A neoplasia escamosa da superfície ocular constitui é uma das lesões mais frequentes que envolve a conjuntiva ou a córnea e tem como principais fatores de risco a exposição solar (radiação ultravioleta), a infecção pelo vírus do papiloma humano (HPV) e os estados de imunodeficiência, especialmente a infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV). Em suas formas mais avançadas, a neoplasia pode cursar com infiltração do globo ocular, da órbita e, mais raramente, com ocorrência de metástases para linfonodos ou a distância. O presente estudo teve como objetivo investigar os dados clínicos, histopatológicos, a presença de HPV e a expressão das proteínas p16 e p53 em 45 casos de neoplasia escamosa da superfície ocular diagnosticados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, no período de 2005-2015. Avaliação histopatológica das lesões, estudo imuno-histoquímico para a detecção das proteínas e hibridização in situ cromogênica (CISH) para a detecção do DNA de HPV de alto e baixo grau foram realizados em todas as amostras. As lesões foram mais frequentes em homens de cor branca, com idade superior a 40 anos. A avaliação histopatológica revelou 31 casos (69%) de carcinoma invasivo e 14 casos (31%) de carcinoma in situ. Em 6 casos (13%) foi detectado DNA de HPV de alto grau por CISH. A frequência de expressão de proteínas p53 e p16 foi alta nas lesões, 89% e 53%, respectivamente. Em nosso estudo, a neoplasia escamosa da superfície ocular predomina em homens de cor branca, com idade acima dos 40 anos, com presença de HPV de alto grau em 13% dos casos. A expressão de p16 não apresentou um valor preditivo positivo alto quanto a possibilidade de associação com o vírus. / Ocular surface squamous neoplasia (OSSN) is one the most frequent lesions involving the conjunctiva or cornea and its main risk factors are solar exposure (ultraviolet radiation), human papilloma virus (HPV) infection and immunodeficiency states, especially human immunodeficiency virus (HIV) infection. In advanced cases one can observe eyeball or orbital infiltration and, rarely, lymph node or distant metastases. The present study aimed to investigate the clinical and histopathological data, as well as the presence of HPV and the expression of proteins p16 e p53 in 45 cases of OSSN diagnosed at the Clinics Hospital of Ribeirão Preto Medical School, University of São Paulo, from 2005 through 2015. Histopathological examination, immunohistochemical study for proteins p16 and p53, and chromogenic in situ hybridization (CISH) for low and high grade HPV were performed in all samples. Lesions were more frequent in white males, above 40 years old. Histopathological examination revealed 31 cases (69%) of invasive carcinoma and 14 cases (31%) of carcinoma in situ. In 6 cases (13%) high grade HPV was detected by CISH. The expressions of p53 and p16 were high, 89% and 53%, respectively. In our study, increased incidence of OSSN was observed in white males, above 40 years old, with high grade HPV in 13% of the cases. The expression of p16 did not show a high positive predictive value for HPV positivity in OSSN.

A infecção genital pelo papilomavírus humano (HPV) corresponde a uma das doenças sexualmente transmissíveis mais frequentes no mundo. Uma preocupação dos pacientes que apresentam HPV na região anogenital diz respeito à possibilidade de disseminação desse vírus para outras partes do corpo. O objetivo geral desse estudo foi avaliar a possível correlação existente entre infecções pelo HPV na mucosa oral e no colo uterino em mulheres com sorologias positiva e negativa para o HIV. Pretendeu-se, também, identificar variáveis clínicas, demográficas e laboratoriais associadas à infecção oral pelo HPV. A amostra foi constituída por 200 pacientes do gênero feminino, sendo 100 com sorologia positiva para HIV (grupo 1) e 100 com sorologia negativa para HIV (grupo 2). As pacientes foram incluídas consecutivamente no Centro de Referência e Treinamento em DST-AIDS entre abril de 2008 a maio de 2009. Todas as pacientes assinaram um Termo de Consentimento Livre e Esclarecido e responderam a uma ficha com questionamentos sobre hábitos e comportamento sexual. Além disso, tiveram as cavidades oral e ginecológica examinadas, sendo que células superficiais de ambos os locais foram coletadas e avaliadas pela captura híbrida 2 e pela citologia em base líquida. Para comparação de variáveis qualitativas, como freqüências e proporções, foi utilizado o teste de qui-quadrado ou exato de Fisher, se necessário. Para comparação de dados quantitativos, foram utilizados os testes de Mann-Whitney ou t de Student. A análise multivariada foi executada utilizando-se o teste de regressão logística, sendo que o valor de significância estatística estabelecido foi de 5% (p<0,05). O DNA do HPV foi detectado nas amostras cervicais de 41 (41%) pacientes HIV+ e de 45 (45%) HIV- (p=0.67). Nas amostras da cavidade oral, o DNA do HPV foi observado em 11 mulheres do G1 (HIV+) e em 2 mulheres do G2 (HIV-) (OR=6,06; 95%IC=1,31-28,07; p=0,02). Os subtipos oncogênicos foram prevalentes em ambos os grupos, sendo que não foi observada diferença entre os grupos (p=0.87). Nenhuma paciente apresentou lesão macroscópica oral relacionada ao HPV, sendo que 15 (15%) mulheres do G1 (HIV+) e 17 (17%) do G2 (HIV-) apresentaram lesão macroscópica na região genital (p=0.2129). Com os resultados obtidos pôde-se concluir que nesta população não houve correlação entre a infecção pelo HPV nas mucosas oral e cervical. Além disso, as pacientes HIV+ apresentaram maior prevalência de infecção pelo DNA-HPV na boca em comparação às pacientes HIV-. / Human papillomavirus (HPV) is one of the most prevalent sexually transmitted viruses worldwide with both oral and genital manifestations. The high prevalence of HPV infection among HIV + individuals provides an opportunity to elucidate the relationship between oral and cervical HPV-infection in this group of subjects. The aim of this study is to evaluate the possible association between oral and cervical infections in HIV-positive and negative patients. One hundred HIV+ (group 1) and 100 HIV- (group 2) women were recruited consecutively from a gynecologic clinic between April 2008 and May 2009. All subjects were given a cervical and oral examination. Cytological samples were evaluated by the hybrid capture 2 technique from oral and cervical scrapings. Statistical analysis was performed using chi-square test and p values < 0.05 were considered significant. HPV-DNA was detected in cervical scrapings from 41 (41%) HIV-positive subjects and from 45 (45%) HIVnegative subjects (p=0.67). In oral samples, HPV-DNA was observed in 11 subjects from group 1 and in 2 subjects from group 2 (p=0.02). High-risk HPV subtypes were prevalent in both groups and no difference between the groups was detected (p=0.87). No subject showed macroscopic oral HPV-related lesion, whereas 15 (15.00%) from group 1, and 17 (17.00%) from group 2, presented with macroscopic genital lesion (p=0.2129). HPV-DNA was more frequent in oral mucosa of HIV+ patients than HIV- (p=0,018). There was no association between oral and cervical HPV infection in HIV+ and HIV- patients. Presence of cervical lesion was not associated with oral lesion.

Introdução: Sabe-se que a elevada prevalência da infecção pelo HPV na população sexualmente ativa, associa-se ao desenvolvimento delesões intra-epiteliais cervicais de alto grau e de baixo grau (LIEAG e LIABG). A cirurgia dealta freqüência (CAF) veio contribuir para o tratamento da LIE, substituindo práticas invasivas e onerosas. A população contaminada pelo HPV é composta por pacientes imunocompetentes e imunodeprimidas, especialmente as infectadas pelo HIV, que poderão ter diferente resposta a esta cirurgia. Objetivos:Avaliar a efetividade da CAF no tratamento das LIEAG no colo uterino e a taxa de complicações tardias dessa modalidade terapêutica em pacientes portadoras ou não do HIV e avaliar se a infecção HIV favorece a persistência de LIEAG após a CAF. Pacientes e Métodos: Estudo observacional prospectivo longitudinal onde foram selecionadas 97 pacientes portadoras de LIEAGe tratadas com CAF divididas em dois grupos: 38 pacientes portadoras do HIV e 59 não infectadas por esse vírus, todas atendidas em Hospital Universitário de referência terciária. As pacientes foram submetidas a CAF e reavaliadas com coleta de colpocitologia e colposcopia com três, seis, nove e 12 meses após o procedimento. As taxas de efetividade da CAF consideraram a evolução da doença cervical ao longo do seguimento desses dois grupos de pacientes por um ano. Resultados:Após o seguimento de 12 meses foram observadas situações de cura (citologia e colposcopia normais), melhora (citologia e/ou comcolposcopia com sinais de infecção HPV ou LIEBG) ou de piora da LIEAG inicial (lesão microinvasora/invasora). Sendo assim, foram obtidos para as pacientes portadoras do HIV: 56,7% de cura; 32,4% de melhora e nenhum caso de piora após o tratamento inicial. Para as pacientes não portadoras do HIV os resultados foram: 75,8% de cura; 13,8% demelhora e 1,7% de piora, indicando desfecho clínico mais favorável entre as pacientes não portadoras do HIV (X 2 , p= 0,02). As taxas de estenose de canal cervical entre as pacientes portadoras do HIV (13,5%) não foram estatisticamente diferentes daquelas observadas entre as pacientes não portadoras do HIV (10,5%). A excisão completa da LIE que motivou a CAF ocorreu em 69 (71,2%) pacientes. Entretanto, 21 (21,7%) mulheres tiveram excisão incompleta com margens da peça cirúrgica comprometida pela LIE. Dessas 21 pacientes que apresentaram margens da peça cirúrgica comprometidas apenas cinco tiveram necessidade de novo tratamento. Também foram submetidas a novo tratamento três das mulheres que tiveram margens cirúrgicas livres da peça excisada e uma paciente com a margemcirúrgica carbonizada. Conclusões: Não foi encontrada diferença estatisticamente significativa entre os dois grupos estudados em relação ao número de complicações após a realização da CAF e também na necessidade de novo tratamento no caso de mulheres portadoras do HIV. Entretanto, o desfecho clínico favorável (cura e melhora) para essa população estudada foi significativamente melhor para as pacientes não portadoras do HIV que para as infectadas por esse vírus após um ano de seguimento pós-CAF. A recidiva da LIEAG é mais freqüente em pacientes com margens cirúrgicas comprometidas, independente da presença da infecção pelo HIV. / Introduction: It is known that the high prevalence of HPV infection in the sexually active population is associated with the development of high and low-grade squamous intraepithelial lesions (HSIL and LSIL). Loop electrosurgical excision procedure (LEEP) has contributed to the treatment of SIL, replacing invasive and expensive procedures. The population contaminated with HPV consists of immunocompetent and immunodepressed patients, especially HIV-infected patients, who may respond differently to this surgery Objectives:To assess the effectiveness of LEEP in the treatment of HSIL in the uterine cervix and the rate of late complications of this therapeutic modality in patients infected or not with HIV and to determine whether HIV infection predisposes to the persistence of HSIL after LEEP. Patients and Methods: This was a prospective longitudinal observational study conducted on 97 patients with HSIL and treated with LEEP who were divided into two groups: 38 HIV-infected and 59 non-HIV-infected patients attended at a tertiary reference University Hospital. The patients were submitted to LEEP and re-evaluated bycolpocytology and colposcopy at three, six, nine and 12 months after the procedure.The rates of LEEP effectiveness were determined on the basis of the evolution of cervical disease along a one year follow-up of the two groups of patients Results:After a follow-up of 12 months, situations of cure (normal cytology and colposcopy), improvement (cytology and/or colposcopy with signs of HPV infection or HSIL) or of worsening of the original HSIL (microinvasive/invasive lesion) were observed. On this basis, the followingresults were obtained for HIV-infected patients: 55.2% of cure, 34.3% of improvement and no case of worsening after the initial treatment. For non-HIV-infected patients, the results were: 75.4% of cure, 14.1% of improvement and 1.7% of worsening, indicating a more favorable clinical outcome among non-HIV-infected patients (X 2 , p= 0.02). The rates of cervical canal stenosis among HIV-infected patients (13.5%) did not differ significantly from those among non-HIV-infected patients (10.5%). Complete excision of the SIL that motivated LEEP occurred in 69 (71.2%) patients. However, in 21 (21.7%) women, excision was incomplete, with SIL involvement of the margins of the surgical piece. Of these 21 patients with compromised surgical piece margins, only five required new treatment. Three of the women whose surgical margins were freeof disease and one patient with a carbonized surgical margin were also submitted to new treatment. Conclusions:No statistically significant difference was detected between the two groups regarding the number of complications after LEEP or also regarding the need for new treatment among HIV-infected women. However, a favorable clinical outcome (cure and improvement) for this population was significantly better for non-HIV-infected patients than for HIV-infected patients after one year of post-LEEP follow-up. HSIL recurrence was more frequent among patients with involved surgical margins regardless of the presence of HIV infection.

O Papilomavírus Humano (HPV), da família Papilomaviridae, são vírus epiteliotrópicos que provocam lesões de pele ou mucosa. O carcinoma do colo uterino é uma das principais causas de morte de mulheres em todo o mundo, sendo a infecção pelo HPV o principal fator de risco para o desenvolvimento do carcinoma cervical. Durante o processo maligno, a migração descontrolada de células neoplásicas, é uma característica fundamental da invasão tumoral, sendo que as metaloproteinases de matriz (MMPs) participam largamente deste processo pois são responsáveis pela clivagem de proteínas da matriz extracelular. O projeto propôs investigar a expressão de MMP-9 total em amostras cérvico-vaginais com inflamação, lesão e tumor. Foram coletadas duas amostras cérvico-vaginais como esfregaços para diagnóstico citológico e imunocitoquímica. A coleta foi realizada em 630 pacientes da Penitenciária Feminina de Sant´ana, no período de agosto de 2009 a agosto de 2010. As lâminas foram submetidas à imunocitoquímica para detecção da expressão de MMP-9. Os resultados indicaram um aumento da expressão de MMP-9 total diretamente proporcional com o aumento do grau das lesões nos esfregaços, corroborando com dados de histologia da literatura. Portanto, tal método de correlação de MMP-9 total com esfregaços cérvico-vaginais poderá auxíliar o prognóstico em esfregaços. / The Human Papillomavirus (HPV) are epitheliotropic viruses from family Papillomaviridae, which cause skin or mucous lesions. Carcinoma of the cervix is a major cause of death in women worldwide, and HPV infection a major risk factor for development of cervical carcinoma. During the malignant process, cell migration is a fundamental characteristic of tumor invasion, and the matrix metalloproteinases (MMPs) are responsible for the cleavage of extracellular matrix proteins. This project aims to investigate the expression of MMP-9 in different degrees of injury in the smear. We collected two cervical smears for cytological diagnosis and immunocytochemistry. Data collection was conducted in 630 women of the Sant´ana Women\'s Penitentiary, during the period August 2009 to August 2010. The slides were submitted to immunocytochemistry to detect the expression of MMP-9 and noticed an increase in protein expression in parallel with the increased lesions grade, which corroborates the histology of the literature and could be a method prognostic aid in vaginal smears.

Made available in DSpace on 2016-08-19T18:16:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO Lisandra Rocha Vidotti.pdf: 838582 bytes, checksum: 45de3f3ca6ccb3eb1c1e83766e212116 (MD5) Previous issue date: 2012-07-03 / FUNDAÇÃO SOUSÂNDRADE DE APOIO AO DESENVOLVIMENTO DA UFMA / Background: Human Pappilomavirus infection is one of the most common sexually transmitted disease, and can be found at various anatomical sites, such as the anogenital tract, skin, larynx, conjunctiva, tracheobronchial mucosa, esophagus and oral cavity. The path of HPV transmission to the oral cavity is not completely understood, and so many studies are being undertaken aiming to clarify if the genital infection by the virus may be a predisposing factor. Methodology: This is a cross-sectional cohort study. The sample consisted of women attending in ambulatory of the Centro de Pesquisas Clínicas-CEPEC / HUUFMA. After signing the TCLE, all patients answered a questionnaire about social information, medical history, smoking habits, alcohol consumption and sexual behavior and were also subjected to collection of cellular material from the oral cavity and genital area for research of Desoxirribonucleic Acid by polymerase chain reaction technique (PCR). Results And Conclusions: The prevalence of human papillomavirus in the oral cavity was higher in women with genital HPV. With a significant association between the presence of oral HPV DNA and genital HPV DNA: The practice of oral sex, smoking and drinking were not related to the presence of HPV DNA in the oral cavity. / Introdução: A infecção pelo Vírus do Papiloma Humano (HPV) é uma das doenças sexualmente transmissíveis mais prevalentes no mundo, e pode ser encontrada em vários sítios anatômicos, como trato anogenital, pele, laringe, conjuntiva, mucosa traqueobrônquica, esôfago e cavidade oral. A via de transmissão do HPV para a cavidade oral ainda não está completamente compreendida, e por isso, diversas pesquisas, estão sendo realizadas objetivando esclarecer se a infecção genital por este vírus pode ser um fator predisponente. Metodologia: Trata-se de um estudo de coorte transversal: A amostra foi constituída por mulheres atendidas no Ambulatório de Ginecologia do Centro de Pesquisa Clínica do Hospital Universitário da UFMA (CEPEC/HUUFMA). Após assinarem o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE), todas as pacientes responderam um questionário sobre informações sociais, história médica, hábitos de tabagismo, consumo alcóolico e comportamento sexual e também foram submetidas a coleta de material celular da cavidade oral e da região genital para pesquisa do ácido desoxirribonucleico (DNA) do HPV pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Resultados e Conclusões: A prevalência do HPV na cavidade oral foi maior nas portadoras de HPV nos genitais, com associação significativa entre a presença do DNA-HPV oral com o DNA-HPV genital: A prática de sexo oral, o tabagismo e o etilismo não estiveram relacionados à presença do DNA-HPV na cavidade oral.

Submitted by Maria Aparecida (cidazen@gmail.com) on 2017-11-27T18:12:10Z No. of bitstreams: 1 Juliana Macedo.pdf: 3843653 bytes, checksum: a40308c73af9a3d7ce2e665d6464831f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-27T18:12:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Juliana Macedo.pdf: 3843653 bytes, checksum: a40308c73af9a3d7ce2e665d6464831f (MD5) Previous issue date: 2017-08-28 / FAPEMA. / Penile cancer (PeCa) is a rare neoplasm with higher incidence in regions with low socioeconomic indexes. In Brazil, most of the men afflicted by this disease reside in the North and Northeast. Among the main risk factors are lack of hygiene, phimosis, high-risk human papillomavirus (HPV) infection and chronic inflammation. Although the role of inflammation and HPV infection is known in some cancers, the relationship between these two factors and the disruption of genes involved in the CaPe genesis is not yet well established. Thus, our main goal was to determine the expression of genes involved in the process of chronic inflammation and in the carcinogenesis mediated by HPV infection and the role of the deregulation of these genes in the establishment and progression of penile tumor. For this purpose, fresh and formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissues from 55 patients with penile cancer were evaluated. HPV detection and genotyping were carried out by nested PCR and direct sequencing in all samples. A subgroup (N = 37) was evaluated by qRT-PCR to determine COX-2, EGFR, MYC, RB and P53 gene expression. For this, sections of FFPE tissues containing more than 70% tumor cells were analyzed. Protein expression of these genes and PGE2 were determined by immunohistochemistry in the same tumor tissues. An analysis of the association between the clinical-histopathological parameters, presence of HPV, and gene and protein expression was performed. All tumors were classified as epidermoid squamous cell carcinoma. HPV DNA was detected in 80% of tumors, of which 95% had at least one high-risk subtype, and HPV16 was the most frequent subtype (63%). Among the HPV negative samples in the tumor tissue, 14% were positive in the tissue adjacent to the tumor, so that 94% of the patients, in total, were positive for the presence of HPV DNA.. Overexpression was identified in all genes involved in the inflammatory process. EGFR showed overexpression in 84% of the samples, while COX2 and PGE were overexpressed in 40% of the tumors, each. There was an associationbetween the levels of EGFR and COX2 expression, and between COX2 and PGE2. On the other hand, the genes related to HPV infection, MYC, RB and P53, were underexpressed in 97%, 85% and 81% of the samples, respectively. The gene expressions did not show any association with clinical-histopathological variables. This study describes the repression of RB and P53 activity in HPV + tumors, suggesting that there is a mechanism of control of these genes, possibly mediated by the virus. The high detection of HPV infection shows the importance of the immunization of boys in the prevention of penile cancer. Our data emphasize the need to expand the vaccine coverage to cover types of HPV present in penile cancer. The overexpression of EGFR / COX2 / PGE2, and the association found between them, support the possibility of therapeutic use of anti-EGFR and anti-COX drugs in penile tumors. / Câncer peniano (CaPe) é uma neoplasia rara com maior incidência em regiões com baixos índices socioeconômicos. No Brasil, a maior parte dos homens acometidos por essa doença residem nas regiões Norte e Nordeste. Entre os principais fatores de risco estão a falta de higiene, fimose, infecção por papilomavírus humano (HPV) de alto risco e inflamação crônica. Embora o papel d a inflamação e da infecção por HPV sejam conhecidas em alguns cânceres, ainda não é bem estabelecida a relação entre esses dois fatores e a disrupção de genes envolvidos na gênese de CaPe. Assim, neste estudo foi avaliada a expressão de genes envolvidos no processo de inflamação crônica e na infecção pelo HPV e o papel da desregulação desses genes no estabelecimento e progressão de tumor peniano. Para isto, foram avaliadas amostras teciduais frescas e fixadas em formalina embebidas em parafina (FFPE) de 55 pacientes com câncer de pênis. Foram realizadas detecção e genotipagem de HPV por nested PCR e sequenciamento direto em todas as amostras Um subgrupo amostral (N=37) foi avaliado por qRT-PCR para determinação da expressão dos genes COX-2, EGFR, MYC, RB e P53. Para isso, foram usadas secões de tecidos de FFPE contendo mais de 70% de células tumorais. A expressão proteica desses genes e de PGE2 foi determinada por imunohistoquímica em 42 amostras. Foi feita análise de associação entre os parâmetros clínico-histopatológicos, presença de HPV e expressão gênica e proteica. Todos os tumores foram classificados como carcinoma epidermóide de células escamosas. DNA de HPV foi detectado em 80% dos tumores (N=55), dos quais 95% apresentaram, pelo menos, um subtipo de alto risco, e destes, HPV16 foi o subtipo mais frequente (63%). Dentre as amostras negativas para HPV no tecido tumoral, 14% foram positivas no tecido adjacente ao tumor, de modo que 94% dos pacientes, no total, foram positivos para presença de DNA de HPV. Nas amostras nas quais foi feita análise de expressão gênica (N=37), detectou-se 94,4% de infecção, sendo 94% dos infectados possuem, pelo menos um, tipo de alto risco. Foi Identificada superexpressão em todos os genes envolvidos no processo inflamatório. EGFR mostrou superexpressão em 84% das amostras, enquanto COX2 e PGE mostraram-se, cada um, superexpressos em 40% dos tumores. Houve associação entre níveis de expressão de EGFR e COX2, e entre COX2 e PGE2. Por outro lado, os genes relacionados à infecção por HPV, MYC, RB e P53, mostraram-se subexpressos em 97%, 85% e 81% das amostras, respectivamente. A expressão dos genes estudados não mostrou associação com as variáveis clínico-histopatológicas. Este estudo descreve a repressão da atividade de RB e P53 em tumores HPV+, sugerindo que há um mecanismo de controle desses genes em câncer peniano, possivelmente mediado pelo vírus. A alta detecção de infecção por HPV mostra a importância da imunização de meninos na prevenção de câncer peniano, e ressalta-se a necessidade de ampliação da cobertura vacinal de modo a abranger tipos de vírus presentes em câncer peniano. A superexpressão de EGFR/COX2/PGE2, e a associação encontrada entre eles, sustenta a possibilidade de uso terapêutico de drogas anti-EGFR e anti-COX em tumores penianos.

A neoplasia escamosa da superfície ocular constitui é uma das lesões mais frequentes que envolve a conjuntiva ou a córnea e tem como principais fatores de risco a exposição solar (radiação ultravioleta), a infecção pelo vírus do papiloma humano (HPV) e os estados de imunodeficiência, especialmente a infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV). Em suas formas mais avançadas, a neoplasia pode cursar com infiltração do globo ocular, da órbita e, mais raramente, com ocorrência de metástases para linfonodos ou a distância. O presente estudo teve como objetivo investigar os dados clínicos, histopatológicos, a presença de HPV e a expressão das proteínas p16 e p53 em 45 casos de neoplasia escamosa da superfície ocular diagnosticados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, no período de 2005-2015. Avaliação histopatológica das lesões, estudo imuno-histoquímico para a detecção das proteínas e hibridização in situ cromogênica (CISH) para a detecção do DNA de HPV de alto e baixo grau foram realizados em todas as amostras. As lesões foram mais frequentes em homens de cor branca, com idade superior a 40 anos. A avaliação histopatológica revelou 31 casos (69%) de carcinoma invasivo e 14 casos (31%) de carcinoma in situ. Em 6 casos (13%) foi detectado DNA de HPV de alto grau por CISH. A frequência de expressão de proteínas p53 e p16 foi alta nas lesões, 89% e 53%, respectivamente. Em nosso estudo, a neoplasia escamosa da superfície ocular predomina em homens de cor branca, com idade acima dos 40 anos, com presença de HPV de alto grau em 13% dos casos. A expressão de p16 não apresentou um valor preditivo positivo alto quanto a possibilidade de associação com o vírus. / Ocular surface squamous neoplasia (OSSN) is one the most frequent lesions involving the conjunctiva or cornea and its main risk factors are solar exposure (ultraviolet radiation), human papilloma virus (HPV) infection and immunodeficiency states, especially human immunodeficiency virus (HIV) infection. In advanced cases one can observe eyeball or orbital infiltration and, rarely, lymph node or distant metastases. The present study aimed to investigate the clinical and histopathological data, as well as the presence of HPV and the expression of proteins p16 e p53 in 45 cases of OSSN diagnosed at the Clinics Hospital of Ribeirão Preto Medical School, University of São Paulo, from 2005 through 2015. Histopathological examination, immunohistochemical study for proteins p16 and p53, and chromogenic in situ hybridization (CISH) for low and high grade HPV were performed in all samples. Lesions were more frequent in white males, above 40 years old. Histopathological examination revealed 31 cases (69%) of invasive carcinoma and 14 cases (31%) of carcinoma in situ. In 6 cases (13%) high grade HPV was detected by CISH. The expressions of p53 and p16 were high, 89% and 53%, respectively. In our study, increased incidence of OSSN was observed in white males, above 40 years old, with high grade HPV in 13% of the cases. The expression of p16 did not show a high positive predictive value for HPV positivity in OSSN.

A compilação mais recente dos dados mundiais indica que anualmente 466.000 novos casos de câncer cervical são detectados em todo mundo. A infecção pelos tipos oncogênicos do papilomavírus humano (HPV), constitui importante fator de risco para o desenvolvimento do câncer do colo uterino. Em mulheres portadoras do vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (HIV-1), tem sido demonstrado o aumento na prevalência e persistência da infecção por HPV oncogênicos, justificando o aumento da susceptibilidade destas mulheres para o desenvolvimento das lesões cervicais, lesões precursoras do câncer do colo uterino. Citocinas são importantes na defesa contra a infecção pelo HPV e o nível de sua produção é geneticamente determinado. A predominância de citocinas do padrão do tipo Th1, como o TNF-alfa, está associada com a regressão das lesões cervicais. Neste estudo foram analisados os fatores comportamentais, imunológicos e virais, possivelmente, associados ao desenvolvimento das lesões cervicais em 66 mulheres mexicanas, portadoras ou não da infecção pelo HIV-1, apresentando lesões cervicais. Assim, aspectos sócio-demográficos e hábitos sexuais, a identificação e a tipificação do HPV, e a detecção do polimorfismo da região promotora do TNF foram analisados. Ao avaliar os aspectos sócio-comportamentais, a maioria das mulheres estava casada legalmente ou em união consensual no momento da entrevista, com nível educacional fundamental e nível sócio-econômico baixo. Associado a isso, a maior porcentagem dos maridos eram migrantes dos Estados Unidos da América (EUA), em busca de emprego e melhores condições financeiras. O grupo de pacientes com HIV-1 que referiram utilizar a camisinha só algumas vezes ou nunca e que relataram possuir entre 2-3 parceiros sexuais foi maior do que o grupo de mulheres sem o HIV- 1. Adicionalmente, os parceiros sexuais de mulheres com o HIV-1 mantinham outras parcerias sexuais, sendo estas heterossexuais e/ou homossexuais. Todas as pacientes arroladas no presente estudo apresentavam infecção ativa por HPV e lesões cervicais de baixo grau. Os HPV oncogênicos, como os do tipo 16/18 e 35, foram significantemente mais freqüentes entre as HIV positivas em comparação às não portadoras dessa infecção. Relativo às comparações do polimorfismo do TNF, a freqüência do genótipo TNF-308 não mostrou diferenças significantes entre os grupos de pacientes. O gene da região promotora do TNF na posição -238 também foi avaliado e observamos que o alelo TNF-238G, associado à alta produção dessa citocina, apresentou significativo aumento de sua freqüência entre as pacientes com o HIV-1 em relação às pacientes sem o HIV-1. Estes resultados sugerem que as condições sócio-culturais e hábitos sexuais estão envolvidos com a vulnerabilidade para a aquisição do HIV e HPV em mulheres mexicanas. Embora as portadoras do HIV apresentem infecção ativa por HPV oncogênicos, a presença do alelo -238G, relacionado com a alta produção do TNFalfa, pode estar associado com a não progressão das lesões cervicais. Entretanto, esta interpretação deve ser realizada com cautela, pois algumas mulheres que apresentavam resultados de lesões cervicais de baixo grau morreram de câncer cérvico uterino. Este fato revela a fragilidade das análises e avaliações ginecológicas nos serviços de saúde referidos neste estudo e sugere que a alternativa de utilizar técnicas de biologia molecular para a identificação e tipificação dos tipos oncogênicos do HPV seja uma estratégia importante para os programas de prevenção do câncer do colo do útero. / The most recent compilation of global data indicates that, every year, 466,000 new cases of cervical cancer are detected around the world. Infection by oncogenic types of the human papillomavirus (HPV) constitutes an important risk factor for the development of colon cancer. In women with human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1), an increased prevalence and persistence of infection by oncogenic HPV has been demonstrated, justifying these women\'s increased susceptibility to the development of cervical lesions, which precede colon cancer. Cytokines are important in the defense against infection by HPV and its production level is genetically determined. The predominance of th1 cytokines, such as TNF-alfa, is associated with the regression of cervical lesions. This study analyzed behavioral, immunological and viral factors that may be associated with the development of cervical lesions in 66 Mexican women, infected by HIV-1 or not and presenting cervical lesions. Sociodemographic aspects and sexual aspects, HPV identification and typification and the detection of polymorphism in the region that promotes TNF were analyzed. With respect to socio-behavioral aspects, most women were legally married or lived in consensual union at the time of the interview, with basic education and low socioeconomic level. Moreover, most husbands were migrants from the United States (USA) who were looking for a job and better financial conditions. The group of HIV-1 patients who mentioned using a condom sometimes or never had having 2-3 partners was larger than the group of women without HIV-1. In addition, the sexual partners of women with HIV-1 had other hetero and/or homosexual partners. All patients included in this research presented active infection by HPV and low-grade cervical lesions. Oncogenic HPV, such as types 16/18 and 35, were significantly more frequent among HIV-positive than among HIV-negative patients. As to the comparisons of TNF polymorphism, the frequency of the TNF-308 genotype did not show significant differences between the patient group. The gene of the TNF promoting region in position -238 was also assessed. It was found that the TNF 238G allele, associated with high production levels of the cytokine, presented a significant increase in frequency among patient with in comparison with those without HIV-1. These results suggest that sociocultural conditions and sexual habits are involved in Mexican women\'s vulnerability to infection by HIV and HPV. Although the HIV patients present active infection by oncogenic HPV, the presence of the -238G allele, related with the high production of TNF-alpha, can be associated with the non progression of the cervical lesions. However, this must be interpreted with caution, as some women with low-grade cervical lesion results died of colon cancer. This fact reveals the fragility of gynecological analyses and assessments at the health services mentioned in this research and suggest the alternative of using molecular biology techniques for the identification and typification of HPV as an important strategy for colon cancer prevention programs.

A infecção por HPV de alto risco é considerada um dos principais fatores de risco para o desenvolvimento do carcinoma do colo uterino, um das neoplasias mais freqüentes em mulheres de todo o mundo. As oncoproteínas E6 e E7 de HPV-16 são capazes de induzir a degradação dos genes supressores de tumor p53 e pRb, respectivamente. Mais do que isso, a expressão dessas oncoproteínas está relacionada a alterações na via de PI3K/AKT/mTOR. A proteína quinase mTOR apresenta importante papel no controle da tradução de proteínas e é considerada o principal mediador entre crescimento celular e proliferação. A ativação de mTOR é correlacionada à fosforilação das proteínas eIF4G1 e 4EBP1, aumentando assim a taxa de síntese de proteínas. A Rapamicina é um inibidor específico de mTOR e seus análogos apresentam potente atividade antiproliferativa em um grande número de células tumorais e tumores gerados em animais. Uma vez que as proteínas E6 e E7 são capazes de interagir com diversas proteínas da via que controla a atividade de mTOR optamos por investigar o efeito da rapamicina na proliferação de culturas organotípicas de queratinócitos expressando esses genes. Também avaliamos o efeito dos genes E6 e E7 na atividade de mTOR após o tratamento com essa droga. Para geração de culturas organotípicas de queratinócitos infectamos essas células com vetores retrovirais recombinantes contendo os genes E6 e E7 de HPV-16 em conjunto ou separadamente. Nós também avaliamos o papel da degradação de p53 e pRb na resposta à rapamicina através da utilização de mutantes de E6 e E7 incapazes de induzir a degradação dessas proteínas celulares. Após a infecção dos queratinócitos, os mesmos foram semeados em uma matriz de colágeno. Após 6 dias as culturas foram tratadas com 100ng/ml de rapamicina e permaneceram 60h em contato com a droga. Para análise por imunohistoquímica os tecidos foram fixados em formalina tamponada e emblocados em parafina. A reação de imunohistoquímica foi realizada utilizando os anticorpos contra BrdU, p-4EBP1 (ser 65), p-eIF4G1 (ser 1188) e pAKT (ser 473). Os resultados obtidos ilustram que a rapamicina apresenta efeito antiproliferativo em culturas de queratinócitos contendo o vetor vazio. Por outro lado, culturas contendo o gene E7 são resistentes ao efeito antiproliferativo dessa droga. Essa resistência parece estar relacionada à capacidade de E7 induzir a degradação da proteína pRb, uma vez que em queratinócitos expressando o mutante de E7, incapaz de induzir a degradação dessa proteína, não foi observada resistência. Além disso, a fosforilação de eIF4G e 4EBP1 indica que a expressão de E7 impede que a rapamicina seja capaz de inibir a atividade de mTOR. Esses resultados mostram, pela primeira vez, que o efeito antiproliferativo da rapamicina pode ser superado pela expressão de uma proteína viral, no caso a proteína E7 de HPV-16. / High-risk HPV infection has a major etiologic role in development and progression of cervical cancer, one of the most frequent forms of cancer among women worldwide. HPV-16 E6 and E7 oncoproteins are able to induce degradation of p53 and pRb tumor suppressor proteins respectively. Moreover, the expression of these oncoproteins is related to alterations in the PI3K/AKT/mTOR pathway. The cellular kinase mammalian target of Rapamycin (mTOR) is an important regulator of the cellular protein synthesis machinery and has emerged as a principal mediator of cell growth and proliferation. mTOR activation has been shown to stimulates eIF4G1 and 4EBP1 phosphorylation, thus increasing the rate of protein synthesis. Rapamycin is a specific inhibitor of mTOR signaling pathway and its analogues have demonstrated impressive activity against a broad range of human cancer derived cell lines in culture and in human tumor xenograft models. Since E6 and E7 target several proteins controlling the mTOR pathway we aimed to investigate the effect of Rapamycin in the proliferation of organotypic raft cultures expressing these genes. We also evaluated the effect of E6 and E7 genes in mTOR activity after rapamycin treatment. To generate organotypic culture of keratinocytes we infect these cells with recombinant retroviruses containing HPV-16 E6 and E7 together or separately. We also analyzed the role of p53 and pRb degradation in rapamycin responsiveness by using E6 and E7 mutants lacking the hability to inactivate these cellular proteins. After infection, keratinocytes were seeded on to a collagen matrix. After 6 days, these cultures were treated with 100ng/ml of Rapamycin for 60 hours. BrdU was added in the last 12 hours to evaluate proliferation. For immunohistochemistry analysis tissues were fixed in buffered formalin and embedded in paraffin. Immunohistochemistry reactions against BrdU, p-4EBP1 (ser 65), p-eIF4G1 (ser 1188) and p-AKT (ser 473) were performed The results show that proliferation of organotypic cultures of keratinocytes transduced with empty vector is inhibited by Rapamycin. On the other hand, cultures generated with keratinocytes transduced with E7 gene were completely resistance to the antiproliferative effect of Rapamycin. Moreover, we found that this antiproliferative effect was dependent of Rb degradation since the cells transduced with E7 mutant unable do induce Rb degradation were sensitive. In addition, eIF4G and 4EBP1 phosphorylation indicates that E7 expression impairs mTOR inhibition by rapamycin. AKT phosphorilation indicates that rapamycin resistance could be dependent of Rb inactivation induced by E7 expression. These results show for the first time that the Rapamycin antiproliferative effect is bypassed by the expression of a viral oncogene, in this case the HPV-16 E7. Moreover, E7 expression impairs rapamycin to inactivate mTOR.

Introdução: Entre as doenças sexualmente transmissíveis (DST), infecções por papilomavírus humano (HPV) são muito comuns. Apesar de frequentemente transitória, quando há persistência da infecção podem surgir lesões que, se não tratadas, podem progredir para o câncer. A disseminação do HPV tende a ser universal entre indivíduos sexualmente ativos, sendo que o homem, além do risco de câncer anal, peniano e da orofaringe, pode ser importante propagador do vírus entre mulheres. No entanto, pouco se sabe a respeito da prevalência, incidência e remissão de infecções por HPV em homens. Os alimentos e nutrientes poderiam influenciar a progressão do câncer afetando a susceptibilidade à infecção, alterando o estado nutricional, atuando na probabilidade da infecção se tornar persistente e na progressão a lesões neoplásicas, além de alterar a estabilidade e reparo do DNA. Objetivo: Investigar a relação entre nutrientes selecionados e a infecção persistente por HPV em homens. Métodos: Foram utilizados dados secundários de 1248 indivíduos de 18 a 70 anos e que responderam a um Questionário de Frequência Alimentar (QFA), obtidos da coorte brasileira de estudo sobre HPV em homens. O QFA foi desenvolvido e validado para a população do estudo, e posteriormente seus dados foram calibrados e ajustados pela energia. Por meio do teste U de Mann-Whitney foram avaliadas diferenças nas medianas de ingestão dos nutrientes entre grupos com e sem infecção persistente por HPV oncogênico e não-oncogênico, e realizado teste de tendência. A associação entre os nutrientes e o HPV persistente foi testada por regressão logística. Resultados: Dos 1248 participantes analisados, 1211 (97,0 por cento ) apresentaram infecção por HPV e 781 (62,6 por cento ) apresentaram infecção persistente por HPV, sendo que 458 (36,7 por cento ) tinham infecção persistente por HPV oncogênico e 636 (51,0 por cento ) por HPV não-oncogênico. Para o HPV oncogênico, o grupo sem infecção persistente apresentou maior mediana de ingestão de retinol (p=0,008), vitamina A (p<0,001) e folato (DFE) (p=0,003), além de menor mediana de ingestão de energia (p=0,005) e licopeno (p=0,008). Não houve associação significativa entre os nutrientes selecionados e o HPV persistente oncogênico. Já para o HPV persistente não-oncogênico, a vitamina B12 apresentou associação inversa estatisticamente significativa (p de tendência=0,003). Conclusão: Não houve associação entre ingestão de nutrientes e infecção persistente por HPV oncogênico; e apenas a vitamina B12 mostrou-se inversamente associada com a persistência da infecção por HPV não-oncogênico. / Background: HPV infections are the most common among sexually transmitted diseases. Although most frequently transitory, persistent oncogenic-type HPV infection may progress to a precursor lesion and, if not correctly treated, to cancer. The dissemination of HPV tends to be universal in sexually active individuals. Men, besides being in risk to cancer, in special penile and anal cancer, can be the spreader of this virus to women, contributing to the infection, and hence the cervical cancer. However, little is known about this infection in men. Some studies discuss the possible relation between diet and the risk of HPV and the role of food in persistent infections. Food and nutrients could influence carcinogenesis process by affecting nutritional status, susceptibility to infection and by acting in the probability of infection turning persistent and progressing to neoplastic lesions, besides altering DNA repair and stability. Objective: Investigate the relation of selected nutrients and HPV persistent infection in men of São Paulo, Brazil. Methods: The study population consisted of 1,248 men from the Brazilian cohort of HIM study, aged from 18 to 70 years old, whose answered a quantitative food frequency questionnaire (FFQ) in the baseline. The FFQ was developed and validated for the study population and afterwards calibrated and energy-adjusted. The U Mann-Whitney test was used to assess differences in the medians of nutrient intake between men with persistent and non-persistent infection. The association of dietary intake and persistent HPV infection was assessed in multivariate logistic models. Two independent multivariate logistic regression models were developed, one for oncogenic HPV persistent infection and other for nononcogenic HPV persistent infection. By treating categorical nutrient variables as continuous, it was possible to perform tests for trends. Results: Of 1248 participants analyzed, 1211 (97,0 per cent ) presented HPV infection and 781 (62,6 per cent ) presented persistent HPV infection, whereas 458 (36,7 per cent ) showed persistent infection by oncogenic type and 636 (51,0 per cent ) by nononcogenic type. For oncogenic type, the group with non-persistent infection had higher medians of retinol (p=0,008), vitamin A (p<0,001) and folate (DFE) (p=0,003), besides lower medians of energy (p=0,005) and lycopene (p=0,008). There was no significant association between selected nutrients and persistent oncogenic HPV infection. For nononcogenic persistent infections, only vitamin B12 was significantly associated (p=0,003, test for trend). Conclusion: No association was found between dietary intake and persistent oncogenic-type HPV infection. For nononcogenic persistent infections, only vitamin B12 was inversely associated.