Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-09-29Bitstream added on 2014-06-13T19:33:18Z : No. of bitstreams: 1 bilhassi_tb_me_jabo.pdf: 379095 bytes, checksum: 3bd49b1b7fc38271d3eda65b601048f6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Reação em Cadeia da Polimerase Quantitativa em Tempo Real (qPCR) foi utilizada para avaliar o nível de infecção por Babesia bovis e Babesia bigemina em bovinos de corte. Foram utilizados 149 animais, sendo 74 bezerros e 75 vacas de três grupos genéticos diferentes (puros Bos indicus, ½ Bos indicus + ½ Bos taurus e puros Bos taurus). Os resultados obtidos foram analisados com o objetivo de verificar se ocorrem variações entre os grupos genéticos e faixas etárias estudadas quanto ao nível de infecção por babesias. De cada bovino foram colhidas amostras de sangue da veia jugular e vasos periféricos, para extração de DNA, determinação do volume globular (VG) e confecção de esfregaços sanguíneos. As amostras de DNA extraídas de sangue venoso, colhidas com anticoagulante EDTA foram submetidas à amplificação pela técnica de qPCR, utilizando sequências iniciadoras específicas para B. bovis e B.bigemina. Pelo exame microscópico de esfregaços sanguíneos verificou-se que, nenhum animal adulto apresentou parasitemia patente por Babesia spp. Nos bezerros foram diagnosticados 10,8% de infecção por B. bigemina (8/74), sendo 26,1%, 3,8% e 4% para os grupos genéticos Angus, cruzados e Nelore, respectivamente. A taxa de infecção por B. bovis diagnosticados pela técnica de qPCR nos bovinos estudados foi de 98,0% (146/149), sendo 100,0%, 98,0% e 96,0% para os grupos genéticos Angus, cruzados e Nelore, respectivamente. As análises estatísticas do nível de infecção medido pelo número de cópias de DNA alvo nas amostras mostraram significância (P<0,05) dos três fatores avaliados: grupo genético, categoria e a interação entre eles. Foi possível observar ainda que bovinos Bos taurus apresentaram maior suscetibilidade às infecções por Babesia bovis e que a quantidade de DNA alvo desta... / The Polymerase Chain Reaction Quantitative Real Time (qPCR) was used to assess the level of infection with Babesia bovis and Babesia bigemina in beef cattle. We used 149 animals, 74 calves and 75 cows from three different genetic groups (Bos indicus pure, ½ Bos indicus + ½ Bos taurus and Bos taurus pure). The results were analyzed with the objective of determining if there are variations between genotypes and age groups in the level of infection with babesias. Each calf was sampled blood from the jugular vein and peripheral vessels for DNA extraction, packed cell volume (VG) and preparation of blood smears. DNA samples extracted from venous blood collected with EDTA anticoagulant were subjected to qPCR amplification technique using sequence specific primers for B. bovis and B.bigemina. By microscopic examination of blood smears showed that no adult animals presented patent parasitemia by Babesia spp. Calves were diagnosed in 10.8% of infection by B. bigemina (8/74), and 26.1%, 3.8% and 4% for the Angus genetic groups, crossbred and Nellore, respectively. The rate of infection by B. bovis diagnosed by qPCR technique in cattle studied was 98.0% (146/149), and 100.0%, 98.0% and 96.0% for Angus genetic groups, crossbred and Nellore, respectively. Statistical analysis of the level of infection measured by the number of copies of target DNA in the samples showed significant (P <0.05) evaluated the three factors: genetic group, category and the interaction between them. It was also possible to observe that Bos taurus cattle showed greater susceptibility to infections by Babesia bovis and the amount of target DNA of this species of protozoa in calves, was significantly (P <0.05) higher than in cows. To B. bigemina, only DNA samples from cattle ½ Bos indicus + ½ Bos taurus and Bos taurus pure technique were assessed by qPCR, due to low concentration... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-19Bitstream added on 2014-06-13T19:50:55Z : No. of bitstreams: 1 hernandez_gv_me_jabo.pdf: 1315271 bytes, checksum: 3786d97151b1ddc80c332c8348bf4567 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A babesiose e a erliquiose canina são doenças comuns em cães, transmitidas pelo vetor Rhipicephalus sanguineus. Os sinais e sintomas dessas doenças não são específicos. A detecção dos parasitos em esfregaços sanguíneos nem sempre é possível e a detecção sorológica pode indicar apenas que o animal teve contato com o agente, mas não necessariamente a doença ativa. Na Colômbia existem poucas pesquisas sobre a epidemiologia e diagnóstico de erliquiose e babesiose em cães, as poucas existentes se basearam na detecção dos hemoparasitas em esfregaços sanguíneos, ou de anticorpos específicos. Sendo assim propos-se este estudo com o objetivo de pesquisar a erliquiose e a babesiose em esfregaços sangüíneos associados a provas sorológicas e moleculares em cães da região centro-oriental de Colômbia. Amostras de sangue e soro de 91 cães, provenientes das cidades de Bogotá (n=21), Villavicencio (n=31) e Bucaramanga (n=39) foram submetidas a pesquisa parasitológica, detecção de anticorpos anti-B. canis e anti-E. canis e detecção molecular de Babesia canis e Ehrlichia canis. Os resultados mostraram que dentre as 91 amostras testadas, 4% e 5% delas apresentaram E. canis e B. canis, respectivamente nas pesquisas parasitológicas dos esfregaços sanguíneos. Nas mesmas amostras, 82% e 51% delas apresentaram anticorpos anti-E. canis e anti-B. canis, respectivamente e, em 40% e 5%, foram detectados os DNA de E. canis e de B. canis, respectivamente. Os amplicons foram confirmados por seqüenciamento e o DNA de E. canis e de B. canis obtidos mostraram similaridade genética de 98% a 99% com amostras de E. canis e de B. canis isoladas em outros países, as árvores filogenéticas dos agentes pesquisados foram / Canine babesiosis and ehrlichiosis are common diseases in dogs, and are transmitted by the vector Rhipicephalus sanguineus. The clinical signs of these diseases are not specific. Detection of parasites in blood smears is not always possible and the serological detection could only indicate that the animal has had contact with the agent and not necessarily that the disease is being developed. In Colombia, there are few reports on canine babesiosis and ehrlichiosis´s epidemiology and diagnosis, being them based only on the detection of haemoparasites in blood smears and detection of antibodies. The purpose of the present study was to investigate the presence of Ehrlichia sp. and Babesia sp. in blood smears, associated with serological and molecular detection of these parasites in dog blood samples from the middle east region of Colombia. Blood and sera samples from 91 dogs from Bogotá (n=21), Villavicencio (n=31) and Bucaramanga cities (n=39) were submitted to parasitological, serological and molecular detection of B. canis and E. canis. Among the 91 samples tested, 4% and 5% presented E. canis morulae and B. canis piroplasms in blood smears, respectively. Moreover, 82% and 51% of samples presented antibodies anti-E. canis and anti-B. canis, respectively. E. canis and B. canis DNA were detected in 40% and 5% of samples, respectively. The amplicons were confirmed by sequencing and the found DNA from E. canis and B. canis showed a genetic identity of 98% to 99% among samples from E. canis and B. canis isolated from other countries. Finally, phyllogenetic trees were constructed from both agents

Orientadora: Mirela Tinucci Costa / Banca: Gervásio Henrique Bechara / Banca: Paulo Cesar Ciarlini / Resumo: A babesiose e a erliquiose canina são doenças comuns em cães, transmitidas pelo vetor Rhipicephalus sanguineus. Os sinais e sintomas dessas doenças não são específicos. A detecção dos parasitos em esfregaços sanguíneos nem sempre é possível e a detecção sorológica pode indicar apenas que o animal teve contato com o agente, mas não necessariamente a doença ativa. Na Colômbia existem poucas pesquisas sobre a epidemiologia e diagnóstico de erliquiose e babesiose em cães, as poucas existentes se basearam na detecção dos hemoparasitas em esfregaços sanguíneos, ou de anticorpos específicos. Sendo assim propos-se este estudo com o objetivo de pesquisar a erliquiose e a babesiose em esfregaços sangüíneos associados a provas sorológicas e moleculares em cães da região centro-oriental de Colômbia. Amostras de sangue e soro de 91 cães, provenientes das cidades de Bogotá (n=21), Villavicencio (n=31) e Bucaramanga (n=39) foram submetidas a pesquisa parasitológica, detecção de anticorpos anti-B. canis e anti-E. canis e detecção molecular de Babesia canis e Ehrlichia canis. Os resultados mostraram que dentre as 91 amostras testadas, 4% e 5% delas apresentaram E. canis e B. canis, respectivamente nas pesquisas parasitológicas dos esfregaços sanguíneos. Nas mesmas amostras, 82% e 51% delas apresentaram anticorpos anti-E. canis e anti-B. canis, respectivamente e, em 40% e 5%, foram detectados os DNA de E. canis e de B. canis, respectivamente. Os amplicons foram confirmados por seqüenciamento e o DNA de E. canis e de B. canis obtidos mostraram similaridade genética de 98% a 99% com amostras de E. canis e de B. canis isoladas em outros países, as árvores filogenéticas dos agentes pesquisados foram / Abstract: Canine babesiosis and ehrlichiosis are common diseases in dogs, and are transmitted by the vector Rhipicephalus sanguineus. The clinical signs of these diseases are not specific. Detection of parasites in blood smears is not always possible and the serological detection could only indicate that the animal has had contact with the agent and not necessarily that the disease is being developed. In Colombia, there are few reports on canine babesiosis and ehrlichiosis's epidemiology and diagnosis, being them based only on the detection of haemoparasites in blood smears and detection of antibodies. The purpose of the present study was to investigate the presence of Ehrlichia sp. and Babesia sp. in blood smears, associated with serological and molecular detection of these parasites in dog blood samples from the middle east region of Colombia. Blood and sera samples from 91 dogs from Bogotá (n=21), Villavicencio (n=31) and Bucaramanga cities (n=39) were submitted to parasitological, serological and molecular detection of B. canis and E. canis. Among the 91 samples tested, 4% and 5% presented E. canis morulae and B. canis piroplasms in blood smears, respectively. Moreover, 82% and 51% of samples presented antibodies anti-E. canis and anti-B. canis, respectively. E. canis and B. canis DNA were detected in 40% and 5% of samples, respectively. The amplicons were confirmed by sequencing and the found DNA from E. canis and B. canis showed a genetic identity of 98% to 99% among samples from E. canis and B. canis isolated from other countries. Finally, phyllogenetic trees were constructed from both agents / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_lourdes_caruccio_hirschmann.pdf: 1613567 bytes, checksum: d6416e53664a9171818d2680a476fe93 (MD5) Previous issue date: 2013-09-12 / The canine visceral leishmaniasis (CVL) is a chronic zoonotic systemic disease, which affects numerous mammals, caused by protozoa Leishimania (Leishimania) chagasi which is transmitted by the hematophagy of the female phlebotominae Lutzomyia longipalis. The CVL shows vast geographical distribution and great lethality potential. Rio Grande do Sul was considered a non-endemic state. However, in 2008, autochthonous cases of the disease in Western cities of the state were reported. The aim of this study was to survey the presence of seropositive dogs in kennels in twelve municipalities of Rio Grande do Sul considering the clinical, epidemiological and laboratory aspects therefore being able to early detect a possible spreading of the disease encouraging prevention and controlling campaigns in order to avoid future outbreaks. This study was conducted in an area without diagnosis for the disease, collecting sampling material of 165 dogs from the cities of Alegrete, São Franscico de Assis, Santiago, Dom Pedrito, Bagé, Caçapava do Sul, Cachoeira do Sul, Piratini, Arroio grande, Capão do Leão, Rio Grande and Camaquã. Animals were submitted to general clinical evaluation and tegumentary and lymphadenopathy injuries. In the laboratory evaluation, CBC, parasitological and serological examinations were performed. The information of each animal was described in detail in the form of clinical examination and then submitted to EpiInfo version 6.04. Dermatological signs, normocytic normochromic anemia, platelet changes and neutrophilic leukocytosis were presented by the suspected and confirmed animals. Serological analysis was performed using the techniques of indirect immunofluorescence (IIF), enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and Dual Plate Platform (DPP). It was found the rate of 33.94% (56/165) reagents for Leishmania chagasi in the IIF, the DPP showed that 6.67% (11/165) were positive, while 3.03 % (5/165) were positive in both tests (IIF and DPP) and ELISA showed a 6.06% (11/165). In these confirmed by ELISA, five (5/10) were reagents in IIF and only three (3/10) were positive in DPP, resulting in three seropositive canines according to the updated protocol recommended by the Ministry of Health. A comparison of serological techniques demonstrated that DPP and IIF alone showed an accuracy of 65.45% while in the analysis of the same tests, considering ELISA as a gold standard, the accuracy of the DPP was 90.91% and IFF showed 66.60%. However, when considering only the positive results in DPP and IIF, the accuracy increased to 94.55%, with Kappa=0.375, that is, with considerable agreement. Concluding the investigation of non-endemic districts, five seropositive dogs were revealed: in Cachoeira do Sul (2), in São Francisco de Assis (1), in Dom Pedrito (1) and in Rio Grande (1). / A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma zoonose de caráter crônico, sistêmica, que acomete diversos mamíferos, causada pelo protozoário Leishmania (Leishmania) chagasi, que é transmitido pela hematofagia da fêmea do flebotomíneo Lutzomyia longipalpis. A LVC apresenta ampla distribuição geográfica, e com alto potencial de letalidade. O Rio Grande do Sul era considerado um estado do Brasil sem casuística da doença, ou seja, não endêmico. Porém, em 2008 foram registrados casos autóctones de LVC em municípios de região oeste do estado. O objetivo deste estudo foi realizar um levantamento da presença de cães soropositivos em canis de doze municípios do Rio Grande do Sul, considerando os aspectos clínicos, epidemiológicos e laboratoriais, comparando métodos e protocolos de diagnóstico. Com isso, pode-se detectar precocemente uma possível disseminação da doença, incentivando campanhas de controle e prevenção, evitando assim futuros surtos. Este estudo foi realizado em uma área do RS sem diagnóstico para LVC, sendo avaliados o total de 165 cães provenientes dos municípios de Alegrete, São Francisco de Assis, Santiago, Dom Pedrito, Bagé, Caçapava do Sul, Cachoeira do Sul, Piratini, Arroio Grande, Capão do Leão, Rio Grande e Camaquã. Os animais foram submetidos à avaliação clínica geral, sendo observadas principalmente lesões tegumentares e linfoadenopatias. Na avaliação laboratorial, realizou-se hemograma completo, exame parasitológico e sorológico. Os achados clínicos de cada animal e os resultados das técnicas laboratoriais foram submetidos a análise estatística no programa EpiInfo versão 6.04. Sinais dermatológicos, anemia normocítica normocrômica, alterações plaquetárias e leucocitose com neutrofilia foram apresentados pelos animais sororreagentes. A pesquisa sorológica foi realizada através das técnicas de Imunofluorescência Indireta (IFI), ensaio imunoenzimático (ELISA) e Dual Plate Plataform (DPP). Constatou-se taxa de 33,94% (56/165) na IFI, 6,67% (11/165) no DPP, 3,03% (5/165) na IFI e DPP e 6,06% (10/165) no ELISA. Destes confirmados no ELISA, cinco (5/10) foram reagentes na IFI, e apenas três (3/10) foram positivos no DPP, resultando em três cães soropositivos conforme o protocolo atual preconizado pelo Ministério da Saúde. A comparação das técnicas sorológicas demonstrou que DPP e IFI isoladamente apresentaram uma Acurácia de 65,45%. Já na análise dos mesmos testes quando se considerou o teste de ELISA como padrão ouro, a Acurácia do DPP foi de 90,91% e a da IFI 66,06%. Entretanto, quando se considerou somente resultados positivos no DPP e IFI, a Acurácia aumentou para 94,55%, com um valor de Kappa=0,375, ou seja, com concordância considerável. Conclui-se que a pesquisa em áreas sem diagnóstico do RS, revelou presença de cães sororreagentes em quatro municípios do RS: Cachoeira do Sul (2), São Francisco de Assis (1), Dom Pedrito (1) e Rio Grande (1).