Os tumores da cérvice-uterina, que representam uma das principais doenças ginecológicas em mulheres na idade reprodutiva em todo o mundo, estão etiologicamente associados com a infecção pelo papilomavírus humano (HPV). A progressão de uma lesão intraepitelial escamosa de baixo-grau (LSIL) a um carcinoma invasivo de cérvix uterina está acompanhada da degradação da matriz extracelular (MEC) devido à ação progressiva das metaloproteinases de matriz (MMP-2, MMP-9 e MMP-14) no processo de invasão e metástase. Entretanto, o balanço entre as MMPs e seus reguladores como RECK e TIMPs é necessário para controlar esta invasão. O objetivo deste projeto consiste em avaliar a atividade e a expressão das metaloproteinases 2, 9, e 14, e caracterizar a expressão do gene supressor de metástase RECK e do inibidor tecidual de metaloproteinases (TIMP-2), em modelo de queratinócitos humanos infectados com retrovírus recombinantes que expressam os oncogenes E6 e/ou E7 de HPV 16, em culturas cultivadas em monocamada e organotípicas. Para isso, utilizamos ensaios de real-time PCR, zimografia, western blot, imunocitoquímica, ensaio de ELISA e imunohistoquímica. Em culturas em monocamada observamos que as células que expressam as oncoproteínas E6E7 de HPV16 apresentaram menores níveis protéicos de RECK e TIMP-2 em relação ao controle pXLSN. Quando analisamos as culturas organotípicas, também observamos esta diminuição dos níveis de RNAm e protéicos de RECK em rafts que expressam E6E7, acompanhado pelo aumento da atividade de MMP-9, em relação ao controle. Também observamos que o tratamento das culturas com a citocina TNF aumenta a expressão gênica, protéica e atividade de MMP-9 em todas as linhagens analisadas. Além disso, os oncogenes E6 e/ou E7 não afetam a expressão e/ou atividade de MMP-2, MT1-MMP. Nossos dados demonstraram que a expressão das oncoproteínas E6E7 de HPV16 estão relacionadas com o desequilíbrio entre MMPS e seus inibidores, sugerindo que em uma fase pré-invasiva do carcinoma cervical, não somente as MMPs, mas, principalmente seus inibidores são críticos para início da progressão tumoral. / Cervical cancer is etiologically associated with to high-risk human papillomavirus (HPV) infection. It has been observed that matrix metalloproteinases (MMPs) -2, -9, and MT1-MMP are required for basement membrane degradation during cervical carcinoma progression. Moreover, a counterbalancing among MMPs and their regulators, such as TIMPs and RECK, is necessary to modulate invasion. In order to study the effect of HPV oncogenes on MMPs expression, primary human keratinocytes (PHKs) were infected with recombinant retroviruses expressing wild-type HPV16 E6 and/or E7 oncogenes and were used to seed monolayers and organotypic cultures. Quantitative real-time PCR (Q-PCR), western blot, zimography, immunocitochemistry, ELISA assay and immunohistochemistry were used to determine the expression level and activity of MMP-2, MMP-9, MT1-MMP and their inhibitors RECK and TIMP-2. We observed that cultures expressing E6E7 presented lower RECK and TIMP-2 protein levels than control keratinocytes. In addition, rafts cultures presented the same lower RECK levels additionally presenting higher MMP-9 activity than control. Furthermore, we observed that expression of E6 and/or E7 proteins do not affect MMP-2 and MT1-MMP protein levels and/or activity. We also observed that TNF treatment enhance the MMP-9 gene and protein expression and activity in all studied cell lines. Taken together, our results demonstrate that HPV16E6E7 expression is related with the unbalance between MMPs and their inhibitors, suggesting that in the initial steps of HPV-related cervical disease, not only MMPs but also RECK and TIMP-2 are critical for tumor progression.

A infecção genital pelo papilomavírus humano (HPV) corresponde a uma das doenças sexualmente transmissíveis mais frequentes no mundo. Uma preocupação dos pacientes que apresentam HPV na região anogenital diz respeito à possibilidade de disseminação desse vírus para outras partes do corpo. O objetivo geral desse estudo foi avaliar a possível correlação existente entre infecções pelo HPV na mucosa oral e no colo uterino em mulheres com sorologias positiva e negativa para o HIV. Pretendeu-se, também, identificar variáveis clínicas, demográficas e laboratoriais associadas à infecção oral pelo HPV. A amostra foi constituída por 200 pacientes do gênero feminino, sendo 100 com sorologia positiva para HIV (grupo 1) e 100 com sorologia negativa para HIV (grupo 2). As pacientes foram incluídas consecutivamente no Centro de Referência e Treinamento em DST-AIDS entre abril de 2008 a maio de 2009. Todas as pacientes assinaram um Termo de Consentimento Livre e Esclarecido e responderam a uma ficha com questionamentos sobre hábitos e comportamento sexual. Além disso, tiveram as cavidades oral e ginecológica examinadas, sendo que células superficiais de ambos os locais foram coletadas e avaliadas pela captura híbrida 2 e pela citologia em base líquida. Para comparação de variáveis qualitativas, como freqüências e proporções, foi utilizado o teste de qui-quadrado ou exato de Fisher, se necessário. Para comparação de dados quantitativos, foram utilizados os testes de Mann-Whitney ou t de Student. A análise multivariada foi executada utilizando-se o teste de regressão logística, sendo que o valor de significância estatística estabelecido foi de 5% (p<0,05). O DNA do HPV foi detectado nas amostras cervicais de 41 (41%) pacientes HIV+ e de 45 (45%) HIV- (p=0.67). Nas amostras da cavidade oral, o DNA do HPV foi observado em 11 mulheres do G1 (HIV+) e em 2 mulheres do G2 (HIV-) (OR=6,06; 95%IC=1,31-28,07; p=0,02). Os subtipos oncogênicos foram prevalentes em ambos os grupos, sendo que não foi observada diferença entre os grupos (p=0.87). Nenhuma paciente apresentou lesão macroscópica oral relacionada ao HPV, sendo que 15 (15%) mulheres do G1 (HIV+) e 17 (17%) do G2 (HIV-) apresentaram lesão macroscópica na região genital (p=0.2129). Com os resultados obtidos pôde-se concluir que nesta população não houve correlação entre a infecção pelo HPV nas mucosas oral e cervical. Além disso, as pacientes HIV+ apresentaram maior prevalência de infecção pelo DNA-HPV na boca em comparação às pacientes HIV-. / Human papillomavirus (HPV) is one of the most prevalent sexually transmitted viruses worldwide with both oral and genital manifestations. The high prevalence of HPV infection among HIV + individuals provides an opportunity to elucidate the relationship between oral and cervical HPV-infection in this group of subjects. The aim of this study is to evaluate the possible association between oral and cervical infections in HIV-positive and negative patients. One hundred HIV+ (group 1) and 100 HIV- (group 2) women were recruited consecutively from a gynecologic clinic between April 2008 and May 2009. All subjects were given a cervical and oral examination. Cytological samples were evaluated by the hybrid capture 2 technique from oral and cervical scrapings. Statistical analysis was performed using chi-square test and p values < 0.05 were considered significant. HPV-DNA was detected in cervical scrapings from 41 (41%) HIV-positive subjects and from 45 (45%) HIVnegative subjects (p=0.67). In oral samples, HPV-DNA was observed in 11 subjects from group 1 and in 2 subjects from group 2 (p=0.02). High-risk HPV subtypes were prevalent in both groups and no difference between the groups was detected (p=0.87). No subject showed macroscopic oral HPV-related lesion, whereas 15 (15.00%) from group 1, and 17 (17.00%) from group 2, presented with macroscopic genital lesion (p=0.2129). HPV-DNA was more frequent in oral mucosa of HIV+ patients than HIV- (p=0,018). There was no association between oral and cervical HPV infection in HIV+ and HIV- patients. Presence of cervical lesion was not associated with oral lesion.

O Papilomavírus Humano (HPV), da família Papilomaviridae, são vírus epiteliotrópicos que provocam lesões de pele ou mucosa. O carcinoma do colo uterino é uma das principais causas de morte de mulheres em todo o mundo, sendo a infecção pelo HPV o principal fator de risco para o desenvolvimento do carcinoma cervical. Durante o processo maligno, a migração descontrolada de células neoplásicas, é uma característica fundamental da invasão tumoral, sendo que as metaloproteinases de matriz (MMPs) participam largamente deste processo pois são responsáveis pela clivagem de proteínas da matriz extracelular. O projeto propôs investigar a expressão de MMP-9 total em amostras cérvico-vaginais com inflamação, lesão e tumor. Foram coletadas duas amostras cérvico-vaginais como esfregaços para diagnóstico citológico e imunocitoquímica. A coleta foi realizada em 630 pacientes da Penitenciária Feminina de Sant´ana, no período de agosto de 2009 a agosto de 2010. As lâminas foram submetidas à imunocitoquímica para detecção da expressão de MMP-9. Os resultados indicaram um aumento da expressão de MMP-9 total diretamente proporcional com o aumento do grau das lesões nos esfregaços, corroborando com dados de histologia da literatura. Portanto, tal método de correlação de MMP-9 total com esfregaços cérvico-vaginais poderá auxíliar o prognóstico em esfregaços. / The Human Papillomavirus (HPV) are epitheliotropic viruses from family Papillomaviridae, which cause skin or mucous lesions. Carcinoma of the cervix is a major cause of death in women worldwide, and HPV infection a major risk factor for development of cervical carcinoma. During the malignant process, cell migration is a fundamental characteristic of tumor invasion, and the matrix metalloproteinases (MMPs) are responsible for the cleavage of extracellular matrix proteins. This project aims to investigate the expression of MMP-9 in different degrees of injury in the smear. We collected two cervical smears for cytological diagnosis and immunocytochemistry. Data collection was conducted in 630 women of the Sant´ana Women\'s Penitentiary, during the period August 2009 to August 2010. The slides were submitted to immunocytochemistry to detect the expression of MMP-9 and noticed an increase in protein expression in parallel with the increased lesions grade, which corroborates the histology of the literature and could be a method prognostic aid in vaginal smears.

Introdução: Sabe-se que a elevada prevalência da infecção pelo HPV na população sexualmente ativa, associa-se ao desenvolvimento delesões intra-epiteliais cervicais de alto grau e de baixo grau (LIEAG e LIABG). A cirurgia dealta freqüência (CAF) veio contribuir para o tratamento da LIE, substituindo práticas invasivas e onerosas. A população contaminada pelo HPV é composta por pacientes imunocompetentes e imunodeprimidas, especialmente as infectadas pelo HIV, que poderão ter diferente resposta a esta cirurgia. Objetivos:Avaliar a efetividade da CAF no tratamento das LIEAG no colo uterino e a taxa de complicações tardias dessa modalidade terapêutica em pacientes portadoras ou não do HIV e avaliar se a infecção HIV favorece a persistência de LIEAG após a CAF. Pacientes e Métodos: Estudo observacional prospectivo longitudinal onde foram selecionadas 97 pacientes portadoras de LIEAGe tratadas com CAF divididas em dois grupos: 38 pacientes portadoras do HIV e 59 não infectadas por esse vírus, todas atendidas em Hospital Universitário de referência terciária. As pacientes foram submetidas a CAF e reavaliadas com coleta de colpocitologia e colposcopia com três, seis, nove e 12 meses após o procedimento. As taxas de efetividade da CAF consideraram a evolução da doença cervical ao longo do seguimento desses dois grupos de pacientes por um ano. Resultados:Após o seguimento de 12 meses foram observadas situações de cura (citologia e colposcopia normais), melhora (citologia e/ou comcolposcopia com sinais de infecção HPV ou LIEBG) ou de piora da LIEAG inicial (lesão microinvasora/invasora). Sendo assim, foram obtidos para as pacientes portadoras do HIV: 56,7% de cura; 32,4% de melhora e nenhum caso de piora após o tratamento inicial. Para as pacientes não portadoras do HIV os resultados foram: 75,8% de cura; 13,8% demelhora e 1,7% de piora, indicando desfecho clínico mais favorável entre as pacientes não portadoras do HIV (X 2 , p= 0,02). As taxas de estenose de canal cervical entre as pacientes portadoras do HIV (13,5%) não foram estatisticamente diferentes daquelas observadas entre as pacientes não portadoras do HIV (10,5%). A excisão completa da LIE que motivou a CAF ocorreu em 69 (71,2%) pacientes. Entretanto, 21 (21,7%) mulheres tiveram excisão incompleta com margens da peça cirúrgica comprometida pela LIE. Dessas 21 pacientes que apresentaram margens da peça cirúrgica comprometidas apenas cinco tiveram necessidade de novo tratamento. Também foram submetidas a novo tratamento três das mulheres que tiveram margens cirúrgicas livres da peça excisada e uma paciente com a margemcirúrgica carbonizada. Conclusões: Não foi encontrada diferença estatisticamente significativa entre os dois grupos estudados em relação ao número de complicações após a realização da CAF e também na necessidade de novo tratamento no caso de mulheres portadoras do HIV. Entretanto, o desfecho clínico favorável (cura e melhora) para essa população estudada foi significativamente melhor para as pacientes não portadoras do HIV que para as infectadas por esse vírus após um ano de seguimento pós-CAF. A recidiva da LIEAG é mais freqüente em pacientes com margens cirúrgicas comprometidas, independente da presença da infecção pelo HIV. / Introduction: It is known that the high prevalence of HPV infection in the sexually active population is associated with the development of high and low-grade squamous intraepithelial lesions (HSIL and LSIL). Loop electrosurgical excision procedure (LEEP) has contributed to the treatment of SIL, replacing invasive and expensive procedures. The population contaminated with HPV consists of immunocompetent and immunodepressed patients, especially HIV-infected patients, who may respond differently to this surgery Objectives:To assess the effectiveness of LEEP in the treatment of HSIL in the uterine cervix and the rate of late complications of this therapeutic modality in patients infected or not with HIV and to determine whether HIV infection predisposes to the persistence of HSIL after LEEP. Patients and Methods: This was a prospective longitudinal observational study conducted on 97 patients with HSIL and treated with LEEP who were divided into two groups: 38 HIV-infected and 59 non-HIV-infected patients attended at a tertiary reference University Hospital. The patients were submitted to LEEP and re-evaluated bycolpocytology and colposcopy at three, six, nine and 12 months after the procedure.The rates of LEEP effectiveness were determined on the basis of the evolution of cervical disease along a one year follow-up of the two groups of patients Results:After a follow-up of 12 months, situations of cure (normal cytology and colposcopy), improvement (cytology and/or colposcopy with signs of HPV infection or HSIL) or of worsening of the original HSIL (microinvasive/invasive lesion) were observed. On this basis, the followingresults were obtained for HIV-infected patients: 55.2% of cure, 34.3% of improvement and no case of worsening after the initial treatment. For non-HIV-infected patients, the results were: 75.4% of cure, 14.1% of improvement and 1.7% of worsening, indicating a more favorable clinical outcome among non-HIV-infected patients (X 2 , p= 0.02). The rates of cervical canal stenosis among HIV-infected patients (13.5%) did not differ significantly from those among non-HIV-infected patients (10.5%). Complete excision of the SIL that motivated LEEP occurred in 69 (71.2%) patients. However, in 21 (21.7%) women, excision was incomplete, with SIL involvement of the margins of the surgical piece. Of these 21 patients with compromised surgical piece margins, only five required new treatment. Three of the women whose surgical margins were freeof disease and one patient with a carbonized surgical margin were also submitted to new treatment. Conclusions:No statistically significant difference was detected between the two groups regarding the number of complications after LEEP or also regarding the need for new treatment among HIV-infected women. However, a favorable clinical outcome (cure and improvement) for this population was significantly better for non-HIV-infected patients than for HIV-infected patients after one year of post-LEEP follow-up. HSIL recurrence was more frequent among patients with involved surgical margins regardless of the presence of HIV infection.

O papilomavirus humano (HPV) é o agente etiológico da infecção sexualmente transmissível mais comum na população mundial. A prevalência da infecção por HPV é estimada em 660 milhões de pessoas e mais de 50% das mulheres serão acometidas pela infecção ao menos uma vez na vida. O HPV é responsável por virtualmente todos os casos de câncer de colo de útero (99%), além de causar muitos outros tipos de câncer de mucosa. O câncer cervical afeta aproximadamente 1.4 milhões de mulheres e 500 mil novos casos surgem anualmente, resultando em 250 mil mortes por ano. Os maiores índices de incidência são observados na América Latina e na África. Duas vacinas contra o HPV são comercializadas desde 2006 por empresas estrangeiras. Entretanto, o custo mínimo da vacinação é superior a 600 reais. Este preço torna sua incorporação pelo sistema de saúde um processo economicamente inviável. Dessa forma, devem ser buscadas alternativas para a produção de uma vacina eficaz, de qualidade e de baixo custo no Brasil. A proteína L1, principal proteína do capsídeo do HPV, tem a propriedade de se auto agregar em partículas semelhantes às virais (VLPs), que são o principal componente das vacinas atuais e possuem muita semelhança com os vírions nativos, introduzindo inclusive, uma imunização predominantemente tipo-específica. Este projeto se propôs a construir e avaliar vetores de expressão visando à produção em larga escala da proteína L1 do HPV 16, o tipo de HPV de maior risco e incidência na população mundial. Foram construídos cinco plasmídeos para Pichia pastoris, uma das principais plataformas industriais de expressão. Eles se diferenciam pelos marcadores de seleção e pelas sequências de manutenção do vetor, mas têm exatamente o mesmo objetivo: gerar sistemas que possuam múltiplas cópias do gene da L1 e que não necessitem da utilização de antibióticos. Essa estratégia foi escolhida porque a produtividade de muitas das proteínas heterólogas tem grande dependência da dosagem gênica e porque o uso de antibióticos encarece muito o custo da produção. Na primeira etapa do projeto foi avaliado um sistema de expressão epissomal auxotrófico, mas ele não se manteve estável ao longo de 60 gerações. Na segunda parte, dois vetores de integração ao sítio do DNA ribossomal foram testados. O sistema mais estável e produtivo foi caracterizado quanto ao número de cópias integradas ao genoma da P. pastoris e ao nível de expressão. O sistema é capaz de produzir clones com mais de 30 cópias do gene da L1 e dois clones expressaram cerca de 20 a 30 miligramas/litro de L1. Adicionalmente outros dois vetores integrativos que utilizam sequências teloméricas para integração foram construídos. Ainda são necessários estudos conjuntos de fermentação em larga escala e purificação da proteína para verificar a viabilidade do sistema / The human papillomavirus (HPV) is the etiologic agent of the sexually transmitted infection most common worldwide. The prevalence of HPV infection is estimated at 660 million people and over 50% of women will be affected by the infection at least once in their lifetime. HPV is responsible for virtually all cervical cancers cases (99%), and causes many other types of mucosal cancer. Cervical cancer affects approximately 1.4 million women, and 500.000 new cases occur annually, resulting in 250.000 deaths per year. The highest incidence rates are seen in Latin America and Africa. Two HPV vaccines are marketed since 2006 by foreign companies. However, the minimum cost of vaccination is higher than 360 dollar. This price makes its incorporation by the Brazilian Health System economically unfeasible. Thus, alternatives must be found to produce an effective vaccine, with low cost and high-quality in Brazil. The L1 protein, the major capsid protein of HPV, has the ability to self aggregate into virus-like particles (VLPs) which are the main component of current vaccines. The VLPs are very similar to the native virions and can introduce an immunization predominantly type-specific. This project aimed to construct and evaluate expression vectors to produce, at large scale, the L1 protein of HPV 16, which is the HPV type at greater risk and incidence in the world. Five plasmids were constructed for Pichia pastoris, one of the major industrial expression platforms. They differ in the selection markers and the vector maintenance sequences, but they have exactly the same goal: to create systems with multiple copies of the L1 gene and that don\'t require the use of antibiotics. This strategy was chosen because the productivity of many heterologous proteins have heavy dependence on gene dosage and because the use of antibiotics is extremely expensive for its production. In the first stage of the project, it was rated an episomal auxotrophic expression system, but it was unstable after a period of 60 generations. In the second part, two vectors for integration in the ribosomal DNA locus were tested. The most stable and productive system was featured on the number of copies integrated into the P. pastoris genome and on the expression level. It was proved that the system is able to produce clones with more than 30 copies of the L1 gene and two clones expressed approximately 20-30 milligrams/liter of L1. Additionally, two other integrative vectors for integration in telomeric sequences were constructed for future testing. More studies on large-scale fermentation and protein purification will be necessary to determine the feasibility of the system.

Os papilomavírus humanos são vírus de DNA que infectam epitélios em regiões anatômicas específicas. Alguns tipos de HPV, coletivamente denominados de alto risco oncogênico, têm associação etiológica com o câncer do colo do útero. Estes vírus expressam dois oncogenes, E6 e E7, que alteram o ciclo celular e o programa de diferenciação das células. Isto promove o acúmulo de defeitos mitóticos e instabilidade genômica, contribuindo à transformação maligna. Alterações nos sistemas de reparo de dano ao DNA associadas à presença de HPV têm sido descritas em diferentes modelos experimentais, no entanto, não tem sido analisadas de maneira sistemática. No presente estudo, avaliamos a expressão de 135 genes envolvidos nas vias de reparo de dano ao DNA em queratinócitos primários humanos e em linhagens derivadas de carcinomas do colo do útero positivas e negativas para HPV. Nossos resultados indicam a presença de alterações importantes na expressão de genes envolvidos nas vias de reparo de dano ao DNA em linhagens derivadas de tumores do colo do útero. / Human papillomaviruses are DNA viruses that infect epithelia in specific anatomical regions. Some HPV types, collectively known as high-risk types are etiologically associated with cervical cancer. These viruses express two oncogenes E6 and E7 that alter the cell cycle and cell differentiation. Besides, they promote genomic instability and the accumulation of mitotic defects contributing to malignant transformation. Alterations in the DNA damage repair systems associated with HPV presence have been described in various experimental model systems. However, they have not been systematically analyzed. In this study, we evaluated the expression of 135 genes involved in the DNA damage repair pathways in primary human keratinocytes and cervical cancer derived cell lines. Our results show the presence of important alterations in the expression of DNA damage repair genes in cervical cancer derived cell lines.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:38:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GERUSA CRISTHINY DA PAIXAO RONCATO.pdf: 1739734 bytes, checksum: e31f127c33ebfe10748de3fa7c77d454 (MD5) Previous issue date: 2011-04-14 / Genital infection by human papillomavirus (HPV) is considered the sexually transmitted disease most prevalent among the population. The man has represented an important role as virus reservoir and transmitter. Most HPV-infected men are asymptomatic. The HPV infection prevalence in young males is poorly understood and few studies are available. This study aim was to evaluate the HPV prevalence in a group of young adults, ages 18 and 25, male, living in the City of Leopoldo de Bulhões-GO. For viral genome detection, was used the polymerase chain reaction (PCR) technique with primers PGMY09/11 Line Blot. Descriptive statistics and their frequencies was performed for the variables related to socio-demographic and behavioral features in the group of asymptomatic men for HPV infection. To investigate the possible associations between related factors and the infection, univariate analysis was performed by chi-square test with Yates correction. The study involved a population of 57 asymptomatic men aged between 18 and 25 years old living in the city of Leopoldo de Bulhões-GO, selected at the Jose Francisco Vargas Health Center. Among the study group behavioral characteristics, 43.9% of subjects were single and 56.1% were married. The individual s age who initiated sexual activity was approximately 15 years old. All subjects were informed about the study and signed a free and clear consent form. The HPV infection prevalence in the study group was 31.6%. HPV infection was significantly associated with marital status and partner s number, in other words, infection was more prevalent among unmarried individuals (56%) who did not have a steady partner (57.1%). As for condom use and early sexual activity, HPV infection was not significantly associated. Our results demonstrate that a man behavioral factor represents a significant risk for HPV infection association / A infecção genital pelo papilomavírus humano (HPV) é considerada a doença sexualmente transmissível de maior prevalência na população mundial. O homem tem apresentado um importante papel como reservatório e o transmissor desse vírus. A maioria dos homens infectados pelo HPV são assintomáticos. A prevalência da infecção pelo HPV em jovens do sexo masculino é pouco conhecida e apenas alguns estudos encontram-se disponíveis. O objetivo deste trabalho foi avaliar a prevalência do HPV em um grupo de adultos jovens, com idades entre 18 e 25 anos, do sexo masculino, residentes no Município de Leopoldo de Bulhões-GO. Para a detecção do genoma viral utilizou a reação em cadeia da polimerase (PCR), utilizando a técnica com primers PGMY09/11. A estatística descritiva com suas respectivas freqüências foi realizada para as variáveis relativas às características sócio-demográficas, comportamentais no grupo de homens assintomáticos para infecção pelo HPV. Para investigar as possíveis associações entre os fatores relacionados e a infecção realizou-se análise univariada, pelo teste do qui-quadrado com correção de Yates, selecionados no Centro de Saúde José Franscisco Vargas. Dentre as características comportamentais do grupo estudado 43,9% dos indivíduos eram solteiros e 56,1% eram casados. A idade de início da atividade sexual foi de aproximadamente 15 anos. Todos os indivíduos foram informados sobre o estudo e assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido. A prevalência da infecção pelo HPV no grupo estudado foi de 31,6%. A infecção pelo HPV esteve significativamente associada ao estado civil e ao número de parceiras, ou seja, a infecção foi mais prevalente nos indivíduos solteiros (56%) e que não apresentaram parceira fixa (57,1%). Quanto ao uso do preservativo e o início da atividade sexual a infecção pelo HPV não esteve significativamente associada. Nossos resultados demonstraram que fatores comportamentais do homem representam uma associação com risco significativo para a infecção pelo HPV

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:39:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antoniella Fernanda Mendanha Sousa.pdf: 2903899 bytes, checksum: ec3428888f580d02453116414b41e866 (MD5) Previous issue date: 2008-04-11 / Cancer arises as a consequence of genetic or epigenetic alterations in genes that have a variety of different influences on the cell cycle, including cell growth, proliferation, differentiation, and apoptosis. Nowadays, cancer is among the most prevalent, costly, and preventable of all health problems. In Brazil, it represents the second cause of death of the adult population. Penile cancer is a rare disease, generally more prevalent in poor populations from developing countries, associated with precarious hygiene habits, especially of uncircumcised men. Penile cancer incidence varies across Brazilian geographical regions and it is more common on the North and Northeast regions. Penile cancer usually develops between the fourth and seventh decade of life and Squamous Cell Carcinoma accounts for up to 97% of all penile cancers. Molecular and epidemiological data has found strong evidence of the presence of HPV genome associated with penile carcinomas. The prevalence of HPV genome has been reported to be as high as 80%, depending on the sensitivity of the detection method and the selection of the tumor type. High-oncogenic-risk viral genotypes 16 and 18 are the most common types detected in association with penile tissue. The general objective of the current study was to detect and genotype HPV genome associated with penile cancer tissue using the polymerase chain reaction (PCR) assay. Furthermore, the potential association between the presence of HPV in the samples and the clinicopathological aspects of all cases was also investigated. The study group comprised of 29 cases diagnosed with penile carcinomas at the Urology Department/Hospital Araújo Jorge in Goiânia from 2001 to 2006. Total DNA was isolated from frozen tumor tissue and HPV DNA amplification was performed using GP5+/6+ primer pairs. Samples identified as positive for HPV DNA were genotyped with type-specific primer pairs. Appropriate positive and negative PCR controls were run with all reactions. As an internal control, a fragment of the GAPDH gene was also amplified. In our study, the mean age at the diagnosis was 61,5 years. With respect to tumor topography, 24% was present on the penile shaft, 28% on the glans, 16% on glans and foreskin as the three most frequent observations. Regarding Jackson s staging, 32% of the cases were J-I, 36% J-II, 24% JIII, and 8% J-IV. Partial penectomy was the most frequent surgical approach during treatment, 32% of all cases had metastasis and phimosis was present in 72% of the patients. HPV genome was amplified in 34,5% (10/29) of samples, and HPV-16 was the most prevalent. HPV role in penile cancer must be investigated and viral infection should be considered an import risk facto for penile cancer development, most likely to be implicated in tumor initiation, and should be investigated in association with the occurrence of phimosis, poor hygiene habits, chronic smoking, and individual promiscuity. / O Câncer é uma conseqüência de alterações genéticas ou epigenéticas em uma variedade dos genes que são fundamentais ao processo de crescimento, proliferação, diferenciação e morte programada da célula. Atualmente, essa doença, configura-se um dos principais problemas da saúde mundial, e no Brasil, representa a segunda causa de óbito na população adulta. O câncer de pênis é um tipo raro de neoplasia, que acomete indivíduos de países subdesenvolvidos com baixo nível social e precários hábitos de higiene associado à fimose e não circuncizados. No Brasil a incidência varia conforme a região estudada: 5,5% a 16% nas regiões Norte e Nordeste de 1 a 4% nas regiões Sul e Sudeste e 3,8% na região Centro-Oeste. Este tipo de câncer ocorre freqüentemente entre a quarta e sétima décadas de vida, com 97% dos casos representados pelo carcinoma epidermóide. No entanto, indivíduos jovens também podem ser afetados. Estudos epidemiológicos e moleculares têm identificado a associação entre o Papilomavírus Humano (HPV) e carcinoma de pênis. O genoma desse vírus já foi identificado em 15-80% dos casos desse tipo de tumor, sendo os subtipos de alto risco oncogênico (16 e 18), os mais freqüentes. Os objetivos do estudo foram detectar e genotipar HPV em espécimes biológicos de tumor de pênis e determinar as possíveis associações existentes entre a persença dos tipos virais e os aspectos clínico patológicos (ACP) dos pacientes diagnosticados com câncer de pênis no Serviço de Urologia do Hospital Araújo Jorge (SU-HAJ), no período de 2001 a 2006 e identificar o genoma do HPV pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Foram diagnosticados 29 pacientes no SU-HAJ e os ACP foram obtidos a partir dos prontuários e tabulados com estatística descritiva. As amostras de tecido com carcinoma peniano foram submetidas à extração de DNA e posteriormente realizada as reações de PCR. Nestas, utilizou-se os primers GAPDH, GP5+/6+ e tipo-específicos, como controle interno da reação, detecção de qualquer tipo de HPV e genotipagem, respectivamente. A média das idades foi de 61,5 anos. Para topografia, observou-se 24% para haste, 28% para glande, 16% para glande e prepúcio, 12% para glande e haste, 8% para prepúcio e 12% para outras especificações. A morfologia de maior prevalência foi carcinoma escamoso invasor variando do grau I ao IV. No estadiamento (classificação de Jackson), foi verificado 32% para Jackson I, 36% para Jackson II, 24% para Jackson III e 8% para Jackson IV. O tratamento de escolha para a maioria dos casos foi a penectomia parcial, sendo que 32% dos pacientes apresentaram metástases e 72% dos pacientes apresentaram fimose. Na avaliação molecular, o conjunto de primers GAPDH mostrou-se amplificado em todas as amostras analisadas, demonstrando eficácia na extração de DNA. A amplificação para o genoma viral com os primers GP5+/6+ foi observada em 34,48% (10/29) e o tipo mais freqüente de HPV foi o 16. Os estudos sobre a associação entre o HPV e os tumores de pênis são importantes, pois podem avaliar a relação desse vírus com o processo de iniciação e promoção de tumores, junto a outros fatores de risco, como a fimose, má higiene, o tabagismo e a promiscuidade.

Câncer cervical é a terceira causa de morte em mulheres no mundo, e a quarta causa de morte em mulheres no Brasil. Seu principal agente etiológico é o vírus do papiloma humano (HPV), e diversos estudos estão sendo feitos na tentativa de desenvolver abordagens terapêuticas que combatam tumores induzidos por HPV. Nesse contexto, surgem às vacinas de DNA, capazes de induzir resposta imune específica contra esse tipo de tumores em camundongos. Entretanto essas vacinas apresentam baixa imunogenicidade em humanos, sendo necessária estudar abordagens que aumentem a potência dessas vacinas. Eletroporação in vivo (EP) é um método de entrega de vacinas de DNA, capaz de elevar potência das mesmas. Nosso grupo desenvolveu uma imunoterapia baseada em DNA (pgDE7h), e quando associamos a EP em nossa imunização pela via intramuscular, observamos aumento do efeito antitumoral e da frequência T CD8+E7-específicas e citotóxicas, migração de células para o sítio de inoculação do DNA, indução de células T polifuncionais e de memória, além de maior avidez de células T ativadas. / Cervical cancer is the third leading cause of death in women worldwide, and the fourth leading cause of death in women in Brazil. Its main etiological agent is human papilloma virus (HPV), and several studies are being done in trying to develop therapeutic approaches that fight tumors induced by HPV. In this context, there are the DNA vaccines are capable of inducing specific immune response against this type of tumors in mice. However, these vaccines have a low immunogenicity in humans, it is required to study approaches to increase the potency of these vaccines. In vivo electroporation (EP) is a method of delivering DNA vaccines, capable of raising power of the same. Our group has developed a DNA-based immunotherapy (pgDE7h), and when associate EP in our immunization by intramuscularly observed increase antitumor effect and frequency CD8+E7-specific and cytotoxic, cell migration for the inoculation site of the DNA polyfunctional T cell induction and memory, and higher avidity for activated T cells.

O desenvolvimento de vacinas contra o vírus do papiloma humano (HPV) representa uma importante alternativa para o controle da infecção sexualmente transmissível e do câncer cervical. Neste trabalho exploramos uma estratégia vacinal inédita contra tumores induzidos pelo HPV-16 empregando a proteína E7 obtida após fusão genética com a glicoproteína D do vírus herpes tipo 1, uma proteína com propriedades adjuvantes para linfócitos T. A proteína recombinante gDE7 foi expressa em bactérias e em células de inseto e purificada por cromatografia de afinidade. A proteína gerada em bactérias foi administrada nas formas insolúvel e solúvel como vacina em camundongos. A gDE7 insolúvel conferiu 80% de proteção profilática para o crescimento tumoral, a gDE7 que manteve a forma solúvel após refolding protegeu 100% dos animais nas mesmas condições. Já a proteção terapêutica alcançou 30% dos animais. Além disso, verificamos o potencial neutralizante dos soros gerados frente ao HSV-1. As condições de obtenção das proteínas expressas em células de inseto também foram estabelecidas. / The development of vaccines against human papillomavirus (HPV) represents an important alternative to control the sexually transmitted infection and cervical cancer. In this paper we explored a novel vaccine strategy against tumors induced by HPV-16 using the E7 protein obtained after genetic fusion to the glycoprotein D of herpes virus type 1, a protein with adjuvant properties for T lymphocytes. The recombinant protein gDE7 was expressed in bacteria and in insect cells and purified by affinity chromatography. The protein generated in bacteria was administered in soluble and insoluble forms as a vaccine in mice. The insoluble gDE7 gave 80% prophylactic protection for tumor growth, the gDE7 that kept the soluble form after refolding protected 100% of the animals under the same conditions. The therapeutic protection reached 30% of the animals. We also verified the neutralizing potential of sera generated against the HSV-1. The conditions for obtaining the proteins expressed in insect cells were also established.