Sarcoma de Kaposi (SK) é um tumor de origem vascular associado ao herpesvírus 8 humano (HHV-8). A incidência do SK-AIDS tem diminuído após o advento da terapia anti-retroviral combinada (HAART), sem estudos relacionando a resposta inflamatória cutânea e a expressão de HHV-8 na era pré e pós HAART. Utilizamos a immuno-histoquímica para caracterizar e quantificar in situ as células inflamatórias, o padrão de citocinas e a expressão de HHV-8 em lesões cutâneas de sarcoma de Kaposi clássico (SKC), sarcoma de Kaposi associado à AIDS (com ou sem HAART). O número diminuído de linfócitos TCD4+ em lesões de SK-AIDS quando comparado com SKC, reflete a imunodeficiência severa causada pelo HIV. O número de linfócitos TCD8+ foi similar nos três grupos de SK, o qual parece não se correlacionar com a forma clínico-epidemiológica do SK. As células S100+ e DD FXIIIa+ estiveram aumentadas em todas as lesões de SK comparadas com a pele normal. Nós também encontramos uma população celular dérmica S100+CD1a- peculiar nas lesões de SK. Os macrófagos CD68+ estiveram aumentados nas lesões de SKC quando comparados com as lesões de SK-AIDS, mas similares com aqueles encontrados em lesões de SK-AIDS/HAART. Dados semelhantes foram encontrados nas células de Langerhans epidérmicas nesses grupos, sugerindo uma recuperação immune parcial através da HAART. O número aumentado de células expressando IFN- em lesões de SKC e SK-AIDS/HAART quando comparado com SK-AIDS sugere essa citocina como um indicador de resposta imune mais eficaz. A expressão aumentada de IL-1 nas lesões de SKC e SK-AIDS/HAART poderia estar relacionada ao seu efeito anti-tumoral. A expressão de TNF-, IL-4 e IL-6 foram similares entre as lesões de SK avaliadas. Através de dupla marcação, a identificação nuclear de HHV-8 em DD FXIIIa+ sugere esse tipo celular como alvo para infecção por HHV-8. As lesões de SKC apresentaram número aumentado de células com expressão de HHV-8 quando comparado com os grupos de SK-AIDS, independente da HAART. Nosso estudo mostra que existiu uma recuperação da resposta immune local nas lesões de SK-AIDS/HAART e que a severidade clínica do SK não pode estar diretamente associada com a densidade aumentada de células infectadas pelo HHV-8 no tecido / Kaposis sarcoma (KS) is a vascular-originated tumor associated to human herpesvirus 8 (HHV-8). The incidence of AIDS-KS has decreased after the advent of highly active antiretroviral therapy (HAART), without studies regarding cutaneous inflammatory response and HHV-8 expression in pre- and post-HAART era. We used immunohistochemistry to characterize and to quantify in situ inflammatory cells, its cytokines pattern and the expression of HHV-8 in cutaneous lesions of classic Kaposis sarcoma (CKS), AIDS associated Kaposis sarcoma (with or without HAART). The decreased number of T CD4+ lymphocytes in lesions of AIDS-KS as compared with CKS, reflect the severe immunodeficiency caused by HIV. T CD8+ lymphocytes numbers were similar in three KS groups, which appeared unrelated to the clinical or epidemiological type of KS. S100+ cells and FXIIIa+ DD were increased in all KS lesions as compared with normal skin. We also found a peculiar dermal cellular population in KS lesions. CD68+ macrophages were higher in CKS lesions as compared with AIDS-KS lesions, but similar to those found in lesions of HAART/AIDS-KS. Similar data were found in epidermal Langerhans cells in these groups, suggesting a partial immune recovery by HAART. The high number of cells expressing IFN- in CKS lesions and HAART/AIDS-KS as compared with AIDS-KS suggests that this cytokine may be a marker of effective immune response. The increased expression of IL-1 in CKS lesions and HAART/AIDS-KS could be related with its anti-tumor effect. Expression of TNF-, IL-4 e IL-6 were similar between KS lesions. Demonstrated by double-immunostaining, nuclear identification of HHV-8 in FXIIIa+ DD suggests this cell type as target for HHV-8 infection. CKS lesions showed increased number of cells with HHV-8 expression as compared with another groups of AIDS-KS, independent of HAART. Our data shown that there was a partial recovery of local immune response in HAART/AIDS-KS lesions and that the KS clinical severity cannot be directly associated with the increased density of HHV-8 infected cells in tissue

A prevalência de anticorpos e DNA viral de HHV-8 em 400 doadores de sangue e 50 indivíduos politransfundidos da Fundação Pró-Sangue Hemocentro de São Paulo, através das técnicas de Nested PCR e IFI para antígenos lítico e latente. Foi detectada uma soroprevalência mais alta entre doadores de sangue(4%) quando comparados a indivíduos politransfundidos (14%) (p= 0,002). A prevalência também foi mais alta entre mulheres em relação a homens, 7% versus 1.8% (p= 0,012; 95% IC 1,14 - 16,6). Foram detectados DNA de HHV-8 no plasma e PBMC de um doador 0.25%. Esta amostra foi seqüenciada confirmando a presença de HHV-8. O encontro de DNA viral no plasma de um doador de sangue indica a transfusão sanguínea como um possível meio de transmissão deste agente / The prevalence of antibodies and DNA viral of HHV-8 in 400 donors of blood and 50 receiving of the Fundação Pró-Sangue Hemocentro of São Paulo, through Nested PCR'S techniques and IFI for lithic and latent antigens. A seroprevalence of 4% was detected in the donors of blood and 14% in receiving, significantly high in comparison with the prevalence in donors of blood (p = 0,002). There was a significant difference in the prevalence among men 1,8% and 7% in the women (p= 0,012; 95% CI 1,14 - 16,6). They were detected DNA of HHV-8 in the plasma and a donor's 6,3% PBMC, and it was sequenced and submitted to the Gene Bank where presented 100% of identity. This allows to define the transmission tax and the need of introducing methods for this agent's selection

INTRODUÇÃO: O Sarcoma de Kaposi (SK) é a neoplasia mais frequente dos doentes com Aids. É causada pelo herpes-vírus 8 (HHV-8). As células dendríticas plasmocitóides (CDp) são especializadas na produção de interferon tipo 1 e participam da resposta imune aos vírus. Os receptores \"toll-like\" são os principais receptores de reconhecimento de padrão, sendo que os receptores toll-like (TLR) 3 e 9 têm função no reconhecimento de vírus. O D2-40 é o anticorpo que reconhece a podoplanina, uma proteína transmembrana, presente no endotélio linfático e que tem função na imunidade. OBJETIVO: Demonstrar e comparar os componentes da imunidade inata: CDp e TLR 3 e 9, nas lesões cutâneas de SK associado a Aids e esporádico. Identificar a presença do HHV-8 nas CDp. Verificar o componente endotelial linfático na progressão das lesões de SK e comparar a expressão dos elementos da imunidade inata estudados, nas lesões com menor e maior componente endotelial linfático. MÉTODOS: Estudo retrospectivo de 50 biopsias de pacientes com diagnóstico de SK, todos com comprovação pelo exame histopatológico e demonstração do antígeno nuclear associado à latência (LANA) do HHV-8. Foram avaliados 11 biopsias de SK da forma clássica (SKc), 22 lesões de doentes com Aids (SK-Aids) e de 17 de doentes com Aids submetidos a tratamento com terapia antirretroviral altamente eficaz (SK-Aids/HAART). Os espécimes foram submetidos a exame por técnica imuno-histoquímica para evidenciar a presença de CDp (anticorpo CD303/BDCA-2), a expressão de TLR 3 e 9, bem como de podoplanina (anticorpo D2-40). Foi realizada também técnica de dupla marcação com CD303 e LANA, objetivando a identificação de CDp infectadas pelo HHV-8.Vinte e três espécimes de granuloma piogênico constituíram o grupo controle. A população de CDp e expressão de TLR 3 e TLR 9 também foi comparada nas lesões cutâneas de SK de doentes com e sem comprometimento visceral pela neoplasia; lesões não tumorais (máculo-papulares/placas) foram comparadas às lesões tumorais (nodulares) e de acordo com níveis sanguíneos de linfócitos T CD4+ (menor e igual ou maior que 350 células/mm3). RESULTADOS: As CDp foram mais numerosas nos espécimes de SK-Aids quando comparado com o granuloma piogênico. Foram identificadas CDp infectadas pelo HHV-8. A expressão de TLR 3 foi menor nas lesões de SK, independente da forma epidemiológica, do que no granuloma piogênico. Para todas as outras comparações da densidade de CDp e expressão de TLR 3 e de TLR 9 não houve diferença entre os grupos. Não houve diferença no componente endotelial linfático das lesões máculo-papulares/placas e tumorais do SK, assim como na expressão dos elementos da imunidade inata estudados entre as lesões com maior e menor componente endotelial linfático. CONCLUSÕES: Demonstrou-se pela primeira vez a presença de CDp e a expressão de TLR 3 e 9 em lesões cutâneas do Sarcoma de Kaposi, bem como a infecção de CDp pelo HHV-8 \"in situ\" nos tumores. Os resultados obtidos sugerem a participação das células CDp e do TLR 3 na patogênese das lesões cutâneas do Sarcoma de Kaposi, independente da presença do vírus da imunodeficiência humana. A imunomarcação de SK com o anticorpo D2-40, tanto nas fases precoce como tardia das lesões, confirma a natureza endotelial linfática das células neoplásicas. Esta parece não ter relação com a expressão dos elementos da imunidade inata estudados / Introduction: Kaposi\'s sarcoma (KS) is the most common Aids-associated malignancy. It is caused by human herpesvirus-8. Plasmacytoid dendritic cells (pDC) are professional interferon producing cells, and participate in the immune response against viruses. Toll-like receptors (TLR) are the main pattern recognition receptors, and TLR 3 and TLR 9 participate in the recognition of viruses. Podoplanin, recognized by antibody D2-40, is a transmembrane protein identified on lymphatic endothelial cells with functions inimmunity. Objective: Demonstrate and compare some innate immunity components: pDC, TLR 3 and TLR 9, in cutaneous lesions of Aids-associated Kaposi\'s sarcoma and classic Kaposi\'s sarcoma. Identify the infection of pDC by HHV-8. Compare the lymphatic endothelial component in the course of tumor progression and compare the expression of innate immunity elements in lesions with a predominance of lymphatic endothelial components or not. Methods: Retrospective study of 50 biopsies diagnosed as Kaposi\'s sarcoma withpositive staining for latency-associated nuclear antigen (LANA) of HHV-8. Eleven classic KS, 22 Aids-associated KS and 17 Aids-associated KS from patients undergoing highly active antiretroviral therapy (HAART) were assessed. Paraffinembedded tissue was submitted to immunohistochemistry technique in order to demonstrate pDC (CD303/BDCA-2 antibody), expression of TLR 3, TLR 9 and podoplanin (D2-40 antibody). We performed double staining with CD303 and LANA in order to identify pDC infection with HHV-8. Twenty-three pyogenic granuloma(PG) specimens were analyzed as a control group. Plasmacytoid dendritic cells population, TLR 3 and TLR 9 expressions were compared between patients with and without visceral disease, nodular stageandpatch/plaque stage and according to bloodlymphocytes T CD4 count(=350 cells/mm3). Results: Plasmacytoid dendritic cells density in Aids-associated SK was higher than in PG. We could identify pDC infection by HHV-8. The expression of TLR 3 in all forms of KS was less extensive than PG. All others comparisons about pDC density, TLR 3 and 9expressions were similar. We found no difference in D2-40 expression between nodular and patch/plaque stages. When comparing tumors with extensive expression of D2-40 (>= 50% of cells) and tumors with less expression (<50% of cells), we found no differences in density of pDC and expression of TLR 3 and TLR 9. Conclusion: This is the first time that pDC, TLR 3 and TLR 9 have been demonstrated in skin lesions of KS, as well as the infection of pDC in the lesions. Our results suggest that pDC and TLR 3 participate in the pathogenesis of KS, independently of HIV presence. The positive staining with D2-40 antibody, in all the stages of KS, confirmsthe lymphatic nature of neoplastic cells. It seems that podoplanin is not related to the innate immunity elements studied here

A infecção pelo herpesvírus humano tipo 8 (HHV-8) tem sido associada ao sarcoma de Kaposi (SK) iatrogênico, que acomete pacientes imunossuprimidos e/ou transplantados renais. Em populações consideradas saudáveis, a soroprevalência para o HHV-8 varia de 1% a 8%. O presente trabalho buscou: determinar a prevalência e os títulos de anticorpos anti-HHV-8 em pacientes com insuficiência renal crônica (IRC), submetidos ou não à terapia renal substitutiva (TRS) do Hospital do Rim e Hipertensão e Casa da Diálise da UNIFESP e da Santa Casa de Misericórdia de São Paulo e, comparar os resultados obtidos com outras populações da mesma região geográfica, porém de outras categorias de risco para adquirir doenças infecciosas. Soros de 805 pacientes: 295 em hemodiálise, 54 em diálise peritoneal e 456 em acompanhamento ambulatorial, sem TRS, foram testados quanto à presença de anticorpos anti-HHV-8, de fase latente e lítica da replicação viral, por meio de técnicas de imunofluorescência indireta (IFI) LANA e Lítico, padronizadas na Seção de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz. Os resultados obtidos foram analisados em relação a dados clínicos, epidemiológicos e laboratoriais usando o teste do qui-quadrado ou exato de Fisher para as variáveis categóricas e os testes de Mann Whitney ou Kruskal Wallis para as variáveis contínuas. Foi encontrada soropositividade ao HHV-8 em 18,0% dos pacientes com IRC, dos quais 18,3% nos pacientes em TRS e 17,7% nos pacientes sem TRS, não havendo diferença significante entre os grupos. As variáveis que estiveram relacionadas à sorologia positiva ao HHV-8 foram: transplante prévio (p<0,001) e doenças sexualmente transmissíveis (p=0,003), com destaque para a sífilis (p=0,021). As demais variáveis não mostraram associação estatística embora tenha havido maior número de amostras HHV-8 soropositivas com o avançar da idade. Em relação ao tipo e ao título de anticorpos detectados, houve mais amostras com sorologia positiva para anticorpos Lítico e maiores títulos de anticorpos LANA. A comparação dos resultados dos pacientes com IRC e outras populações de São Paulo revelou taxa semelhante de prevalência de anticorpos anti-HHV-8 na população com HIV/Aids (20,4%), considerada de alto risco para esta infecção viral. Por outro lado, a prevalência detectada na população com IRC (18,0%) foi inferior às obtidas em pacientes com SK epidêmico (89,3%), SK clássico (100,0%) e SK endêmico (87,5%), e superior a outras populações sem SK: pacientes com deficiência mental e/ou física (1,6%) e profissionais da área da saúde (1,1%). Em todos os grupos analisados houve maior número de amostras com sorologia positiva para HHV-8 de fase lítica, e maiores títulos de anticorpos LANA, exceção feita aos profissionais da área da saúde. Maiores títulos de anticorpos LANA foram detectados nos pacientes com SK. Não foram encontradas outras associações significantes. Os resultados obtidos permitem concluir que os pacientes com IRC têm alta prevalência de anticorpos anti-HHV-8, comparável aos indivíduos com HIV/Aids dessa região geográfica. Ainda, sugerem que se devam acompanhar os pacientes HHV-8 soropositivos com vistas a monitorar os títulos de anticorpos LANA e verificar se estes têm valor prognóstico. Caso isto venha a ser confirmado, sugere-se a introdução da sorologia para o HHV-8 na bateria de exames do pré-transplante renal. / Human herpesvirus 8 (HHV-8) infection is frequently associated with Kaposi\'s sarcoma (KS) in immunodeficient and renal transplanted patients. The HHV-8 seroprevalence in healthy populations varies from 1% to 8%. The present study aimed to determine the HHV-8 seroprevalence and antibodies titers in chronic kidney disease (CKD) patients with or without substitutive kidney therapy (SKT) attended at Hospital do Rim e Hipertensão and Casa da Diálise of UNIFESP, and at Santa Casa de Misericórdia de São Paulo. Secondarly, to compare the serological results with those obtained from populations of the same geographic region, presenting other risk factors for acquiring infectious diseases. Serum samples were collected from 805 CKD patients: 295 under hemodialysis, 54 under peritoneal dialysis, and 456 in ambulatorial assistance without SKT. Latent and Lytic HHV-8 antibodies were searched using indirect immunofluorescence assays that were standardized at Immunology Department of Instituto Adolfo Lutz. Chi-Square test and/or Fisher\'s exact test were performed for comparing categorical variables including epidemiological, clinical and laboratorial data, and HHV-8 serum status. Continuos variables associated with HHV-8 antibodies titers were compared using Mann Whitney or Kruskal Wallis tests. An overall HHV-8-seropositivity of 18.0% was detected in CKD patients: 18.3% in patients under SKT and 17.7% in patients without SKT. Since no difference was detected in HHV-8-seropositivity among patients, they were considered as a unique group for subsequent analysis. A strong association between HHV-8-seropositivity and previous transplant was detected (p<0.001), along with an association with others sexually transmitted diseases (p=0.003), with emphasis for syphilis (p=0.021). In addition, no other data was associated with HHV-8-seropositivity, although higher proportions of HHV-8-seropositivity were detected in samples from elderly persons. In addition, more HHV-8 Lytic antibodies positive samples, and higher titers of LANA antibodies were detected. HHV-8 seroprevalence obtained from CKD patients was similar to the HHV-8 prevalence detected among HIV/Aids patients (20.4%), who were considered a high-risk group for this viral infection. On the other hand, the HHV-8 seroprevalence of CKD patients (18.0%) was lower than the prevalence of patients with epidemic KS (89.3%), classic KS (100.0%) and endemic KS (87.5%), and higher than the patients with mental and/or physical deficiency (1.6%) and health professionals (1.1%). All analyzed groups had more HHV-8-seropositive samples for Lytic antibodies and higher titers of LANA antibodies, with exception for the health professionals. The highest LANA antibodies titers were found among KS patients groups. No other association was found. In conclusion, the obtained results points out CKD patients as a high prevalent population for HHV-8 infection, similar to HIV/Aids patients from the same geographic area. As far, it suggests that HHV-8 seropositive CKD patients should be followed up in order to verify whether LANA antibodies titers have prognostic value. In confirming this hypothesis, it may propose to include the use of HHV-8 serology in the screening testing in kidney pre-transplant.

A cellular pre-mRNA undergoes various post-transcriptional processing events, including capping, splicing and polyadenylation prior to nuclear export. Splicing is particularly important for mRNA nuclear export as two distinct multi-protein complexes, known as human TREX (hTREX) and the exon-junction complex (EJC), are recruited to the mRNA in a splicing-dependent manner. In contrast, a number of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) lytic mRNAs lack introns and are exported by the virus-encoded ORF57 protein. Herein we show that ORF57 binds to intronless viral mRNAs and functions to recruit the complete hTREX complex, but not the EJC, in order assemble an export component viral ribonucleoprotein particle (vRNP). The formation of this vRNP is mediated by a direct interaction between ORF57 and the hTREX export adapter protein, Aly. Aly in turn interacts directly with the DEAD-box protein UAP56, which functions as a bridge to recruit the remaining hTREX proteins to the complex. Moreover, we show that a point mutation in ORF57 which disrupts the ORF57-Aly interaction leads to a failure in the ORF57-mediated recruitment of the entire hTREX complex to the intronless viral mRNA and inhibits the mRNAs subsequent nuclear export and virus replication. Furthermore, we have utilised a trans-dominant Aly mutant to prevent the assembly of the complete ORF57-hTREX complex; this results in a vRNP consisting of viral mRNA bound to ORF57, Aly and the nuclear export factor, TAP. Strikingly, although both the export adapter Aly and the export factor TAP were present on the viral mRNP, a dramatic decrease in intronless viral mRNA export and virus replication was observed in the absence of the remaining hTREX components (UAP56 and hTHO-complex). Together, these data provide the first direct evidence that the complete hTREX complex is essential for the export of KSHV intronless mRNAs and infectious virus production.