Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1710.pdf: 768269 bytes, checksum: e782712ebc5089e6011701c6a7756744 (MD5) Previous issue date: 2007-12-17 / Financiadora de Estudos e Projetos / Previous studies demonstrated that microinjections of midazolam (MDZ), GABAAbenzodiazepine (BDZs) receptor agonist, into the amygdala (AMY) produce anxiolytic effects in the elevated plus-maze (EPM) naïve-mice. During the reexposured to the EPM is increasing avoidance of open arms and impairs the anxiolytic like effect of BDZs, phenomenon characterized as "one trial tolerance" (OTT). This study investigated the effects of intra-AMY infusions of midazolam (MDZ) in EPM-experienced mice and GABAA-BDZs receptor antagonist, flumazenil (FMZ), intra-AMY, on anxiety in EPM-naïve and EPMexperienced mice. The analysis was performed on conventional measures of anxiety (% open arm entries and % open arm time), locomotor activity (frequency of closed arm entries) and a range of ethological measures related to risk assessment. The intra-AMY infusions of MDZ (3.0 and 30 nmol/0.1µl) increased % open arm entries (%OA) and % open arm time (%OT) in EPM-experienced mice. The analysis of ethological measures demonstrated that MDZ increased the total head dipping (THD) and decreased percent protected head dipping (%PHD) and percent protected stretched attend postures (%PSAP) without any significant change to total stretched attend (TSAP), total rearing (TR) and total immobility (TI). The intra-AMY infusions of FMZ 16 (nmol/0.1µl), increased %OA and %OT in maze-naïve and maze-experienced mice. The analysis of ethological measures reveals that FMZ increased the THD and TSAP and decreased %PHD and %PSAP without any significant change to TSAP, TR and TI in maze-naïve. In EPM-experienced mice, intra-AMY infusions of FMZ only increased TSAP without alter any other ethological measure. Interestingly, combined administration of DMCM (1.0 mg/Kg) and FMZ (2.0 nmol) significantly decreased the %OA and %OT when compared to vehicle+vehicle. The anxiogenic-like effect produced by GABAA receptor inverse agonist was blocked by intra-AMY infusions of FMZ. FMZ plus vehicle produced absence of effects. These effects were observed in the absence of significant changes in locomotor activity, indicating a selective anxiolytic-like effect for MDZ and FMZ. Interestingly, both benzodiazepine receptor agonist and antagonist, MDZ and FLU, respectively, produced selective anxiolytic-like effects when injected into the amygdala in maze-experienced mice. Together, present results demonstrate that GABA-benzodiazepine receptor complex located within the AMY did not involvement in the OTT phenomenon. However, the anxiogenic-like effect produced by GABA-BDZs receptor inverse agonist was blocked by intra-AMY infusions of FMZ. These results suggest that the emotional state induced by plus-maze test someway releases endogenous benzodiazepine receptor inverse agonist within the amygdala. / Estudos anteriores têm demonstrado que microinjeções de midazolam (MDZ), agonista GABAA-benzodiazepínico (BDZs), na amígdala (AMG) de camundongos ingênuos produz efeito ansiolítico no labirinto em cruz elevado (LCE). Durante a reexposição ao LCE ocorre aumento da evitação dos braços abertos e a perda do efeito ansiolítico dos BDZs, fenômeno conhecido como one trial tolerance (OTT). Este estudo investigou os efeitos de injeções de MDZ em camundongos reexpostos ao LCE e do antagonista dos receptores GABAA-BDZs, flumazenil (FMZ), intra-AMG, em camundongos ingênuos e reexpostos ao LCE. A possível ação do FMZ em agonistas inversos endógenos foi avaliada com a administração combinada de DMCM em animais ingênuos ao LCE. Foi realizada a análise das medidas convencionais de ansiedade (% entradas e de tempo gasto nos braços abertos do LCE), atividade locomotora (freqüência de entradas nos braços fechados) e medidas etológicas associadas à avaliação de risco. A infusão intra-AMG de MDZ (3,0 e 30 nmol/0,1µl) em camundongos, aumentou a % de entradas e de tempo gasto nos braços abertos após a reexposição ao LCE. Enquanto que as medidas etológicas de avaliação de risco demonstraram que o midazolam aumentou o total de mergulhos e diminuiu a porcentagem de mergulhar e esticar protegido, porém não revelou mudança significativa no total de esticar, levantar e de imobilidade. A infusão intra-AMG de FMZ 16 (nmol/0,1µl), aumentou a % de entradas e de tempo gasto nos braços abertos do LCE, em camundongos ingênuos e reexpostos ao labirinto. A análise das medidas etológicas demonstraram que o FMZ aumentou o total de mergulhos e de esticadas e diminuiu a porcentagem de mergulhar e esticar protegido, sem alterar significativamente o total de esticar, levantar e de imobilidade. A administração combinada de DMCM (1,0 mg/kg) e FMZ (2 nmol/0,1µl)em camundongos ingênuos, significativamente diminuiu as porcentagens de entrada e de tempo gasto nos braços abertos do LCE. O efeito ansiogênico produzido pelo agonista inverso dos receptores GABAA, foi bloqueado pelas microinjeções de FMZ intra-AMG em camundongos ingênuos ao LCE. O FMZ sozinho produziu ausência de efeitos. Os efeitos dos tratamentos com MDZ e FMZ foram observados na ausência de alteração da atividade locomotora. Entretanto, tanto o agonista como o antagonista dos receptores GABAA-BDZs quando administrados na AMG produziram efeito ansiolítico seletivo. Estes resultados sugerem que os receptores GABAABDZs da amígdala não estão envolvidos no processo de modulação do fenômeno OTT. Contudo, o efeito ansiogênico produzido pelo DMCM foi bloqueado pela administração intra- AMG de FMZ. Assim, o estado emocional induzido pela exposição ao LCE parece liberar agonistas inversos benzodiazepínicos na amígdala de camundongos.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4470.pdf: 1297687 bytes, checksum: f9b62c4b271de961a3a6053528edf8c2 (MD5) Previous issue date: 2012-02-10 / Universidade Federal de Sao Carlos / Animal models have often been used to investigate the neurobiology of emotional states (fear and anxiety). In this sense, the elevated plus maze (EPM) and the rat exposure test are effective to evaluate these states and EPM exposure (aversive stimulus) can result in activation of serotonergic pathways with projections to structures belonging to the defense system, such as , amygdala, septum, hypothalamus, periaqueductal gray (PAG) and hippocampus. The hippocampus has a large amount of serotonin receptors (5- HT) and gamma-aminobutyric acid (GABA). In the present study, we used male mice of Swiss Albino, received surgical implantation of guide cannula and subsequent administration of drugs in the ventral hippocampus. After recovery, the animals were tested in EPM (Experiment 1 and 2) or the test exposure to the rat (Experiment 3 and 4). In Experiment 1, administration of midazolam (3.0 and 30.0 nmol) produced anxiolytic effect characterized by increased percentages of entries and time spent in the open arms of the EPM reduction measures and ethological (risk assessment) as percentages of dives stretched and secured. In Experiment 2, mice received combined injections Saline + Saline, Saline + MDZ, ondansetron (OND) + Saline and MDZ (30.0 nmol) + OND (0.03 nmol, antagonist of 5-HT3). Combined treatment of Sal + MDZ produced anxiolytic effect and this effect was reversed by the combined administration of OND + MDZ. The porcentanges of entries and time spent in open arms were lower (P> 0.05) than those found in group Sal + MDZ. Experiment 3 showed the effects of exposure of mice in the presence of mouse toy (RB = neutral stimulus) or mouse real (VR = aversive stimulus, Long Evans rats), under the administration of midazolam (3.0 14 and 30.0nmol). The animals were exposed to RV shortening the holding box (model effect) compared to animals exposed to RB. Animals treated with MDZ in two doses, there was an increase in transitions between the sides of the apparatus, increased time in the area of operation and increases the latency of escape to the protected area and contact time with the grid. In Experiment 4, we evaluated the effect of combined injection of midazolam and ondansetron protocol (Experiment 2). The MDZ 30.0 nmol produced anxiolytic effects and the blockade of this effect when the mice were combined administration of ondansetron and midazolam in the ventral hippocampus. Data from this study suggest that, first, control over emotional reactions and defense of the ventral hippocampus of mice exposed to EPM test or exposure to the rat are mediated via GABABenzodiazepines. Furthermore, there is a likely cross-modulation between GABAergic interneurons and 5-HT3, for blocking 5-HT3 via ondansetron can decrease the GABA release. / Modelos animais têm sido frequentemente utilizados para a investigação da neurobiologia dos estados emocionais (ansiedade e medo). Neste sentido, o labirinto em cruz elevado (LCE) e teste de exposição ao rato são eficazes para avaliar esses estados e a exposição ao LCE (situação aversiva) pode resultar em ativação das vias serotonérgicas com projeções para estruturas pertencentes ao sistema de defesa, tais como, amídala, septo, hipotálamo, substância cinzenta periaquedutal (SCP) e hipocampo. O hipocampo apresenta grande quantidade de receptores de serotonina (5-HT) e do ácido gama-aminobutírico (GABA). No presente estudo, foram utilizados camundongos machos, da cepa Suíco Albino, que receberam implantação cirúrgica de cânulas guia e posterior administração de drogas no hipocampo ventral. Após recuperação, os animais foram avaliados nos testes LCE (Experimento 1 e 2) ou exposição ao rato (Experimento 3 e 4). No Experimento 1, a administração de midazolam (3,0 e 30 nmol) produziu efeito ansiolítico caracterizado pelo aumento das porcentagens de entradas e tempo gasto nos braços abertos do LCE e redução de medidas etológicas (avaliação de risco) como porcentagens de mergulhos e esticadas protegidas. No Experimento 2, os camundongos receberam injeção combinada de Salina+Salina, Salina+MDZ, ondansetron (OND)+Salina e MDZ (30 nmol) + OND (0,03 nmol, antagonista dos receptores 5-HT3). O tratamento combinado de Sal+MDZ produziu, efeito ansiolítico sendo este revertido pela administração combinada de OND+MDZ. As porcentagens de entradas e tempo gasto nos braços abertos foram menores (P>0,05) do que àqueles encontrados no grupo Sal+MDZ. O Experimento 3 mostrou os efeitos da exposição dos camundongos na presença 12 do rato de brinquedo (RB= estímulo neutro) ou rato de verdade (RV= estímulo aversivo, rato Long Evans), sob a administração de Midazolam (3,0 e 30 nmol). Os animais expostos ao RV apresentaram diminuição do tempo de exploração da caixa (efeito do modelo) quando comparados aos animais expostos ao RB. Para os animais tratados com MDZ nas duas doses, houve aumento nas transições entre os lados do aparato, aumento do tempo na área de exploração e aumentos da latência de fuga para a área protegida e tempo de contato com a grade. No Experimento 4, foi avaliado o efeito da injeção combinada de midazolam e ondansetron (conforme descrito no Experimento 2). O MDZ 30 nmol produziu efeito ansiolítico e a administração combinada de ondansetron e midazolam no hipocampo ventral, reverteu este efeito. Os dados deste trabalho sugerem que, o controle sobre as reações emocionais e de defesa do hipocampo ventral de camundongos expostos ao LCE ou ao teste de exposição ao rato são mediados via receptores GABA-Benzodiazepínicos. Além disso, provavelmente ocorre modulação cruzada entre os interneurônios GABAérgicos e os serotoninérgicos do tipo 5-HT3, pois o bloqueio desses receptores com o ondansetron, pode diminuir a liberação de GABA.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6708.pdf: 2113975 bytes, checksum: 30511a391fdfda439671c285b41c07c1 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Financiadora de Estudos e Projetos / The central nucleus of the amygdala (CeA) and the lateral parabrachial nucleus (LPBN) are important areas for the control of sodium appetite. The functional integrity of the CeA is critical to sodium and water intake when LPBN the inhibitory mechanisms are deactivated. Therefore, the aims of this study were to investigate the role of different neurotransmitters of the CeA in the control of sodium and water intake induced by a) sodium depletion and b) after blockade of LPBN inhibitory mechanisms. Male Holtzman rats with stainless steel guide cannula implanted bilaterally only in CeA or both into the CeA and LPBN were used. Sodium (0.3 M NaCl) intake was evaluated in satiated, hyperosmotic and sodium-depleted rats. In sodium-depleted animals, bilateral administration of α2- adrenergic/imidazoline receptor agonist moxonidine (10 nmol) into CeA reduced 0.3 M NaCl and water intake. Moreover, bilateral injections of muscimol (0.25 nmol) into CeA reduced sodium intake without change water intake. Oxytocin receptors activation or its blockade in the CeA, blockade of muscarinic cholinergic receptor or activation of 5HT2A/2C serotonergic receptor into the CeA did not change 0.3 M NaCl or water intake in sodium-depleted animals. Bilateral injections of opioid receptor antagonist naloxone (40 μg) into the CeA did not significantly change 0.3 M NaCl and water intake in sodium-depleted animals. However, sodium and water intake induced by bilateral injections of muscimol (0.5 nmol) into the LPBN in satiated animals were completely abolished after bilateral injections of naloxone (40 μg) into CeA. Furthermore, paradoxical sodium intake observed in rats that received oral gavage with 2 M NaCl (2 ml/rat) combined with bilateral injections of moxonidine (0.5 nmol) in LPBN was also blocked by bilateral naloxone (40 μg) into the CeA. 0.3 M NaCl and water intake induced by bilateral muscimol injections (0.5 nmol) into LPBN in satiated animals were abolished by blocking AT1 angiotensin receptors (losartan - 20 μg) in CeA. In sodium-depleted animals, bilateral injections of losartan (20 μg) into the CeA significantly reduced water intake but did not affect sodium intake. Bilateral injections of the aldosterone antagonist RU 28318 (50 ng) did not change sodium and water intake induced by sodium depletion. Present results suggest that ocitocinergic, cholinergic muscarinic, 5-HT2A/2C serotonergic receptors and aldosterone receptors of the CeA do not participate in the control of 0.3 M NaCl intake induced by sodium depletion. Moreover, present results suggest that GABAergic and α2-adrenergic receptors of the CeA have an inhibitory role for sodium appetite in this situation. Although opioids and angiotensinergic mechanisms of the CeA apparently do not contribute to sodium depletion-induced sodium intake, opioidergic and angiotensinergic mechanisms in CeA are essential for sodium intake when the LPBN inhibitory mechanisms are blockade by LPBN muscimol injection. In addition, opioidergic mechanisms in CeA are also essential for the paradoxical sodium intake by hyperosmotic animals when the inhibitory mechanisms are attenuated by LPBN moxonidine. Therefore, the activation of opioidergic and angiotensinergic receptors of the CeA is required for sodium intake observed after removal or attenuation of LPBN inhibitory mechanisms. / O núcleo central da amígdala (CeA) e o núcleo parabraquial lateral (NPBL) são regiões importantíssimas para o controle da ingestão sódio e água. A integridade funcional do CeA é fundamental para a ingestão de sódio e água quando ocorre redução da atividade dos mecanismos inibitórios do NPBL. Portanto, os objetivos do presente estudo foram investigar a participação de alguns neurotransmissores no CeA no controle da ingestão de sódio e água induzida a) por desidratação extracelular e b) após o bloqueio dos mecanismos inibitórios do NPBL. Para tanto foram utilizados ratos Holtzman com cânulas guia de aço inoxidável implantadas bilateralmente apenas no CeA ou bilateralmente no CeA e no NPBL. A ingestão de NaCl 1,8% foi avaliada em animais saciados, hiperosmóticos ou com depleção de sódio. Em animais depletados de sódio, a administração bilateral do agonista de receptores adrenérgicos α2/imidazólicos moxonidina (10 nmol), assim como a de muscimol (0,25 nmol) no CeA reduziram a ingestão de NaCl 1,8%. A ativação ou bloqueio dos receptores de ocitocina, o bloqueio de receptores muscarínicos, ativação de receptores serotenérgicos 5-HT2A/2C, ou ainda o bloqueio de receptores de aldosterona no CeA não modificaram a ingestão de sódio e água. Contudo, injeções bilaterais de losartan (20 μg) no CeA reduziram a ingestão de água, mas não modificaram a ingestão de sódio em animais depletados. Já a ingestão de sódio e água induzidas por muscimol (0,5 nmol) no NPBL em animais saciados foram abolidas após bloqueio de receptores AT1 de angiotensina com administração de losartan no CeA. Administração bilateral de naloxona (40 μg) no CeA não modificou a ingestão de NaCl 1,8% e de água em animais desidratados. No entanto, a ingestão de sódio e água induzidas por injeções bilaterais de muscimol (0,5 nmol) no NPBL em animais saciados foram completamente bloqueadas após injeções bilaterais de naloxona no CeA. Além disso, a ingestão paradoxal de NaCl 0,3 M observada em ratos hiperosmóticos após o tratamento bilateral de moxonidina no NPBL também foi bloqueada pelas injeções de naloxona no CeA. Os presentes resultados sugerem que receptores ocitocinérgicos, colinérgicos muscarínicos, serotoninérgicos 5-HT2 e receptores de aldosterona no CeA não participam do controle da ingestão de NaCl 1,8% induzida por depleção de sódio. Por outro lado, os presentes resultados sugerem que receptores GABAérgicos e receptores adrenérgicos α2 no CeA apresentam um papel inibitório para o apetite ao sódio nessa situação. Embora os mecanismos opióides e angiotensinérgicos no CeA aparentemente não contribuam para a ingestão de sódio induzida pela depleção de sódio, os mecanismos opióides e angiotensinérgicos no CeA são essenciais para a ingestão de sódio observada quando os mecanismos inibitórios do NPBL são desativados pela ação do muscimol nessa área. Além disso, os mecanismos opióides no CeA também são essenciais para a ingestão paradoxal de sódio em animais hiperosmóticos quando os mecanismos inibitórios são atenuados pela ação da moxonidina no NPBL. Portanto, a ativação de receptores opióides e de receptores angiotensinérgicos no CeA é necessária para a ingestão de sódio observada após a remoção ou atenuação dos mecanismos inibitórios NPBL.