Orientadora: Angela Regina Araujo / Banca: Isabele Rodrigues Nascimento / Banca: Nivaldo Boralle / Banca: Adriana Aparecida Lopes / Banca: Luiz Alberto Beraldo de Moraes / Resumo: Fungos são organismos que podem ser encontrados nos mais diversos habitats e constituem um dos maiores grupos sobre a Terra. Em particular, os fungos endofíticos associados a espécies vegetais, são excelentes produtores das mais diversas classes de metabólitos secundários, sendo uma fonte promissora e racional na obtenção de protótipos para os mais diversos usos terapêuticos. Os endófitos do gênero Xylaria pertencentes à família Xylareaceae, constituem um grupo de espécies que produzem substâncias que apresentam as mais diversas atividades biológicas como antitumorais, antibióticas, entre outros. Dentro deste contexto, neste trabalho avaliamos a produção de griseofulvina, um metabólito secundário produzido por Xylaria spp., e de utilização na terapêutica animal e humana. Também foi realizado o estudo químico e biológico de sete espécies diferentes de fungos endofíticos do gênero Xylaria. Estes foram cultivados em meios líquidos comerciais (MDB, Czapek, YM, EM e Nutrient) e sólidos (arroz e milho) para obtenção dos extratos brutos, totalizando 49 extratos. Cinco evidenciaram a produção de griseofulvina e foram submetidos a análises por RMN de 1H e CLAE-DAD para a detecção e quantificação desta substância, respectivamente. O fungo que apresentou maior produção de griseofulvina foi o Xylaria sp., codificado como PR-03 e cultivado em Czapek. Neste meio foi realizado o estudo de aplicação de estímulos, tais como agitação e luz, utilizando planejamento experimental visando a maximi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fungi are organisms that can be found in a diversit y of habitats and constitute one of the largest groups on Earth. In p articular, the endophytic fungi associated with plant species are excellent p roducers of several classes of secondary metabolites, as well a promising ratio nal source in obtaining prototypes for several therapeutic effects. Endophy tes of the genus Xylaria belong to Xylareaceae family, are a group of specie s that produce substances with potential biological activities, including ant itumoral, antibacterial, among others. In this context, this study evaluated the optimal condictions of griseofulvin-producing endophytic fungus from Xylaria spp., for application in animal and human therapy. It was als o conducted chemical and biological study of seven different species of endophytic fungi of the genus Xylaria . The fungal strain was cultivated in commercial li quid (Potato Dextrose Broth, Czapek, Yeast Medium, Malt Extract and Nutrient) and solid media forms (rice and corn) to obtain the crude ext racts (n= 49). Five samples showed griseofulvin production and were an alyzed by 1 H NMR and HPLC-DAD for the detection and quantification of th e substance, respectively. The fungus that showed higher product ion of griseofulvin was Xylaria sp., encoded as PR-03 and cultured in Czapek. In t his environment, the experiments design under light and shaker induc ed stimulus were performed in order to improve the production of the substance. It was observed a significant increase of production under both conditions. At the same time, all the extracts were submetted to bioas says for evaluation of antitumor, antifungal, and acetylcholinesterase act ivities. Two extracts that revealed promising chemical and biological profiles were subjected to chromatographic fractionation for isolation and ide ntification of substances. Two compounds had their structures determined or el... / Doutor

Orientadora: Angela Regina Araujo / Banca: Novaldo Borale / Banca: Geraldo Humberto Silva / Resumo: O fungo endofítico P. stromaticum isolado dos frutos maduros da espécie vegetal E. jambolana foi cultivado em escala ampliada no meio líquido de Malte por 28 dias a 25 oC no modo estático e, no meio sólido de milho tipo canjica por 21 dias a 25 oC no modo estático. Após 28 dias de crescimento no meio líquido, este foi submetido a sucessivas extrações com acetato de etila (AcOEt), que após evaporado forneceu o extrato bruto de Malte AcOEt. O meio sólido, após 21 dias de cultivo, foi extraído com metanol, seguido de filtração e evaporação fornecendo o extrato bruto metanólico. Este foi submetido à partição líquido/líquido com acetato de etila e água, sendo que a fração AcOEt foi evaporada fornecendo o extrato bruto AcOEt. Este foi particionado com acetonitrila e hexano, e após evaporação dos solventes forneceu os extratos acetonitrila (ACN) e hexânico do meio sólido. O extrato ACN do meio sólido passou por novas partições com acetonitrila e hexano, por apresentar ácidos graxos ainda, fornecendo o extrato bruto de milho NP (novas partições). O extrato bruto de Malte AcOEt, foi fracionado em coluna de bancada, sendo coletadas 11 frações (Fr-1 Ps Ma a Fr-11 Ps Ma). Já o extrato bruto de milho NP sofreu partição utilizando-se cartucho de C18, com base em seu cromatograma, resultando em 6 frações (Fr-1 Ps Milho a Fr-6 Ps Milho). Das 6 frações obtidas do extrato de milho NP, escolheu-se trabalhar com a primeira, a qual sofreu partição no CLAE-DAD preparativo, resultando em 8 frações... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The endophytic fungus P. stromaticum isolated from the ripe fruits of the E. jambolana was cultivated in large scale in the malt liquid medium for 28 days at 25 oC in the static mode and in the solid medium of hominy corn for 21 days at 25 oC in static mode. After 28 days of growth in the liquid medium, it was made successive extractions with ethyl acetate (EtOAc). The organic layer was evaporated affording the crude extract of Malt EtOAc. The solid medium, after 21 days of cultivation, was extracted with methanol, followed by filtration and evaporation to give the crude methanolic extract. This was subjected to the liquid/liquid partition with EtOAc and H2O, being this EtOAc fraction evaporated giving the crude EtOAc extract. After that, the extract was partitioned with acetonitrile and hexane, and after the evaporation of the solvents provided the acetonitrile (ACN) and hexane extracts from the solid medium. The ACN extract of the solid medium was partitioned again with ACN and hexane, due the remaining fatty acid, providing the corn crude extract NP (new partitions). The crude extract of Malt EtOAct was fractionated in a chromatographic column, resulting in11 fractions (Fr-1 Ps Ma to Fr-11 Ps Ma). The crude extract of corn NP was fractionated by solid phase extraction in reverse phase (C18), based on its chromatogram, resulting in 6 fractions (Fr-1 Ps Corn to Fr-6 Ps Corn). Among the corn fractions collected, it was chosen the fraction Fr-1 Ps Corn to the chemical studies. This fraction was fractionated by preparative HPLC-DAD resulting in 8 fractions. The crude extract of Malt EtOAc and its fraction and the crude extract of corn NP, were submitted to the chemical evaluation by 1H NMR and biological against the phytopathogenic fungus Cladosporium sphaerospermum (and in the case of corn to C. cladosporioides as well). Besides, anticolinesterasic activity was made, the crude... / Mestre

Orientadora: Angela Regina Araujo / Banca: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Elaise Gonçalves Pierri / Resumo: Historicamente, a maioria dos novos medicamentos tem sido gerada a partir de produtos naturais, os quais são definidos como metabólitos secundários de microrganismos, plantas ou animais. Atualmente o elemento-chave para a investigação de produtos naturais é o acesso a novas fontes biológicas. Nos últimos anos, um grande número de substâncias biologicamente ativas estão sendo encontrados em diversos microrganismos, as quais são produzidas pela ativação de vias biossintéticas onde vários métodos têm sido estudados para a ativação destas. Um dos métodos utilizados com este objetivo é a cultura mista de microrganismos. Metabólitos secundários de fungos têm atraído um interesse considerável, uma vez que muitos deles apresentam estruturas únicas e atividades biológicas relevantes. Uma importante classe de fungos que vem se destacando na produção de novos compostos bioativos são os fungos endofíticos. Diante disso, visando contribuir com o desenvolvimento de novos produtos naturais bioativos e entender como ocorrem as interações entre os microrganismos, além de avaliar seus potenciais biológicos, é que nesse trabalho apresentamos a realização da co-cultura de dois endófitos: Botryosphaeria parva e Saccharicola sp isolados da espécie vegetal Eugenia jambolana. Estes endófitos foram cultivados em escala reduzida (isoladamente) e escala ampliada (co-cultivo) em Czapek (300 mL) para obtenção dos extratos brutos AcOEt. Os extratos brutos AcOEt obtidos foram submetidos a análises químicas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Historically, most new drugs have been generated from natural products, which are defined as secondary metabolites or byproducts of microorganisms, plants or animals. Currently, the key element for the investigation of natural products is the access to new biological sources. In recent years, a large number of biologically active substances are being reported in several microorganisms, which are produced by the activation of biosynthetic pathways where several methods have been studied for their activation. One of the methods used for this purpose is the mixed culture of microorganisms. Secondary fungal metabolites have attracted considerable interest, since many of them have unique structures and relevant biological activities. An important class of fungi that has been prominent in the production of new bioactive compounds are endophytic fungi. Therefore, in this study we present the co-culture of two endophytes: Botryosphaeria parva and Saccharicola sp. isolated from the plant species Eugenia jambolana. Our objective is to contribute to the development of new bioactive natural products and to understand how the chemical interactions of these microorganisms occur, as well as to evaluate their biological potential. These endophytes were cultivated on a reduced scale (isolated) and extended scale (co-culture) in Czapek (300 mL) to obtain the crude extracts AcOEt. The crude AcOEt extracts obtained were submitted to chemical analysis (comparative thin layer chromatography, high ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientadora: Márcia Aparecida Silva Graminha / Banca: André Conzaga dos Santos / Banca: Pio Colepicolo Neto / Resumo: As leishmanioses acometem mais de 12 milhões de pessoas no mundo, principalmente em países da América Latina, sobretudo populações com acesso precário à infraestrutura. A terapêutica atual empregada para estas doenças dispõe de poucas opções e com elevada toxicidade, portanto, torna-se necessária a busca por novos fármacos antileishmaniais, sendo as fontes naturais uma fonte inesgotável de metabólitos bioativos. Neste sentido, este projeto buscou substâncias presentes em macroalgas e fungos endofíticos associados provenientes do continente Antártico que possuam atividade leishmanicida. Coletas algais foram realizadas durante o verão austral na missão XXXIII pelo Proantar, sendo obtidos extratos e fungos endofíticos associados às algas Ascoseira mirabilis e Cystosphaera jacquinotii. Os extratos hexânicos e etanólicos das algas apresentaram atividade leishmanicida, sendo os extratos hexânicos de ambas, escolhidos para fracionamento e caracterização química. O fracionamento levou a quatro frações, as quais apresentaram atividade igual ou superior à observada no extrato. As frações F3 e F6 do extrato hexânico da alga A. mirabilis foram analisadas por CLAE-EM, CLAE-DAD e RMN de 1H e, posteriormente, sub-fracionadas. Verificamos a presença do diisobutilftalato como constituinte majoritário destas frações, sendo que a presença desta substância também foi observada na subfração AmF6.2, obtida a partir de F6, podendo ser esta responsável pela atividade leishmanicida observada. Foram i... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leishmaniasis affects more than 12 million people worldwide mainly in countries of Latin America, especially in populations with precarious acces to health and infrastructure. The current therapy for these diseases has few drug options, which present several drawbacks inluding high toxicity; thus, is mandatory the search for new antileishmanial drugs. For this, natural sources are promissor due to their great diversity and huge number of potential bioactive metabolites. Therefore, this project aimed to identify antileishmanial substances present in antartic macroalgae and their associated endophytic fungi. The algae here analysed were collected during the austral summer at Proantar mission XXXIII. Extracts from the species Ascoseira mirabilis and Cystosphaera jacquinotii were obtained as well as from their endophitic fungi. The hexanic and ethanolic extracts from the algae showed leishmanicidal activity. We have chosen the hexanic fraction to start further characterization of the analysed bioctive extracts. Fractionation of hexanic extract led to four fractions that presented superior or equal activity when compared to that observed in the extract. The most active fractions of A. mirabilis, F3 and F6, were analyzed by HPLC-MS, HPLC-DAD and 1H NMR and then sub-fractionated. We observed the presence of diisobutyl phthalate as their major constituent, as well as in the sub-fraction AmF6.2 obtained from F6, which might be related to the observed leishmanicidal activity. Two endop... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2015-04-22T22:02:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mayane Pereira de Souza.pdf: 4095551 bytes, checksum: 141cda18f0bf92814b3b56dc65eb882c (MD5) Previous issue date: 2012-03-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The plants of the genera Duguetia and Rollinia belonging to the family Anonnaceae have several reports on its composition mainly by the presence of alkaloids and acetogenins. These compounds have proven biological activity as antiparasitic, antitumor, insecticides and antibacterial. However, there is little information about the plant endophytic microorganisms of these genres. In the present work it was presented the chemical study of two strains of endophytic microorganisms from Duguetia stelechantha, and a strain isolated from Rollinia sp. based on results of antimicrobial assays of the extracts on a pilot scale against Candida albicans, Penicillium avellani, Bacillus cereus and cytotoxic assays against three tumor cell lines. Based on the results of these tests were selected strains DgCr22.1b (result> 90% against tumor cell lines) and DgC32.2 (best result against B. cereus) (Duguetia stelechantha) and AnspCr11.1 (Rollinia sp.) for large scale cultivation and chemical study. Were obtained two substances isolated from a strain DgCr22.1b being a polyketide and a xanthone. Strain DgC32.2 five substances have been isolated and identified two of three dyes belonging to class azaphilone and a steroid. Were isolated and identified three substances of lineage AnspCr11.1 which are an isocoumarin, a chromone and an alkenoic acid known as cordyanhydride B. / As plantas dos gêneros Duguetia e Rollinia pertencentes à família Anonnaceae apresentam vários relatos sobre sua composição química principalmente pela presença de alcalóides e acetogeninas. Esses compostos têm atividades biológicas comprovadas como antiparasitários, antitumorais, inseticidas e antibacterianos. Porém, não há muitas informações quanto aos microorganismos endofíticos de plantas destes gêneros. No presente trabalho foi realizado o estudo químico de duas linhagens de fungos endofíticos de Duguetia stelechantha, e uma linhagem isolada de Rollinia sp. baseadas em resultados de ensaios antimicrobianos dos extratos obtidos em pequena escala contra Cândida albicans, Penicillium avellani, Bacillus cereus e ensaios citotóxicos contra três linhagens de células tumorais. Baseados nos resultados destes testes foram selecionadas as linhagens DgCr22.1b (resultado >90% contra linhagens tumorais) e DgC32.2 (melhor resultado contra B. cereus) (Duguetia stelechantha) e AnspCr11.1 (Rollinia sp.) para cultivo em larga escala e estudo químico. Foram obtidas duas substâncias isoladas da linhagem DgCr22.1b sendo um policetídeo e uma xantona dimérica. Da linhagem DgC32.2 cinco substâncias foram isoladas e três foram identificadas sendo dois corantes pertencentes a classe de azafilonas e um esteróide. Foram isoladas e identificadas três substancias da linhagem AnspCr11.1 os quais são uma isocumarina, uma cromona e um ácido alcenoico conhecido como cordianidrido B.

Orientadora: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Cintia Duarte de Freitas Milagre / Banca: Mariana Helena Chaves / Resumo: Sabe-se que os fungos exercem importantes papéis no cotidiano, sendo utilizados na produção de alimentos fermentados e de enzimas de interesse industrial, em processos de biodegradação e tratamento biológico de efluentes, além de auxiliar na agricultura como parte do corpo de decompositores, e ainda na defesa e crescimento de plantas em que vivem em simbiose. Adicionalmente, nos últimos anos, as pesquisas com fungos e outros micro-organismos têm-se intensificado pelo surgimento de evidências crescentes de seu potencial como fonte de substâncias bioativas para o desenvolvimento de agentes terapêuticos, como as penicilinas e cefalosporinas - antibióticos, a mevastatina e lovastatina - redutores de colesterol, ciclosporina e rapamicina-imunossupressores, entre outros. Muitos fungos endofíticos possuem potencial farmacológico, demonstrando atividades como citotóxica, antibacteriana, anticolinesterásica, antifúngica, antiplasmódica, entre outras. Além de indicarem ser fonte de uma grande variedade de novos metabólitos secundários, decorrente de sua quimiodiversidade marcante. Este contexto levou à investigação de uma linhagem fúngica isolada da alga marinha Asparagopsis taxiformis (Delile) Trevisan, identificada como Microascus intricatus. O cultivo desta linhagem em meio PDB por 28 dias, 65 frascos de Erlenmeyer forneceu o extrato AT-07, que foi submetido a partição com acetato de etila. As frações AT-07 F3, AT-07 F4 e AT-07 F6 foram submetidas a procedimentos cromatográficos e l... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fungi play important roles in our daily life as in the production of fermented food and enzymes for industrial applications, biodegradation processes and biological treatment of effluents, in addition to its roles in agriculture, enhancing decomposition, and defense and growth of plants living in symbiosis.Research involving fungi and other microorganisms has been intensified in the last decades owing to growing evidence of their potential as important sources of novel bioactive compounds for the development of therapeutic agents as penicillins, cephalosporins (antibiotics), mevastatin and lovastatin (cholesterol lowering agents), cyclosporine and rapamycin (immunosuppressors), among others.Several endophytic fungal strains exhibit pharmacological potential as cytotoxic, antibacterial, anticholinesterase antifungal, antiplasmodial activities, which has been markedly associated to the huge chemodiversity of their secondary metabolites.Such context prompted us to investigate one fungal strain isolated from marine red alga Asparagopsis taxiformis (Delile) Trevisan, which has been identified as Microascus intricatus.Cultivation of the fungal strain in PDB media for 28 days, Erlenmeyr flasks yielded extract AT-07 partition with etoac extract which was submitted to chromatographic procedures and led to the isolation of natural products belonging to diketopiperazines classes and one isoflavone.The isolated compounds were identified as cyclo-(Pro-Tir), cyclo-(ProPhe), cyclo-(Phe-Phe)... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Angela Regina Araújo / Banca: Marcia Nasser Lopes / Banca: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Luiz Alberto Beraldo de Moraes / Banca: Geraldo Humberto Silva / Resumo: Este trabalho descreve o isolamento de 43 fungos endofíticos associados à espécie vegetal Senna spectabilis, e a triagem química e biológica destes. Os extratos brutos em AcOEt produzidos pelos fungos foram avaliados quimicamente por CCDC, CLAE-DAD e RMN de 1H, e submetidos a bioensaios para avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica, onde se mostram promissores. A partir dos resultados obtidos os fungos Myrothecium gramineum e Acremonium sp. foram selecionados para crescimento em escala ampliada, em meio de cultivo MBD, visando a obtenção do extrato bruto para isolamento e determinação estrutural dos metabólitos produzidos. Nesta etapa foram utilizados dois modos de incubação (estático e sob agitação) para avaliação da influência do modo de crescimento na produção metabólica, evidenciando que não ocorreram mudanças significativas na produção dos metabólitos secundários. Do extrato bruto obtido de M. gramineum foi isolada a Verrucarina A, como um precipitado, durante a solubilização do extrato em MeOH. O sobrenadante foi então submetido a fracionamento cromatográfico e levou ao isolamento de 3 dicetopiperazinas, sendo a ciclo (Pro-Tyr), ciclo (L-Pro-L-Leu) e a ciclo(D-Pro-D-Phe), e 4 tricotocenos, a Verrucarina A (já isolada como precipitado), Roridina A e Isororidina A e a Verrucarina L. Durante o processo de concentração para a obtenção do extrato bruto de Acremonium sp., ocorreu a formação de cristais em forma de filetes que ficaram aderidos ao balão. Os cristais foram separados e identificados como a Citocalasina D. O extrato bruto resultante da separação destes cristais foi submetido a fracionamento cromatográfico levando ao isolamento de 7 substâncias: uma xantona (Fusaridina), 4 isocumarinas [(R)-8-metoxi-meleina; (3S, 4S)-5-carbometoxi-4-hidroximeleína; (3R)-5-carbometoximeleina e (3S)-5-carboetoxi-mele... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work reports the isolation of 43 endophytic fungi associated with Senna spectabilis, and the chemical and biological screening of their extracts. The AcOEt crude extracts produced by fungi were submitted to chemical analysis by TLC, DAD-HPLC, NMR and bioassays to evaluation of antifungal, antioxidant and anticholinesterase potential, which showed promising. The results enabled us to select the fungi Myrothecium gramineum and Acremonium sp. to growth on a large scale for isolation and structural determination of metabolites produced. The fungal strains were cultivated in liquid media PDB to obtaining the crude extracts. In this stage, we used two modes of incubation (static mode and under agitation), to evaluate the influence of the growing mode in production of the secondary metabolites, showing that there were no significant changes in metabolic production. The crude extract of M. gramineum yielded the substance Verrucarin A, as a white precipitated during solubilization of the extract in MeOH. The supernatant was fractioned by CC and preparative HPLC yielding three diketopiperazines [(cicle (Pro-Tyr), cicle (L-Pro-L-Leu) and cicle (D-Pro-D-Phe)] and four trichothecenes [Verrucarin A (already isolated as substance), Roridin A and Isororidin A and Verrucarin L. During the process of concentration of solvents to obtain crude extract of Acremonium sp., there was the formation of crystals in the form of fillets that were attached to the balloon. The crystals were separated and identified like Citocalasin D. The resulting crude extract was submitted to chromatographic fractionation yielding seven substances: one xanthone [Fusaridin, four isocoumarins [(R)-8-methoxi-mellein, (3S, 4S)-5-carbomethoxi-4-hydroximellein, (3R)-5-carbomethoximellein and (3S)-5-carboethoxi-mellein] and the griseofulvin and 7-dechlorogriseofulvin. The substances (3S, 4S)-5-carbomethoxi-4-hydroximellein... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Daniela Alonso Bocchini / Banca: Luis Henrique Souza Guimarães / Banca: Kelly Johana Dussan Medina / Banca: Jonas Contiero / Banca: Eleni Gomes / Resumo: Atualmente, há um crescente interesse na produção de bioetanol celulósico como biocombustível de segunda geração, sendo uma alternativa promissora aos combustíveis fósseis. Fungos tem sido constantemente isolados na busca por novas fontes de celulases e os endofíticos são interessantes para esta finalidade, por serem potenciais produtores de enzimas de degradação de material vegetal, incluindo celulases, e pouco estudados neste sendido. O presente estudo teve por finalidade a avaliação da influência das condições de cultivo (isolado e co-cultivo) para a produção de celulases pelos fungos endofíticos Botryosphaeria sp. AM01 e Saccharicola sp. EJC04, por meio de metodologias estatísticas, além da utilização dos extratos enzimáticos na sacarificação do bagaço de cana-de-açúcar pré-tratado hidrotérmicamente com NaOH, otimizando-se também esta etapa empregando-se as ferramentas estatísticas citadas. Para a condição de co-cultivo dos fungos, a quantidade de substrato (5,7g) e a umidade inicial do substrato (60,6%) foram otimizadas visando maximizar a produção de endoglunacase (121,56 U/g). Para o cultivo isolado de Botryosphaeria sp. AM01, foi possível a produção de endoglunacase (168,99 U/g), empregando a concentração de NaNO3 a 6,0 g/L e 5,0 g como quantidade de substrato. Para o cultivo isolado de Saccharicola sp. EJC04, obteve-se a condição ótima para produção de β-glicosidase (750,37 U/g) na concentração de ureia de 0,0836 g/L, teor de umidade de 49,2% e quantidade de substrat... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: There is a great interest in the production of cellulosic bioethanol as second generation biofuel and it is a promising alternative to fossil fuels. Fungi have been constantly isolated in the search for new sources of cellulases and the endophytics interesting for this purpose, being potential producers of plant material degrading enzymes, including cellulases, and underexploited in this sense.The present study had as purpose the optimization of culture conditions (monoculture and co-cultivation) for the production of cellulases by the endophytic fungi Botryosphaeria sp. AM01 and Saccharicola sp. EJC04, by statistics methodology, and also the use of enzymatic extracts in saccharification of sugarcane bagasse submitted to hydrothermal pretreatment with NaOH, optimizing this step using those statistical tools. For the fungi co-cultivation, the amount of substrate (5.7g) and the substrate initial moisture (60.6%) were optimized to maximize the production of endoglunacase (121.56 U/g). For the monoculture of Botryosphaeria sp. AM01, it was possible to produce endoglunacase (168.99 U/g), using the concentration of NaNO3 at 6.0 g/L and 5.0 g as substrate amount. For the monoculture of Saccharicola sp. EJC04, the optimal condition for β- glycosidase production (750.37 U/g) was obtained using urea at 0.0836 g/L, initial substrate moisture at 49.2% and substrate amount of 3.84 g. The enzymatic extracts obtained under optimized conditions were used in the saccharification of sugarcane bagasse submitted to alkaline hydrothermal pretreatment with NaOH. The pre-treated bagasse characterization indicated 59.52, 31.62 and 11.32% as the contents of cellulose, hemicellulose and lignin, respectively. The saccharification performed with the enzymatic extract produced by Botryosphaeria sp. AM01 was more efficient in glucose (Full abstract, click on electronic access below) / Doutor

Orientador: Daniela Alonso Bocchini / Banca: Kelly Johana Dussan Medina / Banca: Jonas Contiero / Resumo: Os principais desafios para a produção de etanol celulósico se relacionam aos custos de obtenção das celulases, à disponibilização da celulose presente nos materiais lignocelulósicos (para maior rendimento da sacarificação enzimática), bem como à eficiente conversão da glicose liberada em etanol. As celulases microbianas têm sido extensivamente estudadas nos últimos anos, visando a sua aplicação no bagaço de cana-de-açúcar para liberação de açúcares fermentescíveis e posteriormente a produção de etanol celulósico. O presente trabalho teve como objetivo o estudo da produção de celulases por oito fungos endofíticos, por fermentação em estado sólido (FES) e a utilização dos extratos enzimáticos na sacarificação do bagaço de cana-de-açúcar pré-tratado. Os fungos foram cultivados utilizando-se quatro misturas (1:1 p/p) de diferentes substratos lignocelulósicos, sendo selecionada para cada fungo, a mistura que proporcionou as maiores atividades de celulases nos extratos enzimáticos obtidos. Tais enzimas foram utilizadas na sacarificação do bagaço de cana submetido a pré-tratamento hidrotérmico alcalino (NaOH 5% p/v), o qual apresentou a vantagem de gerar uma baixa concentração de inibidores, seguindo três diferentes protocolos de sacarificação. Nesta etapa, foram selecionados os fungos Phomopsis stipata SC 04 (concentrações de glicose de 3,82 e 4,72 mg/mL nos hidrolisados obtidos pelos Protocolos 1 e 2 de sacarificação respectivamente) e Botryosphaeria sp. AM 01 (concentração de gl... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The main challenges for cellulosic ethanol production have been related to cellulases costs, to the availability of cellulose in lignocellulosic materials (for higher yield of enzymatic saccharification), as well as to the efficient conversion of glucose in ethanol. Microbial cellulases have been extensively studied in the last years, aiming its application on sugarcane bagasse to release of fermentable sugars and later the cellulosic ethanol production. The present work had as objective the study of cellulase production by eight endophytic fungi by solid-state fermentation (SSF), and the use of the enzymatic extracts in saccharification of pre-treated sugarcane bagasse. The fungi were cultivated using four mixtures (1:1 w/w) of different lignocellulosic substrates, has being selected for each fungus, the mixture that provided the highest cellulases activities in the enzymatic extracts obtained. These enzymes were used in the saccharification of sugarcane bagasse submitted to alkaline hydrothermal pre-treatment (NaOH 5% w/v), which had the advantage of generates a low inhibitors concentration, following three different saccharification protocols. In this step, the fungi selected were Phomopsis stipata SC 04 (glucose concentration of 3.82 and 4.72 mg/mL in the hydrolysates obtained from saccharification Protocols 1 and 2, respectively), and Botryosphaeria sp. AM 01 (glucose concentration of 4.01 mg/mL in the hydrolysate obtained from saccharification Protocol 2). Experimental ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Maysa Furlan / Banca: Marcelo Aparecido da Silva / Resumo: As espécies da família Eriocaulaceae apresentam estudos químicos na literatura que descrevem a presença de substâncias com potencial biológico, com destaque para a planifolina em Paepalanthus planifolius. Apesar disso, existem poucos dados sobre a química dos microrganismos associados a essas espécies, como fungos endofíticos. Para esse estudo, selecionamos o fungo endofítico Microsphaeropsis arundinis, isolado dos capítulos de P. planifolius. O endófito foi cultivado em meios de cultivo líquido (Caldo Batata Dextrose, Caldo YM, Extrato de Malte, Caldo Nutrient e Caldo Czapek-Dox) e sólido (arroz parboilizado e milho canjica) e os extratos acetato de etila obtidos foram analisados quimicamente quanto a seu perfil cromatográfico por HPLC-PDA e biologicamente a partir da atividade antitumoral contra linhagens de câncer de mama e de câncer de pulmão. O extrato acetato de etila cultivado em arroz parboilizado demonstrou-se o mais ativo frente as linhagens de adenocarcinoma de mama murino (IC50 = 39,91 μg mL-1) e adenocarcinoma de mama humano (IC50 = 51,93 μg mL-1), sendo cultivado em escala ampliada e estudado fitoquimicamente buscando-se o isolamento das substâncias produzidas. A utilização de técnicas espectroscópicas e espectrométricas permitiu a identificação de oito substâncias, sendo as substâncias 1, 2, 3 e 7 inéditas na literatura e a substância 5 descrita pela primeira vez como produto natural. Uma análise biossintética mostra que as substâncias são provenientes da via d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Species of Eriocaulaceae family showed some chemical studies that describe the presence of compounds with biological potential, such as planifolin in Paepalanthus planifolius . Despite these compounds, there are few data about the chemistry of the microorganisms associated with these species, such as endophytic fungi. For this study, we selected the endophytic fungus Microsphaeropsis arundinis, isolated from P. planifolius capitula. The endophyte was cu ltivate in liquid culture media (Potato Dextrose Broth, YM Broth, Malt Extract, Nutrient Broth and Czapek - Dox Broth) and solid culture media ( parboiled rice and corn) and the ethyl acetate extracts were chemically analyzed by HPLC - PDA and biologically eval uated against adenocarcinoma cell lines using MTT assay. The ethyl acetate extrac t cultivated in parboiled rice was the most active one against murine breast adenocarcinoma (IC 50 = 39,91 μg mL - 1 ) and human breast adenocarcinoma (IC 50 = 51,93 μg mL - 1 ), being select to cultivated on an enlarged scale and fractionated result in the isolation of major compounds . The use of spectroscopic and spectrometric techniques result in the ide ntification of eight compounds, with 1 ( 2Z, 5E ) - 4,7,9 - trihydroxy - 2,5 - decadienoic acid) 2 ( ( 2Z, 5E ) - 4 - acetoxy - 7,9 - dihydroxydeca - 2,5 - dienoic acid ), 3 ( ( 2Z,5E ) - 7 - acetoxy - 4,9 - dihydroxydeca - 2,5 - dienoic acid) and 7 ( 1 - (2,5 - dihydroxypheny l) - 3' - oxobutan - 2' ' - yl acetate) unpublished in ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre