As células derivadas de fígado embrionário tanto de animais quanto de humanos tem sido cada vez mais estudas devido ao seu potencial antiinflamatório, imunomodulador e regenerativo, demonstrado as mesmas bipotencial de diferenciação em hepatócitos e colangiocitos. Na presente pesquisa utilizou-se células derivadas de fígados embrionários de ratos com 14,5 dias de gestação. As células apresentaram marcadores de células progenitoras hepáticas, bem como marcadores de células hepáticas e biliares diferenciadas confirmando, seu bipotencial. A terapia celular utilizando as células supracitadas, reduziu significativamente a progressão da fibrose hepática, diminuindo a inflamação e ainda estimulando a regeneração hepática de ratos submetidos à cirrose por ligadura do ducto biliar. As análises realizadas mediante avaliação quantitativa pela técnica de morfometria, demonstraram redução da deposição de fibras de colágeno, bem como menor proliferação de ductos biliares nos animais tratados. Os resultados foram ainda complementados por analise semiquantitativa, a qual avaliou a intensidade da necroinflamação dos tecidos hepáticos analisados, apontando menor escore de inflamação dos animais tratados. As células poderão ter efeito benéfico para o tratamento de doenças hepáticas crônicas, que estimulam a formação de fibrose. A cirrose é o estágio final comum à doenças hepáticas crônicas por causadas por fatores de diversas etiologias. Esta ocupa a decima quarta causa mundial de mortalidade em humanos, sendo que o único tratamento definitivo atualmente é transplante do órgão. Entretanto o número de transplantes está longe de suprir a demanda atual, visto que há um déficit de doadores do órgão. Terapias que possam oferecer uma alternativa de tratamento confiável, segura e acessível são bastante oportunas. Nossos resultados sugerem que as células utilizadas neste trabalho podem modular a fibrogênese, e consequentemente retardar o estabelecimento da cirrose em doenças hepáticas crônicas. / Studies on human and animal embryonic liver stem cells have been growing due to its anti-inflammatory, immunomodulatory and regenerative potential. These cells show also a bipotential do differentiate into hepatocytes and cholangiocytes. In the present study, it was used rodent embryonic liver with 14.5 of gestation. The cells presented hepatic progenitor, as well adult hepatic and biliary cells markers, confirming their bipotential. Previous studies with these cells in therapy decreased hepatic fibrosis progression in rat models submitted to cirrhosis by biliary duct ligation. Quantitative analysis was performed by morphometry showed decreased collagen fibers deposition and lower proliferation of biliary ducts in treated animals. Results were complemented with semiquantitative analysis with evaluation of necroinflammation of the analyzed hepatic tissues, in which a decreased inflammation score was observed. Cirrhosis is a common final stage for chronic hepatic diseases caused by different factors in several etiologies. It occupies the 14th world cause of mortality in human. However, the number of liver transplants is insufficient for current demand, caused by deficit in organs donors. Therapies that could offer an alternative for a reliable, safe and accessible treatment is opportune. Our results suggest that cells used in this study can modulate fibrogenesis and consequently delay the establishment of cirrhosis in chronic liver diseases.

Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2018-05-28T19:39:54Z No. of bitstreams: 1 Marina Brandão Braz Albuquerque.pdf: 605500 bytes, checksum: 1405379cffb1283fb04eb721d76cc92a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-28T19:39:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marina Brandão Braz Albuquerque.pdf: 605500 bytes, checksum: 1405379cffb1283fb04eb721d76cc92a (MD5) Previous issue date: 2018-03-27 / The use of hepatic biopsy to assess the stay of the level of fibrosis continues to be gold standard but may present some risks during the procedure and high cost. Given that the WHO suggested the use of APRI and FIB-4 indexes to evaluate hepatic fibrosis in patients with chronic hepatitis C, because they are low-cost exams that can replace the use of hepatic biopsy. Objectives: Assess the level of hepatic fibrosis before and after treatment of hepatitis C by means of APRI and FIB 4 methods. Methods: This is a cross-descriptive study, carried out by reviewing medical records of patients attending the STD/AIDS and Viral Hepatitis clinics in the period from March 2016 to December 2017. The level of fibrosis was defined according to PCDT 2015 in significant fibrosis values of APRI > 1.5 and FIB-4 > 3.25; and absence of fibrosis APRI ≤ 0.5 and FIB-4 ≤ 1.5. Patients who did not fit within the triage were defined as indeterminate. The correlation between the improvement of fibrosis and the variables was performed: gender, age and genotype. Results: 45 selected patients were assisted in the clinic, 23 of them (51.1%) were male. The average age of the patients was 57.13. The infection by genotype 1a was more prevalent n = 19 (42.2%). Among the 45 patients, 28 were within the classifications between absence and advanced by the APRI before the treatment and 17 were defined as indeterminate. In the FIB-4, 26 patients were classified between absence and advanced fibrosis and 19 defined as indeterminate. After the treatment 25 patients were classified by APRI and 20 by FIB- 4. Only the FIB-4 index had significant correlation (P < 0.05) with age and improvement in fibrosis. Conclusions: Both tests can be used to verify the staging of hepatic fibrosis and assist in daily practice, but some results may be in the indeterminate zone. In these cases, it is necessary to carry out complementary tests to better define the degree of fibrosis. / O uso da biópsia hepática para avaliar o estadiamento do grau de fibrose continua sendo padrão-ouro, contudo pode apresentar alguns riscos durante o procedimento, além de elevado custo. Diante disso, a OMS sugeriu o uso dos índices APRI e FIB-4 para avaliar a fibrose hepática em pacientes portadores de hepatite C crônica, visto que os exames têm baixo custo e podem substituir a biópsia hepática. Objetivos: Avaliar o grau de fibrose hepática pelos métodos APRI e FIB 4 antes e após tratamento de hepatite C. Métodos: Trata-se de estudo descritivo transversal, realizado por meio da revisão de prontuários médicos de pacientes atendidos no Ambulatório de DST/AIDS e Hepatites Virais em Aparecida de Goiânia no período de março de 2016 a dezembro de 2017. O grau de fibrose foi assim definido conforme PCDT 2015: fibrose significativa com valores de APRI >1,5 e FIB-4 >3,25; ausência de fibrose com APRI ≤0,5 e FIB-4 ≤1,5. Os pacientes que não se enquadravam na classificação foram definidos como indeterminados. Foi realizada a correlação entre a melhora da fibrose e as variáveis: gênero, idade e genótipo. Resultados: Foram selecionados para o estudo 45 pacientes atendidos na unidade, dos quais 23 (51,1%) eram do sexo masculino. A média de idade dos pacientes foi de 57,13 anos. A infecção pelo genótipo 1a foi mais prevalente, n= 19 (42,2%). Dos 45 pacientes, 28 estavam inseridos nas classificações entre fibrose ausente e avançada pelo APRI antes do tratamento e 17 foram definidos como indeterminados. No FIB-4, 26 pacientes foram classificados entre ausência e fibrose avançada e 19 foram definidos como indeterminados. Após o tratamento, 25 pacientes foram classificados pelo APRI e 20 pelo FIB-4. Apenas o índice FIB-4 mostrou correlação significativa (p<0,05) entre idade e melhora na fibrose. Conclusões: Ambos os testes podem ser utilizados para verificar o estadiamento da fibrose hepática e auxiliar na prática diária, porém alguns resultados podem estar na zona indeterminada. Neste caso é necessária a realização de testes complementares para definir melhor o grau de fibrose.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-11-19T18:49:36Z No. of bitstreams: 1 Elisangela Trindade Santos. Schistosoma mansoni....pdf: 19009500 bytes, checksum: 95969f49b90dc351f686bd6dde25898c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-19T18:49:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Elisangela Trindade Santos. Schistosoma mansoni....pdf: 19009500 bytes, checksum: 95969f49b90dc351f686bd6dde25898c (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A esquistossomose mansônica é uma doença parasitária tropical. Causadas por helmintos do gênero Schistosoma. Com a intenção de conter a doença, diversos institutos e organizações vêm desenvolvendo medidas de controle para tratar indivíduos infectados e evitar a ocorrência de novas infecções. Estratégias de administração de medicamentos em massa são eficazes na cura da doença, entretanto o tratamento com drogas anti-helmínticas não previnem a possibilidade da ocorrência de reinfecções. Diante desta questão, neste trabalho propusemo-nos a analisar a cinética da fibrose hepática em camundongos esquistossomóticos tratados e submetidos à reinfecção. Para alcançar este objetivo, 70 camundongos Swiss foram infectados com 50 cercárias de S.mansoni, posteriormente tratados com Oxamniquine ou Praziquantel e reinfectados quatro meses após tratamento. Os fígados destes animais foram submetidos a técnicas de imunohistoquímica e imunofluorescência e microscopia eletrônica de transmissão para avaliação da expressão e participação de componentes envolvidos no processo fibrogênico. Para verificar os índices de colágeno entre os grupos utilizou-se a análise morfométrica. A análise histológica revelou que camundongos esquistossomóticos submetidos à quimioterapia específica desenvolveram altos índices de fibrose durante a reinfecção. A imunomarcação para alfa actina de músculo liso (α-SMA) revelou que grande parte do parênquima hepático dos animais tratados e reinfectados exibiam células com perfil miofibloblástico. A imunofluorescência demonstrou que o padrão de marcação para laminina estava alterado em animais com esquistossomose. A análise morfométrica revelou que reinfecção destes animais ocasionou uma intensa deposição de fibras colágenas no parênquima hepático. Os dados obtidos demonstraram que a reinfecção em animais previamente tratados, foi capaz de induzir uma resposta fibrótica semelhante a encontrada nos animais com infecção primária. / Schistosomiasismansoni is a tropical parasitic disease. Caused by helminths of the genus Schistosoma. In an attempt to contain the disease, various institutes and organizations are developing control measures to treat infected individuals and prevent new infections. Strategies of mass drug administration are effective in curing the disease, whereas treatment with anthelmintic drugs do not prevent the possibility of the occurrence of reinfection. Faced with this question, in this work we decided to analyze the kinetics of hepatic fibrosis in schistosomiasis treated mice and subjected to reinfection. To achieve this goal, 70 Swiss mice were infected with 50 cercariaeS.mansoni subsequently treated with oxamniquine or praziquantel and reinfected four months after treatment. The livers of these animals were subjected to immunohistochemistry and immunofluorescence techniques and transmission electron microscopy to evaluate the expression and participation of constituents involved in the fibrogenic process. To check the rates of collagen between the groups used the morphometric analysis. Histological analysis revealed that mice submitted to specific chemotherapy schistosomiasis developed fibrosis during high rates of reinfection. Immunostaining for alpha smooth muscle actin (α-SMA) revealed that much of the liver parenchyma of animals treated and reinfected cells exhibited myofibloblastic profile. Immunofluorescence showed that the labeling pattern for laminin was abnormal in animals with schistosomiasis. Morphometric analysis revealed that reinfection of animals caused an intense collagen deposition in the liver parenchyma. The data obtained showed that reinfection in animals previously treated, was able to induce a fibrotic response similar to that found in animals with primary infection

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-06-28T12:52:01Z No. of bitstreams: 1 Rodrigo Feliciano do Carmo.pdf: 3731491 bytes, checksum: 86d8eb6b218e10bf0ba32ef83c2d9050 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-28T12:52:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigo Feliciano do Carmo.pdf: 3731491 bytes, checksum: 86d8eb6b218e10bf0ba32ef83c2d9050 (MD5) Previous issue date: 2016-05-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The hepatitis C virus (HCV) represents a worldwide health problem, with over 170 million people infected all over the world, corresponding to almost 3% of the world’s population. Approximately 70% of the individuals will develop the chronic form of the disease; 25% will develop cirrhosis and about 5% among the cirrhotic will develop hepatocellular carcinoma (HCC). The reason why some individuals evolve more rapidly to the severe forms is still unknown, however, several studies have pointed the influence of genetic factors of the host which are involved with the disease progression in the liver. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) are the most common type of genetic variation in humans, and they might alter serum levels or even the function of important proteins. Pentraxin 3 (PTX3) is an acute phase protein that is able to bind the surface of microorganisms and to regulate the complement system. Studies have demonstrated that PTX3 may influence positively the progression of various types of cancer. Additionally, some studies have demonstrated an important influence of a chromosomic region (6q23), associated with the progression of liver fibrosis in schistosomiasis. The IL22RA2 gene is located in this region e may be associated with the severity of fibrosis in HCV, once this gene codifies an inhibitor of an important cytokine correlated with the repair of liver damage, the interleukin-22 (IL-22). Thus, the aim of the present study was to associate the severity of the liver disease caused by HCV with SNPs in the PTX3 and IL22RA2 genes, as well as to identify new SNPs through exome sequencing approach. Patients with chronic hepatitis C were recruited and attended at the service of Gastrohepatology of the Oswaldo Cruz University Hospital/Liver Institute of Pernambuco (Recife, Pernambuco, Brazil) between August 2010 and December 2014. The detection of SNPs was performed by real time PCR using TaqMan probes (Thermo Fisher Scientific). Regarding the exome sequencing, it was used the IonTorrent platform (Thermo Fisher Scientific). A total of three studies were performed, the first study identified two polymorphisms (rs6570136 and rs2064501) on the IL22RA2 gene, associated with the severity of hepatic fibrosis, in a total of 532 patients. It was observed a higher frequency of genotypes GG/GA of rs6570136 and TT/TC of rs2064501 in the group of individuals with severe fibrosis (p=0,007 OR 1,7 and p=0,004 OR 2,4). On the second study, with a total of 524 patients, it was possible to notice a significant association of the genotype AA in the PTX3 gene (rs2305619) with risk of HCC (p=0.024 OR 1,94). Finally, the exome sequencing was carried in 9 HCC cases and 10 cirrhotic controls, where it was possible to identify two genes (PRSS58 and SOCS5), which are possibly associated with the development of HCC. Therefore, through this study we have demonstrated, for the first time, the association of SNPs in IL22RA2, PTX3, PRSS58 and SOCS5 with the progression of the hepatic disease caused by HCV. Other studies are needed in order to evaluate the use of these SNPs as progression markers of hepatitis C; as well as to evaluate the possible use of these molecules as therapeutic targets. / O vírus da hepatite C (HCV) representa um problema de saúde mundial, acometendo mais de 170 milhões de pessoas em todo o mundo, o que corresponde a cerca de 3% da população mundial. Aproximadamente 70% dos indivíduos irão desenvolver a forma crônica da doença, 25% desenvolverão cirrose e cerca de 5% dos cirróticos desenvolverão carcinoma hepatocelular (HCC). O motivo pelo qual alguns indivíduos evoluem mais rapidamente para formas mais graves ainda é desconhecido, entretanto diversos estudos têm apontado a influência de fatores genéticos do hospedeiro envolvidos com a progressão da doença no fígado. Polimorfismos de único nucleotídeo (SNPs) são o tipo de variação genética mais comum em humanos, e podem influenciar os níveis séricos ou até mesmo a função de proteínas importantes. A pentraxina 3 (PTX3) é uma proteína de fase aguda capaz de se ligar a microrganismos e de regular o sistema complemento. Estudos têm demonstrado que a PTX3 pode influenciar positivamente a progressão de vários tipos de câncer. Além disso, alguns estudos têm demonstrado uma grande influência de uma região cromossômica (6q23) associada com a progressão da fibrose hepática na esquistossomose. O gene IL22RA2 está localizado nesta região e poderia estar associado com a gravidade da fibrose no HCV, uma vez que este gene codifica um inibidor de uma importante citocina envolvida com a reparação de danos hepáticos, a interleucina-22 (IL-22). Portanto, o objetivo do presente trabalho foi associar a gravidade da doença hepática causada pelo HCV, com SNPs nos genes PTX3 e IL22RA2, assim como identificar novos SNPs através da técnica de sequenciamento de exoma. Foram recrutados pacientes com hepatite C crônica, atendidos no serviço de Gastrohepatologia do Hospital Universitário Oswaldo Cruz/Instituto do Fígado de Pernambuco (Recife-PE, Brasil) entre agosto de 2010 e dezembro de 2014. A detecção dos SNPs foi realizada por PCR em tempo real através de sondas TaqMan®. Para o sequenciamento do exoma, foi utilizada a plataforma IonTorrent®. Um total de três estudos foram realizados, o primeiro estudo identificou dois polimorfismos (rs6570136 e rs2064501) no gene IL22RA2, associados com a gravidade da fibrose hepática, em um total de 532 pacientes. Foi observada uma maior frequência dos genótipos GG/GA do rs6570136 e TT/TC do rs2064501 no grupo de indivíduos com fibrose grave (p=0,007 OR 1,7 e p=0,004 OR 2,4). No segundo estudo, com um total de 524 pacientes, foi possível observar uma associação significativa do genótipo AA no gene PTX3 (rs2305619) com o risco de HCC (p=0.024 OR 1,94). Por fim, foi realizado o sequenciamento do exoma de 9 casos com HCC e 10 controles cirróticos, onde foi possível identificar dois genes (PRSS58 e SOCS5) possivelmente associados com o desenvolvimento de HCC. Portanto, através do presente estudo, foi demonstrado pela primeira vez a associação de SNPs no IL22RA2, PTX3, PRSS58 e SOCS5 com a progressão da doença hepática causada pelo HCV. Outros estudos são necessários para avaliar o uso desses SNPs como marcadores de progressão da hepatite C, bem como avaliar o possível uso dessas moléculas como alvos terapêuticos.

As células derivadas de fígado embrionário tanto de animais quanto de humanos tem sido cada vez mais estudas devido ao seu potencial antiinflamatório, imunomodulador e regenerativo, demonstrado as mesmas bipotencial de diferenciação em hepatócitos e colangiocitos. Na presente pesquisa utilizou-se células derivadas de fígados embrionários de ratos com 14,5 dias de gestação. As células apresentaram marcadores de células progenitoras hepáticas, bem como marcadores de células hepáticas e biliares diferenciadas confirmando, seu bipotencial. A terapia celular utilizando as células supracitadas, reduziu significativamente a progressão da fibrose hepática, diminuindo a inflamação e ainda estimulando a regeneração hepática de ratos submetidos à cirrose por ligadura do ducto biliar. As análises realizadas mediante avaliação quantitativa pela técnica de morfometria, demonstraram redução da deposição de fibras de colágeno, bem como menor proliferação de ductos biliares nos animais tratados. Os resultados foram ainda complementados por analise semiquantitativa, a qual avaliou a intensidade da necroinflamação dos tecidos hepáticos analisados, apontando menor escore de inflamação dos animais tratados. As células poderão ter efeito benéfico para o tratamento de doenças hepáticas crônicas, que estimulam a formação de fibrose. A cirrose é o estágio final comum à doenças hepáticas crônicas por causadas por fatores de diversas etiologias. Esta ocupa a decima quarta causa mundial de mortalidade em humanos, sendo que o único tratamento definitivo atualmente é transplante do órgão. Entretanto o número de transplantes está longe de suprir a demanda atual, visto que há um déficit de doadores do órgão. Terapias que possam oferecer uma alternativa de tratamento confiável, segura e acessível são bastante oportunas. Nossos resultados sugerem que as células utilizadas neste trabalho podem modular a fibrogênese, e consequentemente retardar o estabelecimento da cirrose em doenças hepáticas crônicas. / Studies on human and animal embryonic liver stem cells have been growing due to its anti-inflammatory, immunomodulatory and regenerative potential. These cells show also a bipotential do differentiate into hepatocytes and cholangiocytes. In the present study, it was used rodent embryonic liver with 14.5 of gestation. The cells presented hepatic progenitor, as well adult hepatic and biliary cells markers, confirming their bipotential. Previous studies with these cells in therapy decreased hepatic fibrosis progression in rat models submitted to cirrhosis by biliary duct ligation. Quantitative analysis was performed by morphometry showed decreased collagen fibers deposition and lower proliferation of biliary ducts in treated animals. Results were complemented with semiquantitative analysis with evaluation of necroinflammation of the analyzed hepatic tissues, in which a decreased inflammation score was observed. Cirrhosis is a common final stage for chronic hepatic diseases caused by different factors in several etiologies. It occupies the 14th world cause of mortality in human. However, the number of liver transplants is insufficient for current demand, caused by deficit in organs donors. Therapies that could offer an alternative for a reliable, safe and accessible treatment is opportune. Our results suggest that cells used in this study can modulate fibrogenesis and consequently delay the establishment of cirrhosis in chronic liver diseases.

Transplantation of adult human hepatic stem/progenitor cells (hHSPCs) has been considered as an alternative therapy, replacing donor liver transplantation to treat liver cirrhosis. This study assessed the antifibrotic effects of hHSPCs in mice with fibrosis induced by carbon tetrachloride (CCl4) and examined the actions of hHSPCs on the fibrogenic activity of human hepatic stellate cells (HSCs) in a coculture system. Isolated hHSPCs expressed stem/progenitor cell phenotypic markers. Mice were given CCl4 (twice weekly for 7 weeks) and hHSPC transplantation weekly. CCl4 induced advanced fibrosis (bridging fibrosis and cirrhosis) in mice, which was prevented by hHSPC transplantation. The liver of hHSPC-transplanted mice showed only occasional short septa and focal parenchymal fibrosis, and a 50% reduction in hepatic collagen, assessed by Sirius red stain histomorphometry. Moreover, the proteins for α-smooth muscle actin (α-SMA) and collagen I were decreased. While α-SMA, collagen α1(I), and tissue inhibitor of metalloproproteinase-1 mRNAs were decreased, matrix metalloproteinase (MMP)-1 mRNA was increased, consistent with decreased fibrogenesis. MMP-2 and transforming growth factor-Β were not affected. Alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase were lower, suggesting improvement of liver function/damage. In coculture, hHSPCs elicited changes of α-SMA and fibrogenic molecules in HSCs similar to those observed in vivo, providing evidence for a functional link between hHSPCs and HSCs. A decreased HSC proliferation was noted. Thus, transplantation of hHSPCs prevents histogenesis of advanced liver fibrosis caused by CCl4. hHSPCs mediate downregulation of HSC activation coincident with modulation of fibrogenic molecule expression, leading to suppression of fibrogenesis both in vivo and in vitro.

A Hepatite Autoimune (HAI) é uma doença inflamatória crônica oriunda de autoimunidade, ocasionando fibrose hepática. O objetivo desse estudo foi verificar possíveis inter-relações entre HLA-G, BAMBI e processos inflamatórios/fibrogênicos hepáticos na Hepatite Autoimune, tanto em biópsias de pacientes pré quanto póstratamento com imunossupressores. Foram selecionadas noventa e cinco biópsias de pacientes do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto diagnosticados com HAI, associados ou não a depósitos de ferro no fígado. As biópsias foram submetidas à imuno-histoquímica para marcação das proteínas HLAG e BAMBI. As estatísticas foram determinadas pelos testes Mann-Whitney e correlação de Spearman. A expressão de HLA-G e de BAMBI se apresentou aumentados conforme o agravamento da inflamação e fibrose em pacientes pré- tratamento com boa ou má resposta ao tratamento. No entanto, a expressão de HLAG e de BAMBI foi reduzida nas biópsias pós-tratamento apenas nos pacientes bom respondedores (diminuição da fibrose). Não houve quaisquer relações entre as quantificações de HLA-G e BAMBI com o número de plasmócitos ou com depósitos de ferro no fígado tanto em pacientes pré quanto pós-tratamento. Os resultados sugerem que tanto HLA-G quanto BAMBI são imunorreguladores sensíveis à intensidade do processo inflamatório no fígado, tendo suas expressões aumentadas ou diminuídas de acordo com a demanda por substâncias que regulem compostos e células imunológicas na HAI. Sugerem também que o infiltrado plasmocitário não é regulado diretamente pelo HLA-G ou BAMBI, e que os depósitos de ferro no fígado não são capazes de influenciar nem o grau inflamatório, nem as expressões de HLAG e BAMBI. / Autoimmune Hepatitis (HAI) is a chronic inflammatory disease originating from autoimmunity, causing liver fibrosis. The objective of this study was to verify possible interrelations between HLA-G, BAMBI and inflammatory / fibrogenic hepatic processes in Autoimmune Hepatitis, both in pre and post-treatment immunosuppressive biopsies. Ninety-five biopsies of patients from the Clinical Hospital of the Medical School of Ribeirão Preto diagnosed with HAI, associated or not with iron deposits in the liver, were selected. Biopsies were submitted to immunohistochemistry for the labeling of HLA-G and BAMBI proteins. The statistics were determined by the Mann-Whitney tests and Spearman\'s correlation. The expression of HLA-G and BAMBI was increased as worsening of inflammation and fibrosis in pre-treatment patients with good or poor response to treatment. However, the expression of HLA-G and BAMBI was reduced in post-treatment biopsies only in patients with good responders (decreased fibrosis). There were no relationships between the quantifications of HLA-G and BAMBI with the number of plasma cells or with liver iron deposits in both pre and post-treatment patients. The results suggest that both HLA-G and BAMBI are immunoregulators sensitive to the intensity of the inflammatory process in the liver, their expressions being increased or decreased according to the demand for substances that regulate immune cells and compounds in HAI. They also suggest that plasmacytic infiltrate is not directly regulated by HLA-G or BAMBI, and that the liver iron deposits are not capable of influencing either the inflammatory grade or the expressions of HLA-G and BAMBI.

Submitted by Cristiane Chim (cristiane.chim@ucpel.edu.br) on 2018-09-12T13:07:29Z No. of bitstreams: 1 Elza Cristina Miranda da Cunha.pdf: 2120613 bytes, checksum: 826a1788c1b8767323bb311695b02224 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-12T13:07:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Elza Cristina Miranda da Cunha.pdf: 2120613 bytes, checksum: 826a1788c1b8767323bb311695b02224 (MD5) Previous issue date: 2018-03-26 / Chronic Hepatitis C (CHC) is a worrisome public health problem that can lead the infected patient to liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Treatment of Hepatitis C virus (HCV) in Brazil in monoinfected patients is provided according to the degree of fibrosis and genotype of the virus. It is an expensive treatment and in some situations presents important side effects. The objective of this work is to evaluate the patients before and during treatment with Peginterferon and Ribavirin and is divided into three articles. The first article was a transversal study evaluated noninvasive tests (APRI, FIB-4 and GPR) in relation to liver biopsy to evaluate liver fibrosis according to the viral genotypes in 94 patients in the pre-treatment. The APRI concordance for liver biopsy for advanced fibrosis presented AUROC = 0.67 (95% CI 0.55-0.79). The GPR index represents an AUROC = 0.59 (95% CI 0.46-0.73) for advanced fibrosis, whereas the FIB-4 represents an AUROC = 0.69 (95% CI 0.58-0.80) for advanced fibrosis. No significant difference was found when compared the three tests used (p = 0.306). Moreover, when evaluated the tests in relation to the viral genotypes, we found only statistical difference for GPR (P = 0.006), with better accuracy for genotype 2-3. The second article was a Coorte Study evaluated in 136 patients the influence of sociodemographic factors on hematological parameters during the first 12 weeks of treatment. Men had higher hemoglobin levels along the treatment (p = 0.001), while older patients (p = 0.012) and non-Caucasians (p = 0.008) had lower values. Platelet levels decreased in the elderly (p = 0.007) and men (p = 0.001) along the treatment. In conclusion, social factors such as sex, age and ethnicity showed a greater impact on the hematological variables during CHC treatment. The third article was a Coorte study evaluated the association between major depression and depressive symptoms and the rs12979860 polymorphism (SNP) in the IL28B gene during the first 12 weeks of treatment in 90 patients. There was no statistically significant relationship with depression in the pre-treatment and during the treatment. However, regarding the symptoms, there was an association of the T-allele with risk for irritability (p = 0.021) and a trendy for loss of appetite (p=0.072) and agitation (p=0.060). / A Hepatite C crônica (HCC) é um preocupante problema de saúde pública, podendo levar o paciente infectado à cirrose hepática e carcinoma hepatocelular. O tratamento do vírus da Hepatite C (HCV) no Brasil, em pacientes monoinfectados, é fornecido conforme o grau de fibrose e genótipo do virus. É um tratamento dispendioso e em algumas situações apresenta importantes paraefeitos. O presente trabalho avaliou pacientes infectados com HCV no pré e durante o tratamento com Peginterferon e Ribavirina e se divide em três partes, divididas por artigos. No primeiro artigo foi realizado em estudo transversal que avaliou testes não invasivos (APRI, FIB-4 e GPR) em relação à biópsia para avaliação de fibrose hepática avançada conforme os genótipos virais em 94 pacientes no pré-tratamento. A concordância do APRI em relação à biópsia hepática para fibrose avançada apresentou AUROC = 0,67 (IC 95% 0,55-0,79). O index GPR apresenta um AUROC = 0,59 (IC 95% 0,46-0,73) para fibrose avançada, enquanto a FIB-4 apresenta um AUROC = 0,69 (IC 95% 0,58-0,80) para fibrose avançada. Não houve diferença quando comparado os três métodos (p=0.306). Houve diferença entre os genótipos quando avaliado o GPR (p=0.006) com melhor acurácia relacionada ao genótipo 2 e 3. No segundo artigo foi realizado um estudo de coorte com 136 pacientes avaliando a influência de fatores sociodemograficos nos parâmetros hematológicos durante as primeiras 12 semanas de tratamento. Os homens apresentaram maiores valores de hemoglobina ao longo do tratamento (p = 0,001), enquanto os pacientes mais velhos (p = 0,012) e não caucasianos (p = 0,008) apresentam valores mais baixos. Os níveis de plaquetas reduziram nos pacientes idosos (p = 0,007) e homens (p = 0,001) ao longo do tratamento. Em conclusão, fatores sociais como sexo, idade e etnia, mostraram maior impacto nas variáveis hematológicas durante o tratamento da HCC. No terceiro artigo foi realizado um estudo de coorte que avaliou a associação entre a depressão maior e sintomas depressivos com o polimorfismo (SNP) rs12979860 no gene do IL28B durante as primeiras 12 semanas de tratamento em 90 pacientes. Não houve relação estatisticamente significativa com depressão no pré-tratamento, e ao longo do tratamento. Entretanto, em relação aos sintomas depressivos houve uma associação do alelo-T com maior risco de irritabilidade (p=0.021) e tendência para agitação (p=0.060) e perda do apetite (p=0.072).

A Hepatite Autoimune (HAI) é uma doença inflamatória crônica oriunda de autoimunidade, ocasionando fibrose hepática. O objetivo desse estudo foi verificar possíveis inter-relações entre HLA-G, BAMBI e processos inflamatórios/fibrogênicos hepáticos na Hepatite Autoimune, tanto em biópsias de pacientes pré quanto póstratamento com imunossupressores. Foram selecionadas noventa e cinco biópsias de pacientes do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto diagnosticados com HAI, associados ou não a depósitos de ferro no fígado. As biópsias foram submetidas à imuno-histoquímica para marcação das proteínas HLAG e BAMBI. As estatísticas foram determinadas pelos testes Mann-Whitney e correlação de Spearman. A expressão de HLA-G e de BAMBI se apresentou aumentados conforme o agravamento da inflamação e fibrose em pacientes pré- tratamento com boa ou má resposta ao tratamento. No entanto, a expressão de HLAG e de BAMBI foi reduzida nas biópsias pós-tratamento apenas nos pacientes bom respondedores (diminuição da fibrose). Não houve quaisquer relações entre as quantificações de HLA-G e BAMBI com o número de plasmócitos ou com depósitos de ferro no fígado tanto em pacientes pré quanto pós-tratamento. Os resultados sugerem que tanto HLA-G quanto BAMBI são imunorreguladores sensíveis à intensidade do processo inflamatório no fígado, tendo suas expressões aumentadas ou diminuídas de acordo com a demanda por substâncias que regulem compostos e células imunológicas na HAI. Sugerem também que o infiltrado plasmocitário não é regulado diretamente pelo HLA-G ou BAMBI, e que os depósitos de ferro no fígado não são capazes de influenciar nem o grau inflamatório, nem as expressões de HLAG e BAMBI. / Autoimmune Hepatitis (HAI) is a chronic inflammatory disease originating from autoimmunity, causing liver fibrosis. The objective of this study was to verify possible interrelations between HLA-G, BAMBI and inflammatory / fibrogenic hepatic processes in Autoimmune Hepatitis, both in pre and post-treatment immunosuppressive biopsies. Ninety-five biopsies of patients from the Clinical Hospital of the Medical School of Ribeirão Preto diagnosed with HAI, associated or not with iron deposits in the liver, were selected. Biopsies were submitted to immunohistochemistry for the labeling of HLA-G and BAMBI proteins. The statistics were determined by the Mann-Whitney tests and Spearman\'s correlation. The expression of HLA-G and BAMBI was increased as worsening of inflammation and fibrosis in pre-treatment patients with good or poor response to treatment. However, the expression of HLA-G and BAMBI was reduced in post-treatment biopsies only in patients with good responders (decreased fibrosis). There were no relationships between the quantifications of HLA-G and BAMBI with the number of plasma cells or with liver iron deposits in both pre and post-treatment patients. The results suggest that both HLA-G and BAMBI are immunoregulators sensitive to the intensity of the inflammatory process in the liver, their expressions being increased or decreased according to the demand for substances that regulate immune cells and compounds in HAI. They also suggest that plasmacytic infiltrate is not directly regulated by HLA-G or BAMBI, and that the liver iron deposits are not capable of influencing either the inflammatory grade or the expressions of HLA-G and BAMBI.

La fibrose hépatique est la conséquence de toutes les maladies chroniques du foie et se caractérise par un dépôt excessif de matrice extracellulaire synthétisée par les myofibroblastes. Les myofibroblastes portaux (MFP), l'une des sous populations de myofibroblastes, jouent un rôle majeur dans la progression de la fibrose et sont pro-angiogéniques. Des études ont montré un rôle important du stress du réticulum endoplasmique (RE) dans la fibrose du foie. Nos objectifs étaient de déterminer si un stress du RE survient dans les MFP lors de la fibrose et affecte les fonctions de ces cellules, et d'étudier l'effet du TUDCA, une molécule chaperonne utilisée en clinique dans les maladies biliaires, sur le stress du RE. Le phénotype de MFP activés in vivo, isolés à partir de foie de rats fibreux après cholestase, a été comparé à celui de MFP contrôles que nous avons préalablement bien caractérisés. Nos résultats montrent que les MFP activés in vivo subissent un stress du RE se traduisant par l'activation de la voie PERK. Ce stress du RE n'a pas d'effet sur la différenciation myofibroblastique, diminue les capacités de prolifération et de migration des MFP mais augmente leur pouvoir angiogénique. En revanche, le TUDCA n'a aucun effet sur les paramètres étudiés. Les MFP subissent donc un stress du RE lors de leur activation myofibroblastique qui stimule leur propriété pro-angiogénique et pourrait ainsi favoriser la progression de la fibrose. Cependant le stress du RE inhibe également leurs fonctions de prolifération et de migration ce qui pourrait induire une boucle de contrôle négative limitant leur expansion. / Hepatic fibrosis is the consequence of all chronic liver diseases and is characterized by an abnormal extra cellular matrix deposition by myofibroblasts. Portal myofibroblasts (PMF), a subpopulation of hepatic myofibroblasts, play a major role in fibrosis progression and angiogenesis. Accumulating evidences indicate an important role of endoplasmic reticulum (ER) stress in hepatic fibrosis. The aims of this study were to determine whether an ER stress occured in PMF during fibrosis and affected the functions of these cells, and to study the effect of the molecular chaperone TUDCA used in biliary diseases, on ER stress. The phenotype of in vivo activated-PMF obtained from rat fibrotic liver after cholestasis was compared with the phenotype of control PMF that we previously characterized. Our results showed that in vivo activated-PMF underwent ER stress with PERK pathway activation. This ER stress had no effect on myofibroblastic differentiation but reduced PMF proliferation and migration and increased PMF angiogenesis capacity. TUDCA had no effect on these parameters. In conclusion, PMF display ER stress during their activation. ER stress stimulates their pro-angiogenic proprieties and thereby may promote fibrosis progression. However, ER stress also inhibits their proliferation and migration functions, and thereby could provide a negative control loop to restrict their expansion.