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Orientadora : Profª Drª Maria Luiza Petzl-Erler / Co-orientador : Prof Dr Danillo Gardenal Augusto / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 26/06/2015 / Inclui referências : f. 103-126 / Área de concentração / Resumo: CD33, LAIR-1 e LAIR-2 são receptores semelhantes a imunoglobulina expressos pela maioria das células das linhagens mielóide e linfóide, e são importantes reguladores das respostas imunes. CD33 e LAIR-1 são receptores transmembrana, e LAIR-2 é um homólogo solúvel de LAIR-1 que antagoniza as funções inibidoras deste ao competir pelos mesmo ligantes. Essas proteínas são codificadas por genes localizados no complexo de receptores leucitários (LRC) estendido, no cromossomo 19q13.4. Nesse estudo, investigamos se polimorfismos de base única (SNP) de CD33, LAIR1 e LAIR2 contribuem para susceptibilidade ao pênfigo foliáceo (PF), uma doença autoimune da pele, endêmica no Brasil e caracterizada por autoanticorpos anti-desmogleína 1. A genotipagem foi realizada pelo método iPLEX MassARRAY (Sequenom, San Diego, CA). Encontramos associação de três SNPs de CD33 com PF em uma amostra de indivíduos de ascendência predominantemente europeia (rs273640 T+, OR=0.48, p=0.0025; rs2455069 G+, OR=0.53, p=0.0063; rs1803254 C/C, OR=1.9, p=0.0076), e associação de um quarto SNP em uma amostra de ascendência mista (rs3865444 G+, OR=0.52, p=0.0151). Dois SNPs de LAIR1 (rs56802430 G, OR=1.52, p=0.0329; rs11084332 C, OR=0.57, p=0.0022) e um de LAIR2 (rs2287828 T+, OR=1.9, p=0.0097) também contribuem para susceptibilidade ao PF. Além das associações individuais, observamos interações entre três SNPs de CD33 e quatro SNPs de LAIR2, que estão associados com PF em análises estratificadas. Adicionalmente, analisamos os níveis de RNAm de CD33, LAIR1 and LAIR2 por PCR quantitativa em células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de controles. Nossos resultados demonstram que genótipos e haplótipos protetores ao PF estão associados com baixos níveis de CD33m, e que um haplótipo formado por quatro SNPs de LAIR2 está associado com maior susceptibilidade ao PF (OR=4.12, p=0.002) e com maior expressão de LAIR2 (p=0.007). Não encontramos relação entre expressão de LAIR1 e susceptibilidade ao PF. Nossos resultados sugerem que polimorfismos de CD33, LAIR1 e LAIR2 contribuem para susceptibilidade ao PF, e que a expressão diferencial de CD33 e LAIR2 possivelmente influencia a patogênese da doença. Palavras-chave: LAIR1, LAIR2, CD33, pênfigo foliáceo, autoimunidade, susceptibilidade genética. / Abstract: CD33, LAIR-1 and LAIR-2 are immunoglobulin-like receptors expressed in the majority of myeloid and lymphoid cells, and are important regulators of immune responses. CD33 and LAIR-1 are membrane-bound receptors, whereas LAIR-2 is a soluble homolog of LAIR-1 that antagonizes LAIR-1 inhibitory function by binding the same ligands. These proteins are coded by genes located within the extended region of the leukocyte receptor complex (LRC), in the chromosome 19q13.4. In this study, we analyzed if CD33, LAIR1 and LAIR2 single nucleotide polymorphisms (SNP) contribute to differential susceptibility to pemphigus foliceus (PF), an autoimmune blistering skin disease endemic in Brazil and characterized by desmoglein-1 specific autoantibodies. SNPs were analyzed by mass spectrometry-based genotyping (Sequenom, San Diego, CA). We report association of three CD33 SNPs with variable susceptibility to PF in a European predominant ancestry population (rs273640 T+, OR=0.48, p=0.0025; rs2455069 G+, OR=0.53, p=0.0063; rs1803254 C/C, OR=1.9, p=0.0076), and association of a fourth SNP in an admixed population (rs3865444 G+, OR=0.52, p=0.0151). We also found that two LAIR1 (rs56802430 G, OR=1.52, p=0.0329; rs11084332 C, OR=0.57, p=0.0022) and one LAIR2 SNP (rs2287828 T+, OR=1.9, p=0.0097) contribute for differential susceptibility to PF. Moreover, we observed interactions among three CD33 and four LAIR2 SNPs that are associated with PF in stratified analysis. Additionally, we measured CD33, LAIR1 and LAIR2 mRNA expression levels by real time PCR. We demonstrate that protective genotypes and haplotypes mark lower expression levels of CD33m, a mRNA CD33 variant. One LAIR2 haplotype harboring four interacting SNPs is strongly associated with higher susceptibility with PF (OR=4.12, p=0.002) and also with higher LAIR2 expression (p=0.007). We found no evidence of association between LAIR1 expression and PF susceptibility. Our data suggests that CD33, LAIR1 and LAIR2 genetic variants impact PF susceptibility, and that CD33 and LAIR2 variable expression possibly influences PF pathogenesis. Keywords: LAIR1, LAIR2, CD33, pemphigus foliaceus, autoimmunity, genetic susceptibility.

Orientadora : Profª Drª Valéria M. M. Sperandio Roxo / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 27/02/2012 / Inclui referências : f. 31-34;44-51 / Área de concentração : Genética / Resumo: HLA-F é um gene pertencente ao complexo principal de histocompatibilidade (MHC) não clássico. Este gene codifica moléculas MHC de classe Ib com distribuição restrita e menos variações nucleotídicas que genes MHC de classe Ia. Dos 22 alelos registrados no banco de dados IMGT apenas quatro codificam proteínas que diferem em suas estruturas primárias. A fim de estimar o genótipo e as frequências alélicas, este estudo teve como foco as regiões previamente descritas do gene HLA-F que são codificadoras de proteínas. A genotipagem foi feita através de sequenciamento (SBT). A amostra foi composta por 199 doadores de medula óssea sem relações de parentesco entre si e que fazem parte do Registro Nacional de Doadores de Medula Óssea (REDOME), euro-brasileiros, provenientes da região Sul do Brasil. Cerca de 1673 pares de base foram analisados. O alelo mais frequente foi o HLA-F*01:01 (87.19%), seguido por HLA-F*01:03 (12.31%), HLA-F*01:02 (0.25%) e HLA-F*01:04 (0.25%). Significantes desequilíbrios de ligação foram verificados entre alelos do gene HLA-F e alelos de genes HLA de classe I e II. Este é o primeiro estudo sobre polimorfismos do gene HLA-F em uma amostra da população euro-brasileira contribuindo para a caracterização genética da região Sul do Brasil. Palavras-chave: Euro-brasileiros, HLA-F, desequilíbrio de ligação, polimorfismos, população. / Abstract: HLA-F is a non-classical major histocompatibility complex (MHC) gene. It codes class Ib MHC molecules with restricted distribution and less nucleotide variations than MHC class Ia genes. Of the 22 alleles registered on the IMGT database only four alleles encode for proteins that differ in their primary structure. To estimate genotype and allele frequencies, this study targeted on known protein coding regions of the HLA-F gene. Genotyping was performed by Sequence-Based Typing (SBT). The sample was composed by 199-unrelated bone marrow donors from the Brazilian Bone Marrow Donor Registry (REDOME), Euro-Brazilians, from Southern Brazil. About 1673 bp were analyzed. The most frequent allele was HLA-F*01:01 (87.19%), followed by HLA-F*01:03 (12.31%), HLA-F*01:02 (0.25%) and HLA-F*01:04 (0.25%). Significant linkage disequilibrium (LD) was verified between HLA-F and HLA classes I and II alleles. This is the first study regarding HLA-F polymorphisms in a Euro-Brazilian population contributing to the Southern Brazilian genetic characterization. Keywords: Euro-Brazilians, HLA-F, linkage disequilibrium, polymorphisms, population.