Orientador: Joyce Maria Annichino-Bizzacchi, Valder Roberval Arruda / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T11:25:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fabri_DanielaRamos_D.pdf: 28613634 bytes, checksum: 506450d54c214e02520051f098953569 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: As complicacoes associadas a aterosclerose sao as causas mais comum de morte na populacao ocidental. O entendimento da aterosclerose como uma doenca inflamatoria e a associacao da coagulacao com fenomenos inflamatorios e complicacoes da doenca arterial oferecem novas oportunidades de prevencao e tratamento.Estudos populacionais demonstraram que o risco de infarto agudo do miocardio esta reduzido em 80% em homens hemofilicos A (HA) se comparados com controles pareados em idade e sexo. No entanto, lesoes ateroscleroticas iniciais foram identificadas em pequenos grupos de pacientes com coagulopatias por estudo ultrassonografico de arterias carotida e femural de forma semelhante aos controles pareados.O objetivo deste estudo e determinar o papel dos fatores VIII e IX dacoagulacao no desenvolvimento da doenca aterosclerotica em dois diferentesmodelos animais de dilipidemia. Comparamos grupos de animais deficientes deFVIII (HA) ou animais deficientes de FIX (HB) deficientes apoliproteina E (APOE-/-) ou deficientes de receptores de lipoproteina de baixa densidade (LDLR-/-) comanimais hemostaticamente normais deficientes apenas de apoE (APOE-/-) ou deLDLR (LDLR-/-). Todos animais da linhagem C57Bl/6, pareados em sexo e idade.Nossos resultados sugerem que o FVIII tem um papel protetor e tempodependente no desenvolvimento da aterosclerose nos animais deficientes de apoE, independente dos seus elevados niveis de colesterol. No entanto, essaprotecao nao foi evidente nos animais LDLR-/-.A deficiencia severa do FIX (<1%) nao protegeu contra o desenvolvimento da aterosclerose. Surpreendentemente, estes animais apresentaram significantemente mais lesoes nos periodos mais tardios nos dois modelos de doenca aterosclerotica utilizados. Os animais HB/APOE-/- apresentaram altos indices de mortalidade a partir de 20 semanas do periodo de dieta. Os elevados niveis de FIX nao influenciou o desenvolvimento da doenca arterial nos modelos apoE, mas mostrou-se como fator de risco para trombose venosa.Este estudo demonstra que o FVIII e o FIX tem papeis heterogeneos na evolução da aterosclerose, sugerindo participacao em mecanismos independentes ao da coagulacao no desenvolvimento da doenca arterial, e novos estudos devem ser realizados visando novas possibilidades terapeuticas tambem para os pacientes hemofilicos de idade mais avancada com risco de doenca cardiovasculares. / Abstract: Complications of atherosclerosis are the most common causes of death in Western societies. The knowledge that atherosclerosis is an inflammatory disease and coagulation affects the disease's complications offers new opportunities for prevention and treatment. Population studies demonstrated that the risk for myocardial infarction is reduced by 80% among hemophilia A (HA) men compared to age and gender-matched controls. However, early atherosclerotic lesions were readily identified in small cohorts of adults HA and hemophilia B (HB) by ultrasonography of carotid and femoral arteries in a similar fashion to an agecontrol male group. Here we sought to determine the role of FVIII and FIX on the development of atherosclerosis in two different mouse models. We compared a group of FVIII (HA) or FIX deficient mice (HB) lacking the low-density lipoprotein receptor (LDLR- /-) or apolipoprotein E (APOE-/-) with hemostatically normal littermate controls lacking either LDLR (LDLR-/-) or apoE (APOE-/-). All mice were on C57Bl/6 background and all groups were matched for gender and age. Our results suggest that FVIII has a protective and time dependent effect on development of atherosclerosis in apoE deficient mice, independently of higher cholesterol levels. Notably, FVIII deficiency did not influence the vascular disease of LDLR-/- mice. Severe FIX deficiency (<1% of normal) did not protect against the development of atherosclerosis. Unexpectedly, the rates of lesions were higher at late time points in the APOE-/- model. In addition, high levels of FIX was did not influence the vascular disease in APOE-/- whereas venous thrombosis was documented in 3/6 mice. Moreover, in the HB/APOE-/- model, the rates of atherosclerosis were higher at week 22 and beyond this age these mice presented high rates of mortality than controls. These data demonstrate that FVIII and FIX play a rather heterogeneous role in the development of atherosclerosis which suggest that there are coagulation independent mechanisms in the development of vascular diseases. Further studies in hemophilia B subjects and carriers are warranted to define the FIX effect on the onset and progression of occlusive vascular disease which may raises concerns on the onset cardiovascular risks on an aging hemophilia population. / Doutorado / Doutor em Clínica Médica

Background: Hemophilia A is X-linked recessive congenital bleeding disorder. Exogenous infusion of FVIII is the treatment of choice in hemophilia A patients. However, inhibitor development remains the major problem in management of Hemophilia A. It has been showed that IVIG has immunomodulatory effects and it has been being used in the treatment of several autoimmune and inflammatory disorders. Here, we investigated the effect of co-administration of FVIII with IVIG on the development of inhibitor in naive and previously immunized hemophilia A mice. Methods: Initially, hemophiliac mice were immunized by weekly intraperitoneal injection of human recombinant FVIII (rFVIII). The mice then were treated, either by rFVIII/IVIG co-injection or rFVIII alone. In the other experimental group, naive hemophiliac mice were treated with rFVIII/IVIG co-injection for four weeks followed by injection of either rFVIII or rFVIII/IVIG. Plasma's anti-FVIII Ab titer was measured using ELISA. Results: Weekly injection of rFVIII led to the development of anti-FVIII Ab in all previously untreated mice. Treatment of those immunized mice with rFVIII/IVIG co-injection did not reduce the level of pre-existing Ab. On the other hand, naive mice treated with rFVIII/IVIG co-injection showed significantly less Ab titer compared to the mice received rFVIII alone after 4 weeks (mean Ab titre of 1 compared to 39, in rFVIII/IVIG co-injection and rFVIII groups respectively). Although the rFVIII/IVIG-treated mice developed immune response following the injection of rFVIII alone, Ab titer in those that kept receiving rFVIII/IVIG co-injection remained lower compared to other groups during the whole twelve weeks of the experiment. Conclusions: Co-injection of rFVIII with IVIG decreased the anti-FVIII immune response in previously untreated hemophilia A mice. These findings suggest that IVIG co-administration can be effective in management of hemophilia A patients at risk of inhibitor development. / Thesis / Master of Applied Science (MASc)

Pacientes com hemofilia apresentam predisposição a sangramentos, tanto póstraumáticos como espontâneos, que ocorrem, principalmente nas articulações (hemartroses) e quando recorrentes podem contribuir para o estabelecimento de artropatia hemofílica, o que torna a doença potencialmente incapacitante e dolorosa, e afeta consideravelmente a qualidade de vida (QV) dos portadores. Avaliar a QV desses pacientes dá-nos subsídio para propor medidas visando a melhoria da assistência prestada e o seu bem-estar. Nesse sentido, uma importante ferramenta é o diário de infusão. O objetivo do estudo foi avaliar a QV dos portadores de hemofilia acompanhados pelo ambulatório da Fundação HEMOMINAS no Hemonúcleo Manhuaçu, utilizando ferramentas específicas e implementar o uso do Diário de Infusão como estratégia para incrementar a assistência. Trata-se de um estudo quantitativo descritivo. Para a avaliação da QV, optou-se, por utilizar o modelo de classificação de saúde, denominado CIF proposto pela OMS. Os instrumentos utilizados incluem: questionário sociodemográfico; Haem-A-Qol; Haemo-Qol; HAL, PedHAL; HJHS e FISH. Participaram da pesquisa 30 pacientes, do sexo masculino, portadores de Hemofilia, o que representou 90,9% da amostra elegível. Nos pacientes maiores de 18 anos (n=24), a média de pontuação do Haem-A-Qol foi de 53,39. No HAL, a média foi de 67,26. Já no HJHS, a média foi de 37,33. No FISH, a média foi de 25,96. Nos menores de 18 anos, (n=06), o Haemo-Qol foi respondido por pacientes e seus pais. No questionário respondido pelo paciente o escore médio foi de 50,36, já dos pais, foi de 55,16. No PedHAL, o escore médio dos pacientes foi 88,59 e dos pais 83,15. A pontuação média no HJHS foi de 5,67. Com relação ao FISH, todos atingiram nota máxima. O Diário de Infusão foi construído e implantado como ferramenta para incrementar a assistência com vistas a estimular a melhora progressiva da QV. A QV dos pacientes acompanhados obteve resultados diferentes nas faixas etárias avaliadas, sendo que pacientes mais jovens alcançaram escores melhores. A realidade do manejo da hemofilia é desafiadora. É necessário reorientar o cuidado, o foco não deve ser a doença, é preciso olhar para o indivíduo, que deve ser assistido integralmente e de maneira holística. / Patients with hemophilia are predisposed to bleeding, both post-traumatic as spontaneous, occurring mainly in the joints (hemarthrosis) and, when recurrent, they may contribute to the establishment of hemophilic arthropathy, which makes the disease potentially disabling and painful, and considerably affects the quality of life (QoL) of patients with the disease. Evaluate the QoL of these patients gives us the subsidy to provide measures that aim to improve the assistance provided and the patients well-being. In this regard, through an important edition of the infusion journal it is possible to follow the care provided. The aim of the study was to evaluate the quality of life of hemophilia patients followed by the HEMOMINAS Foundation clinic in Manhuaçu, using specific tools and implement the use of an Infusion Diary as a strategy to increase assistance. This is a descriptive quantitative study. For the evaluation of QoL, it was used the ICF (International Classification of Functioning, Disability and Health) proposed by the WHO. The tools include: a sociodemographic questionnaire; Haem-A-Qol; Haemo-Qol; HAL, pedHAL; HJHS e FISH. 30 male patients with hemophilia joined the study, which represented 90.9% of the eligible sample. In patients older than 18 years (n = 24), the Haem-A-Qol average score was 53.39. In the HAL, the average was 67.26. In the HJHS, the average score was 37.33. In the FISH, the average score was 25.96. In patients under 18 (n = 06), the Haemo-Qol was answered by patients and their parents. In the questionnaire answered by the patient the average score was 50.36, and in the parents\' score was 55.16. In PedHAL, the average score of the patients was 88.59 and their parents 83.15. The average score in the HJHS was 5.67. Regarding FISH, all patients under 18 years of age (n = 06) reached a maximum score and performed all activities without assistance. The journal of infusion was built and implemented as a tool to enhance the assistance, aiming to stimulate the progressive improvement of the quality of life. The quality of life of patients followed was different, younger ones with better results. The reality of hemophilia management is challenging. It is necessary to reorient care, the focus should not be in the disease, it is necessary to look for the individual, who should be fully assisted in the holistic way.

Haemophilia B is a bleeding disorder caused by various mutations of the coagulation Factor IX gene (F9) resulting in qualitative or quantitative Factor IX protein (FIX) deficiency. Factor replacement therapy is the current standard of care. Cure may be possible in the near future by gene therapy — the transfer of normal copies of F9 to patients with haemophilia, causing establishment of FIX production and correction of the bleeding phenotype. Mesenchymal stem cells (MSC) are potential vehicles for gene delivery through ex vivo gene transfer and subsequent transplantation to the patient. Lentiviral vectors can transduce MSC effectively and mediate long term gene expression. However, gene expression may decline with time due to transgene silencing. Ubiquitous Chromatin Opening Element (UCOE) is a set of genetic sequences cloned from housekeeping genes that can maintain a transcriptionally competent, open chromatin structure and was shown to prevent gene silencing by resisting DNA methylation. We tested human F9 expression and FIX protein secretion by transducing MSC with lentiviral vectors that carry the FIX gene under the control of A2UCOE (A2UCOE-hF9). A2UCOE is a 2.2 kb sequence cloned from the HNRPA2B1–CBX3 gene loci that harbour UCOE function. A2UCOE-eGFP, an enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP) gene expression construct, was used to assist in vector titration of A2UCOE-hF9 by flow cytometry and quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction (qRT-PCR). MSC were transduced at various Multiplicities of Infection (MOIs) by A2UCOE-hF9 lentiviral vector. Upon transduction, F9 mRNA expression and FIX secretion were measured by qRT-PCR and ELISA respectively. Osteogenic and adipogenic differentiation assay were performed to compare differentiation potential before and after transduction at an MOI of 1. F9 mRNA expression and FIX secretion were both undetectable in untransduced MSC. Upon transduction, vector dose-dependent increase in F9 mRNA expression and FIX secretion were detected at MOIs of 1, 2, 4 and 8. The level of secreted FIX ranges from 20 to 150 μIU in 72 hours. Osteogenic and adipogenic differentiation were not affected post-transduction at an MOI of 1. In conclusion, FIX secretion by MSC was detected upon A2UCOE-hF9 lentiviral transduction. However, the level of FIX appeared to be low compared to published studies. Further studies are required to determine the cause of low FIX expression, develop methods to maximize FIX expression and confirm whether A2UCOE can prevent gene silencing and maintain sustainable gene expression. / published_or_final_version / Paediatrics and Adolescent Medicine / Master / Master of Research in Medicine

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Submitted by Maria Creuza Silva (mariakreuza@yahoo.com.br) on 2015-06-26T13:47:34Z No. of bitstreams: 1 DISS MP EDIMAR SILINGOWSCHI. 2015.pdf: 1707951 bytes, checksum: 09286079f91017ebfb8cd843df73a6de (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Creuza Silva (mariakreuza@yahoo.com.br) on 2015-07-09T13:27:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS MP EDIMAR SILINGOWSCHI. 2015.pdf: 1707951 bytes, checksum: 09286079f91017ebfb8cd843df73a6de (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-09T13:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS MP EDIMAR SILINGOWSCHI. 2015.pdf: 1707951 bytes, checksum: 09286079f91017ebfb8cd843df73a6de (MD5) / As hemofilias representam cerca de 60% das coagulopatias hereditárias no Brasil. O Programa Nacional de Coagulopatias atende 10.923 pacientes, no país, por meio da implementação gradativa do tratamento das hemofilias, atuando em três principais eixos: a informação, estruturação dos serviços e o fornecimento de pró-coagulantes. Em 2011, foram instituídos os protocolos das profilaxias e da imunotolerância visando reduzir os episódios de hemorragias e suas complicações promovendo com isso melhoria da qualidade de vida nos pacientes com hemofilia. O estudo teve como objetivo avaliar a implantação dos protocolos das profilaxias e da imunotolerância para hemofilia no estado de Tocantins. Foram realizadas coletas de dados secundários e entrevistas com profissionais em dois serviços. A análise tomou como base o modelo lógico elaborado e a matriz de julgamento derivada do mesmo, considerando-se dimensões, critérios e padrões selecionados, relacionados à estrutura dos serviços, ao processo de trabalho e aos resultados alcançados. A implantação se mostrou intermediária (58%) no Ambulatório do Hemocentro Coordenador de Palmas e incipiente (44%) no Ambulatório do Hemocentro Regional de Araguaína. Alguns desafios precisam ser superados, como promover a melhoria da estrutura e dos processos de trabalho e a sensibilização dos pacientes e familiares demonstrando a importância do tratamento profilático. A interação da equipe multiprofissional, responsável pela implantação das profilaxias e imunotolerância, associada aos resultados positivos alcançados com os pacientes em tratamento, além da inclusão de mais pacientes no programa são avanços que apontam para a implantação das profilaxias e da imunotolerância no Estado. O investimento dos serviços estaduais na capacitação dos profissionais, o fortalecimento da comunicação com os pacientes, com enfoque na sensibilização destes para adesão ao tratamento, e a melhoria da estrutura dos serviços e processos de trabalho podem favorecer a implantação dos protocolos, contribuindo para a melhoria da qualidade de vida dos hemofílicos.

Orientador: Maria Elvira Pizzigatti Correa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-15T16:05:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Feio_PatriciadoSocorroQueiroz_M.pdf: 2401000 bytes, checksum: ec8461997196edfbdd60b22b52c1dc43 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A hemofilia é uma doença hemorrágica hereditária ligada ao cromossomo X, decorrente da ausência ou da baixa quantidade no plasma dos fatores de coagulação Fator VIII (hemofilia A) ou do Fator IX (hemofilia B). Clinicamente, a hemofilia se caracteriza por episódios recorrentes de sangramentos profundos, que podem ocorrer espontaneamente ou em decorrência de traumatismos. O sistema músculo-esquelético é freqüentemente afetado pelos eventos hemorrágicos nos pacientes portadores de hemofilia. Dentro desse sistema, as articulações são alvos de episódios recorrentes de sangramentos, resultando em hemartroses. Estes episódios estimulam a hiperplasia da membrana sinovial articular, caracterizando o quadro das sinovites hemofílicas. O ciclo vicioso típico de hemartrose-sinovite-hemartrose quando estabelecido, tem como conseqüência a cronificação das alterações agudas articulares. Histologicamente, na sinovite é observada a proliferação de fibroblastos sinoviais e a presença de um infiltrado de células inflamatórias. Apesar da articulação temporomandibular (ATM) ser uma articulação do tipo sinovial são poucos os relatos sobre o seu envolvimento na sinovite hemofílica. Portanto, o objetivo deste estudo foi o de avaliar as características morfológicas da ATM de camundongos deficientes de fator VIII. Além disso, avaliar a indução de sinovite por hiper-extensão bucal. Para isso, as ATM de 30 camundongos deficientes de Fator VIII foram avaliadas. Cinco desses animais fizeram parte do grupo controle. E os outros 25 fizeram parte do grupo experimental para indução de sinovite pelo método de hiper-extensão bucal. Os animais do grupo controle foram sacrificados e as ATMs foram preparadas para avaliação histológica através da microscopia óptica. Os animais do grupo de estudo foram sacrificados após 2 e 5 dias e 2,4 e 6 semanas do procedimento. A seguir, as ATM foram preparadas para análise em microscopia e a membrana sinovial anterior inferior foi avaliada segundo os critérios descritos por Muto et al (1998b). Como resultado, as ATMs do grupo controle não apresentaram nenhuma alteração anatômica e a membrana sinovial anterior inferior apresentou entre 2-5 camadas de células sinoviais. No grupo de estudo o número de camadas de células sinoviais foram semelhantes ao grupo controle. Não foi observada dilatação capilar, adesão sinovial nem a presença de sangue na cavidade articular. Portanto, nossos resultados caracterizaram histologicamente a membrana sinovial anterior inferior de camundongos deficientes de Fator VIII e a metodologia empregada de hiper-extensão bucal não foi capaz de provocar sinovite na membrana sinovial avaliada / Abstract: Hemophilia is a hereditary hemorrhagic disease linked to chromosome X due to the deficiency of the activity of coagulation Factor VIII in hemophilia A, or Factor IX in hemophilia B. Clinically, hemophilia is characterized by recurrent severe bleedings, mostly in the musculoskeletal system. When the hemorrhage occurs inside the joint, it is called hemarthosis. Hemarthosis can stimulate the synovial membrane which results in synovial hyperplasia that can characterize the hemophilic synovitis. The typical vicious cycle haemartrosis-synovitis-haemarthrosis when established produces as a consequence, the chronification of joint acute changes. Histologically, synovitis is characterized by proliferation of the sinovial cells surrounded by an inflammatory infiltrate. Despite the fact that temporomandibular joint (TMJ) is a synovial joint there are few clinical reports in the literature regarding its involvement in hemophilic synovitis. Therefore, the goal of this study was to evaluate the morphological characteristics of TMJ in Factor VIII deficient mice. In addition, the second goal was to induce a TMJ synovitis using a forced jaw opening model. For this purpose, 30 Factor VIII deficient mice were enrolled in this study. Five of these animals were included in the control group and their TMJ was evaluated using light microscopy to establish the regular morphology of this joint. The other 25 were submitted to a forced jaw opening, for 5 minutes per day, during 10 days. These animals were sacrificed after 2 and 5 days and 2, 4 and 6 weeks of the procedure. TMJ was prepared for optical microscopy analysis and the anterior inferior synovial membrane was studied using Muto et al (1998) criteria. As a result, the anatomic characteristic of the TMJ was similar with other mice and the anterior inferior synovial membrane of this group presented 2-5 cell layers. In the study group, no anatomic changes were observed. No difference was observed regarding the thickness of sinovial cell layer of the studied group and the control group. Capillaries dilatation, synovial adhesion and blood in the joint chambers were not observed. Therefore, our results have histologically characterized the anterior inferior synovial membrane of TJM in Factor VIII deficient mice. The methodology used for inducing sinovites was not capable of inducing sinovites in the TMJ of Factor VIII deficient mice / Mestrado / Estomatologia / Mestre em Estomatopatologia

Orientador: Margareth Castro Ozelo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T17:29:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_Andreydos_D.pdf: 4770033 bytes, checksum: 92cd7a4adf25e169140e6fbbb68fe9d2 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Uma complicação decorrente do tratamento da hemofilia é a formação de anticorpos neutralizadores da atividade coagulante do fator VIII ou IX (inibidores). Diversos fatores estão relacionados com o desenvolvimento desses inibidores em indivíduos com hemofilia, incluindo fatores genéticos e ambientais. Entre os fatores genéticos, a mutação associada ao diagnóstico da hemofilia é um fator de risco bem documentado. Recentemente foi observada a maior ocorrência de inibidores em indivíduos da etnia negra. O objetivo deste trabalho foi analisar os aspectos genéticos e não genéticos envolvidos no desenvolvimento de inibidores. Foram incluídos nesse estudo 411 pacientes hemofílicos, sendo 321 com hemofilia A (HA) (238 famílias) e 99 com hemofilia B (HB) (59 famílias). A presença de inibidores foi constatada apenas entre os pacientes HA graves. Do total de 220 HA graves desse estudo, 46 (20,9%) apresentaram inibidor detectado em pelo menos uma ocasião após sua inclusão no estudo. Mutações consideradas de alto-risco para o desenvolvimento de inibidores foram identificadas em 125/220 pacientes HA graves (58,8%), e 33 deles desenvolveram inibidores (26,4%). Considerando o grupo étnico de acordo com traços físicos e ancestralidade, 38% dos pacientes HA graves foram classificados como negros. A incidência de inibidores foi maior nesse grupo de pacientes (31% do total de pacientes HA graves classificados como negros) quando comparada aos pacientes caucasóides (20% do total de pacientes HA graves classificados como caucasóides). Recentemente, foi observado que a maior incidência de inibidores em uma população norte-americana de pacientes com HA, estava relacionada com a presença de determinados haplótipos no gene do fator VIII. Esta observação poderia ser explicada pelo fato dos as proteínas expressas pelos haplótipos que aparecem exclusivamente entre a população negra (denominados H3 e H4), estarem ausentes nos concentrados de fator VIII recombinantes utilizados rotineiramente no tratamento desses pacientes. Em nossa análise a presença desses haplótipos não está relacionada com a maior freqüência de inibidor na população negra desse estudo. Além disso, a distribuição dos diferentes haplótipos do gene do fator VIII, classificados de H1 a H6, foi distinta entre todos os grupos étnicos brasileiros e norte-americanos. Essa observação pode ser explicada pela origem distinta entre os negros que imigraram da África para o Brasil e para a América do Norte, assim como o alto índice de miscigenação de nossa população. Em outra fase desse estudo, foi realizada a análise comparativa da expressão gênica a partir de amostras de RNA mensageiro (RNAm) extraídas em pool leucocitário de pacientes com HA grave, com ou sem a presença de inibidores. Na avaliação que incluiu numa primeira análise pacientes de uma mesma família discordante para a presença de inibidor e, em uma segunda fase, indivíduos não relacionados, foram observados 50 genes mais expressos e 16 genes menos expressos em pacientes com inibidor em comparação aos sem inibidor. Dentre esses genes foram selecionados dez, levando-se em conta sua participação na resposta imune ou sua correlação prévia com o desenvolvimento de inibidores em outros estudos. Pela técnica de PCR em tempo real, observou-se que os genes da interleucina 8 (IL-8) e da cistatina F (CST7) demonstraram ser mais expressos em pacientes com inibidor, enquanto que o gene da interleucina 10 (IL-10) foi menos expresso nesse grupo de pacientes. Dessa forma, nossos resultados fortalecem a idéia de que o mecanismo de desenvolvimento de inibidores em hemofilia é complexo e ainda não totalmente esclarecido e que existe um grande envolvimento de diversos genes relacionados com sistema imune na formação desses inibidores. O estudo em diferentes populações é uma importante etapa para o entendimento dos fatores de risco para o desenvolvimento de inibidores. Esse foi o primeiro trabalho realizado no Brasil incluindo pacientes de diversas regiões e analisando simultaneamente diferentes fatores e seu envolvimento com o desenvolvimento de inibidores. A determinação desses fatores de risco ajudará no futuro a determinar um tratamento diferenciado para o controle e sobretudo prevenção do desenvolvimento de inibidores / Abstract: The most serious complication of the treatment of hemophilia is the development of neutralizing antibodies to coagulation activity of factor VIII or IX (inhibitors). Several risk factors are related to the development of these inhibitors in patients with hemophilia, including genetic and environmental factors. Among genetic factors, the mutation associated with the diagnosis of hemophilia is a risk factor well documented. Recently, it was observed a higher incidence of inhibitors in African ancestry patients. The aim of this study was to analyze the genetic and non-genetic factors involved in the development of inhibitors. The study included 411 hemophilia patients, of which 321 with hemophilia A (HA) and 99 with hemophilia B (HB), belonging to a total of 238 and 59 families, respectively. The inhibitors were observed only in severe HA patients. From the 220 severe HA, 46 (20.9%) had inhibitor. The high risk mutation for the development of inhibitors were identified in 125 / 220 (58.8 %) severe HA patients, and 33 (26.4 %) of them developed inhibitors. Considering the ethnic group according to physical traits and ancestry, 38 % of severe HA patients were classified as black. The incidence of inhibitors is higher in this group of patients (31%) when compared to Caucasian patients (20%). The higher risk of inhibitor among African-Brazilians, could not be explained by the presence of the distinct factor VIII haplotypes, such as H3 and H4, as suggested in previous study. In fact, the prevalence rates of these haplotypes were distinct between Brazilians and North Americans, probably due to the fact that migrations of blacks to Brazil and to North America were originated from different geographic areas of Africa. In another phase of this study, we performed a comparative analysis of gene expression in samples of messenger RNA (mRNA) extracted from leukocytes of inhibitor and non-inhibitor patients with severe HA was performed. The evaluation consisted of an initial analysis of severe HA patients siblings, or from the same family, discordant for inhibitor development and in a second phase a group of unrelated individuals. Using the bioarrays technology 50 genes were upregulated and 16 were downregulated in inhibitor patients compared with non-inhibitor patients. Ten genes were selected among them, which are involved in immune response and were related to inhibitors development in other studies. It was observed by real time PCR that the genes for interleukin 8 (IL-8) and cystatin F (CST7) were upregulated and for interleukin 10 (IL-10) was downregulated in inhibitor patients. In conclusion, our results strengthen the idea that the mechanism of inhibitor development in hemophilia is complex, not clear and there is a large involvement of several genes related to the immune system in the development of these inhibitors. The study in different populations is important to understand the risk factors for the development of inhibitors. This is the first work in Brazil, to study patients from various regions and to performe analysis of different factors and their involvement in the development of inhibitors. The determination of these risk factors will help in the future to determine differential treatment for the control and in particular, for preventing the development of inhibitors / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Pacientes com hemofilia apresentam predisposição a sangramentos, tanto póstraumáticos como espontâneos, que ocorrem, principalmente nas articulações (hemartroses) e quando recorrentes podem contribuir para o estabelecimento de artropatia hemofílica, o que torna a doença potencialmente incapacitante e dolorosa, e afeta consideravelmente a qualidade de vida (QV) dos portadores. Avaliar a QV desses pacientes dá-nos subsídio para propor medidas visando a melhoria da assistência prestada e o seu bem-estar. Nesse sentido, uma importante ferramenta é o diário de infusão. O objetivo do estudo foi avaliar a QV dos portadores de hemofilia acompanhados pelo ambulatório da Fundação HEMOMINAS no Hemonúcleo Manhuaçu, utilizando ferramentas específicas e implementar o uso do Diário de Infusão como estratégia para incrementar a assistência. Trata-se de um estudo quantitativo descritivo. Para a avaliação da QV, optou-se, por utilizar o modelo de classificação de saúde, denominado CIF proposto pela OMS. Os instrumentos utilizados incluem: questionário sociodemográfico; Haem-A-Qol; Haemo-Qol; HAL, PedHAL; HJHS e FISH. Participaram da pesquisa 30 pacientes, do sexo masculino, portadores de Hemofilia, o que representou 90,9% da amostra elegível. Nos pacientes maiores de 18 anos (n=24), a média de pontuação do Haem-A-Qol foi de 53,39. No HAL, a média foi de 67,26. Já no HJHS, a média foi de 37,33. No FISH, a média foi de 25,96. Nos menores de 18 anos, (n=06), o Haemo-Qol foi respondido por pacientes e seus pais. No questionário respondido pelo paciente o escore médio foi de 50,36, já dos pais, foi de 55,16. No PedHAL, o escore médio dos pacientes foi 88,59 e dos pais 83,15. A pontuação média no HJHS foi de 5,67. Com relação ao FISH, todos atingiram nota máxima. O Diário de Infusão foi construído e implantado como ferramenta para incrementar a assistência com vistas a estimular a melhora progressiva da QV. A QV dos pacientes acompanhados obteve resultados diferentes nas faixas etárias avaliadas, sendo que pacientes mais jovens alcançaram escores melhores. A realidade do manejo da hemofilia é desafiadora. É necessário reorientar o cuidado, o foco não deve ser a doença, é preciso olhar para o indivíduo, que deve ser assistido integralmente e de maneira holística. / Patients with hemophilia are predisposed to bleeding, both post-traumatic as spontaneous, occurring mainly in the joints (hemarthrosis) and, when recurrent, they may contribute to the establishment of hemophilic arthropathy, which makes the disease potentially disabling and painful, and considerably affects the quality of life (QoL) of patients with the disease. Evaluate the QoL of these patients gives us the subsidy to provide measures that aim to improve the assistance provided and the patients well-being. In this regard, through an important edition of the infusion journal it is possible to follow the care provided. The aim of the study was to evaluate the quality of life of hemophilia patients followed by the HEMOMINAS Foundation clinic in Manhuaçu, using specific tools and implement the use of an Infusion Diary as a strategy to increase assistance. This is a descriptive quantitative study. For the evaluation of QoL, it was used the ICF (International Classification of Functioning, Disability and Health) proposed by the WHO. The tools include: a sociodemographic questionnaire; Haem-A-Qol; Haemo-Qol; HAL, pedHAL; HJHS e FISH. 30 male patients with hemophilia joined the study, which represented 90.9% of the eligible sample. In patients older than 18 years (n = 24), the Haem-A-Qol average score was 53.39. In the HAL, the average was 67.26. In the HJHS, the average score was 37.33. In the FISH, the average score was 25.96. In patients under 18 (n = 06), the Haemo-Qol was answered by patients and their parents. In the questionnaire answered by the patient the average score was 50.36, and in the parents\' score was 55.16. In PedHAL, the average score of the patients was 88.59 and their parents 83.15. The average score in the HJHS was 5.67. Regarding FISH, all patients under 18 years of age (n = 06) reached a maximum score and performed all activities without assistance. The journal of infusion was built and implemented as a tool to enhance the assistance, aiming to stimulate the progressive improvement of the quality of life. The quality of life of patients followed was different, younger ones with better results. The reality of hemophilia management is challenging. It is necessary to reorient care, the focus should not be in the disease, it is necessary to look for the individual, who should be fully assisted in the holistic way.

Orientador: Erich Vinicius de Paula / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T22:14:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vancine_SuleyMaraChaddad_D.pdf: 1402080 bytes, checksum: 16fb35308b27085dd2b0b7cdc94960fc (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Durante muitos anos, a coagulação tem sido implicada na patogênese da sepse. Entretanto, os resultados dos ensaios clínicos com anticoagulantes naturais, bem como estudos com camundongos knockout para os fatores de coagulação específicos produziram resultados conflitantes sobre o papel da coagulação na patogênese da sepse. Dessa forma, este trabalho tem como objetivo avaliar o impacto da deficiência grave de FVIII: C e FIX: C em um modelo de sepse experimental murino induzida por LPS. Camundongos knockout com deficiência grave de FVIII: C e FIX: C e seus controles relacionados com hemostasia normal foram tratados com LPS, e vários parâmetros do resposta inflamatória foram avaliados: as curvas de sobrevida de sete dias foram realizadas utilizando duas doses de LPS; marcadores bioquímicos e marcadores histológicos de lesão tecidual foram avaliados após 3 e 6 horas da infusão de LPS; parâmetros de coagulação e níveis séricos de citocinas pró-inflamatórias foram avaliados no início e após 3 e 6 horas da injeção de LPS. A deficiência grave de FVIII e FIX foram compatíveis com sobrevida normal na sepse experimental murina. Além disso, o dano tecidual induzido por LPS e a ativação da coagulação foram semelhantes em camundongos com deficiência de FVIII ou FIX em relação aos respectivos controles. Uma menor liberação de citocinas pró-inflamatórias foi observada em camundongos com deficiência grave de FIX, mas não em camundongos com deficiência de FVIII. Portanto, concluímos que a deficiência grave de FVIII ou FIX não protege camundongos da mortalidade ou de dano de tecido no modelo de endotoxemia, reforçando a hipótese de FVIII e FIX não são críticas para a patogênese da sepse experimental / Abstract: For many years, coagulation has been implicated in the pathogenesis of sepsis. However, the results of clinical studies with natural anticoagulant, as well as studies with knockout mice for specific coagulation factors produced conflicting results about the role of coagulation in the pathogenesis of sepsis. Our objective are evaluate the impact of severe deficiency of FVIII: C and FIX: C in an experimental murine model of sepsis induced by LPS. Knockout mice with severe deficiency of FVIII: C and FIX: C and its littermate hemostatic normal control mice were treated with LPS, and several inflammatory parameters were evaluated: survival curves seven days were done using two doses of LPS ; biochemical markers and histological markers of tissue injury were assessed after 3 and 6 hours of LPS infusion, coagulation parameters and serum levels of proinflammatory cytokines were assessed at baseline and after 3 and 6 hours of LPS injection. Severe deficiencies of FVIII and FIX were compatible with normal survival in experimental murine sepsis. In addition, the LPS-induced tissue damage and coagulation activation were similar in mice deficient in FVIII or FIX with respect to their controls. A lower release of proinflammatory cytokines was observed in mice with severe deficiency of FIX, but not in mice with deficiency of FVIII. The severe deficiency of FVIII or FIX does not protect mice from mortality and tissue damage in endotoxemia model, supporting the hypothesis that FVIII and FIX are not critical to the pathogenesis of experimental sepsis / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica