus, in addition to PGE2 and LTB4, produces other classes of eicosanoids. Finally, we intended to definitively determine whether COX and 5-LO are the metabolic pathways used for this production. We found that fungus PGE2 and LTB4 ... / Doutor

Orientador: Wagner Bettiol / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito dos lodos de esgotos (LE) produzidos nas Estações de Tratamento de Esgoto (ETEs) de Franca (F) e de Barueri (B), SP, sobre fitopatógenos habitantes do solo. In vitro, o LE nas doses de 0, 5, 10, 15, 20 e 25% foi testado, na forma esterilizada ou não, contra Rhizoctonia solani, Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli, Sclerotinia sclerotiorum, Sclerotium rolfsii e Pythium aphanidermatum. O LE esterilizado inibiu o crescimento micelial dos fungos entre 35% e 100%, com exceção de F. oxysporum. Para o lodo não esterilizado o resultado foi inverso, sendo que apenas F. oxysporum foi inibido. Em casa de vegetação foi avaliado o efeito do LE sobre o tombamento causado por P. aphanidermatum em pepino. Para tanto, o LE foi misturado ao solo nas concentrações de 0, 10, 20, 30, 40 e 50%, com e sem a adição de 5g de fertilizante (4-14-8) por litro. Os substratos foram infestados com 10g L-1 de inóculo de Pythium, sete dias antes da semeadura do pepino. Dois testes foram realizados, sendo o mesmo substrato cultivado por duas e três vezes, respectivamente. Os resultados do segundo cultivo, do primeiro teste e do terceiro cultivo do segundo, indicaram o bom desempenho do LE no controle do tombamento pós-emergência. Também em casa de vegetação, o LE misturado ao solo nas concentrações de 0; 2,5; 5; 7,5; 10 e 12,5 % e infestado com 10g L-1 de inóculo de S. rolfsii controlou o tombamento em três cultivos sucessivos de feijão. Em casa de vegetação foi determinada a sobrevivência de escleródios de S. rolfsii, incorporados aos solos coletados em um experimento de campo, com os seguintes tratamentos: adubação mineral recomendada para a cultura do milho e LE originários das ETEs de Franca e Barueri, SP, nas concentrações de 0, 1, 2, 4 e 8 vezes a dose de nitrogênio recomendada para a cultura. O solo de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: This work was aimed at evaluating the effect of sewage sludge (SS) produced at Sewage Treatment Stations (STS) in Franca (F) and Barueri (B), in the State of São Paulo, Brazil, on soil-borne plant pathogens. The SS was tested in vitro at the rates of 0; 5; 10; 15; 20; and, 25%, either in the sterilized form or not, against Rhizoctonia solani, Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli, Sclerotinia sclerotiorum, Sclerotium rolfsii and Pythium aphanidermatum. The sterilized SS inhibited the mycelial growth of the fungi between 35% and 100%, except for F. oxysporum. For non-sterilized sludge the result was inverted, with F. oxysporum alone being inhibited. The effect of LE on damping-off caused by P. aphanidermatum in cucumbers was evaluated in a greenhouse. For this purpose, the SS was mixed to the soil at concentrations of 0; 10; 20; 30; 40; and, 50%, with and without the addition of 5g fertilizer (4-14-8) per liter. The substrates were infested with 10g L-1 Pythium inoculum, seven days before cucumber seeding. Two tests were carried out, with the same substrate being cultivated twice and three times, respectively. Results obtained in the second cropping period on the first test, and in the third cropping period on the second, indicated a good performance of the SS in controlling post-emergence damping-off. Also, in the greenhouse, the SS mixed to the soil at concentrations of 0; 2,5; 5; 7,5; 10; and, 12,5 %, infested with 10g L-1 of a S. rolfsii inoculum controlled damping-off on three successive bean crops. Survival of S. rolfsii sclerotia incorporated to soils collected from a field experiment was determined in the greenhouse, with the following treatments: mineral fertilization recommended for corn and SS derived from the Franca and Barueri, SP STS, at concentrations of 0; 1; 2; 4; and, 8-fold the nitrogen rate recommended for the crop. The soil from each plot was distributed among... (Complete abstract, click electronic address below). / Doutor

Orientador: Rumy Goto / Resumo: Com o objetivo de avaliar a viabilidade de utilização da enxertia em plantas de pimentão (Capsicum annuum, L.), visando ao controle da murcha de fitóftora, causada por Phytophthora capsici Leonian, instalou-se um experimento na Fazenda de Ensino Pesquisa e Produção de São Manuel da Faculdade de Ciências Agronômicas / UNESP - Campus de Botucatu. As plantas foram conduzidas em ambiente protegido, num módulo de estrutura simples, tipo arco, com 7,0 m de largura, 40,0 m de comprimento e 3,0 m de pé direito, coberto por filme de polietileno de baixa densidade de 100 micras , totalizando uma área de 280 m2. O período de condução foi de setembro de 2000 a julho de 2001. Na Fase 1 do estudo, os tratamentos se constituíram da combinação de dois híbridos, AF-2638 e AF-2640, resistentes a P, capsici utilizados como porta-enxertos, enxertados por garfagem fenda simples em três híbridos comerciais suscetíveis, 'Magali-R', 'Elisa' e 'Margarita' utilizados como enxertos. Estes três híbridos suscetíveis também foram utilizados como pés francos. Esta Fase foi da semeadura até a morte dos pés francos suscetíveis após a infestação do solo com o fungo, 14 dias após o transplante. A Fase 2 constou da condução das plantas enxertadas, que permaneceram vivas devido à resistência dos porta-enxertos, até a obtenção dos frutos provenientes de 9 colheitas. O delineamento experimental foi de blocos casualizados, com 4 repetições e 5 plantas por parcela. Na Fase 1 as características avaliadas foram a compatibilidade inicial de enxertia, expressa pela porcentagem de pegamento; resistência das plantas após a inoculação dos propágulos infectivos do fungo; evolução dos sintomas da doença nos pés francos; tempo gasto em dias da semeadura até a antese da primeira flor... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: With the purpose of verifying the viability of sweet pepper (C. annuum, L.) grafting to control Phytophthora blight, caused by Phytophthora capsici a experiment was carried out at F.C.A/UNESP, São Manuel Experimental Farm, São Paulo, Brazil, under a simple frame arctype vinil house, 7,0m wide, 40,0m long and 3,0m high, covered with a 100mm plastic film. The experimental design was a randomized block with four replication and five plants per plot and the evaluation period was from September 2000 to July 2001. In the first experimental phase three susceptible sweet pepper commercial hybrids ('Magali-R', 'Elisa' and 'Margarita') were cleft grafted on two resistant rootstocks ('AF-2638' and 'AF-2640') and plants were grown on soil infected with P.capsici, 14 days after transplanting. Ungrafted susceptible hybrids were utilized as a control and grafting compatibility, plant resistance, disease symptom evolution and number of days for flowering were recorded. In the second phase plant height, number weight, length and wall thickness of fruits as well as total and commercial fruit yield of the surviving plants were recorded for nine harvesting dates. Good compatibility between stock and rootstock was observed (93%) and grafted plant did not shower any symptoms of the disease during the evaluation period. The hybrid 'Elisa' was the most susceptible one when grown as ungrafted plants, with the faster disease evolution after soil infectation. Ungrafted plants flowered earlier than grafted ones and rootstocks interfered on plant height depending on the studied combinations. The hybrid 'Magali'grafted on 'AF-2639'produced the highest number of fruits. Among hybrids 'Margarita'was intermediate as far as number and fruit weight is concerned. Grafted plants, besides... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Orientador: Edson Luiz Furtado / Banca: Waldir Cintra de Jesus Junior / Banca: Cláudio Angeli Sansigolo / Resumo: As plantações de eucalipto no Brasil vêm crescendo significativamente ao longo dos anos. Minas Gerais tem 29% da área plantada e esta madeira é destinada quase exclusivamente ao pólo siderúrgico na produção de ferro gusa a partir do carvão vegetal. Portanto, o crescimento da área plantada aliada as condições climáticas, propicia o aparecimento e multiplicação de pragas e doenças. Uma das doenças que vem se tornando de importância econômica é a murcha de Ceratocystis, causada pelo fungo Ceratocystis fimbriata, que é um patógeno típico de xilema secundário. Esta doença foi monitorada no período de 2005 a 2011, em 3 municípios de Minas Gerais, com os dados de incidência da doença no campo foi feito o estudo epidemiológico no espaço e no tempo. A evolução da doença no tempo foi melhor explicada pelo modelo monomolecular, com um coeficiente de regressão superior a 90%. A distribuição da doença ocorre de forma agregada e na linha, podendo-se inferir que as mudas foram levadas contaminadas para o campo, e isto pode ter ocorrido no processo de propagação clonal. Analisando os dados climáticos do banco de dados do WORLDCLIM e o software DIVA-GIS, gerou-se um mapa de favorabilidade da doença para o estado de Minas Gerais, concluindo que as áreas dos municípios estudados são de alta favorabilidade à doença, portanto, o uso de material genético resistente é imprescindível para garantir a produtividade das plantações florestais. Foi analisada a interferência da doença na quantidade e qualidade da madeira e do carvão vegetal, concluindo que este fungo ocasiona perdas significativas de em média R$ 7.000/ha na cadeia produtiva do carvão vegetal / Abstract: Eucalyptus plantations in Brazil have been growing significantly over the years. Minas Gerais has 29% of the planted area, and this wood is destined almost exclusively to the steel pole in the production of pig iron from charcoal. Therefore, the growth of the planted area combined with the climatic conditions, allows the emergence and proliferation of pests and diseases. A disease that is becoming economically important is the Ceratocystis wilt, caused by the fungus Ceratocystis fimbriata, a pathogen that is typical of xylem. This disease was monitored in the period of 2005 to 2011 in three towns in Minas Gerais, having an epidemiological study in space and time been done with the data on incidence of the disease in the field. Disease progression in time is best explained by the monomolecular model with a regression coefficient greater than 90%. As the spread of the disease occurs in the aggregate and on the line (in an aggregated and linear way), it can be inferred that the seedlings were taken to the field already contaminated, and this may have occurred in the process of clonal propagation. Analysing climatic data from the database and software WORLDCLIM DIVA-GIS, a map of favorability was generated about the disease in the state of Minas Gerais, concluding that the areas of the cities studied are highly favorable to the disease, therefore, the use of resistant material is essential to ensure the productivity of forest plantations. We analyzed the influence of the disease in the quantity and quality of wood and charcoal production, concluding that this fungus causes significant losses in average US$ 2.800,00 in this chain / Mestre