Introdução: O Papilomavírus Humano está muito bem associado com diversos tipos de cânceres humanos, como câncer anogenital e oral. Alguns estudos demonstram que o aparecimento de lesões e a progressão para o câncer estão relacionados ao tipo de resposta imune do hospedeiro. Deste modo, evidências indicam que a resposta imune do hospedeiro tem um papel muito importante para o curso da infecção pelo HPV. Objetivo: Avaliar a resposta imune específica in vitro ao Papilomavírus Humano (HPV) em homens com lesões causadas por HPV e sem lesão por HPV. Material e Métodos: Foram recrutados 31 pacientes e 11 voluntários, que formaram 4 grupos de estudo; sendo 12 pacientes no Grupo A (HIV +/ HPV +); 09 pacientes no Grupo B (HIV-/HPV+); 10 pacientes no Grupo C (HIV+/ HPV-); e 11 indivíduos saudáveis no Grupo D (HIV-/HPV-). Foram realizados ensaios de cultura celular para mensurar a resposta celular específica \"in vitro\" do tipo Th1/Th2/Th17 (INF-y, IL-2, TNFalfa, IL-4, IL-10 e IL-17) sob o estímulo da vacina quadrivalente do HPV (HPV 6, 11, 16 e 18) e à proteína E7 de HPV-16. Resultados: O grupo coinfectado (HIV +/ HPV+) apresentou níveis mais elevados de citocinas, principalmente do perfil Th2, comparando-se com os dados dos demais grupos de estudo. O grupo coinfectado apresentou níveis elevados de IL-6 e IL-10 (Perfil Th2) em relação ao grupo controle (HIV-/HPV-), com significância estatística (p < 0.0001 e p < 0.0001, respectivamente). Conclusão: Foi demonstrada uma elevada produção de citocinas no grupo HPV+/HIV+, sugerindo uma forte imunomodulação pela coinfecção HIV/HPV. Entretanto, novos estudos devem ser realizados para comprovar estes dados. Além de apresentar um perfil essencialmente Th2 do grupo coinfectado, principalmente pelos níveis elevados de IL-6 e IL-10 apresentados, sugerindo que estas duas citocinas possam servir como biomarcadores para persistência viral, uma vez que, os pacientes soropositivos para HIV apresentam maior persistência de HPV, e monitorar a progressão para lesões mais graves / Introduction: Human Papillomavirus is associated with different types of human cancers, such as anogenital and oral cancer. Some studies show that the appearance of lesions and progression to cancer are related to the type of host immune response. Thus, evidence indicates that the host immune response has a role key in the course of HPV infection. Objective: To evaluate the specific immune response in vitro to HPV in men with lesions caused by HPV and without injury caused by HPV. Methods: We recruited 31 patients and 11 volunteers, who formed four groups, with 12 patients in Group A (HIV+/HPV+); 09 patients in Group B (HIV-/HPV+); 10 patients in Group C (HIV+/HPV-) and 11 healthy subjects in Group D (HIV-/HPV-). Cells culture assay was performed to measure the specific immune response \"in vitro\" Th1/Th2/Th17 (IFN-y, IL-2, TNF-alfa, IL-4, IL-10 and IL-17) under the stimulation of quadrivalent HPV vaccine (HPV 6, 11, 16 and 18) and the E7 protein of HPV-16. Results: The coinfected group (HIV+/HPV+) had higher levels of cytokines, especially Th2 profile, compared with data from the other study groups. The coinfected group showed high levels of IL-6 and IL-10 (Th2 profile) compared to the control Group (HIV- /HPV-), with statistical significance (p < 0.0001 and p < 0.0001, respectively). Conclusion: This study demonstrated a high production of cytokines in the coinfected group, suggesting a strong immunomodulation by coinfection HIV/HPV. However, further studies should be conducted to confirm these data. In addition to presenting essentially a Th2 profile, especially by high levels of IL-6 and IL-10 presented, suggesting that these two cytokines may serve as biomarkers for viral persistence, since HIV seropositive patients have a higher persistence of HPV, and monitor the progression to more serious injuries

Entre mulheres com HIV/AIDS há um maior número de casos de infecções persistentes pelo HPV contribuindo para um risco aumentado do desenvolvimento de lesões intraepiteliais escamosas cervicais. Ademais, a expressão anormal de moléculas HLA-E pode modular o sistema imunológico através da ligação com o receptor inibitório (CD94/NKG2A) ou estimulatório (CD94/NKG2C) de células NK e linfóticos T CD8+, diminuindo imunovigilância favorecendo a evasão de céulas infectadas por vírus. Diante da escassez de estudos avaliando a molécula HLA-E na interação com o HPV, mais especificamente na infecção pelo HIV-1, este estudo teve como objetivo avaliar a expressão de HLA-E em lesões intraepiteliais cervicais em mulheres portadoras do HPV, apresentando ou não a infecção pelo HIV-1. Trata-se de um estudo transversal, ao qual foram submetidos ao processo imunohistoquímico tecido do colo do útero parafinado de 67 mulheres infectadas pelo HIV-1 e 62 mulheres não infectadas, todas com lesão intraepitelial cervical com HPV, o qual foi tipificado. A expressão da molécula HLA-E foi analisada quantitativamente como sem expressão, de 1% a 30%, de 31% a 70% e de 71% a 100%. Os resultados mostraram que a infecção por herpes vírus foi maior entre as participantes HIV+ (P=0,005). Na análise imunohistoquímica, ficou evidente que as lesões intraepiteliais cervicais de mulheres infectadas pelo HIV-1 apresentaram redução na expressão da molécula HLA-E de 31% a 100% em comparação com mulheres sem a infecção pelo HIV- 1 (P=0,001), sugerindo que essa redução possa ser um mecanismo de escape viral, que acarreta a redução da apresentação de peptídeos virais para os linfócitos T CD8+. A expressão do HLA-E não foi associada aos graus de lesões intraepiteliais cervicais. Outros estudos são necessários para melhor compreensão do padrão e da função da expressão das moléculas HLA-E em lesões intraepiteliais cervicais de mulheres infectadas pelo HIV- 1 / Among women with HIV / AIDS there is a greater number of cases of persistent HPV infections contributing to an increased risk of developing squamous intraepithelial lesions of the cervix. In addition, abnormal expression of HLA-E molecules can modulate the immune system by binding to the inhibitory (CD94 / NKG2A) or stimulatory (CD94 / NKG2C) receptor NK cells and CD8+ T lymphocytes, decreasing immunovigilance and favoring the evasion of infected cells infected with virus. Due to the lack of studies evaluating the HLA-E molecule in the interaction with HPV, more specifically in HIV-1 infection, this project aimed to evaluate the expression of HLA-E in cervical intraepithelial lesions of infected women or not by HIV- 1, with the infection by HPV. It is a cross-sectional study, which was submitted to immunohistochemical processing the paraffin-embedded cervix tissue of 67 HIV-1 women infected with HIV-1 and 62 uninfected women, all of them with cervical intraepithelial lesion with HPV, which was typified. The expression of HLA-E was quantitatively analyzed as non- expressed, 1% to 30%, 31% to 70% and 71% to 100%. The results showed that the herpes virus infection was higher among HIV + participants (P = 0.005). In immunohistochemical analysis, it became evident that cervical intraepithelial lesions in HIV-1 infected women showed a reduction the expression of HLA-E molecule from 31% to 100% compared to women without HIV-1 infection (P = 0.001) Suggesting that this reduction may be a viral escape mechanism, which leads to a reduction in the presentation of viral peptides to CD8+ T lymphocytes. The expression of HLA-E was not associated with cervical intraepithelial lesions. More studies are need to better understand the pattern and function of HLA-E molecule expression in cervical intraepithelial lesions of infected women by HIV-1

Avaliamos a incidência e o clareamento para o vírus do papiloma humano (HPV) dos tipos oncogênicos e não-oncogênicos em uma coorte aberta com 202 mulheres portadoras do vírus da imunodeficiência humana (HIV), e identificamos alguns fatores de risco e proteção associados a cada desfecho utilizando modelos de fragilidade Gama. No modelo de incidência, foram estudados os tempos até incidência de HPV oncogênicos e não-oncogênicos para cada mulher; no modelo de clareamento, foram estudados os correspondentes tempos até clareamento. Comparamos os erros-padrões estimados pela matriz de informação observada com os erros-padrões bootstrap para ambos os modelos e verificamos que a proposta de Verweij & Houwelingen (1994) para a matriz de variâncias e covariâncias dos parâmetros é a mais apropriada. Para a incidência de HPV oncogênicos, identificamos como fator de risco o uso de drogas em que a taxa de incidência para as pacientes que usam drogas é 1.88 (IC 90%, 1.01; 3.5) vezes aquela correspondente a mulheres que não usam e como fator de proteção a renda em que a taxa de incidência de pacientes com renda igual ou superior a 3 salários mínimos é 0.62 (IC 90%, 0.38; 1.00) vezes a taxa referente àquelas com renda menor que 3 salários mínimos. Para a incidência de HPV não-oncogênicos identificamos como fatores de risco a escolaridade e o total de gestações, em que, para a última, a taxa de incidência para as mulheres que tiveram mais do que uma gestação é 1.76 (IC 90%, 1.09; 2.86) vezes a taxa referente àquelas que tiveram uma ou nenhuma. Para o clareamento de HPV oncogênicos identificamos como fatores que indicam um clareamento mais rápido a renda, a idade e o tratamento antirretroviral (ARV), em que, para a última, supondo mulheres com fragilidades iguais, a taxa de clareamento para as pacientes que eram tratadas com o esquema inibidor de protease (IP) é 1.79 (IC 90%, 1.1; 2.9) vezes aquela correspondente a mulheres que não foram tratadas com nenhum tratamento ARV e como fator que indicam um clareamento mais lento o número de parceiros sexuais no último ano, em que, as pacientes com mais de um parceiro tiveram taxa de clareamento 0.39 (IC 90%, 0.16; 0.98) vezes a taxa de clareamento referente à uma mulher que teve um parceiro ou menos. Para o clareamento de HPV não-oncogênicos tivemos como fator que indica um clareamento mais lento o hábito tabagista em que, supondo fragilidades iguais, pacientes fumantes tem a taxa de clareamento 0.53 (IC 90%, 0.32; 0.87) vezes a taxa referente à uma mulher que não fuma. / We evaluated the incidence and clearance for oncogenic and non-oncogenic human papilloma virus (HPV) in an open cohort of 202 women infected with human immunodeficiency virus (HIV), and we identified some risk factors and protective factors for each outcome using Gamma frailty models. In the incidence model, we studied the incidence of stroke by oncogenic and non-oncogenic HPV for each woman; in the clearance model, the corresponding times to clearance were studied. We compared the standard errors estimated by the observed information matrix with bootstrap standard errors for both models and found that the variance and covariance matrix of the parameters proposed by Verweij & Houwelingen (1994) is more appropriate. For the incidence of oncogenic HPV, identified as a risk factor drug use and the incidence rate for patients who use drugs is 1.88 (90% CI, 1.01; 3.5) times the rate for those who do not use and as a protective factor income where the incidence rate is 0.62 (90% CI, 0.38; 1.00) times the rate for those earning less than 3 minimum wages. For the incidence of non-oncogenic HPV identified as risk factors schooling and total pregnancies, in which, for the latter, the incidence rate for women who had more than one pregnancy is 1.76 (90% CI, 1.09; 2.86) times the rate for those which have one or none. For clearance of oncogenic HPV identified as factors that indicate a faster clearance income, age and antiretroviral therapy (ART), in which, to the last, with women assuming equal frailties, the rate of clearance for patients who were treated with the protease inhibitor (IP) regimen is 1.79 (90% CI, 1.1; 2.9) times the rate for those who were not treated with any antiretroviral regimen and as a factor that indicates slower clearance the number of sexual partners in the last year, and for patients with more than one partner the clearance rate 0.39 (IC 90%, 0.16; 0.98) times the rate referring to a woman who had up to a partner. For the clearance of non-oncogenic HPV had a factor which indicates a slower clearance smoking habit, assuming equal frailties, smokers have the clearance rate 0.53 (90% CI, 0.32; 0.87) times the rate referring to a woman who does not smoke.

O papilomavirus humano (HPV) é o agente etiológico da infecção sexualmente transmissível mais comum na população mundial. A prevalência da infecção por HPV é estimada em 660 milhões de pessoas e mais de 50% das mulheres serão acometidas pela infecção ao menos uma vez na vida. O HPV é responsável por virtualmente todos os casos de câncer de colo de útero (99%), além de causar muitos outros tipos de câncer de mucosa. O câncer cervical afeta aproximadamente 1.4 milhões de mulheres e 500 mil novos casos surgem anualmente, resultando em 250 mil mortes por ano. Os maiores índices de incidência são observados na América Latina e na África. Duas vacinas contra o HPV são comercializadas desde 2006 por empresas estrangeiras. Entretanto, o custo mínimo da vacinação é superior a 600 reais. Este preço torna sua incorporação pelo sistema de saúde um processo economicamente inviável. Dessa forma, devem ser buscadas alternativas para a produção de uma vacina eficaz, de qualidade e de baixo custo no Brasil. A proteína L1, principal proteína do capsídeo do HPV, tem a propriedade de se auto agregar em partículas semelhantes às virais (VLPs), que são o principal componente das vacinas atuais e possuem muita semelhança com os vírions nativos, introduzindo inclusive, uma imunização predominantemente tipo-específica. Este projeto se propôs a construir e avaliar vetores de expressão visando à produção em larga escala da proteína L1 do HPV 16, o tipo de HPV de maior risco e incidência na população mundial. Foram construídos cinco plasmídeos para Pichia pastoris, uma das principais plataformas industriais de expressão. Eles se diferenciam pelos marcadores de seleção e pelas sequências de manutenção do vetor, mas têm exatamente o mesmo objetivo: gerar sistemas que possuam múltiplas cópias do gene da L1 e que não necessitem da utilização de antibióticos. Essa estratégia foi escolhida porque a produtividade de muitas das proteínas heterólogas tem grande dependência da dosagem gênica e porque o uso de antibióticos encarece muito o custo da produção. Na primeira etapa do projeto foi avaliado um sistema de expressão epissomal auxotrófico, mas ele não se manteve estável ao longo de 60 gerações. Na segunda parte, dois vetores de integração ao sítio do DNA ribossomal foram testados. O sistema mais estável e produtivo foi caracterizado quanto ao número de cópias integradas ao genoma da P. pastoris e ao nível de expressão. O sistema é capaz de produzir clones com mais de 30 cópias do gene da L1 e dois clones expressaram cerca de 20 a 30 miligramas/litro de L1. Adicionalmente outros dois vetores integrativos que utilizam sequências teloméricas para integração foram construídos. Ainda são necessários estudos conjuntos de fermentação em larga escala e purificação da proteína para verificar a viabilidade do sistema / The human papillomavirus (HPV) is the etiologic agent of the sexually transmitted infection most common worldwide. The prevalence of HPV infection is estimated at 660 million people and over 50% of women will be affected by the infection at least once in their lifetime. HPV is responsible for virtually all cervical cancers cases (99%), and causes many other types of mucosal cancer. Cervical cancer affects approximately 1.4 million women, and 500.000 new cases occur annually, resulting in 250.000 deaths per year. The highest incidence rates are seen in Latin America and Africa. Two HPV vaccines are marketed since 2006 by foreign companies. However, the minimum cost of vaccination is higher than 360 dollar. This price makes its incorporation by the Brazilian Health System economically unfeasible. Thus, alternatives must be found to produce an effective vaccine, with low cost and high-quality in Brazil. The L1 protein, the major capsid protein of HPV, has the ability to self aggregate into virus-like particles (VLPs) which are the main component of current vaccines. The VLPs are very similar to the native virions and can introduce an immunization predominantly type-specific. This project aimed to construct and evaluate expression vectors to produce, at large scale, the L1 protein of HPV 16, which is the HPV type at greater risk and incidence in the world. Five plasmids were constructed for Pichia pastoris, one of the major industrial expression platforms. They differ in the selection markers and the vector maintenance sequences, but they have exactly the same goal: to create systems with multiple copies of the L1 gene and that don\'t require the use of antibiotics. This strategy was chosen because the productivity of many heterologous proteins have heavy dependence on gene dosage and because the use of antibiotics is extremely expensive for its production. In the first stage of the project, it was rated an episomal auxotrophic expression system, but it was unstable after a period of 60 generations. In the second part, two vectors for integration in the ribosomal DNA locus were tested. The most stable and productive system was featured on the number of copies integrated into the P. pastoris genome and on the expression level. It was proved that the system is able to produce clones with more than 30 copies of the L1 gene and two clones expressed approximately 20-30 milligrams/liter of L1. Additionally, two other integrative vectors for integration in telomeric sequences were constructed for future testing. More studies on large-scale fermentation and protein purification will be necessary to determine the feasibility of the system.

Câncer cervical é a terceira causa de morte em mulheres no mundo, e a quarta causa de morte em mulheres no Brasil. Seu principal agente etiológico é o vírus do papiloma humano (HPV), e diversos estudos estão sendo feitos na tentativa de desenvolver abordagens terapêuticas que combatam tumores induzidos por HPV. Nesse contexto, surgem às vacinas de DNA, capazes de induzir resposta imune específica contra esse tipo de tumores em camundongos. Entretanto essas vacinas apresentam baixa imunogenicidade em humanos, sendo necessária estudar abordagens que aumentem a potência dessas vacinas. Eletroporação in vivo (EP) é um método de entrega de vacinas de DNA, capaz de elevar potência das mesmas. Nosso grupo desenvolveu uma imunoterapia baseada em DNA (pgDE7h), e quando associamos a EP em nossa imunização pela via intramuscular, observamos aumento do efeito antitumoral e da frequência T CD8+E7-específicas e citotóxicas, migração de células para o sítio de inoculação do DNA, indução de células T polifuncionais e de memória, além de maior avidez de células T ativadas. / Cervical cancer is the third leading cause of death in women worldwide, and the fourth leading cause of death in women in Brazil. Its main etiological agent is human papilloma virus (HPV), and several studies are being done in trying to develop therapeutic approaches that fight tumors induced by HPV. In this context, there are the DNA vaccines are capable of inducing specific immune response against this type of tumors in mice. However, these vaccines have a low immunogenicity in humans, it is required to study approaches to increase the potency of these vaccines. In vivo electroporation (EP) is a method of delivering DNA vaccines, capable of raising power of the same. Our group has developed a DNA-based immunotherapy (pgDE7h), and when associate EP in our immunization by intramuscularly observed increase antitumor effect and frequency CD8+E7-specific and cytotoxic, cell migration for the inoculation site of the DNA polyfunctional T cell induction and memory, and higher avidity for activated T cells.

Os papilomavírus humanos são vírus de DNA que infectam epitélios em regiões anatômicas específicas. Alguns tipos de HPV, coletivamente denominados de alto risco oncogênico, têm associação etiológica com o câncer do colo do útero. Estes vírus expressam dois oncogenes, E6 e E7, que alteram o ciclo celular e o programa de diferenciação das células. Isto promove o acúmulo de defeitos mitóticos e instabilidade genômica, contribuindo à transformação maligna. Alterações nos sistemas de reparo de dano ao DNA associadas à presença de HPV têm sido descritas em diferentes modelos experimentais, no entanto, não tem sido analisadas de maneira sistemática. No presente estudo, avaliamos a expressão de 135 genes envolvidos nas vias de reparo de dano ao DNA em queratinócitos primários humanos e em linhagens derivadas de carcinomas do colo do útero positivas e negativas para HPV. Nossos resultados indicam a presença de alterações importantes na expressão de genes envolvidos nas vias de reparo de dano ao DNA em linhagens derivadas de tumores do colo do útero. / Human papillomaviruses are DNA viruses that infect epithelia in specific anatomical regions. Some HPV types, collectively known as high-risk types are etiologically associated with cervical cancer. These viruses express two oncogenes E6 and E7 that alter the cell cycle and cell differentiation. Besides, they promote genomic instability and the accumulation of mitotic defects contributing to malignant transformation. Alterations in the DNA damage repair systems associated with HPV presence have been described in various experimental model systems. However, they have not been systematically analyzed. In this study, we evaluated the expression of 135 genes involved in the DNA damage repair pathways in primary human keratinocytes and cervical cancer derived cell lines. Our results show the presence of important alterations in the expression of DNA damage repair genes in cervical cancer derived cell lines.

Introdução: Entre as doenças sexualmente transmissíveis (DST), infecções por papilomavírus humano (HPV) são muito comuns. Apesar de frequentemente transitória, quando há persistência da infecção podem surgir lesões que, se não tratadas, podem progredir para o câncer. A disseminação do HPV tende a ser universal entre indivíduos sexualmente ativos, sendo que o homem, além do risco de câncer anal, peniano e da orofaringe, pode ser importante propagador do vírus entre mulheres. No entanto, pouco se sabe a respeito da prevalência, incidência e remissão de infecções por HPV em homens. Os alimentos e nutrientes poderiam influenciar a progressão do câncer afetando a susceptibilidade à infecção, alterando o estado nutricional, atuando na probabilidade da infecção se tornar persistente e na progressão a lesões neoplásicas, além de alterar a estabilidade e reparo do DNA. Objetivo: Investigar a relação entre nutrientes selecionados e a infecção persistente por HPV em homens. Métodos: Foram utilizados dados secundários de 1248 indivíduos de 18 a 70 anos e que responderam a um Questionário de Frequência Alimentar (QFA), obtidos da coorte brasileira de estudo sobre HPV em homens. O QFA foi desenvolvido e validado para a população do estudo, e posteriormente seus dados foram calibrados e ajustados pela energia. Por meio do teste U de Mann-Whitney foram avaliadas diferenças nas medianas de ingestão dos nutrientes entre grupos com e sem infecção persistente por HPV oncogênico e não-oncogênico, e realizado teste de tendência. A associação entre os nutrientes e o HPV persistente foi testada por regressão logística. Resultados: Dos 1248 participantes analisados, 1211 (97,0 por cento ) apresentaram infecção por HPV e 781 (62,6 por cento ) apresentaram infecção persistente por HPV, sendo que 458 (36,7 por cento ) tinham infecção persistente por HPV oncogênico e 636 (51,0 por cento ) por HPV não-oncogênico. Para o HPV oncogênico, o grupo sem infecção persistente apresentou maior mediana de ingestão de retinol (p=0,008), vitamina A (p<0,001) e folato (DFE) (p=0,003), além de menor mediana de ingestão de energia (p=0,005) e licopeno (p=0,008). Não houve associação significativa entre os nutrientes selecionados e o HPV persistente oncogênico. Já para o HPV persistente não-oncogênico, a vitamina B12 apresentou associação inversa estatisticamente significativa (p de tendência=0,003). Conclusão: Não houve associação entre ingestão de nutrientes e infecção persistente por HPV oncogênico; e apenas a vitamina B12 mostrou-se inversamente associada com a persistência da infecção por HPV não-oncogênico. / Background: HPV infections are the most common among sexually transmitted diseases. Although most frequently transitory, persistent oncogenic-type HPV infection may progress to a precursor lesion and, if not correctly treated, to cancer. The dissemination of HPV tends to be universal in sexually active individuals. Men, besides being in risk to cancer, in special penile and anal cancer, can be the spreader of this virus to women, contributing to the infection, and hence the cervical cancer. However, little is known about this infection in men. Some studies discuss the possible relation between diet and the risk of HPV and the role of food in persistent infections. Food and nutrients could influence carcinogenesis process by affecting nutritional status, susceptibility to infection and by acting in the probability of infection turning persistent and progressing to neoplastic lesions, besides altering DNA repair and stability. Objective: Investigate the relation of selected nutrients and HPV persistent infection in men of São Paulo, Brazil. Methods: The study population consisted of 1,248 men from the Brazilian cohort of HIM study, aged from 18 to 70 years old, whose answered a quantitative food frequency questionnaire (FFQ) in the baseline. The FFQ was developed and validated for the study population and afterwards calibrated and energy-adjusted. The U Mann-Whitney test was used to assess differences in the medians of nutrient intake between men with persistent and non-persistent infection. The association of dietary intake and persistent HPV infection was assessed in multivariate logistic models. Two independent multivariate logistic regression models were developed, one for oncogenic HPV persistent infection and other for nononcogenic HPV persistent infection. By treating categorical nutrient variables as continuous, it was possible to perform tests for trends. Results: Of 1248 participants analyzed, 1211 (97,0 per cent ) presented HPV infection and 781 (62,6 per cent ) presented persistent HPV infection, whereas 458 (36,7 per cent ) showed persistent infection by oncogenic type and 636 (51,0 per cent ) by nononcogenic type. For oncogenic type, the group with non-persistent infection had higher medians of retinol (p=0,008), vitamin A (p<0,001) and folate (DFE) (p=0,003), besides lower medians of energy (p=0,005) and lycopene (p=0,008). There was no significant association between selected nutrients and persistent oncogenic HPV infection. For nononcogenic persistent infections, only vitamin B12 was significantly associated (p=0,003, test for trend). Conclusion: No association was found between dietary intake and persistent oncogenic-type HPV infection. For nononcogenic persistent infections, only vitamin B12 was inversely associated.

O desenvolvimento de vacinas contra o vírus do papiloma humano (HPV) representa uma importante alternativa para o controle da infecção sexualmente transmissível e do câncer cervical. Neste trabalho exploramos uma estratégia vacinal inédita contra tumores induzidos pelo HPV-16 empregando a proteína E7 obtida após fusão genética com a glicoproteína D do vírus herpes tipo 1, uma proteína com propriedades adjuvantes para linfócitos T. A proteína recombinante gDE7 foi expressa em bactérias e em células de inseto e purificada por cromatografia de afinidade. A proteína gerada em bactérias foi administrada nas formas insolúvel e solúvel como vacina em camundongos. A gDE7 insolúvel conferiu 80% de proteção profilática para o crescimento tumoral, a gDE7 que manteve a forma solúvel após refolding protegeu 100% dos animais nas mesmas condições. Já a proteção terapêutica alcançou 30% dos animais. Além disso, verificamos o potencial neutralizante dos soros gerados frente ao HSV-1. As condições de obtenção das proteínas expressas em células de inseto também foram estabelecidas. / The development of vaccines against human papillomavirus (HPV) represents an important alternative to control the sexually transmitted infection and cervical cancer. In this paper we explored a novel vaccine strategy against tumors induced by HPV-16 using the E7 protein obtained after genetic fusion to the glycoprotein D of herpes virus type 1, a protein with adjuvant properties for T lymphocytes. The recombinant protein gDE7 was expressed in bacteria and in insect cells and purified by affinity chromatography. The protein generated in bacteria was administered in soluble and insoluble forms as a vaccine in mice. The insoluble gDE7 gave 80% prophylactic protection for tumor growth, the gDE7 that kept the soluble form after refolding protected 100% of the animals under the same conditions. The therapeutic protection reached 30% of the animals. We also verified the neutralizing potential of sera generated against the HSV-1. The conditions for obtaining the proteins expressed in insect cells were also established.

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-03-27T10:38:01Z No. of bitstreams: 0 / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-03-27T14:00:10Z (GMT) No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2018-03-27T14:00:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2018-03-01 / A microbiota vaginal é um ecossistema formado por bactérias aeróbias e anaeróbias, que vivem em equilíbrio dinâmico. Fatores como imunidade e variações hormonais podem provocar a perda do equilíbrio, ocasionando a proliferação de patógenos oportunistas. A vaginose bacteriana (VB) é uma doença de etiologia polimicrobiana, podendo ocorrer em associação com outros microrganismos, tais como o Papilomavirus humano (HPV). O HPV é mais prevalente na população feminina sexualmente ativa, sendo fator de risco para o desenvolvimento do câncer cervical. O objetivo do trabalho foi avaliar a diversidade microbiana do ecossistema vaginal de mulheres com e sem atipias celulares cervicais e relacionar com HPV. Fluido vaginal e raspado da cérvice uterina foram coletados (n= 33 sem lesão e n=41 com lesão) e DNA viral e bacteriano foi extraído. Lâminas foram coradas pelo método de Gram, a fim de estabelecer o escore de Nugent para avaliação da VB. Reação de PCR para genotipagem do HPV foi realizado. PCR-DGGE foi realizado para avaliação da estrutura da comunidade bacteriana. A média de idade das mulheres foi de 36 anos; compreendendo 87% (sem lesão) e 92% (com lesão). A análise do escore de Nugent revelou que 51% das mulheres com lesão não apresentavam VB e 29% eram portadoras de VB. O exame de Papanicolaou mostrou que 31% das mulheres apresentavam lesão com células escamosas atípicas de significado indeterminado (ASC-US), seguida de lesão epitelial escamosa de baixo grau (LSIL) e lesão epitelial escamosa de alto grau (HSIL), ambas com 26%, e 14% das mulheres apresentaram lesão com células escamosas atípicas que não permitem excluir lesão de alto grau (ASC-H). HPV foi detectado em 91% das pacientes, sendo identificados 5 tipos do grupo de alto risco oncogênico (16, 18, 31, 52 e 58). O HPV 16 foi o mais frequente (85%), seguido do HPV 18 (68%). No grupo sem lesão a prevalência da concomitância de HPV 16 e 18 foi de 58% e no grupo com lesão foi de 60%. Na faixa etária de 18 a 30 anos, 43% das mulheres apresentaram HPV 16, e 35% apresentaram coinfecção por HPV 16 e 18. A associação entre a genotipagem e o exame de Papanicolaou mostrou que 40% das pacientes ASC-US e 20% ASC-H apresentaram monoinfecção por HPV 16. Das mulheres com HPV 16 e coinfecção por HPV 16 e 18, VB foi encontrada em 25% das mulheres. Na análise do agrupamento obtido por PCR-DGGE observa-se, com algumas exceções, que os perfis de mulheres com as mesmas condições de saúde (normal, intermediário e com vaginose bacteriana) tenderam a se agrupar, embora em grupos separados. Na análise do agrupamento em relação às atipias, não foi observada a formação de um padrão. Dada a complexidade do ecossistema vaginal, sugere-se a necessidade de técnicas com maior poder de resolução para o entendimento da relação entre o HPV, microbiota vaginal e lesões celulares cervicais. / The vaginal microbiota is a complex ecosystem formed by aerobic and anaerobic bacteria, which live in dynamic equilibrium. Factors such as immunity and hormonal variations can cause loss of balance, leading to the proliferation of opportunistic pathogens and resulting in diseases. Bacterial vaginosis (BV) is a polymicrobial disease, and may occur in association with other microorganisms, such as Human Papillomavirus (HPV). HPV is the most prevalent in the female sexually active population, being a risk factor for the development of cervical intraepithelial lesions, which may progress to cervical cancer. The aim of this study was to evaluate the microbial diversity of the vaginal ecosystem of women with cervical cellular atypias and carrying HPV. Vaginal fluid and scraped uterine cervix were collected (n = 33 without lesion and n = 41 with lesion) and viral and bacterial DNA was extracted. Glass slides were stained by the Gram method in order to establish the Nugent score for BV evaluation. PCR reaction for HPV genotyping was performed. DGGE-PCR was performed to assess the structure of the bacterial community. The mean age of the women was 36 years; comprising 87% (without lesion) and 92% (with lesion). Analysis of the Nugent score revealed that 51% of the women with lesion did not present BV and 29% had BV. Pap smear test showed that 31% of the women had atypical squamous cells of undetermined significance (ASC-US), 26% had low grade squamous epithelial lesion (LSIL), 26% had high grade squamous epithelial lesion (HSIL) and 14% had with atypical squamous cells that do not allow the exclusion of high-grade lesion (ASC-H). HPV was detected in 91% of the patients, being identified 5 types of the high risk group (16, 18, 31, 52 and 58). HPV 16 was the most frequent (85%), followed by HPV 18 (68%). In the non-lesion group, the prevalence of HPV 16 and 18 concomitance was 58% and in the lesion group it was 60%. In the 18-30 age group, 43% of the women had HPV 16, and 35% had coinfection by HPV 16 and 18. The association between genotyping and the Pap smear showed that 40% of ASC- US patients and 20% ASC-H showed monoinfection by HPV 16. Besides, out of women with HPV 16 and coinfection by HPV 16 and 18, BV was found in 25%. In the analysis of the grouping obtained by PCR-DGGE it is observed with some exceptions, that the profiles of women with the same health conditions (healthy, intermediate and with bacterial vaginosis) tended to group, although in separate groups. Analysis of the cluster in relation to the atypia did not observe the formation of a pattern. Given the complexity of the vaginal ecosystem, it is suggested the need for higher resolution power techniques for understanding the relationship between HPV, vaginal microbiota and cervical cellular lesions.

Le cancer du col de l'utérus est le troisième cancer le plus fréquent chez la femme dans le monde. Cependant l'efficacité des traitementsconventionnels n'est pas toujours optimale. La recherche de nouvelles molécules naturelles, possédant des propriétés anticancéreuses et n'induisantpas d'effets secondaires, est donc d'un intérêt majeur. Parmi ces molécules, un flavonoïde se distingue des autres par ses nombreux effetsthérapeutiques potentiels, l'isoliquiritigénine (ILG). Cette chalcone naturellement présente dans la racine de réglisse, possède de nombreusespropriétés, incluant une activité anti-tumorale.Le but de cette thèse était d'étudier l'effet anticancéreux de ITLG synthétique dans des cellules dérivées de cancer du col de l'utérus.L'étude du mécanisme moléculaire impliqué dans Papoptose a été centrée sur les cellules les plus représentatives des carcinomes du col de l'utérus,les Ça Ski infectées par le papillomavirus de type 16 dans lequel nous démontrons que l'ILG inhibe l'expression de l'oncogène viral E6 d'HPVlô.Nos résultats montrent que l'ILG diminue la viabilité, induit un arrêt de cycle et favorise l'apoptose dans des cellules dérivées de cancer du col del'utérus différant par leur statut viral et leur statut p53.Nous mettons ainsi en évidence que l'apoptose induite par l'ILG est spécifique des cellules tumorales et implique différentes voies de signalisationsuivant le type cellulaire. L'ILG pourrait donc faire partie d'un nouvel arsenal thérapeutique visant à lutter contre le cancer du col de l'utéru / Cervix cancer is the third most common cancer among women Worldwide. Many treatments are already available but they are not always efficient.This is why new natural molecules with anticancer properties that could reduce the side effects of conventional therapy are investigated. Among them,isoliquiritigenin (ILG), a fiavonoid, differentiates itself through ils various potential therapeutic properties. This chalcone isolated from roots oflicorice has many properties including an anti-tumor activity.The aim of this thesis was to study anti-tumoral effects of synthetic ILG in cervical cancer cells.We show that ILG decreases viability, induces cell cycle arrest and engages apoptosis in cervial cancer cells differing one from the other by their viraland p53 status. The death induced by ILG in the HPV positive and wild-type p53 Ça Ski, SiHa and HeLa cells appears to be independant of p53 andof the mitochondria, contrary to what happens in the HPV negative mutated p53 C-33A cells, where death could be initiated by an endoplasmicreticulum stress. The molecular mechanism of apoptosis is mainly studied on HPV 16 Ça Ski cells, the most representative cells of cervical carcinoma.ILG leads to a down-regulation of the viral oncogen E6 HPV16 expression.The study of the pathways involved by ILG highlights differences according to the cellular type. As it specifically induces apoptosis on tumoral cells,ILG could act as a potential therapeutic agent in cervix cancer.