Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2015-11-04T16:01:17Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hélio Ranes de Menezes Filho - 2015.pdf: 2092890 bytes, checksum: f6dbc2938f19e7ee61d8ef683a9cb489 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-11-05T10:14:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hélio Ranes de Menezes Filho - 2015.pdf: 2092890 bytes, checksum: f6dbc2938f19e7ee61d8ef683a9cb489 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-05T10:14:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hélio Ranes de Menezes Filho - 2015.pdf: 2092890 bytes, checksum: f6dbc2938f19e7ee61d8ef683a9cb489 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-01-26 / The Hantaviruses are acute viral zoonosis, caused by a virus from the Bunyaviridae family, genus Hantavirus, having the rodents as reservoir. It is considered an emergent disease in several regions of the world. There are few studies in Brazil in areas of cerrado biome and even fewer studies directed to understand how behaves the aggravation in municipalities in Goias. They can present two clinical instances: the Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome – HFRS, known since 1930 and endemic in Europe and Asia and Hantavirus Cardiopulmonary Syndrome – HCPS, described for the first time in the USA in 1933, that associates cardiogenic shock and vascular involvement that follow serious pneumopathy, and that is restrict to Americas. Although the disease is registered in all regions of Brazil, the South, the Southeast and the Middle-West concentrate major percentage of confirmed cases. Objective: To describe the clinic and epidemiologic aspects of patients with diagnosis of Hantavirus infection in the state of Goias from 2007 to 2013. Material and Methods: It was made a descriptive epidemiologic study with data from the State of Goias between 2007 and 2013. The data were obtained from Hantavirus infection investigation file contained in the System of Information of Aggravation and Notification (SINAN-NET) between 2007 and 2013. The analyzed data were social-demographic, clinical and epidemiological, besides mortality rate. All the data were analyzed in the set period of seven years and also what is the behavior of the disease each year. Results: 1171 suspect cases of Hantavirus infection were notified in the State of Goias, and 73 cases were confirmed (6,2%), being the average of 10,4 confirmed cases a year. The average age of the confirmed cases of the disease was 35,4 years old ( 13,2 years old) , with the minimum of 12 and the maximum of 71 years old (Median 33,5 years old); and more frequently among males, with 68,5% of the cases (p<0,05). Related to education, the highest frequency was cases with elementary or high school. The brown race (self-reported) had higher frequency, followed by the white race. The total mortality rate in the period was 57,5%. There was no association between the frequency of confirmed cases of the disease and the seasonality of the regional climate. From the total of 73 confirmed cases, 93,2% (68) were hospitalized and among the first ones, 82,2% (60) with diagnose of clinical form CSBH. The majority of cases had confirmation diagnosed through laboratory. Related to the symptoms and clinical signs, the fever was the most frequent, being present in 95,9% of the cases, followed by dyspnea (86,3%) and dry cough (71,2%). Discussion: There was a higher concentration of cases in the center-south region of the state, highlighting Anapolis and Jatai as the municipalities with higher frequency of the disease, after the capital of the state. The southwest region of the state is characterized by the economic production directed to agriculture and livestock, with advances in the production of grains and soil exploitation, putting the man in frequent contact with rodents, enabling the transmission of the disease. The frequency of Hantavirus infection found in this study was lower than other studies taken in regions of Cerrado Biome. The mortality rate was higher than in other regions of the country. The clinical status shows similar characteristics for the disease. Conclusion: the Hantavirus infection is an emergent infection in the state of Goias, showing frequency with tendency to elevation and with high rates of mortality. The number of notified cases has increased, but it is not reflecting in the increase of the number of confirmed cases. The majority of confirmed cases are hospitalized and the clinical condition identified is similar to the related for the most frequent clinical form, which was the HCPS. / As hantaviroses são zoonoses virais agudas, causadas por vírus da família Bunyaviridae, gênero Hantavirus, tendo os roedores como reservatórios. É considerada uma doença emergente em várias regiões do mundo. Podem apresentar duas formas clínicas: a Febre Hemorrágica com Síndrome Renal – FHSR, conhecida desde 1930 e endêmica na Europa e Ásia e a Síndrome Cardiopulmonar por Hantavírus – SCPH, descrita pela primeira vez nos EUA em 1993, que associa choque cardiogênico e acometimento vascular que acompanham a pneumopatia grave, e que é restrita às Américas. Apesar de a doença ser registrada em todas as regiões brasileiras, o Sul, o Sudeste e o Centro-Oeste concentram maior percentual de casos confirmados. São poucos os estudos feitos no Brasil em regiões do bioma cerrado e mais escassos ainda estudos direcionados a compreender como se comporta o agravo nos municípios goianos. Objetivo: Descrever os aspectos clínicos e epidemiológicos dos pacientes com diagnóstico de hantavirose no Estado de Goiás no período de 2007 a 2013. Material e Métodos: Foi realizado um estudo epidemiológico descritivo com dados do Estado de Goiás, no período de 2007 a 2013, obtidos da ficha de investigação de hantavirose constante do Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN- NET). Os dados analisados foram sócio-demográficos, clínicos e epidemiológicos, além da taxa de letalidade. Todos os dados foram analisados no conjunto do período de sete anos e também qual o comportamento da doença em cada ano. Resultados: foram notificados 1171 casos suspeitos de hantavirose no Estado de Goiás, e confirmados 73 casos (6,2%), sendo a média de 10,4 casos confirmados por ano. A idade média dos casos confirmados da doença foi 35,4 anos ( 13,2 anos), com a mínima de 12 anos e máxima de 71 anos (Mediana 33,5 anos); e maior frequência entre o sexo masculino, com 68,5% dos casos (p<0,05). Com relação à escolaridade, a maior frequência foi de casos com ensino fundamental ou médio. A raça parda (auto referida) teve maior frequência, seguida da raça branca. A taxa de letalidade total no período foi de 57,5%. Não houve associação entre a frequência de casos confirmados da doença e a sazonalidade do clima da região. Do total de 73 casos confirmados, 93,2% (68) foram hospitalizados e entre os primeiros, 82,2% (60) com diagnóstico de forma clínica SCPH. A quase totalidade dos casos teve confirmação diagnóstica por meio laboratorial. Em relação aos sinais e sintomas clínicos a febre foi o mais frequente, estando presente em 95,9% dos casos, seguida por dispneia (86,3%) e tosse seca (71,2%). Discussão: houve maior concentração de casos na região centro sul do Estado, destacando-se Anápolis e Jataí como os municípios com maior frequência da doença, depois da capital. A região sudoeste do Estado caracteriza-se por produção econômica voltada para a agricultura e pecuária, com avanços na produção de grãos e exploração do solo, colocando o homem em contato frequente com roedores, possibilitando a transmissão da doença. A frequência da hantavirose encontrada neste estudo foi inferior a outros estudos realizados em regiões do Bioma Cerrado. A taxa de letalidade foi superior a de outras regiões do país. O quadro clínico apresenta características similares para a doença. Conclusão: a hantavirose é uma infecção emergente no Estado de Goiás, apresentando frequência com tendência à elevação e com altas taxas de letalidade. O número de casos notificados tem aumentado, mas sem refletir no aumento do número de casos confirmados. A quase totalidade dos casos confirmados é hospitalizada e o quadro clínico identificado é semelhante ao relatado para a forma clínica mais frequente, que foi a SCPH.

Hantavirus é um gênero na família Hantaviradae, incluindo agentes polimórficos, envelopados e com genoma de RNA fita simples, polaridade negativa e trissegmentado. Os Hantavírus são zoonóticos e mantidos na natureza em reservatórios das ordens Rodentia, Soricomorpha e Chiroptera. No Brasil, foram descritos 8 Hantavírus e destes, 6 causam doença humana grave e de alta letalidade, a Síndrome Pulmonar e Cardiovascular, sendo dentre eles o Araraquara (ARQV) o vírus de ocorrência nas regiões de Cerrado do Sudeste (incluindo Ribeirão Preto) e Planalto Central. ARQV destaca-se por produzir a maior letalidade dentre todos os Hantavírus existentes e possuir como reservatório o roedor silvestre Necromys lasiurus que o transmite ao homem por inalação dos aerossóis contaminados de suas excretas. Neste trabalho, detectamos genoma de Hantavírus em tecidos de Necromys lasiurus e em tecidos de morcego Desmodus rotundus, ambos capturados no Nordeste do Estado de São Paulo. Destes animais, foram feitas tentativas de isolamento de Hantavírus a partir de amostras de tecido de Necromys lasiurus e Desmodus rotundus. Os procedimentos foram realizados em laboratório de nivel de biossegurança 3, onde fizeram-se as inoculações em cultura de células VERO E6, com detecção viral após uma única passagem de 4 dias. Desta forma, foi possível isolar um Hantavírus a partir de sobrenadante do lisado de coração do roedor, o que foi confirmado pela presença do genoma viral do isolado por RT-PCR do sobrenadante de cultura celular e dos antígenos virais nas células Vero E6, por imunofluorescência indireta e western blot. O processo de isolamento mostrou-se reprodutível, por 3 vezes, para o mesmo tecido do roedor. Tais resultados encorajam que esta metodologia para isolamento de Hantavírus deva ser experimentada por mais vezes. O Hantavírus isolado (provavelmente ARQV) deverá fornecer importantes informações sobre seu genoma completo, além de propiciar vários estudos futuros. / Hantavirus is a genus in the Hantaviradae family, including polymorphic agents, it is enveloped and with a single stranded RNA genome, negative and tri-polarity polarity. Hantaviruses are zoonotic and kept in nature in reservoirs of the orders Rodentia, Soricomorpha and Chiroptera. There are 8 hantaviruses recorded in Brazil, 6 of them cause severe human disease and high lethality, a Pulmonary and Cardiovascular Syndrome, among which Araraquara (ARQV) is the virus that occurs in the Southeastern Cerrado (including Ribeirão Preto) and Central Plateau. ARQV stands out for producing higher lethality among all existing hantaviruses and has as reservoir the wild rodent Necromys lasiurus, which transmits to humans by inhalation of the contaminated aerosols of their excreta. In this work, we detected the genome of hantavirus in Necromys lasiurus and Desmodus rotundus, bat tissues, both captured in the Northeast of the State of São Paulo. Of these animals, attempts were made to isolate hantavirus from tissue samples of Necromys lasiurus and Desmodus rotundus. The laboratory tests of biosafety level 3, where inoculations in culture of VERO cells E6 were done, with viral detection after a single passage of 4 days. Thus, it was possible to isolate hantavirus from the rodent heart lysate supernatant, which was confirmed by the presence of the viral genome of the isolate by RT-PCR of the cell culture supernatant and the viral antigens in the Vero E6 cells by Indirect Immunofluorescence and Western Blot. The isolation process was reproducible, 3 times, for the same tissue of the rodent. These results indicate that this methodology for hantavirus isolation should be tested more often. The isolated Hantavirus (ARQV), should provide important information about its complete genome, as well as providing several future studies.

p. 1-68 / Submitted by Santiago Fabio (fabio.ssantiago@hotmail.com) on 2013-04-23T19:16:46Z No. of bitstreams: 1 33333.pdf: 789962 bytes, checksum: 0f64b656f6cdc624b18dd7db84ae578a (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Creuza Silva(mariakreuza@yahoo.com.br) on 2013-05-04T17:25:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 33333.pdf: 789962 bytes, checksum: 0f64b656f6cdc624b18dd7db84ae578a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-04T17:25:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 33333.pdf: 789962 bytes, checksum: 0f64b656f6cdc624b18dd7db84ae578a (MD5) Previous issue date: 2007 / A Síndrome Cardiopulmonar por Hantavírus (SCPH) é uma doença zoonótica emergente cuja importância para a saúde pública está associada ao pouco conhecimento sobre a sua história natural e à alta taxa de letalidade. Objetivos: Descrever as características epidemiológicas, clínicas e identificar os fatores associados à ocorrência de óbitos por SCPH. Métodos: A população do estudo foi constituída pela totalidade dos casos confirmados de SCPH no Brasil, notificados no Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN) do Ministério da saúde no período de 1993 a 2006. As variáveis estudadas foram referentes à pessoa, tempo, lugar, antecedentes epidemiológicos, clínica, achados laboratoriais e radiológicos e procedimentos terapêuticos. O trabalho foi desenvolvido em duas etapas. A primeira foi referente a um estudo de série de casos, do tipo descritivo, exploratório, com base em dados secundários utilizando-se nas análises média, mediana, proporção, letalidade e densidade de casos. Para estas análises foram utilizados os programas TABWIN, Microsoft Office Excel, Epi Info versão 3.2.2 e MapInfo versão 7.8. A segunda etapa foi de um estudo analítico, tipo coorte retrospectiva, para identificar os fatores prognósticos para óbito por SCPH. Para análise de associação entre a variável dependente (óbito) e as independentes foi utilizada como medida de associação o Risco Relativo, considerando o intervalo de confiança de 95%. As variáveis independentes associadas à ocorrência de óbito, identificadas na análise univariada, foram analisadas no modelo de análise de regressão múltipla com uso do programa SPSS 13.0, tendo como medida de associação a “Odds Ratios” (OR) com intervalo de confiança a 95%. Resultados: Foram reportados 855 casos de SCPH no período analisado. A doença foi registrada em todas as regiões do país e em 14 unidades federadas, com maior número de casos ocorrendo no final do inverno e na primavera. Atingiu, predominantemente, adultos jovens, do sexo masculino, residentes em área rural e mostrou-se relacionada às atividades agrícolas e ao ambiente ocupacional. A letalidade foi de 39,3% e cerca de 95% dos pacientes foram hospitalizados. A mediana de tempo transcorrido entre início de sintomas e internação foi de 4 dias e entre hospitalização e óbito, 1 dia. Os fatores associados com óbito na análise univariada foram: dispnéia, dor torácica, tosse, síndrome de angústia respiratória do adulto (SARA), manifestações hemorrágicas, insuficiência renal, hemoconcentração, leucocitose com desvio à esquerda, aumento no nível sérico de uréia e creatinina e presença de infiltrado intersticial pulmonar. A associação de maior significância foi no grupo das variáveis de tratamento - necessidade de assistência respiratória mecânica. Na análise multivariada SARA e a variável necessidade de assistência respiratória mecânica permaneceram como fatores associados a óbito. Um segundo modelo de análise múltipla foi utilizado - sem essas duas variáveis típicas de evolução tardia - com o objetivo de identificar fatores precoces como indicadores de que o paciente poderia evoluir para óbito mostrou a dispnéia e a hemoconcentração como fatores associados à mortalidade. Conclusão: Esses achados poderão colaborar para aumentar a sensibilidade do sistema de vigilância epidemiológica da SCPH no Brasil e contribuir para o diagnóstico precoce e o manejo clínico mais adequado dos pacientes de SCPH, com a conseqüente redução da letalidade. / Brasilia

The hantaviruses are among the most important zoonotic pathogens of humans, especially due to high fatality, those associated with Hantavirus Pulmonary Syndrome (HPS). In Brazil, more than 1600 cases of HPS have been confirmed since 1993, with a fatality rate of 40%. The viral genotypes associated with HPS in humans, as well as those present in wild rodents were investigated in an endemic area of the state of Minas Gerais in this study. Furthermore, the seroprevalence for hantaviruses, the karyotyping of rodent species captured and the population dynamics of these animals on the Cerrado vegetation types were also evaluated in an ecoepidemiological approach. The ELISA and / or RT-PCR were used to test sera from human cases of SPH and wild rodents and rodent lung fragments. In our study, six patients were evaluated, of these six (100%) were seroreactive in ELISA in six (100%) was possible to amplify viral genetic material and in five (83.3%) was possible sequencing. Were observed in all the viral genotype Araraquara (ARAV), but with the formation of two well-defined clusters. The case fatality rate was 50%. Regarding rodents, 258 specimens were captured. Nine taxa were identified to species level and seven in genus level, all belonging to the subfamily Sigmodontinae. Necromys lasiurus was the most abundant (70.2). We observed a greater diversity of rodents in a fitofisionomy called semi-deciduous dry forest (07 taxa in species level and four in genus level). The winter dry season was associated with the highest capture success (p <0.0001). There was a higher prevalence of pregnancy during the rainy season (p <0.0001). There was a prevalence of IgG antibodies against hantavirus of 1.6%, all specimens of N. lasiurus. Among the four seroreactive rodents, three (75%) was possible to amplify viral genetic material and two (50%) was possible sequencing. Only ARAV viral genotype was observed. Samples of rodents had higher phylogenetic identity with the genotype sequenced of the human sample of Uberlândia, Minas Gerais, where the rodents were also captured. Samples identified with ARAV analyzed in this study were distributed at a distance of approximately 400 kilometers. Despite the geographical distance, we observed a high phylogenetic identity between two samples 384 km distant from each other. The environmental and demographic changes that have occurred in recent decades in the study area affected the ecology of wild rodents and facilitated the occurrence of hantavirus infections in humans and the emergence of HPS in this region, mainly ARAV transmitted by N. lasiurus. The observation in this study only the genotype ARAV in specimens of N. lasiurus and humans, does not exclude the possibility of co-circulation of other viral genotypes in this area, beyond the possibility of the existence of other reservoirs of hantaviruses, including non-rodents. / Os hantavírus estão entre os patógenos zoonóticos mais importantes para o homem, especialmente devido a alta letalidade, daqueles associados à Síndrome Pulmonar por hantavírus (SPH). No Brasil, mais de 1600 casos de SPH foram confirmados desde 1993, com uma taxa de letalidade de 40%. Os genótipos virais associados à SPH em humanos, bem como os presentes nos roedores silvestres foram investigados em uma área endêmica do estado de Minas Gerais neste estudo. Além disso, a soroprevalência para hantavírus, a cariotipagem das espécies de roedores capturadas e a dinâmica populacional destes animais nas fitofisionomias do Cerrado também foram avaliadas em uma abordagem ecoepidemiológica. O ELISA e/ou o RT-PCR foram utilizados para testar amostras de soro de casos humanos suspeitos de SPH e de roedores silvestres e fragmentos de pulmão de roedores. Em nossa casuística, seis pacientes foram avaliados, destes (100%) foram sororreativos no ELISA, e em seis (100%) foi possível amplificar material genético viral e em cinco (83,3%) foi possível o sequenciamento. Em todos foram observados o genótipo viral Araraquara (ARAV), porém com a formação de dois clusters bem definidos. A taxa de letalidade dos casos foi de 50%. Em relação aos roedores, 258 espécimes foram capturados. Nove táxons foram identificados a nível específico e sete a nível genérico, todos pertencentes à subfamília Sigmodontinae. Necromys lasiurus foi a espécie mais capturada (70,2). Foi observada maior diversidade de roedores na fitofisionomia Mata seca semidecídua (07 táxons a nível específico e quatro a nível genérico), A estação inverno seco esteve relacionada com o maior sucesso de captura (p < 0,0001). Houve maior prevalência de prenhez durante a estação chuvosa (p<0,0001). Observou-se uma prevalência de anticorpos IgG contra hantavírus de 1,6%, todos espécimes de N. lasiurus. Dentre os quatro roedores sororreativos, em três (75%) foi possível amplificar material genético viral e em dois (50%) foi possível o sequenciamento. Somente o genótipo viral ARAV foi observado. Estes tiveram maior identidade filogenética com o genótipo viral sequenciado de uma amostra humana do município de Uberlândia-MG, local onde também os roedores foram capturados. As amostras identificadas com ARAV analisados no presente estudo foram distribuídas a uma distância de aproximadamente 400 quilômetros. Apesar da distância geográfica, observamos uma alta identidade filogenética entre duas amostras distantes 384 km entre si. As alterações ambientais e demográficas ocorridas nas últimas décadas na área de estudo afetou a ecologia dos roedores silvestres e facilitou a ocorrência de infecções humanas por hantavírus e a emergência da SPH nesta região, principalmente por ARAV transmitido por N. lasiurus. A observação neste estudo apenas do genótipo ARAV em espécimes de N. lasiurus e humanos, não exclui a possibilidade de cocirculação de outros genótipos virais nesta área, além da possibilidade da existência de outros reservatórios de hantavírus, inclusive não roedores. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Realizou-se estudo analitico transversal relacionando caracteristicas individuais e familiares de 182 moradores pertencentes a 58 famílias de área de reserva ecológica à presença de infecções por arbovirus e hantavirus de interesse sanitário local. Pesquisou-se anticorpos para os antigenos dos virus Rocio, Ilhéus, da encefalite de st. Louis, das encefalites equinas do leste, oeste e venezuelana e Hantaan. Foram utilizados os testes de inibição de hemaglutinação, neutralização com redução de placas, imunofluorescência indireta e ensaio imunoenzimático com captura de anticorpos IgM (MAC-ELISA).· A associação estatistica foi pesquisada utilizando-se o teste de qui-quadrado e o grau de associação foi obtido calculando-se o odds ratio. Também foram pesquisadas a sensibilidade, a especificidade e os valores preditivos positivo e negativo das caracteristicas investigadas para avaliar seu poder de discriminar infectados de não infectados e de predizer infecções por arbovirus e hantavirus. A prevalência observada de anticorpos para arbovirus nos individuos foi de 26,9% e nas familias foi de 62,1%. Observou-se uma prevalência de 1,6% de anticorpos para hantavirus nos individuos e 5,2% nas familias. Não foram encontrados anticorpos para o virus da encefalite equina do oeste e nem anticorpos da classe IgM para os antigenos testados. Entre as caracteristicas estudadas, a idade, a ocupação, a naturalidade e o hábito de entrar na mata mostraram-se fatores de risco para infecções por arbovirus. Foram considerados fatores preditivos de infecção por arbovirus a presença de galinheiro anexo à casa, o hábito de criar galinhas e a presença de ratos no domicilio. Não foram observados fatores de risco ou de predição para infecção por hantavirus entre as caracteristicas estudadas. Os resultados obtidos sugerem que as caracteristicas, que mostraram ser fator de risco ou predição, poderiam ser usadas no diagnostico presuntivo preliminar de infecções por arbovirus e hantavirus, permitindo priorizar medidas de intervenção. O uso de um questionário ofereceria aos serviços de saúde ferramenta de simples aplicação e baixo custo, especialmente em condições de campo em áreas que, como a estudada, dispõe de escassos recursos humanos e laboratoriais. / In order to identify risk factors and predictive factors to arbovirus and hantavirus infections among individual and family characteristics, a cross-sectional study was carried out among 182 persons belonging to 58 families living at ecological reserve. The characteristics were associated with the presence of antibodies to the following virus of local interest: Hantaan, Rocio, Ilheus, Eastern, Western and Venezuelan equine encephalitis virus and st. Louis encephalitis virus using inhibition hemagglutination test, plaque reduction neutralization test, indirect immunofluorescence test and immunoglobulin M antibody capture enzyme immunoassay (MAC-ELISA). The associations were calculated using chi-square statistics and the odds ratio. Sensitivity, especificity, positive and negative predictive values of the individual and familiar characteristics were also analyzed to evaluate their capacity to discriminate between infected and non-infected people and to predict arbovirus and hantavirus infections. The prevalence of antibodies to arbovirus was 26.9% and 62.1% of the families had at least one member infected by these agents. Hantavirus antibodies were found in 1.6% of the sera analysed and 5.2% of the families had members infected by these agents. Antibodies to western equine encephalitis virus were not found. IgM antibodies were not observed sugesting no recent infection for those agents in that population. Age, ocupation, nativity and the habit to enter the forest were shown to be risk factors to arbovirus infections. The presence of annexes to the house, to breed chickens and the presence of rodents inside the house were considered predictive factors to arbovirus infections. Risk or predictive factors to hantavirus infections were not observed. The results suggest the use of some of the individual or family characteristics as a tool on the surveillance of arbovirus infections, to discriminate people with major probability of infections, specially in fie1d conditions, where human and laboratorial resources are scarce.

O gênero Hantavírus está incluído na família Bunyaviridae que são vírus emergentes associados a roedores que podem infectar o homem causando graves doenças. Nas Américas, os Hantavírus causam uma síndrome pulmonar e cardiovascular (SPCVH) com alta letalidade. Cerca de 1600 casos de SPCVH já foram notificados no Brasil causando mais de 600 óbitos. Sete espécies de Hantavírus são conhecidas no Brasil incluindo o vírus Araraquara que circula nas regiões de cerrado do país associado ao roedor Necromys lasiurus. Para o desenvolvimento de uma RT-PCR em tempo real para detecção e quantificação de Hantavírus, mostramos as etapas para o desenvolvimento de uma one-step RT-PCR em tempo real SYBR Green I para Hantavírus Araraquara que se mostrou específica para o gênero e capaz de detectar até 10 cópias por mL de RNA viral na amostra. Além disso, realizamos um estudo filogenético utilizando algoritmos bayesianos, com 190 sequências completas do gene da nucleoproteína, oriundas de 30 países durante um período de 25 anos (1985-2010) que encontravam-se disponíveis no GenBank (NCBI). Baseando-se em uma taxa média de 6.8 x 10-4 (2.5 x 10-4 - 1 x 10-3) substituições nucleotídicas por sítio/ano, foi possível inferir que os Hantavírus teriam aproximadamente 1917 anos. O processo de dispersão dos Hantavírus pelo mundo teria ocorrido há aproximadamente 500 anos, e a introdução destes vírus nas Américas teria ocorrido há 549 anos (95% HPD 1555-341 anos), via América Central ou México, originando os Hantavírus adaptados aos roedores da subfamília Neotominae, e pelo Brasil surgindo há 406 anos (95% HPD 1150-250 anos) os Hantavírus associados a roedores da subfamília Sigmodontinae, e posteriormente dispersaram para todo o continente sul-americano. O trabalho contribui de forma relevante para o diagnóstico das infecções por Hantavírus com a one-step RT-PCR em tempo real SYBR Green I e também, contribui para o entendimento da filogenia e história destes vírus, oferecendo subsídios ao entendimento sobre como teria ocorrido o espalhamento dos Hantavírus pelo mundo. / The genus Hantavirus is included in the family Bunyaviridae are viruses emerging carried by rodents, which can infect humans causing serious illness. In the Americas, the Hantavirus causing a pulmonary syndrome (HPS) with high lethality. About 1,600 cases of HPS have been reported in Brazil, cause over 1600 deaths. Seven species of Hantavirus are known in Brazil, including Araraquara virus circulating in Cerrado regions (or Savannah regions) of the related in rodents Necromys lasiurus. The development of a real-time RT-PCR for detection and quantitation of Araraquara virus, here we show the steps for developing a one-step SYBR Green real-time RT-PCR for virus Araraquara which proved to be specific for the genus and capable of detecting up to 10 copies of viral RNA per ml in the sample. Furthemore, we performed a phylogenetic analysis using Bayesian algorithms, with 190 complete sequences of the nucleoprotein gene, originating from 30 countries over a 25 year period (1985-2010) that were available in GenBank (NCBI). Based on an average rate of 6.8 x 10-4 (2.5 x 10-4 - 1 x 10-3) nucleotide substitutions per site/year, it was possible to infer that the Hantavirus would be about 1917 years old. The Hantavirus spreading in the world have occurred for nearly 500 years, and the introduction of these viruses have occurred in the Americas 549 years ago (95 years% HPD 1555-341) bye Central America or Mexico, causing the Hantavirus adapted to rodents subfamily Neotominae, and Brazil emerged 406 years ago (95% HPD 1150-250 years) the Hantavirus associated with rodents subfamily Sigmodontinae, and subsequently disseminated to South America. The work contributes significantly to the diagnosis of Hantavirus infections with one-step SYBR Green real-time RT-PCR and also contributes to an understanding of the phylogeny and evolutionary history of these viruses, offering subsidies have occurred understanding of how the Hantavirus spread of the worldwide.

The genus Hantavirus, family Bunyaviridae, includes rodent-borne viruses that are transmitted to humans by inhalation of rodent secretions and excreta, or through direct contact with an infected rodent. They are associated with hemorrhagic fever and renal syndrome (HFRS) and with Hantavirus cardiopulmonary syndrome (HCPS). In Brazil, more than 1,500 HCPS cases have been recorded, since 1993. In this study, it was investigated the presence of hantavirus antibodies in the population of Alagoas. For this, it was carried out an active surveillance for acute cases of hantavirus infection in hospitals of Alagoas State and also it was analyzed sera samples sent by LACEN-AL, from patients suspected of having other diseases, such as dengue and leptospirosis. In addition, it was investigated the presence of memory antibodies IgG to hantavirus in rural workers from Coruripe-AL, by performing a pilot study of serological survey in Usina Coruripe. Sera samples were tested by an enzyme immunoassay (ELISA) in house for detection of hantavirus antibodies, using a recombinant N protein of Araraquara hantavirus as antigen. Of the 64 samples analyzed by serology from patients who were classified as suspected of HCPS or HFRS, none was positive for IgM anti-hantavirus, however, one (1,56%) was reagent for IgG anti-hantavirus. In the survey for antibodies in 124 patients with leptospirosis confirmed by LACEN-AL it was found three (2,42%) samples that were reagent for IgG to hantavirus and none of them was reagent for IgM. In the 170 patients with clinical suspicion of dengue but non-reagent for NS1 the survey for both IgM and IgG to hantavirus was negative. The pilot study of serological survey in Coruripe showed immunity against hantavirus in 10 (4%) of 250 studied workers, among which five attested that had never lived or travelled out of state of Alagoas. Taken together, our findings suggest the circulation of hantavirus in the state and its silent occurrence in the region, causing inapparent infections, or even symptomatic, but that remain undiagnosed. This study is pioneer in the surveillance for hantavirus in the state of Alagoas. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Hantavirus são vírus zoonóticos principalmente de roedores silvestres, pertencentes à família Bunyaviridae, os quais são transmitidos para seres humanos pela inalação de secreções ou excretas de roedores infectados ou pelo contato direto com os mesmos. Estes vírus podem causar graves doenças como a Febre Hemorrágica com Síndrome Renal (FHSR) e a Síndrome Pulmonar e Cardiovascular (SPCVH). No Brasil, já foram notificados mais de 1500 casos, desde 1993. Neste estudo, investigou-se a presença de anticorpos anti-hantavírus na população alagoana. Para isso, com finalidade diagnóstica, realizou-se uma busca ativa de casos agudos em hospitais de Alagoas e analisou-se amostras séricas encaminhadas pelo LACEN-AL, provenientes de pacientes suspeitos de outras enfermidades, como dengue e leptospirose. Também, foi investigada a presença de anticorpos de memória da classe IgG para hantavírus, em trabalhadores rurais de Coruripe/AL, em um estudo piloto para inquérito sorológico na Usina Coruripe. Para detecção dos anticorpos anti-hantavírus, amostras de soros foram submetidas a um teste imunoenzimático (ELISA) caseiro, utilizando-se como antígeno uma proteína N recombinante do hantavirus Araraquara. Foram estudadas 608 amostras séricas divididas nos seguintes grupos: 1- Pacientes internados, que se encaixavam nos critérios de suspeita clínica de hantavirose; 2- Pacientes com leptospirose; 3- Pacientes com suspeita clínica de dengue; 4- Estudo piloto para inquérito sorológico. Das 64 amostras séricas analisadas por sorologia procedentes de pacientes que se enquadravam como caso suspeito de SPCVH ou FHSR, nenhuma foi reagente para IgM anti-hantavirus, porém, uma (1,56%) foi reagente para IgG anti-hantavirus. Na pesquisa dos anticorpos em 124 pacientes com leptospirose confirmada pelo LACEN-AL foram encontrados três (2,42%) amostras reagentes para IgG anti-hantavirus e nenhuma reagente para IgM. Nos 170 pacientes com suspeita de dengue cuja pesquisa NS1 foi não reagente, não foram detectados nem IgG nem IgM anti-hantavírus. O estudo piloto do inquérito sorológico em Coruripe mostrou imunidade para hantavírus em 10 (4%) dos 250 trabalhadores estudados, dentre os quais, cinco alegaram nunca terem morado ou viajado para fora do Estado de Alagoas. Tomados em conjunto, nossos achados sugerem a circulação de hantavírus no estado e sua ocorrência silenciosa na região, causando infecções inaparentes, ou ainda, sintomáticas, mas que permanecem sem diagnóstico. Esse trabalho é pioneiro na busca por hantavirose no estado de Alagoas.

Submitted by Simone Souza (simonecgsouza@hotmail.com) on 2018-05-21T17:27:05Z No. of bitstreams: 1 DISS_2011_ Ana Cláudia Pereira Terças.pdf: 1368247 bytes, checksum: 0b6658d4da60cb0be8209e1c24a7dd50 (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2018-05-24T16:51:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2011_ Ana Cláudia Pereira Terças.pdf: 1368247 bytes, checksum: 0b6658d4da60cb0be8209e1c24a7dd50 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-24T16:51:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2011_ Ana Cláudia Pereira Terças.pdf: 1368247 bytes, checksum: 0b6658d4da60cb0be8209e1c24a7dd50 (MD5) Previous issue date: 2011-12-06 / O presente estudo tem por objetivo descrever as características de um surto ocorrido no Parque Indígena do Xingú e determinar fatores relacionados com a morbidade e mortalidade pela Síndrome Cardiopulmonar por Hantavírus (SCPH), ocorrida no Estado de Mato Grosso (Brasil), desde 1999 a 2010. A partir da análise de características clínicas e epidemiológicas, buscou-se predizer, por meio de modelagem estatística, a freqüência de casos de hantavirose nos anos de 2011 e 2012. Trata-se de um estudo constituído de fonte de dados secundários: de 100% das fichas de notificação de casos com sorologia positivas e de relatórios de investigação do surto, imagens e fichas de notificação/investigação arquivados na área técnica da Vigilância da Hantavirose da Secretaria do Estado de Saúde de Mato Grosso. As análises estatísticas foram realizadas no SPSS versão 15.0, sendo que as análises estatísticas bivariada e multivariada de mortalidade foram realizadas pelo teste do qui-quadrado. Os dados espaciais foram construídos no Terra View 3.14 e para modelagem de predição de casos da SCPH utilizou o modelo de Holt-Winters. O trabalho está apresentado em três artigos. No primeiro artigo analisou-se um surto de SCPH ocorrido no Parque Indígena do Xingú. No segundo artigo, foram utilizadas as técnicas estatísticas bivariadas e multivariadas para identificar os fatores que tiveram significância estatística para o óbito por SCPH em Mato Grosso. Já no terceiro artigo, utilizou-se a técnica inferencial de séries temporais para prever o número de caso de SCPH nas regiões médio norte, extremo norte e para o Estado de Mato Grosso nos anos de 2011 e 2012. Concluiu-se que a ocorrência de um surto em área indígena em Mato Grosso, suscita a necessidade de discussões sobre ações de vigilância em saúde, bem como estudos para a população indígena brasileira que reside em áreas de circulação de hantavírus. A utilização de análises bivariada e 3 multivariada para a identificação de significância estatística para óbito por SCPH em Mato Grosso mostrou-se um recurso importante na compreensão da ocorrência da morbi-mortalidade pela SCPH. O resultado da modelagem estatística de séries temporais mostrou que o modelo de Holt-Winters é o mais adequado para realizar as predições a curto prazo e que tais predições poderão auxiliar no planejamento das ações da vigilância da SCPH em Mato Grosso. / The present study it has for objective to analyze the clinical characteristics and epidemiologists of the SCPH in the State of Mato Grosso in the period of 1999 the 2010, using statistical analyses as tools to identify such characteristics and to make possible to the professionals and managers of health of the State tools to instrumentalizar them in the monitoramento, prevention and control of the illness. The statistical analyses had been carried through in the SPSS version 15.0, being that for the statistical analyses bivaried and multivaried of mortality they had been carried through by the test of the qui-square, already the space data had been constructed in the Land View 3,14 and the modeling for prediction of SCPH cases used the model of Holt-Winters. The work is presented in three articles. In the first article one was analyzed occasions of SCPH occurred in the Aboriginal Park of the Xingú. In as the article, the statistical techniques bivaried and multivaried had been used to identify the 0 variable that had had significance statistics for the death for SCPH in Mato Grosso. No longer third article, used it inferencial technique of secular series to foresee the number of case of SCPH in the regions average north, extremity north and for the State of Mato Grosso in the years of 2011 and 2012. It was concluded that the occurrence of one I occasion in aboriginal area in Mato Grosso, excites the necessity of quarrels on action of monitoring in health, as well as studies for the Brazilian aboriginal population that inhabits in areas of circulation of hantavírus. The use of analyses bivaried and multivaried for the significance identification statistics for death for SCPH in Mato Grosso, revealed an important resource in the understanding of the natural history of the SCPH, mainly in what it refers to mortality. The results of the modeling statistics of secular series show that the model of Holt-Winters is adjusted to carry through these predictions and that such

Realizou-se estudo analitico transversal relacionando caracteristicas individuais e familiares de 182 moradores pertencentes a 58 famílias de área de reserva ecológica à presença de infecções por arbovirus e hantavirus de interesse sanitário local. Pesquisou-se anticorpos para os antigenos dos virus Rocio, Ilhéus, da encefalite de st. Louis, das encefalites equinas do leste, oeste e venezuelana e Hantaan. Foram utilizados os testes de inibição de hemaglutinação, neutralização com redução de placas, imunofluorescência indireta e ensaio imunoenzimático com captura de anticorpos IgM (MAC-ELISA).· A associação estatistica foi pesquisada utilizando-se o teste de qui-quadrado e o grau de associação foi obtido calculando-se o odds ratio. Também foram pesquisadas a sensibilidade, a especificidade e os valores preditivos positivo e negativo das caracteristicas investigadas para avaliar seu poder de discriminar infectados de não infectados e de predizer infecções por arbovirus e hantavirus. A prevalência observada de anticorpos para arbovirus nos individuos foi de 26,9% e nas familias foi de 62,1%. Observou-se uma prevalência de 1,6% de anticorpos para hantavirus nos individuos e 5,2% nas familias. Não foram encontrados anticorpos para o virus da encefalite equina do oeste e nem anticorpos da classe IgM para os antigenos testados. Entre as caracteristicas estudadas, a idade, a ocupação, a naturalidade e o hábito de entrar na mata mostraram-se fatores de risco para infecções por arbovirus. Foram considerados fatores preditivos de infecção por arbovirus a presença de galinheiro anexo à casa, o hábito de criar galinhas e a presença de ratos no domicilio. Não foram observados fatores de risco ou de predição para infecção por hantavirus entre as caracteristicas estudadas. Os resultados obtidos sugerem que as caracteristicas, que mostraram ser fator de risco ou predição, poderiam ser usadas no diagnostico presuntivo preliminar de infecções por arbovirus e hantavirus, permitindo priorizar medidas de intervenção. O uso de um questionário ofereceria aos serviços de saúde ferramenta de simples aplicação e baixo custo, especialmente em condições de campo em áreas que, como a estudada, dispõe de escassos recursos humanos e laboratoriais. / In order to identify risk factors and predictive factors to arbovirus and hantavirus infections among individual and family characteristics, a cross-sectional study was carried out among 182 persons belonging to 58 families living at ecological reserve. The characteristics were associated with the presence of antibodies to the following virus of local interest: Hantaan, Rocio, Ilheus, Eastern, Western and Venezuelan equine encephalitis virus and st. Louis encephalitis virus using inhibition hemagglutination test, plaque reduction neutralization test, indirect immunofluorescence test and immunoglobulin M antibody capture enzyme immunoassay (MAC-ELISA). The associations were calculated using chi-square statistics and the odds ratio. Sensitivity, especificity, positive and negative predictive values of the individual and familiar characteristics were also analyzed to evaluate their capacity to discriminate between infected and non-infected people and to predict arbovirus and hantavirus infections. The prevalence of antibodies to arbovirus was 26.9% and 62.1% of the families had at least one member infected by these agents. Hantavirus antibodies were found in 1.6% of the sera analysed and 5.2% of the families had members infected by these agents. Antibodies to western equine encephalitis virus were not found. IgM antibodies were not observed sugesting no recent infection for those agents in that population. Age, ocupation, nativity and the habit to enter the forest were shown to be risk factors to arbovirus infections. The presence of annexes to the house, to breed chickens and the presence of rodents inside the house were considered predictive factors to arbovirus infections. Risk or predictive factors to hantavirus infections were not observed. The results suggest the use of some of the individual or family characteristics as a tool on the surveillance of arbovirus infections, to discriminate people with major probability of infections, specially in fie1d conditions, where human and laboratorial resources are scarce.

O gênero Hantavírus está incluído na família Bunyaviridae que são vírus emergentes associados a roedores que podem infectar o homem causando graves doenças. Nas Américas, os Hantavírus causam uma síndrome pulmonar e cardiovascular (SPCVH) com alta letalidade. Cerca de 1600 casos de SPCVH já foram notificados no Brasil causando mais de 600 óbitos. Sete espécies de Hantavírus são conhecidas no Brasil incluindo o vírus Araraquara que circula nas regiões de cerrado do país associado ao roedor Necromys lasiurus. Para o desenvolvimento de uma RT-PCR em tempo real para detecção e quantificação de Hantavírus, mostramos as etapas para o desenvolvimento de uma one-step RT-PCR em tempo real SYBR Green I para Hantavírus Araraquara que se mostrou específica para o gênero e capaz de detectar até 10 cópias por mL de RNA viral na amostra. Além disso, realizamos um estudo filogenético utilizando algoritmos bayesianos, com 190 sequências completas do gene da nucleoproteína, oriundas de 30 países durante um período de 25 anos (1985-2010) que encontravam-se disponíveis no GenBank (NCBI). Baseando-se em uma taxa média de 6.8 x 10-4 (2.5 x 10-4 - 1 x 10-3) substituições nucleotídicas por sítio/ano, foi possível inferir que os Hantavírus teriam aproximadamente 1917 anos. O processo de dispersão dos Hantavírus pelo mundo teria ocorrido há aproximadamente 500 anos, e a introdução destes vírus nas Américas teria ocorrido há 549 anos (95% HPD 1555-341 anos), via América Central ou México, originando os Hantavírus adaptados aos roedores da subfamília Neotominae, e pelo Brasil surgindo há 406 anos (95% HPD 1150-250 anos) os Hantavírus associados a roedores da subfamília Sigmodontinae, e posteriormente dispersaram para todo o continente sul-americano. O trabalho contribui de forma relevante para o diagnóstico das infecções por Hantavírus com a one-step RT-PCR em tempo real SYBR Green I e também, contribui para o entendimento da filogenia e história destes vírus, oferecendo subsídios ao entendimento sobre como teria ocorrido o espalhamento dos Hantavírus pelo mundo. / The genus Hantavirus is included in the family Bunyaviridae are viruses emerging carried by rodents, which can infect humans causing serious illness. In the Americas, the Hantavirus causing a pulmonary syndrome (HPS) with high lethality. About 1,600 cases of HPS have been reported in Brazil, cause over 1600 deaths. Seven species of Hantavirus are known in Brazil, including Araraquara virus circulating in Cerrado regions (or Savannah regions) of the related in rodents Necromys lasiurus. The development of a real-time RT-PCR for detection and quantitation of Araraquara virus, here we show the steps for developing a one-step SYBR Green real-time RT-PCR for virus Araraquara which proved to be specific for the genus and capable of detecting up to 10 copies of viral RNA per ml in the sample. Furthemore, we performed a phylogenetic analysis using Bayesian algorithms, with 190 complete sequences of the nucleoprotein gene, originating from 30 countries over a 25 year period (1985-2010) that were available in GenBank (NCBI). Based on an average rate of 6.8 x 10-4 (2.5 x 10-4 - 1 x 10-3) nucleotide substitutions per site/year, it was possible to infer that the Hantavirus would be about 1917 years old. The Hantavirus spreading in the world have occurred for nearly 500 years, and the introduction of these viruses have occurred in the Americas 549 years ago (95 years% HPD 1555-341) bye Central America or Mexico, causing the Hantavirus adapted to rodents subfamily Neotominae, and Brazil emerged 406 years ago (95% HPD 1150-250 years) the Hantavirus associated with rodents subfamily Sigmodontinae, and subsequently disseminated to South America. The work contributes significantly to the diagnosis of Hantavirus infections with one-step SYBR Green real-time RT-PCR and also contributes to an understanding of the phylogeny and evolutionary history of these viruses, offering subsidies have occurred understanding of how the Hantavirus spread of the worldwide.