Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-06T16:54:49Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 650913 bytes, checksum: b9f17c4a57a8b906d67c928beb6ed056 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T16:54:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 650913 bytes, checksum: b9f17c4a57a8b906d67c928beb6ed056 (MD5) Previous issue date: 2015-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os fungos endofíticos constituem um grupo de micro-organismos produtores de metabólitos secundários bioativos. Dentro desta perspectiva, foi estudado o potencial antimicrobiano do endofítico Cochliobolus sativus, isolado do feijoeiro comum Phaseolus vulgaris. Foi investigada a capacidade deste fungo em produzir metabólitos secundários com atividade antifúngica e antibacteriana em diferentes condições de crescimento, levando em consideração o meio de cultura, o fotoperíodo e o tempo de incubação. Os extratos gerados nas diferentes condições foram testados contra quatro fitopatógenos de importância agrícola e bactérias Gram-positivas e Gram-negativas de interesse médico e industrial, utilizando o método de diluição em ágar e difusão em ágar, respectivamente. O extrato que apresentou os melhores resultados de inibição determinou a melhor condição de crescimento para a síntese desses compostos. Foi observado que a atividade do extrato E4 nos micro- organismos testados foi superior a atividade dos demais extratos, apresentando inibição significativa de 52%, 29,69% e 8,16% do crescimento micelial dos fungos Sclerotinia sclerotiorum, Rhizoctonia solani e Fusarium oxysporum. A inibição do fitopatógeno Colletotrichum lindemuntianum não foi significativa. Quanto as bactérias, a atividade dos extratos brutos só foi observadas nas Gram-positivas Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis e Enterococcus faecalis, apresentando os melhores halos de inibição, pelo extrato bruto 4, de 12 mm, 10 mm e 6,8 mm, respectivamente. A menor MIC (concentração mínima inibitória) do extrato bruto foi contra S. aureus (MIC = 32 μg mL -1 ), enquanto em B. subtillis e E. faecalis foi de 68 μg mL -1 . Sendo assim, foi selecionada a condição de crescimento correspondente ao extrato bruto E4 para otimização da síntese de metabólitos secundários em larga escala. Ensaios biológicos foram realizados, para averiguação da influência do pH do filtrado fúngico na extração com acetato de etila. Os resultados indicaram que não há necessidade de acidificação ou alcalinização do filtrado para se obter os compostos bioativos. Posteriormente, os extratos brutos foram submetidos a análises de cromatografia à gás, apontando inicialmente, para dois compostos majoritários. Procedimentos futuros serão empregados para o isolamento e caracterização completa desses compostos e será testada a capacidade do fungo para inibir o crescimento de fitopatógenos in vivo. / From this perspective, we investigated the potential antimicrobial activity of Cochliobolus sativus endophyte, isolated from the common bean Phaseolus vulgaris. We investigated the ability of this fungus to produce antifungal and antibacterial secondary metabolites in different growth conditions, taking into account the culture medium, photoperiod and incubation time. Extracts of the culture media generated under the various growth conditions were tested against four phytopathogenic fungi of agricultural importance and against gram- positive and gram-negative bacteria of medical and industrial interest, using the agar dilution method and agar diffusion, respectively. The extract that showed the best inhibition results determined the best growth condition for the synthesis of these compounds. Extract E4 showed the higher antifungal and antibacterial activities inhibiting 52%, 29.69%, and 8.16% of the mycelial growth of the fungus Sclerotinia sclerotiorum, Rhizoctonia solani and Fusarium oxysporum, respectively. Also, this extract presented significant activity against gram-positive bacteria Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, and Enterococcus faecalis,producing inhibition zones of 12 mm, 10 mm, and 6.8 mm in diameter, respectively. MIC (minimum inhibitory concentration) values were determined as 32 ug mL -1 for S. aureus and 68 ug mL -1 for B. subtilis and E. faecalis . Therefore, the growth conditions that lead to extract E4 were selected for large scale fermentation and isolation of bioactive metabolites. Biological assays were performed to investigate the influence of the pH of the culture filtrates on the of extraction of the metabolites. The results indicated that there is no need for acidification or alkalinization of the filtrate to improve the extraction of the bioactive compounds. Subsequently, the crude extracts were subjected to analysis by Gas-Chromatography-Mass Spectrometry, pointing initially to two major compounds. Future procedures will be applied to the complete isolation and characterization of these compounds, which will be tested for its ability to inhibit in vivo growth of pathogens.

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:20:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-24. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:01Z : No. of bitstreams: 1 000854407_20170724.pdf: 663761 bytes, checksum: 60eaa36c360bd21a72c549385424c3ff (MD5) Bitstreams deleted on 2017-07-24T11:34:16Z: 000854407_20170724.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-07-24T11:35:24Z : No. of bitstreams: 1 000854407.pdf: 8174488 bytes, checksum: 9e24d2d63d9e50b4f003bc5a41502cda (MD5) / Os fungos são considerados fontes promissoras de compostos bioativos com potencial aplicação na indústria alimentícia, agricultura e medicina, e de fato, diversos medicamentos utilizados na saúde pública são originárias de fungos. Estes são encontrados em vários ecossistemas, entre os quais podemos citar os que vivem no interior das espécies vegetais. Estes micro-organismos são denominados de endófitos e tem se revelado uma fonte promissora de metabólitos bioativos. Dentro deste contexto, este trabalho foi idealizado, objetivando a obtenção de substâncias potencialmente bioativas a partir do estudo químico e biológico dos extratos produzidos pelos fungos endofíticos Camarops sp., Periconia atropurpurea e Pseudofusicoccum stromaticum isolados de espécies vegetais do Cerrado e, o estudo epigenético de Phoma sp. isolado de espécie vegetal do Deserto de Sonora, utilizando no cultivo o modificador epigenético SAHA. Estes endófitos foram cultivados em escala reduzida em meios de cultivo líquidos e sólidos para obtenção dos extratos brutos, os quais foram submetidos a análises químicas (CCDC, HPLC e RMN de 1H) e biológicas (antifúngico, anticolinesterásico e citotóxico). Todos os extratos brutos apresentaram pelo menos uma atividade biológica, o que adicionado às análises químicas permitiram selecionar os meios de cultivo adequados para o crescimento em escala ampliada e, isolamento dos metabólitos secundários. Do cultivo de Camarops sp. no meio sólido de Milho isolou-se cinco substâncias, das quais quatro são inéditas 3-((1S,2S)-1,2-dihidroxibut-3-enil)-4-((E)-pent-1-enil)furan-2(5H)-ona (1), 3, 5, 9-trihidroxi presilfiperfolano (2), deacetilbotridial (3), ácido (E)-2,4-dimetilocta-2-enóico (4) e, ácido (E)-2,4-dimetilnon-2-enóico (5), os compostos 4 e 5 foram ativos na inibição da enzima acetilcolinesterase. Do extrato, obtido do meio líquido de Malte, de... / Fungi are considered promising sources of bioactive compounds with potential application in the food, agriculture and medicine industry, and in fact, many drugs used in public health originate from fungi. These are found in various ecosystems, among which we can mention those who live inside the plant species. These microorganisms are called endophytes and have proved to be a promising source of bioactive metabolites. Within this context, this work was carried out, aiming to obtain potentially bioactive substances from chemical and biological study of extracts produced by the endophytic fungi Camarops sp., Periconia atropurpurea and Pseudofusicoccum stromaticum isolated from plant species of the Cerrado and epigenetic studies of Phoma sp. isolated from plant species of the Sonoran Desert using in cultivation the epigenetic modifier SAHA. These endophytes were grown on small scale in liquid culture media and solid to obtain the crude extract. These were subjected to chemical analysis (TLC, HPLC and 1H NMR) and biological (antifungal, anticholinesterase and cytotoxic). All crude extracts showed at least one biological activity, which added the chemical analysis allowed to select the culture medium of appropriate for growth in large scale and isolation of secondary metabolites. The growing of Camarops sp. in solid medium of corn were isolated five compounds of which four are new 3-((1S,2S)-1,2-dihydroxybut-3-enyl)-4-((E)-pent-1-enyl)furan-2(5H)-one (1), 3, 5, 9-trihydroxy presilphiperfolane (2), deacetyl-botrydial (3), (E)-2, 4-dimetilocta-2-enoic acid (4), and (E)-2, 4-dimetilnon-2-enoic acid (5), compounds 4 and 5 were active in inhibiting the enzyme acetylcholinesterase. From the extract obtained from the liquid medium Malt, of P. atropurpurea were isolated the compounds 4,5-diethyl-3,4,5,6-tetrahydrobenzo[c][1,6]dioxecine-1,8-dione (6) and periconicina B (7). From the cultivation of P. stromaticum...

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2209.pdf: 3433970 bytes, checksum: f1696bf3d4dba44ef3cb8eb1b129cdf5 (MD5) Previous issue date: 2008-10-11 / Financiadora de Estudos e Projetos / This work describes the investigation of part of the secondary metabolism of actinomicete Streptomyces clavuligerus and endophytic filamentous fungus Penicillium sp isolated from Murraya paniculata; Penicillium brasilianum and Aspergillus aculeatus isolated from Melia azedarach and Penicillium griseoroseum isolated from the grains of Coffea arabica. Preliminary tests were realized to define the best composition of medium culture and the best condition of cultivation Streptomyces clavuligerus. On the other hand, the endophytic fungus were cultivated in rice and Czapec´k (medium liquid). The anthranilic acid and the 7-hydroxy-2- methyl-chromone were identified from the extracts of S. clavuligerus by spectroscopic methods 1D e 2D NMR and mass spectrometry. Methodologies of analysis for detection of β-lactam antibiotics were developed by liquid chromatography combined with mass spectrometry. The identification was based on studies of standard compounds and comparison with literature data. These methodologies were efficient in the analysis of this type of substances and they allowed the detection and identification of β-lactam antibiotics such as the penicillin N, the cephamycin C, deacetoxy-cephalosporin C and the clavulanic acid in small amounts in S. clavuligerus the extracts. In the endophytic fungus extracts were possible to identify the 6-aminopenicillanic acid, precursor of the penicillin G and metabolites no β-lactams as nucleotides thymine and adenine. / Este trabalho descreve a investigação química de uma parte do metabolismo secundário do actinomiceto Streptomyces clavuligerus e dos fungos endofíticos filamentosos Penicillium s.p isolado de Murraya paniculata; Penicillium brasilianum e Aspergillus aculeatus isolados de Melia azedarach e Penicillium griseoroseum isolado dos grãos de Coffea arabica. Inicialmente, foram realizados testes preliminares para definir a melhor composição do meio de cultura e as melhores condições de cultivo para Streptomyces clavuligerus, já os fungos endofíticos foram cultivados em arroz e em meio líquido Czapec k. Dos extratos de S. clavuligerus foram identificados, por métodos espectroscópicos de RMN 1D e 2D e espectrometria de massas, o ácido antranílico e a 7-hidroxi-2-metilcromona. Com o objetivo de determinar a presença de antibióticos β-lactâmicos e outros metabólitos nos extratos foram desenvolvidas metodologias de detecção por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas. A identificação das substâncias foi feita com base no estudo de padrões comerciais e levantamento bibliográfico. Estas metodologias se mostraram eficientes na análise deste tipo de substâncias e permitiu a detecção de antibióticos β-lactâmicos como a penicilina N, a cefamicina C, a deacetoxicefalosporina C e o ácido clavulânico nos extratos de S. clavuligerus. Estas metodologias foram aplicadas nas análises dos extratos fúngicos onde foi identificado o ácido 6-aminopenicilânico, precursor da penicilina G e metabólitos não β-lactâmicos como os nucleotídeos timina e adenosina.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-09-24Bitstream added on 2014-06-13T20:26:04Z : No. of bitstreams: 1 zanardi_gj_dr_araiq.pdf: 7757680 bytes, checksum: 124090a2cfedea428566b448f77acc17 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho descreve o isolamento de 43 fungos endofíticos associados à espécie vegetal Senna spectabilis, e a triagem química e biológica destes. Os extratos brutos em AcOEt produzidos pelos fungos foram avaliados quimicamente por CCDC, CLAE-DAD e RMN de 1H, e submetidos a bioensaios para avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica, onde se mostram promissores. A partir dos resultados obtidos os fungos Myrothecium gramineum e Acremonium sp. foram selecionados para crescimento em escala ampliada, em meio de cultivo MBD, visando a obtenção do extrato bruto para isolamento e determinação estrutural dos metabólitos produzidos. Nesta etapa foram utilizados dois modos de incubação (estático e sob agitação) para avaliação da influência do modo de crescimento na produção metabólica, evidenciando que não ocorreram mudanças significativas na produção dos metabólitos secundários. Do extrato bruto obtido de M. gramineum foi isolada a Verrucarina A, como um precipitado, durante a solubilização do extrato em MeOH. O sobrenadante foi então submetido a fracionamento cromatográfico e levou ao isolamento de 3 dicetopiperazinas, sendo a ciclo (Pro-Tyr), ciclo (L-Pro-L-Leu) e a ciclo(D-Pro-D-Phe), e 4 tricotocenos, a Verrucarina A (já isolada como precipitado), Roridina A e Isororidina A e a Verrucarina L. Durante o processo de concentração para a obtenção do extrato bruto de Acremonium sp., ocorreu a formação de cristais em forma de filetes que ficaram aderidos ao balão. Os cristais foram separados e identificados como a Citocalasina D. O extrato bruto resultante da separação destes cristais foi submetido a fracionamento cromatográfico levando ao isolamento de 7 substâncias: uma xantona (Fusaridina), 4 isocumarinas [(R)-8-metoxi-meleina; (3S, 4S)-5-carbometoxi-4-hidroximeleína; (3R)-5-carbometoximeleina e (3S)-5-carboetoxi-mele... / This work reports the isolation of 43 endophytic fungi associated with Senna spectabilis, and the chemical and biological screening of their extracts. The AcOEt crude extracts produced by fungi were submitted to chemical analysis by TLC, DAD-HPLC, NMR and bioassays to evaluation of antifungal, antioxidant and anticholinesterase potential, which showed promising. The results enabled us to select the fungi Myrothecium gramineum and Acremonium sp. to growth on a large scale for isolation and structural determination of metabolites produced. The fungal strains were cultivated in liquid media PDB to obtaining the crude extracts. In this stage, we used two modes of incubation (static mode and under agitation), to evaluate the influence of the growing mode in production of the secondary metabolites, showing that there were no significant changes in metabolic production. The crude extract of M. gramineum yielded the substance Verrucarin A, as a white precipitated during solubilization of the extract in MeOH. The supernatant was fractioned by CC and preparative HPLC yielding three diketopiperazines [(cicle (Pro-Tyr), cicle (L-Pro-L-Leu) and cicle (D-Pro-D-Phe)] and four trichothecenes [Verrucarin A (already isolated as substance), Roridin A and Isororidin A and Verrucarin L. During the process of concentration of solvents to obtain crude extract of Acremonium sp., there was the formation of crystals in the form of fillets that were attached to the balloon. The crystals were separated and identified like Citocalasin D. The resulting crude extract was submitted to chromatographic fractionation yielding seven substances: one xanthone [Fusaridin, four isocoumarins [(R)-8-methoxi-mellein, (3S, 4S)-5-carbomethoxi-4-hydroximellein, (3R)-5-carbomethoximellein and (3S)-5-carboethoxi-mellein] and the griseofulvin and 7-dechlorogriseofulvin. The substances (3S, 4S)-5-carbomethoxi-4-hydroximellein... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-17Bitstream added on 2014-06-13T20:06:36Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_cm_dr_araiq.pdf: 6887141 bytes, checksum: 82b00c7d4674c3606654ce87230ecfce (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este trabalho, descreve a busca de substâncias bioativas a partir do estudo químico e biológico dos extratos brutos produzidos pelos fungos endofíticos AM-01 identificado como Penicillium sp1, AM-02 e AM-03 não identificados e AM-04, também pertencente ao gênero Penicillium, que foram isolados das folhas de Alibertia macrophylla. Os fungos endofíticos isolados, foram cultivados em meio líquido MBD, e sólido (milho) a 25oC, sob agitação, e no modo estático, respectivamente. Para o meio líquido, o caldo foi separado do micélio e submetido à partição com AcOEt, fornecendo os extratos brutos após a evaporação do solvente. Para o meio sólido, foi realizado uma extração com metanol, seguido de filtração e evaporação do solvente, originando os extratos brutos. Após análises por RMN de ¹H e CLAE-DAD, os extratos brutos obtidos em milho, foram fracionados por cromatografia em coluna, seguida de separação via Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAEprep.). O extrato bruto de AM-01 (Penicillium sp1) forneceu seis substâncias da classe das isocumarinas, sendo duas inéditas. O fracionamento cromatográfico do extrato bruto de AM-02, conduziu ao isolamento de três sesquiterpenos inéditos identificados como Xylarenonas C, D e E. Também do extrato bruto de AM-02 foi isolado um composto furânico identificado como (E)-5-(1- hidroxialil)-4-(pent-1-enil)-2,5-diidrofurano-3-ácido carboxílico. O fracionamento cromatográfico de AM-04, permitiu o isolamento de um benzenóide, identificado como orcinol. O estudo químico dos extratos brutos obtidos em MBD, de AM-03 e AM-04, permitiram o isolamento das dicetopiperazinas ciclo (Pro-Try) e ciclo (L-Pro- L-Val), além da uracila. As substâncias isoladas foram identificadas por análises de RMN 1D e 2D e espectrometria de massas, bem como por comparação com dados da literatura... / This work describes the search for bioactive substances from the chemical/biological of the crude extracts produced by endophytic fungi AM-01 identified as Penicillium sp1, AM-02, AM-03 and AM-04 also belonging to the genus Penicillium isolated from the leaves of Alibertia macrophylla. The endophytic fungal isolates were grown in liquid medium and solid MBD to 25 °C under shaking and static mode, respectively. For the liquid medium the mycelium was separated from the broth and subjected to partition with AcOEt, giving the crude extracts after evaporation of the solvent. For solid medium, the extraction was performed with MeOH, followed by filtration and evaporation of the solvent yielding the crude extracts. After analysis by the ¹H NMR and HPLC-DAD, the crude extracts from maize were fractionated by chromatography on a column followed by separation using High Performance Liquid Chromatography (HPLCprep.). The crude extract of AM-01 (Penicillium sp1) provided six isocoumarins, two news. Chromatographic fractionation of the crude extract of AM-02 led to the isolation of three novel sesquiterpenes identified as Xylarenonas C, D and E and a furanic compound identified as 2,5-dihydro-5-(1-hydroxyallyl)-4-(E)-pent-1-enyl)furan-3-carboxylic acid. Chromatographic fractionation of AM-04 allowed the isolation of a benzenoid, identified as orcinol. The chemical study of AM-03 crude extracts and AM-04 cultivated in MDB allowed the isolation of diketopiperazines cyclo (Pro-Try), cyclo (L-Pro-L-Val), and uracil. The substances isolated were identified through analysis of 1H NMR, mass spectrometry and by comparison with literature data. The crude extracts and pure substances were submited for trials for antifungal agents, antioxidants, anticholinesterasic and inhibition of protease. All substances showed biological activities.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-08-17Bitstream added on 2014-06-13T20:26:07Z : No. of bitstreams: 1 cafeu_mc_dr_araiq.pdf: 2687839 bytes, checksum: 6f78bffb8a9f427b48e9b75f8cda9db6 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho descreve a triagem de 21 fungos endofíticos associados a espécies vegetais de Cerrado e Mata Atlântica. Os extratos brutos fornecidos por estes fungos foram avaliados quimicamente (CLAE e RMN1H) e submetidos a bioensaios para avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica, onde se mostraram promissores. Após esta triagem, os fungos Xylaria sp. E Colletotrichum crassipes, associados a Casearia sylvestris, foram selecionados para o estudo químico/biológico. Estes fungos foram cultivados nos meios líquido (MDB) e sólido (milho) para obtenção dos extratos brutos. O extrato bruto de Xylaria sp. em milho foi submetido a fracionamento cromatográfico e levou ao isolamento da griseofulvina, 7-desclorogriseofulvina e citocalasina B, enquanto que o extrato obtido do meio líquido conduziu ao isolamento da citocalasina D, citocalasina C e 5-carbóxi-6-hidroxi-3-metil-3,4- diidroisocumarina. Após fracionamento do extrato bruto do endófito C. crassipes no meio líquido MDB foram isoladas 8 substâncias da classe de dicetopiperazinas, N-(2-feniletil)acetamida, tirosol e as substâncias inéditas 1-hidroxi-1-feniletil-tirosol e (6-metil-3- (feniletóxi)-1,4-dioxan-2-il)metanol. Algumas substâncias puras foram submetidas à bioensaios e apresentaram potencial bioatividade frente aos fungos fitopatogênicos Cladosporium cladosporioides e C. sphaerospermum e nos ensaios antioxidante e anticolinesterásico. As citocalasinas D e B isoladas durante este trabalho e outras 5 citocalasinas isoladas anteriormente foram submetidas à avaliação da citotoxicidade utilizando linhagens de células de adenocarcinoma murino e se mostraram muito ativas. Os fungos endofíticos Xylaria sp. e C. crassipes foram utilizados em biotransformação do substrato 4-etilciclohexanona. Este experimento foi realizado através do cultivo... / This work describes the screening of 21 endophytic fungi from plant species from Cerrado and Atlantic Forest. The crude extracts produced by these fungi after fermentation in potato dextrose broth (PDB) were evaluated by HPLC, 1HNMR and potential biological activities: antifungal, antioxidant and anticholinesterasic. After screening, the extracts of Xylaria sp. and Colletotrichum crassipes, isolated from Casearia sylvestris, were selected, based on the chemical/biological results. These endophytic fungi were cultivated in PDB and corn for crude extract preparation. The crude corn extract of Xylaria sp. led to isolation of griseofulvin, 7- dechlorogriseofulvin and cytochalasin B while the crude PDB extract led to isolation of cytochalasin C, cytochalasin D and 5-carboxy-6- hidroxy-3-methyl-3,4-dihydroisocoumarin. The crude PDB extract of Colletotrichum crassipes led to isolation of eight diketopiperazines, N-(2-phenylethyl)acetamide, tyrosol, 1-hidroxy-1- phenylethyl-tyrosol and (6-methyl-3-(phenethyloxy)-1,4-dioxan-2- yl)methanol. The some of them pure compounds showed potential antifungal activity against Cladosporium cladosporioides and C. sphaeropermum, antioxidant and anticholinesterasic activities. The Cytochalasins D and B, isolated in this work, and other five cytochalasins produced by Xylaria sp.1 showed potential activity for cytotoxic activity against adenocarcinomatous murine cells. The fungi Xylaria sp. and C. crassipes were evaluated as biocatalysts for biotransformation of 4-ethylcyclohexanone. Four biotransformation products were isolated. Their structures were established by spectroscopic methods, including the application of bidimensional NMR techniques and comparison with published data.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-20Bitstream added on 2014-06-13T19:45:05Z : No. of bitstreams: 1 leptokarydis_ih_dr_araiq.pdf: 4347278 bytes, checksum: 74059159e4a0a5ee40f9805bfa0d6f0d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os fungos, diferente dos vegetais são heterotróficos, mais especificamente quimiorganotróficos, por suas características específicas pertencem a um reino separado. Alguns dos fungos através de sua evolução se especializaram em invadir os espaços intercelulares das plantas passando a sobreviver dentro dos seus hospedeiros, não provocando nenhuma patologia. Estes microrganismos são denominados de fungos endofíticos. A disputa por alimentos entre os fungos no interior das espécies vegetais, gerou a necessidade dos fungos produzirem metabolitos secundários com atividades contra outros microrganismos, podendo assim demarcar seu território. Todo este processo deve acontecer de forma a não causar patologias na planta que é a fonte de seu alimento, em alguns casos essas relações de mutualismo e comensalismo se aprimoraram sendo muito comum alguns vegetais possuirem fungos endofíticos protegendo contra pragas insetos e patógenos. Este trabalho descreve o isolamento e a purificação dos fungos endofíticos associados às folhas, caules, raízes e sementes da espécie vegetal Michela champaca. Foram isolados 8 fungos, sendo 3 dos caules, 4 das folhas, 1 das raízes, nenhum fungo foi isolado das sementes. Os extratos brutos produzidos por estes fungos em caldo de dextrose e batata foram avaliados quimicamente (CLAE-DAD e RMN1H) e submetidos à bioensaios para avaliação da potencialidade anticancerígena, antifúngica e anticolinesterásica. Todos os extratos apresentaram atividade contra os fungos fitopatogênicos Cladosporium cladosporioides e Cladosporium sphaerospermum e 40% apresentaram atividade frente às linhagens mutantes de Saccharomyces cerevisiae. Após esta triagem, os fungos endofíticos Mc-8R (ainda não identificado) e Colletotrichum gloeosporioides (Mc-7F) foram selecionados para estudo químico/biológico. / Some fungal species, through their evolution, have specialized in invading plants and surviving inside their hosts causing no warm them. These microorganisms have been called endophytic which in the invasion process, produce chemical substances that inhibit competitors to invade their neighborhood and thus survive in harmony with the host. This work seeks to evaluate the chemical diversity of substances from endophytic fungi associated to Michelia champaca L. that present biological activity by isolating and identification of their secondary metabolites. This work resulted in the isolation of eight fungi species and selection of 2 strains which presented strong antifungal activity against Cladosporium cladosporioides and C. sphaerospermum, both of them pathogenic fungus; and a weak antitumor activity against mutant strains of Saccharomyces cerevisiae. The first one was codified as Mc-8R and chromatographic fractionation of its EtOAc extract allowed the identification of the Pirenocines A (1), E (2) and B (3) and the Pirenochaetic acids, C (4), A (5) and B (6), and in addition to the novel (7) and (8). Ergosterol (9), was found in the hexanic extract obtained from growing Mc-8R in rice, and the Ergosterol peroxide (10), which was isolated from the hexanic extract in corn. The other selected fungi species was identified as Colletotrichum gloeosporioides. The fractioning of its EtOAc extract led to the isolation of the known substances as Uracil (11), cyclo-(S*-Pro-S*-Tyr) (12), cyclo-(S*-Pro-S*-Val) (13), 2-Aminophenyl acetic acid (2-APA), (14), p-Hydroxyphenylacetic acid (15), 4-Hydroxybenzamide (16) and (2-Hydroxy-phenyl)- acetic acid (17), in addition to the novel compounds (18) and (19). 2-Hexylidene-3-methylsuccinic acid (20) was also identified as major compound from the fungus Mc-C3, (Xylaria sp.).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-20Bitstream added on 2014-06-13T18:58:41Z : No. of bitstreams: 1 gubiani_jr_me_araiq.pdf: 4375602 bytes, checksum: ebf0911b0c298d741ce239b8375476b9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A busca por novos produtos para as indústrias farmacêuticas e agroquímicas é um processo que requer otimização contínua. Apesar dos avanços nos processos envolvidos no planejamento racional de fármacos, incluindo química combinatória e ensaios em larga escala, os produtos naturais constituem a estratégia de maior sucesso para a descoberta de novas drogas. Sendo assim, este trabalho foi idealizado, objetivando a obtenção de substâncias potencialmente bioativas a partir do estudo químico e biológico do extrato metanólico produzido pelo fungo endofítico Camarops sp. isolado das folhas de Alibertia macrophylla (Rubiaceae). O endófito Camarops sp. foi cultivado em escala ampliada, utilizando meio de cultivo sólido milho, por 21 dias a temperatura ambiente no modo estático. Os extratos metanólico e acetonitrila obtidos foram avaliados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com detector de arranjo de diodos e por Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio, e submetidos aos ensaios para a avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante, anticolinesterásica e anticancerígena. Os resultados evidenciaram extrato e frações com uma variação metabólica intensa e potencialmente bioativos principalmente contra a inibição da enzima acetilcolinesterase. O extrato acetonitrila foi submetido a fracionamento cromatográfico e levou à identificação e determinação estrutural de oito substâncias, sendo estas, (S)-mevalonolactona (1), para-hidroxibenzaldeído (2), Ácido (E)-5-(1-hidroxialil)-4-(pent-1-enil)-2,5-diidrofurano-3-carboxílico (3), azepan-2-ona (4), xylarenona D (5), xylarenona F (6), xylarenona G (7), sendo as duas últimas substâncias inéditas, e xylarenona C (8). Este é o primeiro relato de mevalonolactona obtida de fungo endofítico, substância esta muito utilizada para... / The search for new products to the pharmaceutical and agrochemical industry is a process that requires continuous optimization. Despite advances in the processes involved in rational planning of drugs, including combinatorial chemistry and tests in large scale, the natural products constitute the most successful strategy for the discovery of new drugs. Thus, this work was idealized aiming the obtaining of potentially bioactive substances from the chemical and biological study of methanolic extract produced by the endophytic fungus Camarops sp. isolated from the leaves of Alibertia macrophylla (Rubiaceae). The endophyte Camarops sp. was cultivated in large scale using maize solid culture medium for 21 days at room temperature in the static mode. The methanolic and acetonitrile extracts obtained were evaluated by High Efficiency Liquid Chromatography with diode array detector and by Nuclear Magnetic Resonance of Hydrogen, and submitted to tests for evaluation of antifungal, antioxidant, anticholinesterase and anticancer potenciality. The results showed extract and fractions with an intense metabolic variation and potentially bioactive principally against the inhibition of the enzyme acetylcholinesterase. The acetonitrile extract was submitted to chromatographic fractionation and led to the identification and structural determination of eight substances, being, (S)-mevalonolactone (1), para-hidroxybenzaldehyde (2), acid (E)-5-(1-hidroxyallylic)-4-(pent-1-enyl)-2,5-dihydrofuran-3-carboxylic (3), Azepan-2-one (4), xylarenone D (5), xylarenone F (6), xylarenone G (7), being the last two ones novel substances, and xylarenone C (8). This is the first report of mevalonolactone obtained from endophytic fungus, substance much used for cosmetics, and also the first report of Azepan-2-one as a natural product, which is much used in the making... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-18Bitstream added on 2014-06-13T20:19:05Z : No. of bitstreams: 1 cardoso_p_me_araiq.pdf: 3362047 bytes, checksum: fcc1f18d091d35b1b0091e28b5cadc70 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O fungo endofítico Colletotrichum gloeosporioides isolado de Garcinia xanthochymus, foi cultivado em pequena escala nos meios líquidos, (400 mL) MDB, Extrato de Malte, YM, Czapek e em meio sólido (150 g) de milho tipo canjica, a 28ºC, em regime estático. Após triagem por ensaios biológicos, e análise por 1H RMN e HPLC-DAD, os meios de milho e extrato de malte foram selecionados para o estudo químico, sendo cultivados em larga escala. As matrizes brutas foram submetidas a estratégias de separação e de desreplicação utilizando as técnicas hifenadas: cromatografia líquida acoplada a detector de arranjo de diodos e espectrometria de massas de alta resolução, cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas e também a ressonância magnética nuclear, sendo a detecção dos constituintes majoritários realizada in silico, através do uso de bases de dados públicas e pertencentes ao NuBBE. Os experimentos realizados permitiram a detecção de 14 substâncias: 6 por CG-MS (extrato DCM de milho) – dihexadecanoato de glicerila (1); trioctadec-9-enoato de glicerila (2); sn1`, 2` octadeca-9,12-dienoato de glicerila (3); sn1`,3` octadeca-9,12-dienoato de glicerila (4); ácido 6,11-hexadecanóico (5); geranilinalol (6); e 7 por HPLC-DAD-HRMS: colletodiol (7); fischerina (8); sambutoxina (9); micosporina-glicina (10); ciperina (11); micosporina serina (12); arginomicina (13) e aspergillomarasmina B (14). Os compostos 2, 3 e 4, majoritários na matriz bruta foram isolados. Os metabolitos detectados por HPLC-DAD-HRMS (7-10) foram também detectados por 1H RMN / Colletotrichum gloeosporioides, an endophytic fungi isolated from Garcinia xanthochymus, was initially cultivated on the following liquid media (400 mL): MDB, YM, Czapek and static solid medium (150 g) using bleached corn at 28 C. After careful screening using bioassays, 1H NMR and HPLC-DAD, the corn and malt extract were selected for further studies and large-scale growth. The crude matrixes were submitted to several separation strategies using dereplication and hyphenated techniques such as high performance liquid chromatography coupled to a diode array detector (HPLC-DAD), high resolution mass spectrometry (HRMS), gas chromatography coupled to a mass spectrometer (GC-MS) as well as nuclear magnetic resonance (NMR). Most of the detected molecules were achieved using an in silico approach towards the data mining of public and NuBBE’s databases. This approach lead us to detect 14 substances; 6 by means of CG-MS (dichloromethane extract from corn’s media): glyceril dihexadecanoate (1); glyceril trioctadec-9-enoate (2); sn1`, 2` glyceril octadec-9,12-dienoate (3); sn1`, 3` gliceryl octadec-9,12-dienoate (4); 6,11-hexadecanóic acid (5); geranyl linalool (6); and 7 by means of HPLC-DAD-HRMS: colletodiol (7); fischerin (8); sambutoxin (9); micosporin glycin (10); cyperin (11); micosporin serin (12); arginomicin (13) e aspergillomarasmin B (14). Compounds 2, 3 and 4, been the most abundant in the matrix, were isolated and individually characterized. Compounds 7-10 were also confirmed using 1H NMR by means of in situ elucidation

Orientador: Angela Regina Araújo / Banca: Luiz Alberto Beraldo de Moraes / Banca: Mary Ann Foglio / Resumo: A busca por novos produtos para as indústrias farmacêuticas e agroquímicas é um processo que requer otimização contínua. Apesar dos avanços nos processos envolvidos no planejamento racional de fármacos, incluindo química combinatória e ensaios em larga escala, os produtos naturais constituem a estratégia de maior sucesso para a descoberta de novas drogas. Sendo assim, este trabalho foi idealizado, objetivando a obtenção de substâncias potencialmente bioativas a partir do estudo químico e biológico do extrato metanólico produzido pelo fungo endofítico Camarops sp. isolado das folhas de Alibertia macrophylla (Rubiaceae). O endófito Camarops sp. foi cultivado em escala ampliada, utilizando meio de cultivo sólido milho, por 21 dias a temperatura ambiente no modo estático. Os extratos metanólico e acetonitrila obtidos foram avaliados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com detector de arranjo de diodos e por Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio, e submetidos aos ensaios para a avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante, anticolinesterásica e anticancerígena. Os resultados evidenciaram extrato e frações com uma variação metabólica intensa e potencialmente bioativos principalmente contra a inibição da enzima acetilcolinesterase. O extrato acetonitrila foi submetido a fracionamento cromatográfico e levou à identificação e determinação estrutural de oito substâncias, sendo estas, (S)-mevalonolactona (1), para-hidroxibenzaldeído (2), Ácido (E)-5-(1-hidroxialil)-4-(pent-1-enil)-2,5-diidrofurano-3-carboxílico (3), azepan-2-ona (4), xylarenona D (5), xylarenona F (6), xylarenona G (7), sendo as duas últimas substâncias inéditas, e xylarenona C (8). Este é o primeiro relato de mevalonolactona obtida de fungo endofítico, substância esta muito utilizada para... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The search for new products to the pharmaceutical and agrochemical industry is a process that requires continuous optimization. Despite advances in the processes involved in rational planning of drugs, including combinatorial chemistry and tests in large scale, the natural products constitute the most successful strategy for the discovery of new drugs. Thus, this work was idealized aiming the obtaining of potentially bioactive substances from the chemical and biological study of methanolic extract produced by the endophytic fungus Camarops sp. isolated from the leaves of Alibertia macrophylla (Rubiaceae). The endophyte Camarops sp. was cultivated in large scale using maize solid culture medium for 21 days at room temperature in the static mode. The methanolic and acetonitrile extracts obtained were evaluated by High Efficiency Liquid Chromatography with diode array detector and by Nuclear Magnetic Resonance of Hydrogen, and submitted to tests for evaluation of antifungal, antioxidant, anticholinesterase and anticancer potenciality. The results showed extract and fractions with an intense metabolic variation and potentially bioactive principally against the inhibition of the enzyme acetylcholinesterase. The acetonitrile extract was submitted to chromatographic fractionation and led to the identification and structural determination of eight substances, being, (S)-mevalonolactone (1), para-hidroxybenzaldehyde (2), acid (E)-5-(1-hidroxyallylic)-4-(pent-1-enyl)-2,5-dihydrofuran-3-carboxylic (3), Azepan-2-one (4), xylarenone D (5), xylarenone F (6), xylarenone G (7), being the last two ones novel substances, and xylarenone C (8). This is the first report of mevalonolactone obtained from endophytic fungus, substance much used for cosmetics, and also the first report of Azepan-2-one as a natural product, which is much used in the making... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre