Orientador: Lourdes Campaner dos Santos / Co-orientador: Angela Regina Araujo / Banca: Alberto José Cavalheiro / Banca: Marcelo Aparecido da Silva / Resumo: Eriocaulaceae se destacam como uma das famílias mais representativas dos campos rupestres da Cadeia do Espinhaço - MG, não só pela grande riqueza de espécies, mas também pelo elevado número de táxons endêmicos desta formação geológica. Dos capítulos de Paepalanthus planifolius, um dos gêneros mais representativos da família já foram isoladas do extrato etanólico e diclorometano as naftopiranonas, substâncias com comprovadas atividades biológicas como antirradicalar, antiúlcera e mutagênica. Apesar, dos estudos realizados até o momento com espécies de Eriocaulaceae, é importante destacar que ainda existe uma grande variedade de substâncias ainda não isoladas e identificadas e que ainda não foram avaliadas para várias atividades biológicas. Portanto, neste trabalho descrevemos o isolamento, purificação, identificação de substâncias e preservação dos endófitos associados à espécie de P. planifolius. A triagem química foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada com detector de arranjo de fotodiodos HPLC-DAD, cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC) e ensaio antirradicalar realizada com os extratos particionados com acetato de etila (AcOEt) dos endofíticos isolados dos capitulos de P. planifolius em escala reduzida. Os perfis químicos desta triagem preliminar nos permitiu selecionar o extrato produzido pelo fungo endofitico identificado como Anthostomella brabeji para o estudo em escala ampliada em meio de cultivo PDB. A estratégia de fracionamento por HPLC-DAD em escala semipreparativa do extrato AcOEt do endófito A. brabeji permitiu isolar e identificar quatro metabólitos secundários [(6-hidroxi-2,2-dimetil-5,6,7,8-tetraidro-7,8-epoxicroman-4-ona (Ab1), Sicaina (Ab2), Eutipinol (Ab3) e 6,7,8-hidroxi-2,2-dimetil-5,6,7,8-tetraidro-croman-4-ona (Ab4)] que foram identificados por técnicas de RMN mono e bi-dimensionais e... / Abstract: Eriocaulaceae stand out as one of the most representative families of the rocky fields of the Espinhaço - MG, not only for the great richness of species, but also the high number of endemic taxa of this geological formation. The capitula of Paepalanthus planifolius, one of the most representative genera of the family, have been isolated from the ethanol extract and dichloromethane the naphytopyranones, substances with proven biological activity as antiradical, anti-ulcer and mutagenic. Despite the studies performed to date with Eriocaulaceae species, it is important to note that there is still a wide variety of substances were not yet isolated and identified and that have not been evaluated for various biological activities So in this paper we describe the isolation, purification, identification of substances and preservation of endophytes associated with the P. planifolius specie. The chemical screening was performed by high-performance liquid chromatography coupled with a photodiode array detector HPLC-DAD, comparative thin layer chromatography (TLC) and antiradical assay conducted with extracts partitioned with ethyl acetate (EtOAc) of the capitula of the isolated endophytic P. planifolius, on a reduced scaled. The chemical profile of this preliminary screening allowed us to select the extract produced by the endophytic fungus identified as Anthostomella brabeji for the study on a large scale in the PDB culture media. The fractionation strategy by HPLC-DAD in semi-preparative scale EtOAc extract endophyte A. brabeji allowed to isolate and identify four secondary metabolites [(6-hydroxy-2,2-dimethyl-5,6,7,8-tetrahydro-7,8-epoxychroman-4-one (Ab1), Siccayne (Ab2), Eutypinol (Ab3) e 6,7,8-hydroxy-2,2-dimethyl-5,6,7,8-tetrahydro-chroman-4-one (Ab4)] which were identified by NMR techniques mono- and bi-dimensional and mass spectrometry, and the Ab4 substance is being described at the first time in... / Mestre

Orientador: Ângela Regina Araújo / Banca: Marcia Nasser Lopes / Banca: Dionéia Camilo Rodrigues de Oliveira / Resumo: Microrganismos endofíticos são definidos como organismos que habitam pelo menos um período de seu ciclo vital, o interior de um vegetal, sem causar aparentemente nenhum dano a este. Na busca de novos organismos e novos metabólitos secundários, um estudo foi conduzido visando avaliar a diversidade química de fungos endofíticos por meio do isolamento e identificação de metabólitos secundários produzidos por Phomopsis stipata, um fungo endofítico obtido das folhas de Styrax camporum, uma planta do Cerrado brasileiro. Sete fungos foram isolados das folhas de Styrax camporum (SC-01, 02, 03, 04, 05, 06 e 07) e cultivados em meio de cultura líquido MDB, inicialmente em pequena escala (400 mL), durante 28 dias em incubadora rotatória à temperatura ambiente. A seguir, os caldos contendo os metabólitos secretados pelos fungos foram separados do micélio por filtração e submetidos à partição líquido-líquido com AcOEt, fornecendo os extratos brutos. Os extratos brutos obtidos foram submetidos a um processo de triagem química e biológica, que compreendeu análise do perfil cromatográfico e espectroscópico e avaliação das atividades: antioxidante (através do teste com DPPH), antifúngica (frente aos fungos fitopatogênicos Cladosporium sphaerospermum e Cladosporium cladosporioides), antibacteriana (frente ao Mycobacterium tuberculosis), e anticolinesterásica. Dos microrganismos triados, SC-04 (Phomopsis stipata) foi cultivado em larga escala e seu extrato bruto obtido em MBD submetido a fracionamento cromatográfico resultando no isolamento das substâncias 1 e 2. Paralelamente, foi realizada a comparação da diversidade na produção metabólica do fungo quando cultivado em cereais (arroz e milho) e em diferentes meios de cultura comerciais, através de dados espectroscópicos e do perfil cromatográfico via RMN e CLAE, assim como avaliação das atividades antioxidante...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Endophytic microorganisms are defined as organisms that inhabit the interior of a vegetable at least during a period of the vital cycle, without causing any apparent damage. In the search for new organisms and new secondary metabolites, a study was conducted to evaluate the chemical diversity of endophytic fungi through the isolation and identification of secondary metabolites produced by Phomopsis stipata, an endophytic fungi obtained from the leaves of Styrax camporum, a plant of the Brazilian Cerrado. Seven fungi had been isolated from the Styrax camporum leaves (SC-01, 02, 03, 04, 05, 06 e 07) and cultivated on a liquid medium of MDB culture, initially in a small scale (400 ml), during 28 days in a rotating incubator at room temperature. To follow, the culture broth containing the metabolites secreted by the fungi had been separated from the micelium by filtration and submitted to the liquid-liquid partition with AcOEt, to give the crude extracts. These extracts had been submitted to a chemical and biological screening process, which consisted in an analysis of the chromatographic and spectroscopic profile and evaluation of the following activities: antioxidant (by DPPH test), antifungal (in relation to the phytopathogenic fungi Cladosporium sphaerospermum and Cladosporium cladosporioides), bactericidal (in relation to Mycobacterium tuberculosis), and anticolinesterasic. From the screened fungi, SC-04 (Phomopsis stipata) had been cultivated in large scale and its raw extract obtained by MBD had been submitted in a chromatographic fragmentation, resulting in an isolation of substances 1and 2. At the same time, had been made a comparison of the diversity in the metabolic production of the fungi when cultivated in cereals (rice and corn) and in different commercial culture way, through spectroscopic data and chromatographic profile by RMN e CLAE, as well as evaluation...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ângela Regina Araújo / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Jacqueline Aparecida Takahashi / Resumo: Micro-organismos endofíticos habitam os espaços intra e intercelular de um hospedeiro, durante todo ou parte de seu ciclo de vida, sem causar danos aparentes. Esses micro- organismos são considerados uma fonte importante para a produção de metabólitos secundários com ação antimicrobiana, antitumoral, entre outras. Este trabalho descreve o estudo químico e biológico do fungo endofítico Phomopsis sp. associado à espécie vegetal do cerrado Senna spectabilis. Phomopsis sp. foi cultivado em diferentes meios de cultura para avaliar a variação metabólica em relação a composição dos nutrientes. Foram usados 5 meios líquidos comerciais (MBD, YM, Extrato de Malte, Nutrient e Czapek) e 2 meios sólidos (Milho e Arroz). Os extratos brutos Acetato e Acetonitrila obtidos foram avaliados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com detector de arranjo de diodos e por Ressonância Magnética Nuclear de 1 H, e submetidos aos ensaios para a avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica. Os resultados evidenciaram extratos com uma variação metabólica intensa e potencialmente bioativos. Destes, os meios MDB e Milho foram selecionados para obtenção dos extratos brutos em escala ampliada. O extrato bruto acetato obtido em MDB foi submetido a fracionamento cromatográfico e levou à identificação da uracila (1), ácido nitropropanóico (2), citocalasina H (3), tirosol (4), ciclo(L- Pro-L-Leu), (5), ciclo(L-Pro-L-Ile) (6), ciclo(L-Pro-L-Val) (7), ciclo(L-Pro-L-Tyr) (8) e ciclo(L-Pro-L-Phe) (9). Este é o primeiro relato de dicetopiperazinas obtidos de fungos do gênero Phomopsis. Esta classe de substâncias apresenta inúmeras bioatividades, principalmente antimicrobiana. O extrato bruto acetonitrila obtido de milho conduziu ao isolamento da citocalasina H (3), citocalasina J (10), alternariol monometil éter (11).... não descritos / Abstract: Endophytic microorganisms inhabit the intra and intercellular spaces of a host, during all or part of their life cycle, without causing any apparent damage. Microorganisms are regarded as an important source for the production of secondary metabolites with antimicrobial, antitumoral actions, among others. This work describes the chemical and biological study of endophytic fungus Phomopsis sp. associated with plant species of Cerrado Senna spectabilis. Phomopsis sp. was cultived in different culture media to assess the metabolic variation in relation to nutrient composition. Were used 5 commercial liquid media (PDB, YM, Malt extract, nutrient and Czapek) and 2 solid mediums (Corn and Rice). The acetate and acetonitrile crude extracts were evaluated by High Performance Liquid Chromatography with Diode Array Detector and 1 H Nuclear Magnetic Resonance and subjected to assays for the evaluation of potential antifungal, antioxidant and anticholinesterase. The results showed extracts with an intense metabolic variation and potentially bioactive. From these, the mediums PDB and Corn were selected to obtain the crude extracts on a large scale. The crude acetate extract obtained in PDB was submitted to chromatographic separation and led to the identification of uracil (1), 3-nitropropionic acid (2), cytochalasin H (3), tyrosol (4), cyclo (L- Pro-L-Leu) (5), cyclo (L-Pro-L-Ile) (6), cyclo (L-Pro-L-Val) (7), cyclo (L-Pro-L-Tyr) (8) and cyclo (L-Pro-L-Phe) (9). This is the first report of diketopiperazines obtained from fungi of the Phomopsis genus. This class of substances shows many bioactivities, especially antimicrobial. The crude acetonitrile extract obtained from Corn led to the isolation of cytochalasin H (3), cytochalasin J (10), alternariol monomethyl ether (11), alternariol (12) and 2-hydroxy-alternariol (13), being the last one reported for the first time as a natural product and with NMR data not reported / Mestre

Orientador: Angela Regina Araujo / Co-orientador: / Banca: Isabele Rodrigues Nascimento / Banca: Mônica Tallarico Pupo / Resumo: Os micro - organismos têm demonstrado serem valiosas fontes de princípios ativos de uso clínico, no qual a penicilina é o exemplo mais conhecido de metabólito secundário, de importância medicinal, produzido por fungos. A espécie vegetal Eugenia jambolana Lam ., popularmente conhecida como Jambolão, é utilizada na medicina popular brasileira, principalmente no tratamento de diabetes. O fungo Botryosphaeria parva, isolado das folhas da E. jambolana (L.) e codificado como Ej_F01, foi cultivado em escala ampliada em três meios de cultivo: Czapek ®, PDB e Milho. Após o período de fermentação do endófito no meio de milho, foi feita uma extração direta com MeOH, seguida de filtração e evaporação do solvente . O extrato obtido foi solubilizado em AcOEt e fez - se três part iç ões l í quido - líquido com H 2 O, após a evaporação do solvente orgânico, o extrato foi dissolvido em CH 3 CN e foi feita uma nova partição líquido - líquido com Hexano, após a evaporação da CH 3 CN, foi obtido o extrato de interesse . Após o período de fermentação do endófito nos meios líquidos (PDB e Czapek ® ), a suspensão micelar foi filtrada a pressão reduzida, separando os micélios dos meios fermentados . Em seguida, os filtrados aquosos foram submetidos a três partições líquido - líquido com AcOEt, e após a evapora ção do solvente orgânico, foram obtidos os extratos brutos de interesse . Todos os extratos for am fracionados utilizando técnicas cromatográficas, como Cromatografia em Coluna e/ou Cromatografia Líquida de Alta Eficiência preparativa. Após o fr acionamento d os extratos brutos, foi possível obter sete substâncias oriundas do extrato do m ilho, seis substâncias do extrato do Czape k ®, e uma do extrato de PDB, que foram submetidas a análises espectrométricas ( EM, RMN de 1 H, 13 C, 1D e 2D) para a determinação/identificação estrutural... / Abstract: M icroorganisms have proven to be valuable sources of active principles for clinical use, wherein the penicillin is the best known example of a secondary metabolite of medicinal importance, produced by fungi. The plant species Eugenia jambolana Lam., c ommonl y called Black Plum, is used in traditional Brazilian medicine, especially in the treatment of diabetes. The Botryosphaeria parva fungus, isolated from leaves of E. jambolana (L.) encoded as Ej_F01, was grown on an enlarged scale in three different culture media: Czapek ®, PDB and corn. After the fermentation period in the corn media, a direct extraction was done with MeOH followed by filtration and evaporation of the solvent. The extract was disolved in AcOEt and made three liquid - liquid partition with H 2 O, after evaporation of the organic solvent, the extract was dissolved in CH 3 CN and was made a new liquid - liquid partition with H exane, after evaporation of the CH 3 CN, it was obtained extract of interest. After the fermentation period in liquid media (PDB an d Czapek ® ), the micellar suspension was filtered under reduced pressure, separating the mycelium from the fermented broth . Then, the aqueous filtrates were subjected to three liquid - liquid partition with AcOEt, and after evaporation of the organic solvent, there were obtained the crude extracts of interest. All extracts were fractionated using chromatographic techniques su ch as column chromatography and /or preparative High Performance Liquid Chromatography efficiency. After the fractioning of crude extracts, it was possible to obtain seven substances derived from corn extract, six substances obtained from Czapek extract, and a substance obtained from the PDB extract, which were submitted to spectrometric analysis (MS - ESI, NMR 1 H, 13 C, 1D and 2D) for determin ing and structural identification. The substances 05, 08, 09 and 11 were identified as 5 - h... / Mestre

Orientador: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Isabele Rodrigues Nascimento / Banca: Paulo Cézar Vieira / Resumo: O fungo Hypoxylon investiens ocorre em ambientes terrestres e aquáticos, sendo que a maior parte dos estudos já realizados com o gênero Hypoxylon refere - se aos fungos terrestres. Diversas substâncias e atividades biológicas foram determinadas para o gênero e o presente estudo é o primeiro a realizar a bioprospecção de H. investiens associad o à alga marinha. N este trabalho, foram est udados os constituintes químicos produzidos pelo fungo H. investiens e avaliadas algumas atividades biológicas promissoras (antifúngica e citotóxica ). O extrato bruto dos metabólitos produzidos em meio líquido de PDB obtido em escala ampliada apresentou fo rte ativ i dade frente aos fungos fitopatogênicos C ladosporium cladosporioides e C ladosporium sphaerospermum e mostrou - se ativo (75,7% de inibição) frente à linhagem tumoral HCT - 116 (carcinoma d e cólon). O seu fracionamento por CC em Sephadex  LH - 20 eluída c om metanol resultou em 6 frações ( G1 a G6 ) : a fração G4 mostrou forte atividade antifúngica contra linhagens de C. cladosporioides e C. sphaerospermum, além de a lto potencial de inibição (97,3 %) de células tumorais HCT - 116. As frações G5 e G6 também se mos traram ativas frente à linhagem tumoral HCT - 116 apresentando, respectivamente, 104,8% e 99, 4 % de inibição dessa linhagem de células tumorais. A fração G5 apresentou ainda atividade (inibição de 84,5%) contra a linhagem MCF - 7 (adenocarcinoma de mama metastá tico). N o entanto, a s fraç ões G4 e G6 mostr aram - se inativa s contra esta linhagem, o que evidenciou a seletividade dessa s fraç ões frente às linhagens tumorais testadas . Estes resultados indicaram elevado potencial de produção de metabólitos bioativos por H. investiens . O s procedimentos cromatográficos levaram ao isolamento de 14 substâncias da fração G5, 3 substâncias da fração G6 e de outras 2 substâncias da fração... / Abstract: The fungus Hypoxylon investiens occurs in terrestrial and aquatic environments, and most studies carried out so far on genus Hypoxylon refer to the terrestrial fung al strains . Many compounds and b iological activities were determined for the genus and the present study is the first to carry out the bioprospec t ion of H. investiens associated to marine algae. In this work, the chemical constituents produced by a fungal strain of H. investiens were inv estigated and some promising biological activities were evaluated (antifungal and cytotoxicity). The crude extract of the metabolites produced in PDB liquid medium by H. investiens was obtained in large scale and showed strong activity against the phytopat hogenic fungi Cladosporium cladosporioides and C. sphaerospermum . It also showed inhibitory activity (75.7% of inhibition) on colon carcinoma tumor cell line HCT - 116. Its fractionation by column chromatography over Sephadex  LH - 20 eluted with met h anol affo rded 6 fractions, ( G1 - G6 ) . Fraction G4 showed strong antifungal activity against C. cladosporioides and C. sphaerospermum strains, in addition to high inibit ory potential (97,3%, ) towards tumor cells HTC - 116. Fractions G5 and G6 were also active against tu mor cell line HCT - 116, showing 104,8% and 99,4% inhibition, respectively. Additionally, fraction G5 inhibited metastatic breast adenocarcinoma cell line MVF - 7 whereas fraction s G4 and G6 were inactive, which evidenced selectivity of such fractions towards the tested tumor cells lines. These results evidenced a high poten t ial of production of bioactive metabolites by H. investiens . The chromatographic procedures led to the isolation of 14 compounds from frac t ion G5, 3 compounds from fraction G6 and 2 compoun ds from the non - active fraction G3 . The preliminary analysis of the 17 isolated compounds from the bioactive fraction G5 and G6 by NMR spectroscopy indicat... / Mestre

Orientador: Angela Regina Araujo / Banca: Isabele Rodrigues Nascimento / Banca: Ana Helena Januário / Resumo: Micro-organismos endofíticos, geralmente fungos e b actérias, vivem sistematicamente no interior das plantas sem causar, aparentemente, dan os a seus hospedeiros. Fungos endofíticos representam um importante grupo de fungos com poten cial fármaco e biotecnológico e podem ser isolados de diversas plantas medicinais. A espé cie vegetal Eugenia jambolana Lam . tem sido intensamente explorada química e biologicament e devido a seus usos populares e por apresentar diversas atividades biológicas. Logo, o estudo de fungos endofíticos, associados a esse espécie vegetal, apresenta-se como uma estraté gia promissora na obtenção e identificação de substâncias potencialmente bioativ as. Dentro deste contexto, este trabalho teve como objetivo principal a avaliação química do fungo endofítico Saccharicola sp. isolado de Eugenia jambolana Lam. Este endófito foi cultivado em pequena escala nos meio de cultura liquido (MDB) e sólido (Milho) e em esca la ampliada no meio Czapek. O caldo foi separado dos micélios após 28 dias (meios líquidos) e 21 dias (meio sólido) por filtração e o filtrado foi submetido à partição líquido/líquido c om AcOEt fornecendo, após a evaporação do solvente, os respectivos extratos brutos. Os ext ratos foram avaliados frente a produção metabólica por CCDC, CLAE-DAD e RMN de 1 H e também avaliados frente aos ensaios biológicos. Portanto para os extratos MDB, Milho Fr .CH 3 CN, Milho Fr. aquosa e Milho Fr.Hexânica, foram realizados ensaios antifúngico, antioxidante e anticolinesterásico, onde estes extratos demonstraram ser promissores. O extr ato obtido em escala ampliada (Czapek) foi fracionado em cartucho SPE (extração em fase só lida), resultando em seis frações ( S s.C.Fr1- S s.C.Fr6). Do estudo da fração S s.C.Fr1 foi possível o isolamento de uma substância o Ácido fusárico ( 1 ) e a fração S s.C.Fr3 resultou no isolamento de 6,7 dihidroxi... / Abstract: Endophytic microorganisms, often bacteria and fungi systematically live within the plant without apparent harm their hosts. Endophytic fungi represent an important group of fungi with biotechnological potential and may be isolated from various medicinal plants. The plant species Eugenia jambolana Lam. has been intensively explored chemically and biologically due to its popular uses and it has several biologic al activities. Thus, the study of endophytic fungi associated with this plant species, presents itself as a promising strategy in obtaining or identifying potentially bioactive substances. Withi n this context, this study aimed to evaluate the chemical endophytic fungus Saccharicola sp. isolated from Eugenia jambolana Lam., encoded as Ej-c04. This endophyte was cultivated on a small scale to a liquid culture medium PDB solid Corn and enlarged scale for the Czapek me dium. The broth was separated from the mycelium after 28 days (liquid media) and 21 days ( solid medium) by filtration and the filtrate was subjected to liquid / liquid partition with ethyl acetate providing after evaporation of the solvent, their crude extracts. The extracts were evaluated against metabolic production by TLC, CLAE-DAD and 1 H NMR also evaluated and compared to the bioassay. So for MDB extracts, Fr.CH 3 CN Corn, aqueous Fr. Corn and Corn Fr.Hexânica, tes ts were performed antifungal, antioxidant and anticholinest erase where these extracts have shown promise.The extract obtained in enlarged scale (Cza pek) was fractionated on SPE cartridge (solid phase extraction), resulting in six fraction s ( S s.C.Fr1- S s.C.Fr6). From S s.C.Fr1 fraction was possible to isolate a substance fusaric acid (1 ) and S s.C.Fr3 fraction resulted in the isolation of (2E, 4E) - 6,7 dihydroxy-4,6-dimethyl octanoate (2) novel substance. The extract obtained in small scale (Corn Fr.CH 3 CN) was subjected to fractionation column of silica ge... / Mestre

Orientador: Angela Regina Araujo / Co-orientador: Daniela Alonso Bocchini Martins / Banca: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Niege Araçari Jscometti Cardoso Furtado / Banca: Taícia Pacheco Fill / Resumo: A capacidade biossintética dos fungos endofíticos, aliado a os estudos químico e biológicos relatados para Eugenia brasiliensis, motivou a idealização d o projeto, a prospecção química, biológica e enzimática em fungos endofíticos associados a folhas, caules e frutos saudáveis de Eugenia brasiliensis e a avaliação do co - cultivo e epigenética em Xylaria cubensis, Diaporthe sp. e Colletotrichum sp., na obtenção de novas substâncias . O isolamento dos fungos endof íticos, resultou em dezessete linhagens de fu n gos endofíticos, sendo estes cultivados em escala reduzida em meio líquido de batata e dextrose (PDB) e Czapek, a 25 o C, sob modo estático para obtenção dos respec tivos extratos brutos em AcOEt. A avaliação met abólica destes extratos foi realizada por CCDC, HPLC - DAD e RMN de 1 H, como também a potencialidade enzimática e biológica pela avaliação das atividades antifúngica, anticolinesterásica e citotóxica, sendo que estes extratos demonstraram ser promissores . A prospecção inicial conduziu a seleção de três fungos endofíticos identificados como Xylaria cubensis (Eb_caH_5), Diaporthe sp. (Eb_caS_4), e Colletotrichum sp. (Eb_ frmH _1), os quais foram cultivados (escala ampliada) em PDB para isolamento e determinação/e lucidação estrutural dos metabólitos secundários . O estudo de Xylaria cubensis, resultou no isolamento de 8 substâncias, sendo da classe dos nucleosídeos, dicetopirazinas, isocumarinas e citocalasina s . De Diaporthe sp. foi isolado e identificado 8 substânc ias : duas dicetopiperazinas, ácido nitropropiônico, uracila, tirosol, z ygosporina D, pirrolidona (inédita) e alternariol. Colletotrichum sp. resultou no isolamento de 6 substâncias, sendo três dicetopiperazinas, além das substâncias N - (2 - fenilet il)acetamid a, N - acetiltriptamina e metanoato de 2 - hidroxibutila 3 - indol (inédita). Todas as classes de... / Abstract: The biosynthetic capacity of endophytic fungi, allied chemical and biological studies reported to Eugenia brasiliensis motivated the idealization of the project, prospection chemi cal, biological and enzymatic in endophyt ic fungi associated with healthy leaves, stems and fruits from Eugenia brasiliensis and evaluation co - cul tur e and epigenetic in Xylaria cubensis, Diaporthe sp. and Colletotrichum sp., in obtaining new substances. Th e isolation of endophytic fungi resulted in seventeen endophytics fungi, these being cultivated in small scale on potato dextrose broth (PDB) and Czapek at 25 ° C under static mode to obtain the corresponding crude extracts in AcOEt. The metabolic evalua tio n of these extracts was performed by CCDC, HPLC - DAD and 1 H NMR, also e nzymatic and biological po tential were performed by antifungal, cytotoxic, and anticholinesterase activities, and these extracts have shown promise . The preliminary prospection led to th e selection of three endophytic fungi identified as Xylaria cubensis (Eb_caH_5), Diaporthe sp. (Eb_caS_4) and Colletotrichum sp. (Eb_frmad_1) which were culti vated ( large r scale) in PDB fo r isolation and determination or structural elucidation of secondary metabolites. The study of Xylaria cubensis resulted in the isolation of eight substances, as follows: nucleoside, diketopiperazine s, isocoumarins and c ytochalasins class . From Diaporthe sp. was isolated and identifi ed eight substances, as follows: two dik etopiperazine s, nitropropionic acid, uracil, tyrosol, z ygosporin D, pyrrolidone (unpublished) and alternariol. Colletotrichum sp. resulted in the isolation of six substances, three diketopiperazine s, besides the substances N - (2 - phenylethyl) acetamide, N β - acetyltry ptamin e and 3 - hydroxybutan - 2 - yl - 1H - indol - 3 - ylacetate (unpublished ). All classes of substances produced by these endophytic fungi present severa... / Doutor

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The preliminary phytochemical analysis of leaves and fungi showed that dichlorometane and hexane extracts contain terpenes and methanolic extracts contain phenolic compounds. The broths from fungi showed that diclorometânica phase (DCM) contain terpenes, and phase of Ethyl Acetate (AcOEt) contain terpene and phenolic compounds. The phytochemical study of the leves led to the isolation of: Friedelan-3-one (I), 30-hydroxy-friedelan-3-one (II), Lupeol (III), the mixture of β -Sitosterol and Stigmasterol steroids (IV and V), hydroxycoriatin (VI), the mixture of α and β-amyrin (VII and VIII ), 7- hydroxy-6-methoxy-coumarin (IX), 7,4 ''' dymethylamentoflavone (X), methyllonyflavna 3'-O-(XI) and purification of the 28-hydroxy-friedelan-3-one (XIV). The phytochemical study of the Diaporthe hongkongensis, fungi, led to the isolation of (3-oxociclobutil) 2-methyl-1- hydroxi metilciclopenta -2,4- diene carboxylate (XII) and 9-amino-7- (2,5,7-triazabicyclo [2.2.1] hept-3-yl)-2,3,6- trioxi-1-azabicyclo [3.2.2] nona-4,8-diene-4- carbaldehyde (XIII) both isollated of the first time. All compound were identified by 1H, 13C NMR, 2D and mass espectra data. The antioxidant activity, shoed the MeOH extract of leaves from collection 2, was equivalent with 1,15 and 1,13, the H2O phase showed 2,8 and 4.,51 (DPPH• and Fe3+) were considered significant. The antibacterial activity the DCM phase of leaves of collectes 2 and 3 and the EtOAc phase of collection 1, showed CIM and CMB found was 500/mL against Aeromonas hydrophila and Flavobacterium columnare. The aqueous phase of collection 1 showed CIM and CMB found was 1000 μg/ml against Flavobacterium columnare and Pseudomonas fluorescens. The mycelial extracts of fungi 4 and 6, tested with methodology to inhibition halo, showed medium activity, 1 cm, against Aeromonas hydrophila and Klebsiella pneumoniae. The DCM and EtOAc phases of metabolite broth of the fungu 4, showed activity with halo of 1 and 1,2 cm. The antimalical activity. The antimalarial activity showed that hexane and MeOH extracts of leves of the collection 3, showed IC50 of 1,51 and 1,77 mg/mL when compared to the standard. The MeOH extract of fungi 4, showed 6,89 of parasitaemia being significant. The activity by isolated compound sowed CIM of 73,58% to the compound X and 71,75% to the compound XI against Klebsiella pneumoniae . / O presente trabalho teve como objetivo realizar o estudo químico e biológico das folhas de Piranhea trifoliata e de seus fungos endofíticos (Picrodendraceae) e realizar a avaliação do seu potencial frente aos ensaios antimicrobiano, antioxidante e antimalárico. As folhas foram coletadas na Volta Grande do Xingú, Altamira, PA (coleta 1) e no lago do Catalão, Manaus, AM (coletas 2 e 3). A coleta 1 foi extraída com diclorometano, metanol e Água, e as coletas 2 e 3 foram extraídas com hexano, metanol e água. Parte do material das coletas 2 e 3 foi também processada para a obtenção dos fungos endofíticos e estes foram extraídos com diclorometano e acetato de etila. A análise fitoquímica preliminar das folhas e dos fungos mostrou que os extratos diclorometânicos e hexânico possuem terpenos e os extratos metanólicos apresentam substânciastos fenólicas. Os caldos metabólitos dos fungos mostraram que a fase diclorometânica (DCM) possui terpenos, e a fase de acetato de etila (AcOEt) possui indícios de terpenos e substâncias fenólicas. O estudo fitoquímico das folhas levou ao isolamento da Friedela-3-ona, 30-hidroxi-friedelan-3-ona, Lupeol, a mistura dos esteróides β-sitosterol e Estigmasterol, hidroxicoriatina, a mistura de α e β–amirina, 7-hidroxi-6-metoxi-cumarina, 7,4’’’ dimetilamentoflavona, 3’-O- metilloniflavna e a 28-hidroxi-friedelan-3-ona. Já o estudo fitoquímico do fungo Diaporthe hongkongensis, levou ao isolamento de (3-oxociclobutil) metil1-hydroxi-2 metilciclopenta-2,4-dieno carboxilato e 9-amino-7-(2,5,7-triazabiciclo[2.2.1]hept-3-il)-2,3,6-trioxi-1-azabiciclo [3.2.2] nona-4,8-dieno-4-carbaldeido ambas inéditas. Todas as substânciais foram identificadas por RMN de 1H e de 13C, mono e bidimensionais e espectrômetro de massas. Quanto à atividade antioxidante, o extrato MeOH das folhas da coleta 2, apresentou equivalência de 1,15 e 1,13, a fase H2O apresentou 2,8 e 4,51 (DPPH e Fe3+) sendo considerados significativos. A atividade antibacteriana mostrou que a fase DCM das folhas das coletas 2 e 3 e a fase AcOEt da coleta 1, apresentaram CIM e CMB de 500 μg/mL frente às bactérias Aeromonas hydrophila e Flavobacterium columnare. A fase aquosa da coleta 1, apresentou CIM e CMB de 1000 μg/mL frente às bactérias Flavobacterium columnare e Pseudomonas fluorescens. Os extratos miceliais dos fungos 4 e 6, testados pela a metodologia do halo de inibição, apresentaram média atividade, 1 cm frente às bactérias Aeromonas hydrophila e Klebsiella pneumoniae. As fases DCM e AcOEt do caldo metabólito do fungo 4 mostraram-se ativas com 1 e 1,2 cm de halo. A atividade antimalárica mostrou que os extratos hexânicos e MeOH das folhas da coleta 3 apresentaram IC50 de 1,51 e 1,77 μg/mL quando comparado com o padrão. O extrato MeOH do fungo 4 apresentou 6,89 de parasitemias sendo significativo. Ao testar as substâncias isoladas frente as bactérias, observou-se a CIM de 73,58% em X e 71,75% em XI frente a bactéria K. pneumoniae.

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The ethylacetat crude extract was obtained through extraction from the broth and then submitted to larvicide assay against larvae of the mosquito Aedes aegypti and antimicrobial against the pathogenic bacteria Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa. It was also performed assays against the enzyme anticholinesterase, antioxidants and antifungal against Cladosporium cladosporioides e Cladosporium sphaerospermum. In the selective larvicide, 3 fractions showed bioactivity (100 ppm) in 24h. In the dosing assay larvicide, the extract of the fungus Phomopsis sp. showed bioactivity with LD50 of 84.7, 81.6 and 79.5 ppm and LD90 de 147.8, 140.2 and 137.7 ppm after 24, 48 e 72 h, respectively. The crude extract was analyzed using TLC, HPLC and NMR and then purified through column chromatography and HLPC-DAD. From F4, the 3-nitropropionic acid was isolated, which is used in neurological research. Succinic acid, which is considered one of the construction blocks in chemical synthesis industry, was isolated from the fraction F7. Other 3 esterified substances, derivatives of tyrosol, were isolated of the fraction F1, and one of them unpublished. In the antioxidant assay, two fractions (F5, F6) showed positive results and in the assay against the enzyme anticholinesterase four fraction (F2, F5, F6, F7) presented bioactivity. These results demonstrate the expressive biopotency of the fungus Phomopsis sp. and open a new perspective for further studies. / Fungos endofíticos são fungos que vivem no tecido interno das plantas sem que lhes causem prejuízo imediato. Esses microrganismos são considerados uma fonte importante para a produção de metabólitos secundários com ação antimicrobiana, antitumoral, entre outras. Este trabalho descreve o estudo químico e biológico dos metabólitos secundários produzidos pelo fungo endofítico Phomopsis sp. isolado da planta Passovia stelis. Para tanto, o fungo em questão foi cultivado em escala ampliada, utilizando meio líquido de batata dextrose. O caldo obtido foi extraído com acetato de etila fornecendo o extrato bruto. Este foi submetido à ensaio larvicida, frente as larvas do mosquito Aedes aegypti, antimicrobiano frente às bactérias patogênicas Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa. Também foram realizados ensaios anticolinesterase, antioxidante e antifúngico frente aos fungos Cladosporium cladosporioides e Cladosporium sphaerospermum. No ensaio larvicida de dose, o extrato do fungo Phomopsis sp. exibiu bioatividade com valores de DL50 de 84,7; 81,6 e 79,5 ppm e DL90 de 147,8; 140,2 e 137,7 ppm respectivamente, nas leituras realizadas após 24, 48 e 72 h. No ensaio larvicida seletivo, três frações obtiveram bioatividade em 100 ppm nas primeiras 24 horas. Após análise por CCD, CLAE e RMN, o extrato bruto foi fracionado por cromatografia em coluna e por CLAE-DAD. Da fração F4 foi isolado o ácido 3-nitropropiônico que é muito utilizado em pesquisas neurológicas. Da fração F7 foi isolado o ácido succínico tido como um dos principais blocos de construção na indústria da síntese química. Outras três substâncias da classe dos ésteres, derivados do tirosol foram isolados da fração F1 sendo uma delas inédita. No ensaio antioxidante duas frações (F5, F6) deram resultado positivo e no ensaio anticolinesterásico quatro frações (F2, F5, F6, F7) mostraram atividade. Estes resultados mostraram a expressiva biopotência do fungo Phomopsis sp, abrindo novas perspectivas atrativas para estudos futuros.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-06-13T19:02:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) FUNGOS ENDOFÍTICOS E EXTRATOS VEGETAIS NO CONTROLE ALTERNATIVO DA MANCHA-ALVO.pdf: 1834924 bytes, checksum: 559ecffd91838e06bc0c870d7174f04f (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-06-13T19:03:00Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) FUNGOS ENDOFÍTICOS E EXTRATOS VEGETAIS NO CONTROLE ALTERNATIVO DA MANCHA-ALVO.pdf: 1834924 bytes, checksum: 559ecffd91838e06bc0c870d7174f04f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-13T19:03:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) FUNGOS ENDOFÍTICOS E EXTRATOS VEGETAIS NO CONTROLE ALTERNATIVO DA MANCHA-ALVO.pdf: 1834924 bytes, checksum: 559ecffd91838e06bc0c870d7174f04f (MD5) Previous issue date: 2018-04-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Secondary metabolites present in endophytic fungi and medicinal plants have several biological properties, including antifungal activity. In this context, 141 endophytic fungi isolated from guaraná leaves and seeds (Paullinia cupana Kunth), crude aqueous extracts of leaves of Picrolemma sprucei Hook.f (caferana), Croton cajucara Benth. (sacaca), Piper marginatum Jacq. (caapeba) and rhizome of Curcuma zedoaria (Christin.) Rosc (curcuma) prepared at the concentrations of 0 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 % and 50 %, and hexanic, ethyl acetate and methanolic fractions phytopathogen Corynespora cassiicola. Thirteen endophytic isolates showed inhibition between the antagonist and the pathogen, whereas the isolates 3012 R1 and 3031 R2 presented the highest inhibition value, showing their potential for future studies on the biocontrol of fungi of the genus Corynespora. In vitro bioassays (mycelial growth, sporulation, spore germination, direct bioautography and minimal inhibitory concentration) and in vivo (effect of the crude aqueous extract of P. marginatum on tomato seedlings) showed that the hexane and ethyl acetate fractions of P. marginatum reduced mycelial growth, sporulation and germination of the pathogen, and that the crude extract of P. sprucei presented the highest percentages of inhibition of these variables. In direct bioautography, zones of inhibition of mycelial growth were detected in the hexanic and acetate-ethylic fractions of P. marginatum, which presented a minimum inhibitory concentration (MIC) of 2.5 mg.mL-1. The in vivo test showed that control of the target spot in tomato was not feasible under the tested conditions of the crude extract of P. marginatum. / Metabólitos secundários presentes em fungos endofíticos e em plantas medicinais apresentam várias propriedades biológicas, incluindo a atividade antifúngica. Neste contexto, foram testados 141 fungos endofíticos isolados de folhas e sementes de guaranazeiro (Paullinia cupana Kunth), extratos brutos aquosos de folhas de Picrolemma sprucei Hook.f (caferana), Croton cajucara Benth. (sacaca), Piper marginatum Jacq. (caapeba) e rizoma de Curcuma zedoaria (Christin.) Rosc (curcuma) preparados nas concentrações de 0 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 % e de 50 %, e frações hexânicas, acetato-etílicas e metanólicas contra o fitopatógeno Corynespora cassiicola. Treze isolados endofíticos apresentaram inibição entre o antagonista e o patógeno, sendo que os isolados 3012 R1 e 3031 R2 apresentaram o maior valor de inibição, mostrando seus potenciais para futuros estudos no biocontrole de fungos do gênero Corynespora. Bioensaios in vitro (crescimento micelial, esporulação, germinação de esporos, bioautografia direta e concentração inibitória mínima) e in vivo (efeito do extrato bruto aquoso de P. marginatum em mudas de tomate) mostraram que as frações hexânica e acetato-etílica de P. marginatum reduziram o crescimento micelial, a esporulaççao e a germinação do patógeno, e que o extrato bruto de P. sprucei apresentou as maiores porcentagens de inibição dessas variáveis. Na bioautografia direta, foram detectadas zonas de inibição de crescimento micelial nas frações hexânica e acetato-etílica de P. marginatum, que apresentaram concentração inibitória mínima (CIM) de 2,5 mg.mL-1. O teste in vivo mostrou que o controle da mancha-alvo em tomateiro não foi viável nas condições testadas do extrato bruto de P. marginatum.